PLoS ONE: kanabinoidų HU210 Apsaugo išskirti žiurkių skrandžio prieš pablogėja dėl to serume Rats su eksperimentinės Ūmus Pancreatitis

Anotacija

Ūminis pankreatitas (AP), ypač sunkiu ūminiu pankreatitu dažnai sukelia Papildomas kasos komplikacijų, tokių kaip ūmus virškinimo trakto gleivinės pažeidimas (AGML), kuris lydi labai didelis mirtingumas, tačiau AP "sukelta AGML patogenezė dar nėra iki galo suprastas. Šioje ataskaitoje, mes ištirti serumo komponentų ir skrandžio endokrininės ir egzokrininės funkcijos pakitimus žiurkėms su eksperimentinio ūminio pankreatito, studijavo galimus įnašus šių pakeitimų į AGML patogenezėje. Be to, mes ištirti intervencijos poveikį kanabonoidinių receptorių agonistų HU210 ir antagonistas AM251 izoliuotose ir serumo nušvies žiurkių skrandžiui. Mūsų rezultatai parodė, kad AGML įvyko po 5 h AP replikacija, o kūnas homeostazės buvo sutrikdyta AP žiurkės, su padidėjusiu kasos fermentų, lipopolisacharidų (LPS), proinflammtory citokinų ir chemokinus kraujyje, ir skrandžio disbalansas sekrecijos funkcija. Nutvieksianti į išskirti žiurkių skrandžio su AP žiurkių kraujo serume sukėlė morfologiniai pokyčiai skrandyje, kartu su žymiu prieaugio pepsino ir [H ^{+] išleidimo ir padidinti Gastrino sumažėjo somatostatino sekreciją. HU210 atvirkščia AP serume sukeltos žiurkių patologinius pakitimus, įskaitant transformacijos skrandžio morfologijos iki tam tikro laipsnio pasikeitimo. Rezultatai Šio tyrimo įrodyti, kad uždegiminė reakcija ir skrandžio sekrecijos disbalansas per AP vystymuisi yra atsakingas už AGML patogenezės ir pasiūlyti gydomąjį potencialą HU210 už AGML susijęs su ūminio pankreatito.}

citavimo: Cao MH, ličio YY Xu J., Feng Yj Lin XH Li K et al., (2012) kanabinoidų HU210 Apsaugo išskirti žiurkių skrandžio prieš pablogėja dėl to serume Rats su eksperimentinės ūminis pankreatitas. PLoS vieną iš 7 (12): e52921. Doi: 10,1371 /journal.pone.0052921

redaktorius: Vinod K. Yaragudri Nathan Kline institutas psichiatrijos mokslinių tyrimų ir Niujorko medicinos mokyklos, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: gegužės 9 2012; Priėmė: Lapkričio 21, 2012 m Paskelbta 28. Gruodis, 2012

Visos teisės saugomos: © 2012 Cao ir kt. Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė Nacionalinės Gamtos mokslo fondo Kinijos (dotacijos kodas 81270477 ir 81141050 dr Jong-yu Li). http://www.nsfc.gov.cn/. Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Ūminis pankreatitas (AP), ypač sunki AP, yra potencialiai mirtina uždegiminė liga kasos, kurios dažnai veda prie papildomų, kasos komplikacijų, net keliais sisteminių organų disfunkcijų. Buvo pranešta, kad 52% pacientų, sergantiems ūminiu pankreatitu plėtoti ūmių žarnyno gleivinės pažeidimui (AGML) arba streso opa [1], [2]. Nors endoskopinis stebėjimas rodo, kad tiriamųjų dauguma tik turėti keletą seklių eroziją virškinimo trakto, optimalus farmakologinis intervencija tebėra diskutuotinas, o AGML patogenezė lieka neaiškus.

Kai tyrėjai teigia, kad įtempto būklė su ūminio pankreatito priežastis dėl sumažėjusio kraujo tiekimą ar hipoperfuzija skrandžio gleivinę, ir netiesioginė difuzijos skrandžio vandenilio jonų (H ^{+) yra svarbus veiksnys AGML taip pat [3], [4]. Kiti tyrimai atrado, kad serumo ir ascitic skystis iš AF pacientų ir eksperimentinių gyvūnų buvo labai daug toksinių medžiagų, pavyzdžiui, kasos fermentų, endotoksinų, uždegimo mediatorių [5], [6], kuris gali prisidėti prie daugelio organų disfunkciją ūmus pankreatitas [7], [8].}

amžių, kanapių augalų ir jos ekstraktai buvo naudojami simptomams palengvinti skrandžio ir žarnų uždegiminių ligų. Buvo nustatyta, kad D ^{9-tetrahidrokanabinolio, pagrindinis psichiką komponentas Kanapės, daro savo pirminius ląstelių veiksmus, nors du su G baltymu sujungto receptorių, kanabinoidų 1 (CB1) ir kanabinoidų 2 (cb2) receptorių [9] - [ ,,,0],11]. Nuo tada šie du receptoriai buvo pripažinta kaip pagrindinių reguliavimo institucijų fiziologinių ir patologinių procesų [12]. Kanabinoidai gali sumažinti virškinimo trakto sekreciją [13], ir CB1 receptorių aktyvavimas eksponatų apsauginį vaidmenį nuo streso sukeltos AGML [14], [15], tačiau jų veikimo mechanizmai lieka nepagaunamas.}

