PLoS ONE: каннабиноидов защищает Изолированные HU-210 Rat Желудок против расстройства, вызванного сыворотке крыс с экспериментальной острой Pancreatitis

Абстрактный
<р> Острый панкреатит (AP), особенно тяжелый острый панкреатит часто приводит к дополнительным-панкреатических осложнений, таких как острый желудочно-кишечного тракта через слизистую оболочку поражения (AGML), которое сопровождается значительно высокой смертностью, но патогенез AP-индуцированной AGML до сих пор до конца не изучен. В этом отчете мы исследовали изменения компонентов в сыворотке крови и желудочном эндокринных и экзокринных функций у крыс с экспериментальным острым панкреатитом, и изучили возможный вклад этих изменений в патогенезе AGML. Кроме того, мы исследовали эффекты вмешательства рецепторов каннабиноидов агонистов и антагонистов HU-210 AM251 на изолированной и сыворотки перфузировались желудка крысы. Наши результаты показали, что AGML наступило после 5 ч репликации AP, и гомеостаз тело было нарушено в AP крысы, с повышением уровня панкреатических ферментов, липополисахаридными (LPS), proinflammtory цитокинов и хемокинов в крови, и дисбаланс желудка функция секреции. Перфузии изолированного желудка крысы с крысиной сывороткой AP вызвало морфологические изменения в желудке, сопровождается значительным приращением пепсина и [Н ^{+] выпуска и увеличение гастрина и снижение секреции соматостатина. HU-210 отменил AP-сывороточных индуцированных крыс патологические изменения, в том числе и реверсирования трансформации желудка морфологии в определенной степени. Результаты этого исследования доказывают, что воспалительные реакции и нарушение баланса секреции желудка во время развития АП ответственны за патогенез AGML, и предлагают терапевтический потенциал для AGML HU-210, связанного с острым панкреатитом.
<Р> Образец цитирования: Цао Mh, Li Yy, Сюй J, Фэн Yj, Лин Xh, Ли K, и др. (2012) каннабиноидов защищает Изолированные HU-210 Rat Желудок против расстройства, вызванного сыворотки крыс с экспериментальным острым панкреатитом. PLoS ONE 7 (12): e52921. DOI: 10.1371 /journal.pone.0052921
<р> Редактор: Винод К. Yaragudri, Натан Клайн институт психиатрических исследований и Нью-Йоркской школы медицины, Соединенные Штаты Америки}

Поступило: 9 мая 2012; Принято: 21 ноября 2012 года; Опубликовано: 28 Декабря, 2012
<р> Copyright: © 2012 Цао и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Эта работа Работа выполнена при поддержке Национального фонда естественных наук Китая (грант № 81270477 и 81141050 д-ру Ен юй Ли). http://www.nsfc.gov.cn/. Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

Введение
<р> Острый панкреатит (AP), особенно тяжелая AP, является потенциально смертоносных воспалительное заболевание поджелудочной железы, которая часто приводит к дополнительным панкреатического осложнений, даже нескольких системных дисфункций органов. Сообщалось, что 52% пациентов с острым панкреатитом развивается острый желудочно-кишечный слизистый поражения (AGML) или стрессовых язв [1], [2]. Хотя эндоскопическое наблюдение показывает, что большинство субъектов просто иметь несколько мелких эрозий в желудочно-кишечном тракте, оптимальное фармакологическое вмешательство продолжает оставаться предметом дискуссий, а также патогенез AGML остается неясным.
<Р> Некоторые исследователи сообщают, что стрессовое состояние при остром панкреатите вызывает уменьшенное кровоснабжение или гипоперфузии в слизистой оболочке желудка, а также контр-диффузии желудочного иона водорода (H ^{+) является важным фактором для AGML, а также [3], [4]. Другие исследования обнаружили, что в сыворотке крови и асцитической жидкости у больных АП и экспериментальных животных содержали большое количество токсичных веществ, таких как ферменты поджелудочной железы, эндотоксинов, воспалительных медиаторов [5], [6], которые могут внести свой вклад в полиорганной недостаточности при острой панкреатит [7], [8].
<р> на протяжении многих веков растение каннабис и его экстракты используются для облегчения симптомов желудочно-кишечных воспалительных заболеваний. Было установлено, что D 9-тетрагидроканнабинол, основным психоактивным компонентом конопли, проявляет свои первичные клеточные действия, хотя два G-белками, каннабиноидов 1 (СВ1) и каннабиноидов 2 (CB2) рецепторов [9] - [ ,,,0],11]. С тех пор эти два рецептора были признаны в качестве основных регуляторов физиологических и патологических процессов [12]. Каннабиноиды может уменьшить желудочно-кишечные секреции [13], а активация рецепторов CB1 проявляет защитную роль против индуцированной стрессом AGML [14], [15], но механизмы их действия остаются неуловимыми.
<Р> Цель этого Настоящая работа заключалась в изучении, с помощью как в естественных условиях и в пробирке эксперименты, изменения в компонентах сыворотки, альтерации желудочного эндокринных и экзокринных функций в крысиной модели AP, а также возможный вклад этих изменений в патогенезе AGML. Также были исследованы интервенционной эффекты CB1, используя его агониста и антагониста HU-210 AM251, в попытке лучше выяснения патофизиологические механизмы AP-ассоциированного AGML и противоязвенного потенциалы этих каннабиноидов агентов.}

