PLOS ONE: cannabinoïdes HU210 Protège l'estomac isolé de rat contre la perte de valeur causée par le sérum de rats avec expérimentale aiguë Pancreatitis

Résumé

pancréatite aiguë (PA), la pancréatite aiguë particulièrement sévère provoque souvent des complications extra-pancréatiques, comme aiguë gastro-intestinal lésion des muqueuses (AGML) qui est accompagné d'une forte mortalité considérablement, mais la pathogenèse de AGML AP-induite est pas encore pleinement compris. Dans ce rapport, nous avons étudié les modifications des composants du sérum et endocrinien gastrique et les fonctions exocrines chez les rats atteints de pancréatite aiguë expérimentale, et étudié les contributions possibles de ces altérations dans la pathogenèse de AGML. En outre, nous avons exploré les effets de l'intervention de l'agoniste des récepteurs cannabinoïdes HU210 et antagoniste AM251 sur l'estomac isolé de rat et le sérum perfusé. Nos résultats ont montré que la AGML produite après 5 h de replication AP et l'homéostasie du corps a été perturbée dans le PA de rat, avec des niveaux accrus d'enzymes pancréatiques, lipopolysaccharide (LPS), des cytokines proinflammtory et chimiokines dans le sang, et un déséquilibre de l'estomac fonction de sécrétion. Perfuser l'estomac isolé de rat avec le sérum de rat AP a provoqué des changements morphologiques dans l'estomac, accompagnée d'une augmentation significative de la pepsine et [H ^{+] la libération, et l'augmentation de la gastrine et une diminution de la sécrétion de la somatostatine. HU210 a renversé les rats altérations pathologiques AP-sérum-induite, y compris la reprise de la transformation de la morphologie gastrique certaine. Les résultats de cette étude prouvent que les réponses inflammatoires et le déséquilibre de la sécrétion gastrique au cours du développement de l'AP sont responsables de la pathogenèse de AGML, et suggèrent le potentiel thérapeutique de HU210 pour AGML associée à la pancréatite aiguë.}

Citation: Cao Mh, Li Yy, Xu J, Feng Yj, Lin Xh, Li K, et al. (2012) cannabinoïdes HU210 Protège l'estomac isolé de rat contre la déficience causée par le sérum de rats avec expérimentale pancréatite aiguë. PLoS ONE 7 (12): e52921. doi: 10.1371 /journal.pone.0052921

Editeur: Vinod K. Yaragudri, Nathan Institut Kline pour la recherche en psychiatrie et à New York School of Medicine, États-Unis d'Amérique

Reçu: 9 mai, 2012; Accepté: 21 Novembre 2012; Publié le 28 Décembre, 2012 |

Droit d'auteur: © 2012 Cao et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, à condition que l'auteur et la source originelle sont crédités

Financement:. Ce travail a été soutenu par la national science Foundation naturel de la Chine (Grant No. 81270477 et 81141050 Dr Yong-yu Li). http://www.nsfc.gov.cn/. Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Introduction

la pancréatite aiguë (PA), particulièrement sévère AP, est une maladie inflammatoire du pancréas potentiellement mortelle qui conduit souvent à des complications extra-pancréatique, voire plusieurs dysfonctionnements systémiques d'organes. Il a été rapporté que 52% des patients atteints de pancréatite aiguë développent une lésion aiguë de la muqueuse gastro-intestinale (AGML) ou ulcère de stress [1], [2]. Bien que l'observation endoscopique montre que la majorité des sujets ont simplement de multiples érosions peu profondes dans le tractus gastro-intestinal, l'intervention pharmacologique optimal continue d'être un sujet de débat, et la pathogenèse de AGML reste incertaine.

Certains chercheurs rapportent que la condition stressante avec une pancréatite aiguë provoque l'approvisionnement en sang diminué ou hypoperfusion dans la muqueuse gastrique, et la contre-diffusion de l'estomac ions d'hydrogène (H ^{+) est un facteur important pour AGML ainsi [3], [4]. D'autres études ont découvert que le sérum et ascite chez des patients AP et les animaux de laboratoire contenait une grande quantité de substances toxiques, telles que les enzymes pancréatiques, des endotoxines, des médiateurs inflammatoires [5], [6], qui peut contribuer à des dysfonctionnements d'organes multiples dans aiguë pancréatite [7], [8].}