siekiamo Šis darbas buvo ištirti, abu in vivo ir in vitro eksperimentų, kad serume komponentų pokyčiai, skrandžio endokrininę ir egzokrininės funkcijos pakitimai žiurkė AP modelio ir galimus įnašus šių pakeitimų į AGML patogenezėje. Taip pat tyrinėjo buvo į intervencines poveikį CB1 naudojant savo agonisto HU210 ir antagonisto AM251, stengiantis geriau išaiškinti patofiziologinių mechanizmus AP susijusių AGML ir priešopinius potencialą šių kanabinoidų agentai.

Medžiagos ir metodai

Gyvūnai

Sprague-Dawley žiurkės (220-250 g) buvo gauti iš eksperimentinių gyvūnų centras Fudano universiteto Šanchajuje, Kinijoje. Prieš eksperimentų, visi gyvūnai buvo laikomi 1 savaitę standartinėmis sąlygomis nemokamą prieigą prie vandens ir laboratorinės čiau. Toliau Visi eksperimentiniai procedūros buvo susitarusi su tarptautinių gairių priežiūros ir naudojimo laboratoriniams gyvūnams ir buvo patvirtintos Gyvūnų etikos komiteto Tongji universiteto Šanchajuje, Kinijoje.

indukcija Ūminis pankreatitas žiurkių

žiurkės buvo atsitiktinai paskirstyti į dvi grupes: A. ir negaunanti operacija grupė su 24 gyvūnų kiekvienoje grupėje. Žiurkėms buvo pasninkavo per naktį su tik vandens leidžiama prieš operaciją. A. modelis buvo sukeltas metodu sukurta Aho et al [16]. Trumpai tariant, žiurkės gavo laparotomija (~3 cm pilvo-vidurinės linijos įpjovimas) po standartine aseptinio tvarka ir pagal bendrąją nejautrą su injekciją į pilvą 20% etilo karbamido 10 ml /kg. Biliopancreatic kanalas buvo laikinai užkimštas ne kepenų hilum su smulkiu, švelniu kraujagyslių apkaba užkirsti kelią refliukso iš suleidžiama medžiagos kepenyse. Atgal, injekcija 3% natrio deoksicholato į biliopancreatic latako tada buvo atlikta (0,1 ml /100 g kūno svorio). Pakaba buvo pašalintas po injekcijos. Sham-operacija buvo atitinkamai vykdoma be natrio deoksicholatas injekcijos, o operacija buvo sudaryta su pilvo sluoksniuotoji uždarymo. Penktą valandą po operacijos, kraujas buvo surinkta iš pilvo aortos punkcijos pagal anaesthetization. Visi kraujo mėginiai buvo centrifuguojamas ir paviršiuje plūduriuojantį skystį (serumo) buvo surinkti, padalinamas alikvotinėmis dalimis, ir laikomi -20 ° C temperatūroje arba vėlesnės paraiškos. Kasa buvo pašalintas, padalintas į dvi dalis, ir viena dalis buvo įdėti į trizol nedelsiant, ir parduotuvėje -20 ° C temperatūroje genechip analizės, kaip ir kita dalis buvo nustatyta su 10% paraformaldehido. Skrandis taip pat buvo pašalintas, atidarė kartu dideliame kreive, ir fiksuotojo su 10% paraformaldehido už kylančių patologinį tyrimą.

histologinis įvertinimas

histologinis įvertinimas buvo atliktas žiurkių kasos ir skrandžio, kurios buvo nustatytos 10% paraformaldehidas ir įdėta į parafiną. Po 5 mkm storio sekcijos buvo griežinėliais ant "Leica RM2126 Mikrotoms (Leica, Šanchajus, Kinija) ir tamsintas hematoksilinu (0,5%) ir eozinu (0,5%), o po to stebint pagal ranga Motic BA300 mikroskopu (MOTIC Kinija Group Co Ltd ., Siamenas, Kinija). Histologinis Balai buvo vertinamas pagal kasos skyriuose naudojant modifikuotą kriterijų iš Nathan JD et al [17]. Vertinimas buvo atliekamas dešimtyje atsitiktinai pasirinktų mikroskopinių srityse kiekvieno gyvūno skaidres ir pakartota trijų žiurkių /grupės aklu būdu. Ir buvo išreikštas bendras histologinis rezultatas (0-9) kaip edemos suma (0-3), uždegiminės ląstelės infiltracija (0-3) ir audinių nekrozė (0-3).