Материалы и методы

Животные

Мужчина Sprague-Dawley крыс (220-250 г) были получены из экспериментального животного центра университета Фудань, Шанхай, Китай. До начала экспериментов все животные были размещены в течение 1 недели в стандартных условиях со свободным доступом к воде и корму лаборатории. Все экспериментальные процедуры ниже, были в соответствии с международными рекомендациями по уходу и использованию лабораторных животных и были одобрены Комитетом по этике Животных Тунцзи университета, Шанхай, Китай по.

Индукционная острого панкреатита у крыс
<р> крысы были распределены случайным образом на две группы: Точка доступа и ложной операции группа с 24 животных в каждой группе. Крысы голодали в течение ночи только с водой, разрешенной перед операцией. AP модель индуцировали методом, разработанным Ахо и др [16]. Если коротко, то крысы получили лапаротомию (~3 см абдоминальная-срединный разрез) в соответствии со стандартным асептическим процедуры и под общим наркозом с внутрибрюшинного введения 20% -ным раствором карбамата со скоростью 10 мл /кг. Biliopancreatic канал был временно окклюзированы на рубчика печени с тонкой мягкой микрососудов зажим, чтобы предотвратить рефлюкс заваренного материала в печень. Ретроградную инъекция 3% дезоксихолате натрия в Biliopancreatic проток Затем проводили (0,1 мл /100 г веса тела). Зажим удаляли после инъекции. Ложная операция была выполнена соответствующим образом без инъекции дезоксихолат натрия, и операция завершилась брюшную послойным закрытием. На пятый час после операции, собирали кровь из брюшной аорты под обезболиванием прокола. Все образцы крови центрифугировали и надосадочную жидкость (сыворотка), собирали, делили на аликвоты и хранили при -20 ° С для последующего применения. Поджелудочная железа была удалена, разделена на две части, и одну часть была введена в TRIzol немедленно и хранить при температуре -20 ° С для анализа GeneChip, а другая часть фиксировали 10% параформальдегидом. Желудок был также удален, открыт вдоль большой кривой, и фиксировали 10% параформальдегидом для последующего гистологического исследования.

гистологической оценки
<р> Гистологическая оценка проводилась на поджелудочной железе у крыс и желудка, которые были зафиксированы в 10% параформальдегидом и заливали в парафин. После 5 мкм толщина секции нарезали на Leica RM2126 микротома (Leica, Шанхай, Китай) и окрашивали гематоксилином (0,5%) и эозином (0,5%), с последующим наблюдением под микроскопом Motic BA300 (Motic China Group Co. Ltd ., Сямэнь, Китай). Гистологическое Scoring была оценена на срезах поджелудочной железы с использованием модифицированного критерия от Nathan JD, и др [17]. Оценка проводилась в десяти произвольно выбранных микроскопических полей горками каждого животного, и повторяется в трех крыс /группу слепым методом. И было выражено общее гистологическое оценка (0-9) в виде суммы отеком (0-3), инфильтрация воспалительных клеток (0-3), а также некроз тканей (0-3).