Pendant des siècles, le cannabis plante et ses extraits ont été utilisés pour soulager les symptômes de maladies inflammatoires gastro-intestinales. Il a été établi que D ^{9-tétrahydrocannabinol, le principal composant psychoactif du cannabis, exerce ses actions cellulaires primaires si deux G récepteurs couplés aux protéines, cannabinoïdes 1 (CB1) et cannabinoïdes 2 (CB2) récepteurs [9] - [ ,,,0],11]. Depuis lors, ces deux récepteurs ont été reconnus comme étant les principaux régulateurs des processus physiologiques et pathologiques [12]. Les cannabinoïdes peuvent réduire la sécrétion gastro-intestinale [13], et l'activation du récepteur CB1 présente rôle protecteur contre le stress induit par AGML [14], [15], mais les mécanismes de leur action reste insaisissable.}

Le but de la ce travail était d'explorer, par la fois in vivo et in vitro, les changements dans les composants du sérum, les altérations des fonctions endocrines et exocrines gastriques dans le modèle d'AP de rat, et les contributions possibles de ces altérations dans la pathogenèse de AGML. Aussi sondé étaient les effets interventionnels de CB1 en utilisant son HU210 agoniste et antagoniste AM251, dans un effort pour mieux comprendre les mécanismes physiopathologiques de AGML AP-associé et les potentiels anti-ulcéreux de ces agents cannabinoïdes.

Matériel et méthodes

Animaux

des rats Sprague-Dawley (220-250 g) ont été obtenus à partir du Centre expérimental des animaux de l'Université Fudan, Shanghai, Chine. Avant les expériences, tous les animaux ont été logés pour 1 semaine dans des conditions standard avec accès libre à l'eau et de laboratoire chow. Toutes les procédures expérimentales ci-dessous sont en accord avec les lignes directrices internationales pour les soins et l'utilisation des animaux de laboratoire et ont été approuvés par le Comité d'éthique animale de l'Université de Tongji, Shanghai, Chine.

Induction de pancréatite aiguë chez les rats

Les rats ont été répartis au hasard en deux groupes: AP et le groupe sham-opération avec 24 animaux dans chaque groupe. Les rats ont été soumis à un jeûne pendant une nuit avec seulement de l'eau a permis avant la chirurgie. AP modèle a été induite par la méthode développée par Aho et al [16]. En bref, les rats ont laparotomie (~ 3 cm incision abdominale-midline) suivant la procédure aseptique standard et sous anesthésie générale avec injection intrapéritonéale de carbamate d'éthyle à 20% à 10 ml /kg. Le conduit biliopancréatique a été temporairement occlus au niveau du hile du foie avec une pince fine microvasculaire douce pour empêcher le reflux de la matière infusé au foie. Une injection rétrograde de désoxycholate de sodium à 3% dans le conduit biliopancreatic a ensuite été réalisée (0,1 ml /100 g de poids vif). La pince a été retirée après l'injection. Sham-opération a été réalisée en conséquence, sans l'injection de désoxycholate de sodium, et l'opération a été conclue avec la fermeture stratifiée abdominale. Sur la cinquième heure après l'intervention chirurgicale, le sang a été prélevé de l'aorte abdominale sous anesthésie ponction. Tous les échantillons de sang ont été centrifugés et le surnageant (sérum) a été prélevée, aliquotées et conservées à -20 ° C pour des applications ultérieures. Le pancréas a été enlevé, divisé en deux parties, et une partie a été mise en trizol immédiatement et conserver à -20 ° C pour l'analyse GeneChip, que l'autre partie a été fixé avec 10% de paraformaldehyde. L'estomac a également été enlevé, ouvert le long de la grande courbe, et fixé avec 10% de paraformaldehyde pour qui a suivi l'examen pathologique.

Évaluation histologique

L'évaluation histologique a été effectuée sur le pancréas de rat et de l'estomac qui ont été fixés dans 10% de paraformaldehyde et incluses dans de la paraffine. Par la suite, 5 um sections épaisseur ont été découpées sur un microtome Leica RM2126 (Leica, Shanghai, Chine) et colorées à l'hématoxyline (0,5%) et de l'éosine (0,5%), suivi par observation au microscope Motic BA300 (Motic China Group Co. Ltd ., Xiamen, Chine). Histologiques Scoring a été évalué sur des sections pancréatiques en utilisant un critère modifié de Nathan JD, et al [17]. L'évaluation a été faite dans dix champs microscopiques choisis au hasard des diapositives de chaque animal, et répété dans trois rats /groupe en aveugle. Et le score histologique totale (0-9) a été exprimée comme la somme de l'œdème (0-3), l'infiltration de cellules inflammatoires (0-3), et une nécrose tissulaire (0-3).