mikrogardeliq Hibridizacija Analizės

mikrogardelių sistemoje analizė buvo naudojami siekiant nustatyti transkripcijos profilius kai kurių uždegiminių indeksų kasos žiurkės su ūminio pankreatito. Array hibridizacija buvo atliekami naudojant tris biologinius lygiagretūs RNR mėginių paimti iš AP ir kontrolės žiurkių kasos. Zondas paruošimas, lustas hibridizacija ir pirminė duomenų analizė buvo atliekama Capital Bio Corporation (firmai licenciją ir įgalioto Affymetrix veikti esantys Pekinas, Kinija). Masyvai buvo nuskaitomi naudojant Genechip skaitytuvas 3000 7g (Affymetrix, Santa Clara, CA, JAV). Kiekybinė analizė atlikta naudojant Affymetric mikrogardeliq Suite 5.0 specifiniai terminai (statistinis algoritmai) GCOS (Affymetrix GeneChip operacinės sistemos programinės įrangos versija 1.4). Į skirtingai išreikšti genai buvo nustatyti naudojant SAM (Reikšmingas analizė mikrogardeliq) programinę įrangą, ir atrenkami remiantis jų klosčių pokyčių pagrindu (> 2 kartus), palyginti su kontrolinių bandinių

imunohistocheminis analizė
. ALX-210-314 anti-CB1 ir Kat:: ALX-210-315

imunohistocheminis dėmių ant parafino skyriuose žiurkių skrandžio ir kasos ne buvo atliekama naudojant triušis polikloninį anti-CB1 ir anti-cb2 antikūnus (Kat.. anti-cb2, Enzo, Plymouth Meeting, Pensilvanija, JAV), kaip aprašyta anksčiau [18]. Skaidres su skyriuose žiurkių skrandžio ir kasos buvo inkubuojami per naktį 4 ° C su anti-CB1 arba anti-CB2 antikūnų, ir biotino žymėto ožkos anti-triušio IgG darbo skystis (Kat:. SP0023; biosintezė biotechnologijos Co Ltd ., Pekinas, Kinija) buvo taikomas ant kiekvienos skaidrės ir inkubuojamos 37 ° C temperatūroje 15 minučių, po to inkubacijos su HRP-žymėto streptavidino darbinio tirpalo, esant 37 ° C temperatūroje 15 minučių, ir skaidres buvo kruopščiai perplaunami. Galiausiai, skaidres buvo TBP tamsintas ir branduolinė Re tamsintas hematoksilinu. Atsižvelgiant į neigiamą kontrolės skaidres buvo apdoroti per identiški etapų, tačiau pagrindinis antikūnas buvo pakeistas su PBS. Vaizdo analizė buvo atlikta naudojant skaitmeninį MOTIC Med 6,0 ​​vaizdų analizės sistemą. (MOTIC; Kinija Group Co Ltd, Siamenas, Kinija)

Imunoblotingo matavimo CB1 ir CB2 išraiška pervežimas

CB1 ir cb2 baltymo ekspresija kasos ir skrandžio buvo įvertintos Imunoblotingo. Kaip aprašyta anksčiau [19], po inkubacijos su pirminių antikūnų A 1:250 praskiedimo atskirai (triušis polikloninius Anti-CB1 ir anti-cb2 antikūnai, Kat:.. ALX-210-314 anti-CB1 ir Kat: ALX-210-315 anti-cb2, Enzo, Plymouth Meeting, PA, USA), kad bloting nitroceliulioziniai membranos (WHATMAN, Dassel, Vokietija) buvo kruopščiai išskalauti ir tinkamas antriniais antikūnais, konjuguoto su krienų peroksidazės inkubuojama 1 val ne kambario temperatūra. Vidaus nuoroda, buvo naudojamas polikloninis triušių anti-pelės β-Aktinis antikūnas (1:2,000 praskiedimas) (Abmart, Šanchajus, Kinija). Galiausiai antikūno jungimosi buvo aptikta poveikio ECL Imunoblotingo aptikimo REAGENTAI (Kat. AB-2048, Santa Cruz Biotechnologijos, Santa Krusas, Kalifornija, JAV) ir įrašyti į filmo

paruošimas Isolated- vascularly. nušvies Žiurkė skrandžio

Žiurkė buvo anestezuoti ir izoliuoti, vascularly nušvies žiurkė skrandis buvo paruoštas kaip aprašyta anksčiau [20]. Trumpai tariant, pilvo buvo atidaryta vidurinq pjūvį steriliomis sąlygomis. Po to, kai žiedais, pilvo aortos iškart virš į pilvo ertmės arterijos atšakų, kaniulę buvo įterptas į pilvo ertmės arterijos per pjūvį, padėto ant aortos. Du mililitrų fiziologinio tirpalo, kuriame yra 600 V heparino tada buvo švirkščiamas į skrandžio arteriją per arterinė kaniulė. Vėliau, šiltas (37 ° C), modifikuotos, Krebs-Ringer sprendimą smulkių burbuliukų su 95% O _{2 ir 5% CO 2 buvo įvesta mišinio. Venų nuotekos buvo surinkta per vartų venos kateterių. Polietileno vamzdis skrandžio spindžio perfuzinio buvo įterptas į stemplę ir galiuko, įtaisytu toje luminal dalį, skrandžio. Vėliau, The prievarčio ir dvylikapirštės žarnos sankryžos buvo veikiami, o kitas polietileno vamzdis buvo įvesta į skrandį per pjūvį ant dvylikapirštėje žarnoje, ir tada nustato Ligatūra aplink fazė prievartyje. Nušvies žiurkė skrandis buvo izoliuotas ir dedamas į šiltą (37 ° C) Mažoji kamera su Krebso-Ringerio tirpalu.}