микрочипов Гибридизация пробирного
<р> анализ микрочипов был использован для идентификации транскрипционные профили некоторых воспалительных индексов в поджелудочной железе от крыс с острым панкреатитом. Массив гибридизацию проводили с использованием трех биологических повторяет образцов РНК, выделенной из поджелудочной железы, ЩФ и контрольных крыс. Подготовка зонда, гибридизацию чип, и анализ первичных данных были выполнены Bio Corporation Capital (фирмы лицензированным и уполномоченным Affymetrix работать в Пекине, Китай). Массивы были отсканированы с помощью сканера GeneChip 3000 7G (Affymetrix, Санта-Клара, Калифорния, США). Количественный анализ проводился с использованием Affymetric Microarray Suite 5.0 специальные термины (статистические алгоритмы) (Affymetrix ГСНК GeneChip операционное программное обеспечение) версии 1.4. Дифференциально экспрессируемые гены были идентифицированы с использованием программного обеспечения SAM (Существенный анализ микрочипа), и выбирается на основании их изменений кратной величины (> 2 раза) по сравнению с контрольными образцами

Иммуногистохимическое Анализ
. <р> Иммуногистохимическое окрашивание на парафиновых срезах желудка и поджелудочной железы крыс, не были выполнены с использованием кроличьей поликлональной анти-CB1 и анти-CB2 антител (кат. №: ALX-210-314 для анти-CB1 и кат. №: ALX-210-315 для анти-CB2, Enzo, Plymouth Meeting, Пенсильвания, США), как описано ранее [18]. Слайды с участками желудка крысы и поджелудочной железы инкубировали в течение ночи при 4 ° C с анти-CB1 или анти-CB2 антител, и меченного биотином козьего антитела против кроличьего IgG рабочей жидкости (кат. №: SP0023; Биосинтез биотехнологии Co. Ltd ., Пекин, Китай) затем наносят на каждый слайд, и инкубировали при 37 ° с в течение 15 минут с последующей инкубацией с HRP-меченым стрептавидином рабочего раствора при температуре 37 ° с в течение 15 мин, и предметные стекла промыты тщательно. И, наконец, слайды были ДАБ окрашенных и ядерной повторно окрашивали гематоксилином. Слайды отрицательного контроля были обработаны с помощью идентичных шагов, но первичное антитело было заменено PBS. Анализ изображений осуществляли с использованием цифрового Motic Med 6.0 системы анализа изображений. (Motic, China Group Co. Ltd, Сямэнь, Китай)

Вестерн блот для измерительных CB1 и CB2 Expression

CB1 и CB2 экспрессия белка в поджелудочной железе и желудке оценивали с помощью вестерн-блоттинга. нет Как было описано ранее [19], после инкубации с первичными антителами в разведении 1:250 индивидуально (кроличьего поликлонального анти-CB1 и анти-CB2 антитела, Кат. №:. ALX-210-314 для анти-CB1 и Кат №: ALX-210-315 для анти-CB2, Энцо, Plymouth Meeting, PA, США), BLOTTED нитроцеллюлозные мембраны (Ватман, Дассель, Германия) были тщательно промыть, а соответствующее вторичное антитело, конъюгированное с пероксидазой хрена, инкубировали в течение 1 ч при комнатная температура. Для внутреннего эталона использовали поликлональные кроличьи анти-мышиные β-актин антитела (1:2,000 разведение) (Abmart, Шанхай, Китай). И, наконец, связывание антитела детектировали путем воздействия на ECL вестерн-блоттинга реагенты для детекции (кат. №: SC-2048, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, США) и не записан на пленку

Приготовление Isolated- vascularly. перфузируемом Крыса желудок
<р> крысу анестезируют и Выделенную, vascularly перфузию желудка крысы получали, как описано ранее [20]. В кратком изложении, живот был открыт с срединный разрез при стерильных условиях. После лигирования брюшной аорты как раз над разветвлением чревной артерии, канюлю вставляли в целиакией артерии через разрез помещенной на аорте. Два миллилитра солевого раствора, содержащего 600 ЕД гепарина затем вводили в желудочную артерию через артериальный катетер. Впоследствии, теплый (37 ° С), модифицированный Кребса-Рингера раствор продувают смесью 95% O <суб> 2 и 5% СО <суб> 2 был введен. Венозный сточные воды собирали через воротную вену канюлю. Полиэтиленовая труба для просвете желудка перфузату вставляли в пищевод и наконечником, расположенным в полостной части желудка. После этого, то пилородуоденальных узел был выставлен, а другой полиэтиленовую трубку вводили в желудок через разрез на двенадцатиперстную кишку, а затем фиксируют с помощью лигатуры вокруг привратника. Перфузировались желудка крысы выделяли и помещали в теплую (37 ° C) небольшую камеру с раствором Кребса-Рингера.