Microarray Hybridization Assay

analyse de biopuces a été utilisé pour identifier les profils de transcription de certains indices inflammatoires dans le pancréas de rat avec une pancréatite aiguë. Des hybridations de matrice ont été réalisées avec trois répétitions biologiques des échantillons d'ARN extraits du pancréas d'AP et de contrôle des rats. préparation de la sonde, la puce d'hybridation, et l'analyse des données primaires ont été réalisées par Capital Bio Corporation (une société agréée et autorisée par Affymetrix pour fonctionner à Beijing, en Chine). Les tableaux ont été scannés à l'aide du GeneChip Scanner 3000 7G (Affymetrix, Santa Clara, CA, USA). L'analyse quantitative a été réalisée en utilisant Affymetric MicroArray Suite Conditions 5.0-spécifiques (statistiques Algorithmes) GCOS (Affymetrix GeneChip Operating Software) Version 1.4. Les gènes exprimés de manière différentielle ont été identifiés à l'aide SAM (significatif Analyse de biopuces) logiciel, et sélectionnés sur la base de leurs changements de pliage (> 2 fois) par rapport aux échantillons de contrôle

Analyse immunohistochimie
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coloration immunohistochimique sur des coupes de paraffine de l'estomac et du pancréas de rat ont été réalisées en utilisant polyclonal de lapin anti-CB1 et CB2 des anticorps anti-(Cat. no: ALX-210-314 anti-CB1 et Cat no. ALX-210-315 anti-CB2, Enzo, Plymouth Meeting, PA, USA) comme décrit précédemment [18]. Les lames avec des sections de l'estomac du rat et du pancréas ont été incubées pendant une nuit à 4 ° C avec des anticorps anti-CB1 ou des anticorps anti-CB2, et marqué à la biotine de chèvre anti-IgG de lapin de fluide de travail (Cat. No: SP0023; Biosynthèse Biotechnology Co. Ltd. ., Beijing, Chine) a ensuite été appliqué sur chaque lame et mis à incuber à 37 ° C pendant 15 minutes, suivie d'une incubation avec une solution de travail de streptavidine marqué à la HRP à 37 ° C pendant 15 minutes, puis on rince abondamment les diapositives. Enfin, les lames ont été colorées DAB et nucléaire re-colorées avec de l'hématoxyline. Les lames de contrôle négatif ont été traitées à travers les étapes identiques, mais l'anticorps primaire a été remplacé par PBS. L'analyse des images a été réalisée en utilisant numérique Motic Med 6.0 image de système d'analyse. (Motic; China Group Co. Ltd, Xiamen, Chine)

Western blot pour mesurer CB1 et CB2 Expression

CB1 et CB2 l'expression des protéines dans le pancréas et de l'estomac ont été évaluées par western blot. Comme décrit précédemment [19], après incubation avec les anticorps primaires dans une dilution 1:250 individuellement (polyclonal de lapin anti-CB1 et CB2 anticorps anti-Cat. No:. ALX-210-314 pour la lutte contre CB1 et Cat No: ALX-210-315 pour l'anti-CB2, Enzo, Plymouth Meeting, PA, USA), les membranes de nitrocellulose épongée (Whatman, Dassel, Allemagne) ont été rincés à fond, et l'anticorps secondaire approprié conjugué à la peroxydase de raifort a été incubé pendant 1 h à température ambiante. Pour référence interne, lapin polyclonaux β-actine anti-anticorps de souris (1:2,000 dilution) (Abmart, Shanghai, Chine) a été utilisé. Enfin, liaison de l'anticorps a été détecté par l'exposition à Western ECL réactifs de détection blot (No de Cat. SC-2048, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) et enregistré sur le film