Gydymas izoliuotų Rat skrandžio

izoliuotos skrandis buvo vascularly nušvies keistas Krebso-Ringerio tirpalą 30 min nusistovi pusiausvyra prieš formalių eksperimentų. tada perfuzijos buvo atliktas nuosekliai su trijų skysčių ir kiekvienas skystis 20 minučių, iš viso 60 minučių. Kontrolinė grupė gavo: 1) Krebso-Ringerio tirpalas, 2) serumas nuo įprastų kontrolės žiurkėms 3) Krebso-Ringerio tirpalu. AP grupė gavo: 1) Krebso-Ringerio tirpalas, 2) serumas nuo AP žiurkėms 3) Krebso-Ringerio tirpalu. Iš AP + HU grupė gavo: 1) Krebso-Ringerio tirpalo + HU210 (10 ^{-7M), 2) AP serumo + HU210 (10 -7M), 3) Krebso-Ringerio tirpalo. Ir AP + AM grupė gavo: 1) Krebso-Ringerio tirpalas + AM251 (10 -7M), 2) AP serumo + AM251 (10 -7M), 3) Krebso-Ringer sprendimą. Skrandžio spindį izoliuotos skrandžio buvo nušvies fiziologinio tirpalo (pH 7,0). Visi perfuzijos skysčiai bėgo pastoviu kursu 1 ml /min, naudojant mikro-infuzijos pompomis. Tuo tarpu, sprendimai ir izoliuotos organai buvo laikomi 37 ° C temperatūroje, naudojant termostato vienetų visoje eksperimento metu. Mėginiai iš venų nuotekų arba iš skrandžio liumenų nuotekų buvo surinkti, ne į kas 20 minučių pabaigoje į atšaldytus mėgintuvėlius, kurie buvo iš karto prie -80 ° C vėlesnių matavimo eksperimentus.}

amilazės ir lipopolisacharidų Lygiai

amilazės ir lipopolisacharidų (LPS) lygių serumą AP ar kontrolės žiurkių tyrimai buvo atlikti remiantis gamintojo rekomenduojama tvarką (Kat: C016 už amilazės bandymo komplektas, Jiancheng technologijos Nanjing, Kinija ir. . Kat. CE32545 už LPS bandymo komplektas, kinų Pasagos krabų Reagentų Co Ltd Xiamen, Kinija)

Kiekybinėje uždegimo mediatorių

lygmenų interleukino-6 (IL-6 ) ir citokinų sukeltą neutrofilų chemoattractant 1 (CINC1 /KC) į žiurkių ir į venų išmetant dujas iš izoliuotos žiurkės skrandžio serume buvo įvertinami naudojant žiurkės IL-6 ir KC ELISA rinkiniai remiantis gamintojo rekomenduojami protokolai (Kat. nėra : F01731D už žiurkė interleukino 6 ELISA rinkiniai; Kat:. F01723D už žiurkių KC ELISA rinkiniai. H Y Biologinis Co Ltd, Šanchajus, Kinija). Optinis tankis buvo nustatomas 490 nm absorbcijos fermento susietų immunoabsorbent bandymo priemonės (microplate Reader, Modelis Elx800; BioTek, WINOOSKI, VT, JAV). Kiekvieną bandinį buvo matuojamas tris kartus ir matavimo buvo pakartotas 6 žiurkių pavyzdžių kiekvienai grupei. Į venų išmetant dujas iš izoliuotos žiurkės skrandžio duomenys buvo pateikti kartu su IL-6, arba KC lygmeniu tarp perfuzijos ir nuotekose skirtumo, svarstomas kaip IL-6 ir KC atleidimo nuo žiurkių skrandžiui.