Лечение Изолированный Rat Желудок
<р> Выделенный желудок vascularly перфузировались изменен раствор Кребса-Рингера в течение 30 мин уравновешивания до формального эксперимента. Затем перфузию проводят последовательно с тремя жидкостями и каждой текучей среды в течение 20 минут, в общей сложности 60 минут. Контрольная группа получила: 1) раствор Кребса-Рингера, 2) в сыворотке крови от нормальных контрольных крыс, 3) Кребса-Рингера раствор. Группа AP получил: 1) Кребса-Рингера раствор, 2) в сыворотке крови от AP крыс, 3) раствор Кребса-Рингера. Группа AP + HU получили: 1) раствор Кребса-Рингера + HU-210 (10 -7M), 2) AP + сыворотка HU-210 (10 -7M), 3) Кребса-Рингера раствор. А группа AP + AM получили: 1) Кребса-Рингера раствор + AM251 (10 -7M), 2) AP сыворотка + AM251 (10 -7M), 3) раствор Кребса-Рингера. Просвете желудка изолированного желудок вливают с нормальным солевым раствором (рН 7,0). Все жидкости перфузионные побежали с постоянной скоростью 1 мл /мин с помощью микро-инфузионных насосов. В то же время, решения и отдельные органы хранили при температуре 37 ° С с помощью терморегулирующие единиц в течение всего эксперимента. Образцы из вытекающего потока венозной или из просвете желудка сточных вод были собраны, в конце каждых 20 минут, в охлажденный пробирках, которые были немедленно хранили при -80 ° С в течение последующих измерительных экспериментов.

амилазы и липосахарид Уровни
<р> анализы амилазы и липополисахаридными уровней (LPS) в сыворотке от AP или контрольных крыс были выполнены на основе производителя рекомендовал процедуры (Cat No: C016 для амилазы набора для анализа, Jiancheng технологии, Нанкин, Китай, а также. . Кат. №: CE32545 для набора для анализа LPS, китайский подкова Краб Реагент Co. Ltd., Сямэнь, Китай)

Анализы для медиаторов воспаления

уровни интерлейкина-6 (IL-6 ) и цитокин-индуцированной нейтрофилами хемоаттрактантной 1 (CINC1 /КЦ) в сыворотке крови крыс и в венозной вытекающего из изолированного желудка крысы были определены количественно с использованием крыс IL-6 и комплектов KC ELISA на основании рекомендованных производителем протоколов (Кат. нет : F01731D для крыс интерлейкин 6 комплектов ELISA; Кат. №: F01723D для крыс KC ELISA наборов. H-Y Биологический Co. Ltd., Шанхай, Китай). Оптическая плотность определяли при длине волны 490 нм для поглощения в энзим-иммуноферментный анализ инструмента (микропланшетов Reader, модель Elx800; BioTek, Winooski, VT, США). Каждый образец измеряли трижды, и измерение было повторено в 6 образцах у крыс каждой группы. Данные, приведенные в венозную вытекающего из изолированного желудка крысы была представлена ​​разностью IL-6 или KC уровне между перфузией и стоке, рассматривается как освобождение IL-6 и КС из желудка крысы.

Гастрин и соматостатина уровни в животных образцы

гастрин и уровни соматостатина в сыворотке крови животных и в изолированном желудка венозной стоке были измерены с использованием коммерчески доступных гастрина и соматостатина радиоиммуноанализа с Kits (гастрин Kit:. Cat No. G01PJB Северный институт биологических технологий, Пекин, Китай Соматостатин Kit:.. Cat No. S111013, Второй военный медицинский университет, Шанхай, Китай). Процедуры измерения были основаны на рекомендациях производителей, как описано ранее [21]. Так же как и выше, каждый образец измеряли трижды, и измерение было повторено в 6 образцах у крыс каждой группы. Данные в венозной вытекающего из изолированного желудка крысы была представлена ​​с различиями гастрина или соматостатина уровне между перфузией и стоках, рассматривается как высвобождение гастрина и соматостатина из желудка крысы.