Préparation de Isolated- vasculairement. perfusé rat estomac

rat a été anesthésié et l'isolement, de l'estomac de rat perfusé vasculairement a été préparé comme décrit précédemment [20]. En bref, l'abdomen a été ouvert par une incision médiane dans des conditions stériles. Après ligature de l'aorte abdominale juste au-dessus de la bifurcation de l'artère coeliaque, on insère une canule dans l'artère cœliaque par une incision placée sur l'aorte. Deux millilitres de solution saline contenant 600 U d'héparine ont ensuite été injectées dans l'artère gastrique par l'intermédiaire de la canule artérielle. Par la suite, une solution de Krebs-Ringer barboter avec un mélange de 95% O _{2 et 5% de CO 2 a été introduit un chaud (37 ° C) modifié. L'effluent veineux a été recueilli par une canule de la veine. Un tube en polyéthylène pour la lumière gastrique perfusat a été inséré dans l'oesophage et de la pointe positionnée dans la partie luminale de l'estomac. Par la suite, la jonction pyloroduodénale a été exposé, et un autre tube en polyethylene a été introduit dans l'estomac par l'intermédiaire d'une incision pratiquée sur le duodénum, ​​puis fixée par une ligature autour du pylore. L'estomac de rat perfusé a été isolé et placé dans une petite chambre chaude (37 ° C) avec une solution de Krebs-Ringer.}

Traitement de l'Isolated Rat Estomac

L'estomac isolé a été perfusé avec vasculairement modifiée une solution de Krebs-Ringer pendant 30 min équilibration avant les expériences formelles. La perfusion a ensuite été réalisée successivement avec trois fluides, et chaque liquide pendant 20 minutes, pour un total de 60 minutes. Le groupe témoin a obtenu: 1) solution de Krebs-Ringer, 2) le sérum de rats témoins normaux, 3), la solution de Krebs-Ringer. Le groupe AP a obtenu: 1) Krebs-Ringer solution, 2) le sérum de rats AP, 3) solution de Krebs-Ringer. Le groupe d'AP + HU a obtenu: 1) une solution de Krebs-Ringer + HU210 (10 ^{-7m), 2) AP + sérum HU210 (10 -7m), 3) une solution de Krebs-Ringer. Et le groupe de AP + AM a obtenu: 1) une solution de Krebs-Ringer + AM251 (10 -7m), 2) AP + sérum AM251 (10 -7m), 3) une solution de Krebs-Ringer. La lumière gastrique de l'estomac isolé a été perfusé avec une solution saline normale (pH 7,0). Tous les liquides de perfusion ont fonctionné à un débit constant de 1 ml /min en utilisant des pompes micro-perfusion. Pendant ce temps, les solutions et les organes isolés ont été conservés à 37 ° C, par des unités thermostatiques tout au long de l'expérience. Les échantillons provenant des effluents veineux gastrique ou de passage d'effluent ont été}

amylases et le lipopolysaccharide niveaux collectés, à la fin de toutes les 20 minutes dans des tubes à essais qui ont été refroidis immédiatement stockés à -80 ° C pour les expériences de mesure suivantes.

les tests de lipopolysaccharide (LPS) niveaux dans le sérum d'AP ou de contrôle des rats amylase et ont été exécutées en fonction du fabricant recommandé procédures (Cat No: C016 pour le kit de dosage de l'amylase, Jiancheng technologie, Nanjing, en Chine, et. . Cat. No: CE32545 pour le kit de dosage LPS, chinois Horseshoe Crab réactif Co. Ltd, Xiamen, Chine)

des tests pour

Les niveaux de médiateurs inflammatoires de l'interleukine-6 ​​(IL-6 ) et induite par les cytokines neutrophile chimiotactique 1 (CINC1 /KC) dans le sérum de rat et dans l'effluent veineux de l'estomac isolé de rat ont été quantifiés en utilisant l'IL-6 et des kits KC ELISA rat basé sur le fabricant recommande de protocoles (Cat. : F01731D pour l'interleukine rat 6 kits ELISA; Cat pas:. F01723D pour rat kits KC ELISA. H-Y biologique Co. Ltd., Shanghai, Chine). La densité optique a été déterminée à 490 nm pour l'absorbance dans un instrument de dosage immuno-enzymatique (lecteur de microplaques, modèle ELx800; BioTek, Winooski, VT, USA). Chaque échantillon a été mesurée trois fois et la mesure a été répétée dans 6 échantillons de rats de chaque groupe. Les données contenues dans l'effluent veineux de l'estomac isolé de rat a été présenté à la différence de l'IL-6 ou KC niveau entre la perfusion et de l'effluent, étant considéré comme la libération d'IL-6 et KC de l'estomac de rat.