gastrinas ir somatostatin lygiai gyvūnų Egzemplioriai pervežimas

gastrinas ir somatostatino lygiai gyvūnų serume ir į izoliuotas skrandžio venų nuotekų buvo matuojamas naudojant rinkoje parduodamas gastrinas ir somatostatin radioimuninė rinkiniai (gastrinas komplektas: kat. Nr G01PJB Šiaurės institutas biologinių technologijų, Pekinas, Kinija somatostatin komplektas:. kat. Nr S111013, Antrojo karo medicinos universiteto, Šanchajus, Kinija). Matavimo procedūros buvo grindžiamas gamintojo rekomendacijas, kaip aprašyta anksčiau [21]. Kaip tas pats kaip aukščiau, kiekvieną bandinį buvo matuojamas tris kartus ir matavimo buvo pakartotas 6 žiurkių pavyzdžių kiekvienai grupei. Į venų išmetant dujas iš izoliuotos žiurkės skrandžio duomenys buvo pateikti su gastrinas arba somatostatino lygio skirtumus tarp perfuzijos ir nuotekose, kurios laikomos su Gastrino ir somatostatinas atleidimo nuo žiurkių skrandžiui.

pepsinas ir o + lygiai Animal Egzemplioriai

pepsino lygio žiurkių skrandžio sulčių ir skrandžio liumenų išmetant dujas iš izoliuotos žiurkės skrandžio tyrimai buvo atliekami naudojant gamintojas rekomenduojama protokolus (Kat. Nr A081- 1, Jiancheng technologijos, Nanjing, Kinija), nes [H ^{+] šiuose mėginiuose buvo matuojamas delta 320 pH-metrą (Mettler-Toledo Inc Ciurichas, Šveicarija), o tada rodmenys buvo perskaičiuotos [H +].}

Sprendimai ir chemikalai

HU210 [(6aR) Trans-3- (1,1-Dimethylheptyl) -6a, 7,10,10a-tetrahidro-1-hidroksi -6,6-dimetil -6H-dibenzo [b, d] piran-9-metanolis], AM251 [(N- (piperidin-1-il) -5- (4-jodfenil) -1- (2,4- dichlorfenil) - 4-metil-1H-pirazol-3-karboksamido)], buvo įsigytas iš Tocris (Tocris-biologijos, Ellisville, MO, JAV). Abi chemijos produktai buvo ištirpinti tirpiklyje sudarė etanolio, Tween80 ir izotoninio natrio chlorido tirpalo (NS), ir tūrio santykis 1:1:18, koncentracijai 10 ^{-2M, sudaro 37 ° C temperatūroje, naudojant žinutę ultrasonicator, ir tada buvo dar kartą praskiesti N iki 10 -5, M, ir vėl 10 -7M su perfuzijos skysčio tik prieš naudojimą tokiomis sąlygomis, kad buvo nustatytas bandomojo tyrimo [22]. Modifikuota Krebso-Ringerio tirpalą sudarė 117,5 mM NaCl, 4,7 mM KCl, 2,4 mM CaCl _{2, 1,1 mM MgCl 2, 1,1 mM NaH 2PO 4, 25 mM NaHCO 3, 11.1 mM gliukozės, 0,05% galvijų serumo albumino, ir 4% dekstrano. Kitos medžiagos, jei šaltiniai nebuvo minėta, buvo įsigytas iš Sigma (Šanchajus, Kinija).}}

Duomenų analizė

Visi duomenys yra pateikti kaip vidurkis ± SEM. Stjudento t-testas arba vienas veiksnys dispersinė analizė (ANOVA) buvo atlikta naudojant SPSS 13.0 programinę įrangą (SPSS Co Ltd, Šanchajus, Kinija). P-vertės < 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas

Rezultatai

Rezultatai nuo eksperimento , in vivo

Patologiniai pokyčiai AP žiurkių kasos. .

Pagal šviesos mikroskopijos, buvo akivaizdu, kad po gydymo natrio taurocholato, žiurkės sukurtas sunkiu ūminiu pankreatitu su akivaizdžiu edema, vakuolizaciją ir rimtų nekrozė į acinarinėse ląstelių kasos audinius. Ir histologinės balų priklausomybė AP žiurkių buvo daug didesnis nei iš kontrolės žiurkių (1 pav.). Kartu su aukštesnio laipsnio amilazės aktyvumui AP žiurkių kraujo serume, rezultatai parodė, kad AP modelis replikacijos žiurkėms buvo sėkmingas.

Patologiniai pokyčiai AP žiurkių skrandžiui.

iš žiurkių, sergantiems ūminiu pankreatitu skrandžio, sunkios patologiniai pokyčiai atsirado, eksponuoti gleivinės edema, eroziją ir kraujavimas kaip rodo tiek macrography (2A ir 2B pav.) ir mikroskopines patikrinimai (pav 2D.); ir šie sužalojimai congregated daugiausia skrandžio antralinėje dalyje.

GeneChip analizė.

Kaip parodyta Fig. 3A, sklaida sklypai atstovavo genus su du kartus ir aukštojo išraiška buvo viršutiniame (raudonas) ribos, o genai, kurių du kartus ir mažesnės raiškos apatiniame (žalias) ribos; ir pasikeitusios genai glaudžiai susijusios su ūminiu pankreatitu buvo parodyta grupavimo modelių (3b pav.). Tai buvo akivaizdu, kad ekspresijos profilį, genai su žymiai skirtingą išraiškos (≥2-kartus, P < 0,05) yra daugiausia tuos, kurie buvo susiję su kasos virškinimo fermentų, uždegimo mediatorių ir signalo perdavimo kelių, kurie buvo išskirti ir išvardijami nurodant jų Genų Vardas ir GeneBank ID 1 lentelėje

pasikeitimus IL-6, KC ir LPS lygiai AP serume.