Пепсин и H + уровни в животных образцы
<р> анализы уровня пепсина в желудочном соке крысы и в просвете желудка вытекающего из изолированного желудка крысы были выполнены с использованием рекомендованные производителем протоколы (Cat. No. A081- 1, Jiancheng технологии, Нанкин, Китай), как [H +] в этих образцах измеряли с помощью дельта-320 рН-метр (Mettler-Toledo Inc. Цюрих, Швейцария) и показания затем были преобразованы в [H <вир> +].

Растворы и химические вещества
<р> HU-210 [(6aR) -транс-3- (1,1-диметилгептил) -6a, 7,10,10a-тетрагидро-1-гидрокси -6,6-диметил -6H-дибензо [б, г] пиран-9-метанол], AM251 [(N- (пиперидин-1-ил) -5- (4-йодфенил) -1- (2,4- дихлорфенил) - 4-метил-1Н-пиразол-3-карбоксамид)], были приобретены у Tocris (Tocris-Bioscience, Ellisville, MO, USA). Оба химические вещества, растворенные в растворителе, состоял из этанола, Tween80 и нормального физиологического раствора (NS), объемное соотношение 1:1:18, до концентрации 10 ^{-2M, при 37 ° С с использованием ультразвукового дезинтегратора, а затем дополнительно разбавляли в NS до 10 -5 М, и снова 10 -7M с перфузионной жидкости непосредственно перед использованием в условиях, которые были определены в экспериментальном исследовании [22]. Модифицированный раствор Кребса-Рингера состоит из 117,5 мМ NaCl, 4,7 мМ KCl, 2,4 мМ CaCl <югу> 2, 1,1 мМ MgCl <югу> 2, 1,1 мМ NaH <суб> 2PO <суб> 4, 25 мМ NaHCO <суб> 3, 11,1 мМ глюкозы, 0,05% бычьего сывороточного альбумина, и 4% декстран. Другие агенты, если источники не были упомянуты выше, были приобретены у Sigma (Shanghai, China).}

Анализ данных
<р> Все данные представлены как среднее ± SEM. Стьюдента-тест или одного факторного анализа отклонений (ANOVA) проводили с использованием программного обеспечения SPSS 13.0 (SPSS Co. Ltd., Шанхай, Китай). P-значения &л; 0,05 считались статистически значимыми

Результаты

Результаты эксперимента В естественных условиях

Патологические изменения в поджелудочной железе крыс AP. .
<р> Под световым микроскопом, было видно, что после обработки таурохолата натрия, крыс развился тяжелый острый панкреатит с явным отеком, вакуолизации и серьезных некрозы в ацинарных клетках поджелудочной железы тканей. И гистологические оценки у крыс AP были значительно выше, чем у крыс контрольной группы (рис. 1). В сочетании с повышенным уровнем активности амилазы в сыворотке крови крыс AP, результаты показали, что модель репликации AP у крыс была успешной.

Патологические изменения в желудке крыс AP.
<Р> В желудок крыс с острым панкреатитом, тяжелые патологические изменения возникли, экспонирование отек слизистой оболочки, эрозии и геморрагии, как продемонстрировано как macrography (рис 2А и 2В.) и микроскопические исследования (в рис 2D.); и эти травмы скопились главным образом в антральном желудка.

GeneChip анализ.
<р> Как показано на рис. 3А разброс участков представлены гены с двукратным и более высокой экспрессии были в верхней (красный) границы, в то время как гены с двукратным и более низкой экспрессии в нижней (зеленый) границы; а измененные гены тесно связаны с острым панкреатитом были показаны в кластерные узоры (рис. 3б). Было очевидно, что в профиле экспрессии, гены со значительно дифференциальные выражения (≥2 раза, P &л; 0,05), в основном те, которые были связаны с панкреатических пищеварительных ферментов, медиаторов воспаления и сигнальных путей, которые были выделены и перечисленные с их именем Джин и Генбанке ID в таблице 1.