gastrine et somatostatine niveaux dans spécimens animaux

Gastrin et les niveaux de la somatostatine dans le sérum des animaux et dans l'effluent veineux de l'estomac isolé ont été mesurés à l'aide disponibles dans le commerce gastrine et somatostatine Kits de radioimmunodosage (Gastrin Kit:. Cat No. G01PJB , Institut Nord de Biologic Technology, Beijing, Chine somatostatine Kit:.. Cat No. S111013, université médicale militaire Deuxièmement, Shanghai, Chine). Les procédures de mesure ont été basées sur les recommandations du fabricant comme décrit précédemment [21]. La même que ci-dessus, chaque échantillon a été mesurée trois fois et la mesure a été répétée dans 6 échantillons de rats de chaque groupe. Les données dans l'effluent veineux de l'estomac isolé de rat a été présenté avec les différences de niveau de gastrine ou somatostatine entre la perfusion et l'effluent, étant considéré comme la libération de gastrine et de la somatostatine de l'estomac de rat.

pepsine et H + les niveaux dans les animaux spécimens

les tests de niveau de la pepsine dans le suc gastrique de rat et dans la lumière des effluents gastriques de l'estomac isolé de rat ont été réalisées avec le fabricant protocoles recommandé (Cat. No. A081- 1, Jiancheng Technology, Nanjing, Chine), comme [H ^{+] dans ces échantillons ont été mesurés par delta 320 pH-mètre (Mettler-Toledo Inc. Zurich, Suisse) et les lectures ont ensuite été converties en [H +].}

Solutions et produits chimiques

HU210 [(6aR) -trans-3- (1,1-diméthylheptyl) -6a, 7,10,10a-tétrahydro-1-hydroxy -6,6-diméthyl-6H-dibenzo [b, d] pyranne-9-méthanol], AM251 [(N- (pipéridin-1-yl) -5- (4-iodophényl) -1- (2,4- dichlorophényl) - 4-méthyl-1H-pyrazole-3-carboxamide)], ont été achetés chez Tocris (Tocris-Bioscience, Ellisville, MO, USA). Ces deux produits chimiques ont été dissous dans un solvant consistait en l'éthanol, Tween 80 et une solution saline normale (NS), le rapport en volume 01:01:18, à une concentration 10 ^{-2M, à 37 ° C en utilisant un appareil à ultrasons, puis a été en outre dilué dans NS à 10 -5 M, et de nouveau à 10 -7m avec liquide de perfusion juste avant l'utilisation dans les conditions qui ont été déterminées dans l'étude pilote [22]. La solution de Krebs-Ringer modifié a été composé de NaCl 117,5 mM, KCl 4,7 mM, CaCl 2,4 _{2 mM MgCl 1.1 2 mM NaH 1.1 2PO 4 mM NaHCO 25 3, glucose 11,1 mM, 0,05% d'albumine de sérum bovin et 4% de dextran. D'autres agents, si les sources ne sont pas mentionnés ci-dessus, ont été achetés auprès de Sigma (Shanghai, Chine).}}

Analyse des données

Toutes les données sont exprimées en moyenne ± SEM. t-test ou d'analyse de facteur de variance (Anova) de Student a été réalisée en utilisant le logiciel SPSS 13.0 (SPSS Co. Ltd., Shanghai, Chine). P-valeurs de < 0,05 ont été considérées comme statistiquement significatives

Résultats

Les résultats de l'expérience In Vivo

changements pathologiques dans le pancréas des rats AP. .

Sous microscopie optique, il était évident que, après le traitement avec le taurocholate de sodium, les rats ont développé une pancréatite aiguë sévère avec oedème évident, vacuolisation et nécroses graves dans les cellules acineuses des tissus pancréatiques. Et les scores histologiques chez les rats AP étaient beaucoup plus élevées que celles des rats témoins (Fig. 1). Combiné avec l'augmentation du niveau d'activité de l'amylase dans le sérum des rats AP, les résultats ont démontré que la réplication du modèle AP chez le rat a réussi.

changements pathologiques dans l'estomac des rats AP.

l'estomac des rats atteints de pancréatite aiguë, des changements pathologiques graves émergé, présentant un oedème de la muqueuse, l'érosion et les hémorragies comme démontré à la fois par macrographie (figure 2A et 2B.) et des examens au microscope (Fig. 2D); et ces blessures se rassemblaient principalement dans l'antre gastrique.

analyse GeneChip.

Comme le montre la Fig. 3A, les diagrammes de dispersion représentés gènes avec deux fois et une expression plus élevée étaient dans la limite supérieure (rouge), tandis que les gènes avec deux fois et plus faible expression dans le (vert) limite inférieure; et les gènes modifiés étroitement liés à la pancréatite aiguë ont été présentés dans les modèles de clustering (Fig. 3B). Il était évident que dans le profil d'expression, les gènes avec différentiel significativement expressions (≥2 fois, P < 0,05) sont principalement ceux qui ont été en relation avec les enzymes digestives du pancréas, des médiateurs inflammatoires et les voies de transduction du signal, qui ont été désignés et énumérés avec leur nom et Gene Genebank ID dans le tableau 1.