Abu IL-6 ir KC lygiai AP serume žiurkės rodomas padidinimą, kaip, palyginti su tais kontrolės žiurkių, su upsurges prie 145 °% ir 186%, atitinkamai (P < 0,05; 4 pav.). Panašus, bet ryškesni padidėjimas buvo pastebėtas LPS lygiu AP žiurkių kraujo serume, su išaugusio kaip kiek 231 kartų, kad kontrolinės grupės (p < 0,01; pav. 4A)

pakeitimus. iš gastrino ir somatostatino lygių AP žiurkių kraujo serume.

AP žiurkių kraujo serume, gastrino ir somatostatino kiekis labai padidėjo, palyginti su kontrolinių žiurkių, su upsurges 169% ir 147% (atitinkamai abiem atvejais, p < 0,05;.. 4B pav)

pokyčiai pepsino lygių ir [H ^{+] skrandžio sulčių AP žiurkių}

Jei įvertinti skrandžio pakeitimus. egzokrininė funkcija, tyrimai dėl pepsino lygio ir [H ^{+] buvo atliekami naudojant skrandžio sulčių AP ir kontrolės žiurkėms. Tiek pepsino lygis ir [H +] į skrandžio sulčių parodė, atskirą stebimas AP žiurkių, palyginus su kontrolės žiurkių, su upsurges 177% ir 347%, atitinkamai (4C pav.).}

išraiška CB1 ir cb2 receptorius žiurkių kasos ir skrandžio.

Tirti išraiška charakteristikos CB1 ir cb2 receptorius žiurkių kasos ir skrandžio. Rezultatai parodė, kad egzemplioriai iš gyvūnų kontrolinėje grupėje pateikti tik silpnas immunohistological dažymas, CB1 ir cb2 receptorius kasos, o pavyzdžiai iš AP žiurkėmis buvo eksponuojami padidėjo išraiškos CB1 ir cb2 receptorius. Daugiausia, stiprūs teigiami požymiai rudos dažymo susitelkę kasos acini (5 pav. A strėlių antgalių). Up-nuostatai CB1 ir cb2 receptorius kasos audinių AP žiurkėmis buvo toliau rodo Vakarų dėmė analizė ir pateiktos 5 pav B. panašiais žodžiais charakteristikas CB1 ir cb2 receptoriai taip pat buvo nustatyta, jog AP žiurkių skrandžio , kaip rodo tiek immunohistological dažymo ir Vakarų dėmė tyrime (5 pav. C ir 5 D). Stiprios teigiamų ženklų rudos dažymo buvo daugiausia skrandžio gleivinės (5 pav. C, strėlių antgalių).

Rezultatai nuo eksperimento, in vitro

poveikis kanabinoidų skrandžio patologiniai pokyčiai ir gastrinas ir somatostatino spaudai.

Jei ištirti CB1 receptorių agonistų HU210 poveikį endokrininės funkcijos izoliuotos žiurkės skrandžio skatino su AP žiurkių kraujo serume, mes išnagrinėjo gastrino ir somatostatino lygio pakitimus venų nuotekos iš skrandžio, su arba be intervencijos CB1 receptorių agonistas HU210 ir antagonistas AM251. Rezultatai parodė, kad, palyginti su kontroline grupe, žiurkės skrandžio gydomi AP serumo sukėlė didesnį gastrino išleidimą į aplinką (P <0.05), bet tuo pačiu metu mažiau somatostatino atpalaidavimo (P <0.05), HU210 atvirkščia gastrino ir somatostatino pokyčius, kuriuos sukelia serume AP žiurkės (P < 0,05) (pav. 6)., o AM251 nebuvo eksponuoti aptinkamo poveikio dėl dviejų hormonų išleidimo

efektai kanabinoidų apie pepsino aktyvumo ir [H ^{+] į skrandžio liumenų srautą.}

agentų HU210 ir AM251 nuo pepsino aktyvumo ir [H ^{+] skrandžio liumenų nuotėkų izoliuotos žiurkės skrandžio poveikis buvo pateikta pav. 7. Lyginant su kontroline grupe kolegomis, AP serumo skatino pepsino sekreciją ir Rūgšties kiekis išskirti žiurkių skrandžio (P <0.05). Iš CB1 /2 receptorių agonistų HU210 intervencija susilpninto AP serume sukeltus pasikeitimus pepsino sekrecijos ir rūgšties produkcijos (P < 0,05)., O receptorių antagonistas AM251 nepavyko parodyti akivaizdų poveikį šių dviejų parametrų}

efektai iš kanabinoidų apie IL-6 ir KC lygių skrandžio venų nuotėkų žiurkėms.