изменения IL-6, уровни KC и LPS в сыворотке крови AP.

Оба уровня IL-6 и KC в сыворотке AP крысы отображается значительное увеличение по сравнению с теми, контрольных крыс, с подъемов на 145% и 186%, соответственно (Р &л; 0,05;. рис.4). Аналогичный, но более заметным рост наблюдался на уровне LPS в сыворотке крови крыс AP, с всплеском столько, сколько 231 раза больше, чем у контрольной группы (P < 0,01;. Фиг.4А)

Изменения. уровней гастрина и соматостатина в сыворотке крови крыс AP.
<р> в сыворотке крови крыс AP, гастрина и соматостатина уровни значительно возросли по сравнению с теми, контрольных крыс с подъемов на 169% и 147%, соответственно ( в обоих случаях, P &л; 0,05;.. фиг.4В)

изменения уровней пепсина и [H ^{+] в желудочном соке крыс AP
<р> Для того, чтобы оценить изменения желудка. экзокринной функции, анализы на уровне пепсина и [Н +] были выполнены с помощью желудочного сока ЩФ и контрольных крыс. Оба уровня пепсин и [Н +] в желудочном соке показало явное увеличение крыс AP по сравнению с теми, контрольных крыс, с подъемов на 177% и 347%, соответственно (рис. 4в).}

Выражение CB1 и CB2 рецепторы в поджелудочной железе и желудке крыс.
<р> исследованы характеристики экспрессии CB1 и CB2 рецепторы в поджелудочной железе и желудке крыс. Результаты показали, что образцы из животных в контрольной группе представлены лишь слабые иммуногистохимического окрашивания для CB1 и CB2 рецепторы в поджелудочной железе, в то время как образцы от крыс AP были выставлены увеличенные выражения CB1 и CB2 рецепторы. В основном, сильные положительные признаки коричневого окрашивания группируются в поджелудочной ацинусов (Arrowheads рис. 5 а). Повышающий правила CB1 и CB2 рецепторы в тканях поджелудочной железы крыс AP были дополнительно продемонстрирована с помощью Вестерн-блот-анализа и представлены на рис.5 В. Похожая характеристик экспрессии CB1 и CB2 рецепторы также были обнаружены в желудке крыс AP , о чем свидетельствует как иммуногистохимического окрашивания и вестерн-блот-анализа (фиг. 5 и C 5 D). Сильные положительные признаки коричневой окраски, в основном, в слизистой оболочке желудка (рис. 5 C, Arrowheads).

Результаты эксперимента In Vitro

Влияние каннабиноидов на желудочную патологические изменения и на гастрина и соматостатина выпуска.
<р> Для того, чтобы исследовать влияние CB1 рецептора агониста на HU-210 эндокринную функцию изолированного желудка крысы стимулировали AP крысиной сыворотки, мы рассмотрели изменения гастрина и соматостатина уровней в венозный поток из желудка, с или без вмешательства агониста рецептора СВ1 HU-210 и антагониста AM251. Результаты показали, что по сравнению с контрольной группой, желудок крыс обрабатывали AP сыворотки вызвала повышенный выпуск гастрина (Р &л; 0,05), а выпуск снизился соматостатин (Р &л; 0,05), HU-210 обратной изменения гастрина и соматостатина, индуцированные сыворотке AP крыс (P &л; 0,05) (. рис.6)., в то время как AM251 не проявляли детектируемого влияния на высвобождение двух гормонов

эффекты каннабиноидов на активность пепсина и [H ^{+] в просвете желудка сточные воды.
<р> были представлены эффекты агентов и AM251 HU-210 на активность пепсина и [H +] в просвете желудка истекающей из изолированного желудка крысы на рис. 7. По сравнению с аналогами контрольной группы, А.П. сывороточный стимулировали секрецию пепсина и выход кислоты в изолированном желудка крысы (Р &л; 0,05). Вмешательство CB1 /2 агонистом рецепторов HU-210 уменьшал AP сывороточные индуцированных изменений секреции пепсина и выхода кислоты (Р &л; 0,05)., В то время как антагонист рецептора AM251 не смог проявлять очевидный эффект от этих двух параметров}