Changements de l'IL-6, KC et LPS dans le sérum AP.

les deux IL-6 et KC niveaux dans le sérum des AP les rats affichent une augmentation significative par rapport à celles des rats témoins, avec recrudescences de 145% et 186%, respectivement (p < 0,05; fig. 4). Une augmentation similaire mais plus importante a été observée dans le niveau de LPS dans le sérum des rats AP, avec une montée jusqu'à 231 fois celle du groupe témoin (p < 0,01; fig. 4A)

modifications. de la gastrine et de la somatostatine niveaux dans le sérum de rats AP.

dans le sérum des rats AP, les niveaux de gastrine et de la somatostatine ont augmenté de manière significative par rapport à celles des rats témoins, avec recrudescences de 169% et 147%, respectivement ( dans les deux cas, P < 0,05;.. Fig 4B)

les changements de niveaux de pepsine et [H ^{+] dans le suc gastrique des rats AP}

Pour évaluer les changements de l'estomac. fonction exocrine, des essais pour le niveau de la pepsine et [H ^{+] ont été effectuées en utilisant le suc gastrique des AP et de contrôle des rats. À la fois le niveau et la pepsine [H +] dans le suc gastrique a montré une nette augmentation chez les rats AP par rapport à celles des rats témoins, avec recrudescences de 177% et 347%, respectivement (Fig. 4C).}

expression des récepteurs CB1 et CB2 dans le pancréas de rat et de l'estomac
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Les caractéristiques d'expression des récepteurs CB1 et CB2 dans le pancréas de rat et de l'estomac ont été étudiés. Les résultats ont démontré que les spécimens d'animaux dans le groupe témoin ont présenté seulement une faible coloration immunohistochimique pour les récepteurs CB1 et CB2 dans le pancréas, alors que les échantillons de rats AP ont montré une augmentation des expressions de récepteurs CB1 et CB2. Principalement, les forts signes positifs de la teinture brune regroupés dans le acini pancréatique (têtes de flèches Fig. 5 A). La mise à la réglementation des récepteurs CB1 et CB2 dans les tissus pancréatiques de rats AP ont ensuite été mises en évidence par l'analyse par transfert de Western et présentées dans la figure 5 B. Les caractéristiques d'expression similaires des récepteurs CB1 et CB2 ont également été trouvées dans l'estomac des rats AP , comme l'a démontré à la fois par la coloration immunohistochimique et occidentale test blot (Fig. 5 C et 5 D). Les forts signes positifs de la teinture brune étaient principalement dans la muqueuse gastrique (Fig. 5 C, pointes de flèches).

Les résultats de l'expérience In Vitro

Effet de cannabinoïdes sur gastrique des changements pathologiques et sur la gastrine et la libération de somatostatine.

Pour étudier l'effet de CB1 agoniste des récepteurs HU210 sur la fonction endocrine de l'estomac isolé de rat stimulé avec du sérum de rat AP, nous avons examiné les modifications des taux de gastrine et de la somatostatine dans le l'effluent veineux de l'estomac, avec ou sans intervention du récepteur CB1, agonistes et antagonistes HU210 AM251. Les résultats ont montré que, par rapport au groupe de contrôle, l'estomac de rat traité avec du sérum AP a provoqué une libération de gastrine augmenté (P < 0,05), mais une libération réduite de la somatostatine (P < 0,05), HU210 renversé les gastrine et somatostatine changements induits par le sérum de rats AP (P < 0,05) (fig. 6)., alors que AM251 ne présentent pas l'impact décelable sur la libération des deux hormones

Effets des cannabinoïdes sur l'activité de la pepsine et [H ^{+] dans le gastrique effluent de lumière.}

les effets des agents HU210 et AM251 sur l'activité de la pepsine et [H ^{+] dans la lumière des effluents gastriques de l'estomac isolé de rat ont été présentés sur la Fig. 7. Par rapport aux homologues du groupe témoin, le sérum AP a stimulé la sécrétion de pepsine et de la production d'acide dans l'estomac de rat isolé (P < 0,05). L'intervention de CB1 /2 agoniste du récepteur HU210 atténué les changements induits par le sérum-AP de la sécrétion de pepsine et de sortie de l'acide (P < 0,05)., Alors que l'antagoniste du récepteur AM251 n'a pas réussi à présenter l'effet évident sur ces deux paramètres}

Effets des cannabinoïdes sur les niveaux d'IL-6 et KC dans l'effluent veineux gastrique chez le rat.