Po to, kai žiurkės gavo AP serumo gydymą, IL-6 ir KC lygio, kuris gerokai padidėjusi venų nuotekas iš izoliuotos žiurkės skrandžio; HU210 atstatomi IL-6 ir KC pokyčius, kuriuos sukelia serume AP žiurkėmis (P < 0,05)., O AM251 turėjo neaptinkama įtaką citokinų ir chemokino į venų nuotekų lygio (. 8 pav)

Diskusijos

klinikoje, kad pacientams, sergantiems ūminiu pankreatitu, ypač su sunkiu ūminiu pankreatitu, dažnai kenčia AGML ar streso opa, yra dažna komplikacija AP. Priežastinių veiksnių bambą traumos apima, bet neapsiriboja, streso nuo uždegimo stimuliacijos, kuri gali indukuoti lokusas ceruleus-norepinefrino /simpatinės-antinksčių šerdinės sistemos aktyvinimą ir pagumburio-hipofizės-antinksčių žievės sistemą. Slaptos padidėja katecholaminų ir gliukokortikoidų hormonų yra svarbiausi veiksniai kūno streso, kad šie komponentai išprovokuoti skrandžio rūgšties hiper-sekreciją ir kraujotakos perjungimą, kad sukelti virškinimo trakto gleivinės išemija. Svarbiau, išemija paeiliui menkina skrandžio gleivinės gebėjimą perleisti nugaros sklaidantis rūgšties, todėl vidiniams pH ir aktyvavimo proteazės sumažėjimo, ir vėlesnis išopėjimas [3], [4], [23]. Kiti mechanizmai, įskaitant ir deguonies kilmės laisvųjų radikalų ir kai neaiškus veiksnių, taip pat vaidina vaidmenį virškinimo traumos, susijusios su ūminiu pankreatitu.

Ankstesni tyrimai parodė, kad A. plazmos ir AP susiję ascitic skystis yra didelį kiekį toksiškos medžiagos, kurios yra kenksmingos [5] kūną, [6], [8], sukelia kepenų, inkstų, plaučių ir kraujotakos sistemos ir virškinimo trakto sutrikimas ir tt žalą [24] - [28]. Mūsų Prieš tyrimas nustatė, kad kasos salelių ląstelių patyrė kalcio perkrovos ir sumažinti gyvybingumą, kaip buvo inkubuojami su AP serumo ar ascitic [8] skysčiu. Šiame tyrime mes pirmą kartą sukeltas praktiškai išbandytas AP žiurkėms ir įrodė, kad AP gyvūnų modelio indukcijos buvo sėkmingas įrodant patologinę kasos morfologijos pokyčius ir kasos fermento padidėjimas žiurkių kraujo serume po indukcijos. Po patvirtinimą modelio, mes ir toliau nustatyti genų ekspresijos profilio iliustruoti pakitusi geno ekspresiją kasos fermentų ir uždegimo mediatorių, bandant atsekti apatinė genus, kurie grojo svarbiausius vaidmenis AGML patogenezės, susijusioje su AP. Ir rezultatai iš AP ir kontrolės žiurkių profiliuoti naudojant genų mikroschemų analizę buvo sutampa su biocheminių tyrimų. Be to, mes patikrinome, jei ten buvo naudingas poveikis kanabinoidų antagonistų ir /ar agonistų Gyvuliai su eksperimentinio ūminio pankreatito.

Remiantis minėtų rezultatų, nagrinėjo klausimą, ar skrandžio sekreciją, tiek endokrininės ar egzokrininė funkcijos, būtų pakeista AP žiurkėms. Ji yra žinoma, kad gastrino stimuliuoja skrandžio rūgšties sekrecija ir pepsino sekreciją, kaip somatostatino neutralizuoja gastrino poveikį. Kai gastrino arba somatostatino sekrecijos nepavyksta išlaikyti pagrindinę pusiausvyrą, perteklius pepsinas ir rūgšties išsiskyrimą neproporcingai, todėl žalos ir sutrikimus, skrandžio metu ūminio pankreatito. Kaip parodė šios ataskaitos, mes nustatėme, žymiai padidinta gastrinas lygį serume ir padidėjęs pepsino ir rūgšties kiekį skrandžio sultyse AP žiurkių, kurios patvirtino, kad endokrininės ir egzokrininės funkcijos skrandyje buvo sutrikdyta į AP modelį.