Эффекты каннабиноидов на уровни ИЛ-6 и KC в желудочном венозной истекающей из крыс.
<р> После того, как крысы получали лечение сывороткой AP, уровни IL-6 и КС значительно повышен в венозной поток, вытекающий из изолированные желудка крысы; HU-210 отменил изменения IL-6 и KC, индуцированные сыворотке крыс AP (P < 0,05)., В то время как AM251 не было никакого обнаруживаемого влияния на уровни цитокинов и хемокинов в венозной стоках (. Рис 8)

Обсуждение
<р> В клинике, у пациентов с острым панкреатитом, особенно с тяжелым острым панкреатитом, часто страдают AGML или стрессовых язв, общее осложнение AP. Причинные факторы для повреждения желудка включают, но не ограничиваясь этим, стресс от воспалительного раздражения, которое может вызывать активацию симпатической системы /надпочечниковой продолговатом голубоватое-норадреналина и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы коры головного мозга. Скрытный увеличение катехоламинов и глюкокортикоидов являются наиболее важными факторами стресса тела, поскольку эти компоненты вызывают желудочной кислоты гипер секрецию и переключение передач кровотока, которые вызывают желудочно-кишечного тракта слизистой ишемии. Важно отметить, что ишемия последовательно понизило способность слизистой оболочки желудка распоряжаться задней светорассеивающие кислоты, что приводит к снижению рН очный и активации протеазы, и последующее изъязвление [3], [4], [23]. Другие механизмы, в том числе кислородных производных свободных радикалов и некоторых неопределенных факторов, также играют роль в желудочно-кишечном травмы, связанной с острого панкреатита.
<Р> Предыдущие исследования показали, что АР в плазме и АР, связанных с асцитической жидкости содержат большое количество токсичные вещества, которые являются вредными для организма [5], [6], [8], в результате чего повреждение печени, почек, легких и сердечно-сосудистой системы и желудочно-кишечной дисфункции и т.д. [24] - [28]. Наше исследование до обнаружили, что ацинарных клетках поджелудочной железы страдали от перегрузки кальция и снижает жизнеспособность, а инкубируют с AP сыворотки или асцитической жидкости [8]. В этом исследовании мы впервые экспериментально индуцированной AP в крысах и доказали, индукция модели AP животных было успешным, демонстрируя патологические изменения морфологии поджелудочной железы и увеличение поджелудочной железы фермента в сыворотке крови крыс после индукции. По утверждению модели, мы продолжали создать профиль экспрессии генов, чтобы проиллюстрировать измененную экспрессию генов ферментов поджелудочной железы и воспалительных медиаторов, в попытке проследить Подчеркивание гены, которые играли наиболее решающую роль в патогенезе AGML связанной с точкой доступа. И результаты от AP и контрольных крыс профилированный с использованием анализа гена чипа согласуются с результатами биохимических анализов. Кроме того, мы проверили, есть ли положительные эффекты каннабиноидов антагонистов и /или агонистов у животных с экспериментальным острым панкреатитом.
<Р> На основании вышеуказанных результатов, мы рассмотрели вопрос ли желудочной секреции, как эндокринные или экзокринной функции, будут изменены у крыс AP. Известно, что гастрин стимулирует выход кислоты и секреции пепсина, так как соматостатин противодействует эффектам гастрина. Когда гастрин или секрецию соматостатина не в состоянии поддерживать равновесие основной, избыток пепсин и выброс кислоты несоразмерно, что приводит к повреждениям и дисфункций желудка при остром панкреатите. Как показано в настоящем докладе, мы обнаружили значительно повышенный уровень гастрина в сыворотке крови, а также повышенные уровни пепсина и кислоты в желудочном соке AP крыс, которые подтвердили, что эндокринные и экзокринной функции желудка были нарушены в модели AP.
<р> Кроме того, циркулирующие активированные протеолитические ферменты, вазоактивные белки и эндотоксины, специфичные для патогенеза острого панкреатита может быть ответственным за AGML а. Таким образом, мы исследовали эффекты сыворотки крыс AP на изолированном и перфузируемом желудка крысы таким образом, чтобы орган мог игнорировать системное напряжение и воздействие. Выделенную желудка крысы стимулируется сыворотке AP крысы не только показал глаз видимые повреждения слизистой, но также представлен ряд биохимических нарушений, в том числе более высокие уровни гастрина, цитокина ИЛ-6, хемокинов KC, а также более низкий уровень соматостатина в желудочный венозный эффлюент, а также поднятый пепсин и выход кислоты в просвете желудка стоках. Разумно предположить, что существует дисбаланс между агрессивным фактором и защитным фактором слизистой оболочки желудка при остром панкреатите. В частности, повышенная гастрина, выход желудочной кислоты и пепсина совместно играют важную роль в патогенезе AGML, усугубляя повреждение желудка и запуская порочный круг при остром панкреатите.