Après que les rats ont reçu le traitement du sérum de l'AP, les niveaux d'IL-6 et KC significativement élevés dans l'effluent veineux du estomac isolé de rat; HU210 inverser les modifications de l'IL-6 et KC induites par le sérum de rats AP (P < 0,05)., Alors que AM251 n'a eu aucun effet détectable sur les niveaux de cytokines et de chimiokines dans l'effluent veineux (Fig. 8)

Discussion

En clinique, les patients atteints de pancréatite aiguë, en particulier avec une pancréatite aiguë sévère, souffrent souvent AGML ou un ulcère de stress, une complication fréquente de l'AP. Les facteurs causaux pour les lésions de l'estomac comprennent, mais sans s'y limiter, le stress causé par la stimulation inflammatoire qui peut induire l'activation du /système rachidien sympathique surrénalien locus coeruleus norépinéphrine et le système de cortex hypothalamo-hypophyso-surrénalien. Les augmentations secrètes des catécholamines et des hormones glucocorticoïdes sont les facteurs les plus importants de stress du corps, pour ces composants provoquent l'acide gastrique hyper-sécrétion et le déplacement du flux sanguin qui provoquent une ischémie muqueuse gastro-intestinale. Fait important, l'ischémie séquentielle dégrade la capacité de la muqueuse gastrique pour éliminer l'acide en arrière diffusante, ce qui entraîne une diminution du pH intra-muros et l'activation de protéase, et une ulcération ultérieure [3], [4], [23]. D'autres mécanismes, y compris les radicaux libres dérivés de l'oxygène et des facteurs incertains, jouent également un rôle dans la lésion gastro-intestinale liée à une pancréatite aiguë.

Des recherches antérieures ont montré que AP plasma et le liquide d'ascite AP liées contiennent une grande quantité de les substances toxiques qui sont nocifs pour le corps [5], [6], [8], ce qui provoque l'endommagement du foie, les reins, les poumons et le système circulatoire et un dysfonctionnement gastro-intestinal, etc. [24] - [28]. Notre étude préalable a découvert que les cellules acineuses pancréatiques ont subi une surcharge de calcium et de vitalité réduite, comme étant incubés avec AP sérum ou du liquide d'ascite [8]. Dans cette étude, nous avons d'abord induite expérimentalement AP chez les rats et prouvé l'induction de modèle animal AP a réussi en démontrant le changement pathologique de la morphologie du pancréas et de l'augmentation des enzymes pancréatiques dans le sérum de rat après l'induction. Sur l'affirmation du modèle, nous avons continué à établir un profil d'expression génique pour illustrer l'expression du gène altéré des enzymes pancréatiques et des médiateurs inflammatoires, dans une tentative de retracer les gènes soulignement qui ont joué des rôles les plus importants dans la pathogenèse de AGML associé à AP. Et les résultats de l'AP et de contrôle des rats profilées en utilisant l'analyse de la puce génétique étaient compatibles avec ceux des analyses biochimiques. En outre, nous avons testé s'il y avait des effets bénéfiques des antagonistes et /ou agonistes cannabinoïdes chez les animaux atteints de pancréatite aiguë expérimentale.

D'après les résultats mentionnés ci-dessus, nous avons abordé la question de savoir si la sécrétion gastrique, à la fois le système endocrinien ou exocrine fonctions, seraient modifiées chez les rats AP. Il est connu que la gastrine stimule la production d'acide et la sécrétion de pepsine, comme la somatostatine contrecarre les effets de la gastrine. Lorsque gastrine ou sécrétion de somatostatine ne parvient pas à maintenir un équilibre de base, l'excédent de la pepsine et la libération d'acide disproportionnellement, entraînant des dommages et des dysfonctionnements de l'estomac lors de la pancréatite aiguë. Comme démontré dans ce rapport, nous avons constaté un niveau significativement élevé de gastrine dans le sérum et les niveaux de pepsine et d'acide élevées dans le suc gastrique des rats AP, qui a confirmé que les fonctions endocrines et exocrines de l'estomac ont été perturbés dans le modèle AP.