Be to, cirkuliuojantys aktyvuota Proteolitiniai fermentai, vazoaktyvius baltymai ir endotoksino, kurios yra būdingos ūmaus pankreatito patogenezės gali būti atsakingas už AGML taip pat. Todėl mes ištirti serumo nuo AP žiurkių poveikį izoliuotos ir nušvies žiurkių skrandžio tokio, kad organas gali ignoruoti sisteminę streso ir pasekmių. Izoliuoti žiurkė skrandžio stimuliuojama kraujo serume AP žiurkėmis parodė ne tik akį matomi gleivinės sužalojimas, bet ir pristatė biocheminių sutrikimų serija, įskaitant aukštųjų lygių Gastrino, citokinų IL-6, chemokino KC, ir žemesnio lygio somatostatinas skrandžio venų nuotekų, taip pat iškilusis pepsino ir rūgšties produkcijos skrandžio spindžio produkto srautą. Tai yra pagrindas daryti išvadą, kad yra tarp agresyvaus faktoriaus ir per ūminio pankreatito apsauginio faktoriaus skrandžio gleivinės disbalansas. Visų pirma, padidėjo Gastrino, skrandžio rūgšties produkcijos ir pepsino kartu vaidina svarbų vaidmenį į AGML patogenezės sunkinančių skrandžio žalą ir suveikimo užburtą ciklų metu ūminio pankreatito.

Per pastarąjį dešimtmetį, daug skaičių publikacijomis parodė, kad anti-uždegiminių poveikį kanabinoidų [29] - [32]. Keletas tyrimų parodė, kad kanabinoidai slopina skrandžio rūgšties sekreciją ir sumažina uždegiminius citokinus ir kitą tarpininką į gyvūnų plazmoje su AP [33], [34]. Mūsų rezultatai ne tik patvirtinti šiuos ankstesnius atradimus, bet taip pat rodo, kad cheminė medžiaga HU210, matyt, kanabinoido receptoriaus agonistas, tarnauti funkcijas tuo pačiu būdu, kaip kanabinoidų sumažinti uždegiminių citokinų ir kitų tarpininkų, taigi savijautos pagerinimui AP-susijusio AGML simptomus. Įdomu tai, kad šio tyrimo rezultatai rodo, kad HU210 gali sušvelninti skrandžio endokrininę ir Egzokrininis pokyčius išskirti žiurkių skrandžio erzina AP serume, atvirkštinės nenormaliai išpūstus lygius Gastrino, skrandžio rūgšties ir pepsino ir muffle šių žalingų veiksnių poveikį. Iš kitos pusės, HU210 kelia somatostatinas lygį, kuris slopina sekreciją Gastrino ir skrandžio rūgšties, todėl daro apsauginį veiksmų dėl skrandžio gleivinę.

Tyrimo rezultatai suteikia harmoningą darną genų mikroschemų analizės ir biocheminių Tyrimo duomenimis, naudodamiesi mėginius iš gyvūnų modelio, o tai rodo romaną mechanizmą, kad AGML pradžia, bent jau iš dalies, atsižvelgiant į Gastrino ir skrandžio rūgšties /somatostain disbalansas suaktyvinamas AP serume toksinų; ir kanabonoidinių agonistas HU210 atstato pusiausvyrą, taigi ir apsaugą. Tyrimo rezultatai paremti, kad HU210 yra naudingas gydant ūminį pankreatitą, nes jos prieš uždegimas vaidmenį ir užkirsti kelią poveikį AGML susijusi su ūminiu pankreatitu. Rezultatai kad CB1 receptorių antagonistas AM251 nepavyksta žaisti bet kokį AP sukeltas skrandžio žalos paramos vaidmenį mūsų postulavimas, patvirtindamas teigiamus vaidmenis CB1 /2 receptorius.

būsimasis eksperimentas ištirti, ar protonų siurblio inhibitorių (PSI) gali apsaugoti gyvūnus su eksperimentinio ūminio pankreatito, mes vartojamas omeprazolis (Om, IP, 40 mg /kg, svorio), tipinis PPI agento, į žiurkių grupės tuo pačiu metu, kai buvo atlikta AP indukcija. Preliminarūs rezultatai rodo, kad Om padidėjo išgyvenamumas AP žiurkėmis (duomenys neparodyti). Tačiau gali tekti daugiacentriu tyrimą, kuriuo siekiama išsiaiškinti, ar PSI yra naudingas kaip terapinio parinktį ūminio pankreatito žmonėms.

Atsižvelgiant visų pirma, rezultatai iš mūsų eksperimentinio tyrimo atskleisti, kad uždegiminė reakcija ir skrandžio sutrikimai sekrecija, tiek endokrininės ir egzokrininės funkcijos, yra ūminio pankreatito rezultatai, ir jie savo ruožtu prisideda prie AGML patogenezėje. Be to, rezultatai rodo, kad kanabinoido HU210, CB1 /2 receptoriaus agonistas, turi terapinį potencialą AGML į ūminio pankreatito pagal lengvinančios uždegimą ir atkurti gastrino /somatostatino pusiausvyrą, ir tada sumažinant skrandžio rūgšties ir pepsino sekreciją.

• PLoS ONE: Pooperacinis chemoradioterapija Kartu su epirubicino-Based trynukų chemoterapija lokaliai progresavusiam adenokarcinoma skrandžio ar gastroezofaginio Junction
• PLoS ONE: analizė Skrandžio ir žarnyno Microbiomes Rytų austrė (Crassostrea virginica) Pakrančių Luizianoje, JAV