В течение последнего десятилетия, ряд публикации показали противовоспалительные эффекты каннабиноидов [29] - [32]. Несколько исследований показали, что каннабиноиды подавляют секрецию желудочного сока и уменьшения воспалительных цитокинов и других медиатора в плазме животных с точкой доступа [33], [34]. Наши результаты не только подтверждают эти более ранние открытия, но также демонстрируют, что химическое вещество HU-210, по-видимому агониста каннабиноидных рецепторов, выполняют функции таким же образом, как каннабиноиды в снижении воспалительных цитокинов и других медиаторов, следовательно, смягчить симптомы АР-ассоциированной AGML. Интересно отметить, что результаты этого исследования показывают, что может ослабить HU-210 желудочных эндокринных и экзокринных изменения в изолированной желудка крысы раздражали AP сыворотки, поменять местами аномально завышенные уровни гастрина, желудочной кислоты и пепсина и приглушить влияние этих повреждающих факторов. С другой стороны, поднимает HU-210 уровень соматостатина, который ингибирует секрецию гастрина и желудочной кислоты, следовательно, оказывает защитное действие на слизистую оболочку желудка.
<Р> Результаты исследования обеспечивают гармоническую последовательность анализа генов-чипов и биохимических данные Анализ, использующий образцы из животной модели, предлагая новый механизм, что начало AGML, по крайней мере, частично, из-за гастрина и желудочной кислоты /соматостатин дисбаланс вызвана токсинов в сыворотке AP; и каннабиноидов агонисты восстанавливает HU-210 равновесие, отсюда и защиту. Эти данные подтверждают, что HU-210 является полезным для лечения острого панкреатита из-за его противовоспалительным роли и предотвращающий эффект на AGML, связанную с острым панкреатитом. Результаты, которые антагониста рецептора CB1 терпит неудачу AM251, чтобы играть какую-либо роль в AP индуцированной желудка поддержки повреждения наша ПОСТУЛИРОВАНИЕМ, подтверждая положительную роль CB1 /2 рецепторов.
<Р> В перспективном эксперименте, чтобы исследовать, если ингибиторы протонной помпы (ИЦП) может защитить животных с экспериментальным острым панкреатитом, мы вводили омепразол (ОМЕ, внутрибрюшинно, 40 мг /кг массы тела), представитель PPI агента, в группе крыс, в то же самое время, когда А.П. индукция была выполнена. Предварительные результаты показали, что ОМЕ повысило выживаемость крыс AP (данные не показаны). Тем не менее, возможно, потребуется многоцентровое исследование, чтобы выяснить, если ИЦП являются полезными в качестве терапевтического варианта при остром панкреатите человека.
<Р> Принимая во внимание все выше, результаты нашего экспериментального исследования показывают, что воспалительные реакции и нарушения желудка секреции, как эндокринные и экзокринной функции, являются исходы острого панкреатита, а они, в свою очередь, способствуют патогенеза AGML. Кроме того, результаты показывают, что каннабиноидов HU-210, агонист СВ1 /2, имеет терапевтический потенциал для AGML при остром панкреатите, ослабляя воспаление и восстановление гастрин /соматостатина равновесие, а затем снижает секрецию желудочной кислоты и пепсина.

• PLoS ONE: Послеоперационный Химиолучевая терапия в сочетании с Эпирубицин-Based триплетных Химиотерапия местно-ра…
• PLoS ONE: Анализ Желудок и Gut Microbiomes Восточного Oyster (Crassostrea virginica) из прибрежных Луизиана, США