en outre, les enzymes activées circulant protéolytiques, des protéines vasoactives et endotoxines spécifiques à la pathogenèse de la pancréatite aiguë peuvent être responsables de AGML ainsi. Par conséquent, nous avons étudié les effets du sérum provenant de rats AP sur l'estomac de rat perfusé isolé, de telle sorte que l'organe peut ignorer le stress et les effets systémiques. L'estomac isolé de rat stimulé par le sérum d'AP rat non seulement montré la lésion de la muqueuse oculaire visible, mais a également présenté une série d'anomalies biochimiques, y compris des niveaux plus élevés de gastrine, cytokine IL-6, chimiokine KC, et le niveau inférieur de la somatostatine dans le l'effluent veineux gastrique, ainsi que la pepsine et la sortie relevée de l'acide dans la lumière des effluents gastrique. Il est raisonnable de conclure qu'il existe un déséquilibre entre le facteur agressif et le facteur de protection de la muqueuse gastrique au cours de la pancréatite aiguë. En particulier, la gastrine a augmenté, la production d'acide gastrique et la pepsine jouent conjointement un rôle important dans la pathogenèse de AGML, aggravant les dégâts de l'estomac et le déclenchement des cycles vicieux pendant une pancréatite aiguë.

Au cours de la dernière décennie, un certain nombre de publications ont montré que les effets anti-inflammatoires des cannabinoïdes [29] - [32]. Plusieurs études ont montré que les cannabinoïdes inhibent la sécrétion d'acide gastrique et de réduire les cytokines inflammatoires et d'autres médiateurs dans le plasma des animaux avec l'AP [33], [34]. Nos résultats non seulement confirment ces découvertes antérieures, mais démontrent également qu'un HU210 chimique, vraisemblablement un agoniste du récepteur cannabinoïde, remplissent des fonctions de la même manière que les cannabinoïdes dans la réduction des cytokines inflammatoires et d'autres médiateurs, par conséquent, améliorer les symptômes de AGML AP associé. Fait intéressant, les résultats de cette étude démontrent que HU210 peut atténuer les endocrines et exocrines changements gastriques dans l'estomac de rat isolé irrité par le sérum AP, inverser les niveaux anormalement gonflés de gastrine, l'acide gastrique et la pepsine et assourdir l'effet de ces facteurs nuisibles. De l'autre côté, HU210 augmente le niveau de la somatostatine qui inhibe la sécrétion de gastrine et de l'acide gastrique, donc exerce une action protectrice sur la muqueuse gastrique.

Les résultats de l'étude fournissent la cohérence harmonique de l'analyse génétique puce et biochimique les données d'essai en utilisant des échantillons à partir du modèle animal, ce qui suggère un mécanisme novateur que le début de AGML est au moins en partie, en raison de la gastrine et /acide gastrique somatostatine déséquilibre provoqué par les toxines dans le sérum AP; et agoniste cannabinoïde HU210 rétablit l'équilibre, d'où la protection. Les résultats confirment que HU210 est bénéfique pour le traitement de la pancréatite aiguë en raison de son rôle anti-inflammatoire et l'effet sur la prévention AGML liée à une pancréatite aiguë. Les résultats que l'antagoniste des récepteurs CB1 AM251 ne joue aucun rôle dans la lésion gastrique soutien AP induit notre postulation, confirmant le rôle positif de CB1 /2 récepteurs.

Dans une expérience prospective pour étudier si les inhibiteurs de la pompe à protons (IPP) peut protéger les animaux avec une pancréatite aiguë expérimentale, nous oméprazole administré (OME, ip, 40 mg /kg de poids), un agent de PPI représentant, à un groupe de rats en même temps quand AP induction a été réalisée. Les résultats préliminaires ont montré que l'OME a augmenté le taux de rats AP de survie (données non présentées). Toutefois, il faudra peut-étude multicentrique à élucider si les IPP sont bénéfiques comme une option thérapeutique dans la pancréatite aiguë de l'homme.

Compte tenu de tous ci-dessus, les résultats de notre étude expérimentale montrent que les réponses inflammatoires et les troubles de l'estomac fonctions de sécrétion, les deux endocrines et exocrines, sont les résultats de la pancréatite aiguë, et à leur tour contribuent à la pathogenèse de AGML. En outre, les résultats suggèrent que les cannabinoïdes HU210, l'agoniste du récepteur CB1 /2, a le potentiel thérapeutique pour AGML dans la pancréatite aiguë, en atténuant l'inflammation et la restauration de gastrine /somatostatine équilibre, puis en diminuant la sécrétion d'acide gastrique et la pepsine.

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