PLOS ONE: Cannabinoides HU210 Protege estómago de rata aislado contra el deterioro causado por suero de ratas con pancreatitis aguda experimental

Extracto

pancreatitis aguda (PA), especialmente pancreatitis aguda grave a menudo causa complicaciones extra-pancreática, tales como lesión de la mucosa gastrointestinal aguda (AGML) que se acompaña de una considerablemente alta mortalidad, sin embargo, la patogénesis de la AP AGML inducida todavía no se entiende completamente. En este informe, hemos investigado las alteraciones de los componentes del suero y endocrino gástrica y funciones exocrinas en las ratas con pancreatitis aguda experimental, y estudiamos las posibles contribuciones de estas alteraciones en la patogénesis de la AGML. Además, hemos explorado los efectos de la intervención del agonista de los receptores cannabinoides HU210 y el antagonista AM251 en aislados y perfundidos suero estómago de rata. Nuestros resultados mostraron que la AGML se produjo después de 5 h de la replicación del AP, y la homeostasis corporal fue perturbado en AP rata, con un aumento de los niveles de enzimas pancreáticas, lipopolisacárido (LPS), citoquinas proinflammtory y quimiocinas en la sangre, y un desequilibrio de la gástrico función de la secreción. Perfusión del estómago de rata aislados con el suero de rata AP provocó cambios morfológicos en el estómago, acompañado con un incremento significativo de la pepsina y la liberación [H ^{+], y el aumento de la secreción de gastrina y somatostatina disminuido. HU210 invierte las ratas alteraciones patológicas AP-suero inducida, incluyendo la reversión de la transformación de la morfología gástrica a cierto grado. Los resultados de este estudio demuestran que las respuestas inflamatorias y el desequilibrio de la secreción gástrica durante el desarrollo de AP son responsables de la patogénesis de la AGML, y sugieren el potencial terapéutico de HU210 para AGML asociado con pancreatitis aguda.}

cita: Cao Mh, Li Yy, Xu J, Feng y j, Lin Xh, Li K, et al. (2012) Cannabinoides HU210 Protege estómago de rata aislado contra el deterioro causado por suero de ratas con pancreatitis aguda experimental. PLoS ONE 7 (12): e52921. doi: 10.1371 /journal.pone.0052921

Editor: Vinod K. Yaragudri, Instituto Nathan Kline para la Investigación Psiquiátrica y la Escuela de Medicina de Nueva York, Estados Unidos de América

Recibido: 9 de mayo de 2012; Aceptado: 21 Noviembre 2012; Publicado: December 28, 2012

Derechos de Autor © 2012 Cao et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

Financiación:. Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Grant No. 81270477 y 81141050 con el Dr. Yong Li-yu). http://www.nsfc.gov.cn/. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito

Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia

Introducción

pancreatitis aguda (PA), especialmente PA grave, es una enfermedad inflamatoria potencialmente letal del páncreas que a menudo conduce a complicaciones extra-pancreática, incluso múltiples disfunciones de órganos sistémicos. Se ha informado de que el 52% de los pacientes con pancreatitis aguda desarrollar lesión aguda gastrointestinal mucosa (AGML) o úlcera de estrés [1], [2]. Aunque la observación endoscópica muestra que la mayoría de los sujetos simplemente tiene múltiples erosiones superficiales en el tracto gastrointestinal, la intervención farmacológica óptima sigue siendo un tema de debate, y la patogénesis de la AGML sigue sin estar clara.

Algunos investigadores informan que la condición de estrés con pancreatitis aguda hace que el suministro de sangre disminuida o hipoperfusión en la mucosa gástrica, y el contra-difusión de ión de hidrógeno gástrica (H ^{+) es un factor importante para AGML así como [3], [4]. Otras investigaciones descubrieron que el suero y líquido ascítico de pacientes de AP y animales experimentales contenía una gran cantidad de sustancias tóxicas, tales como las enzimas pancreáticas, endotoxinas, mediadores de la inflamación [5], [6], que pueden contribuir a las múltiples disfunciones de órganos en aguda pancreatitis [7], [8].}

Durante siglos, la planta de cannabis y sus extractos se han utilizado para aliviar los síntomas de enfermedades inflamatorias gastrointestinales. Se ha establecido que D ^{9-tetrahidrocannabinol, el principal componente psicoactivo de Cannabis, ejerce sus acciones celulares primarias aunque dos receptores acoplados a proteínas G, de cannabinoides 1 (CB1) y cannabinoides 2 (CB2), los receptores [9] - [ ,,,0],11]. Desde entonces, estos dos receptores han sido reconocidos como los principales reguladores de procesos fisiológicos y patológicos [12]. Los cannabinoides pueden reducir la secreción gastrointestinal [13], y la activación de los receptores CB1 exhibe papel protector contra AGML inducida por estrés [14], [15], pero los mecanismos de su acción siendo difícil de alcanzar.}

El objetivo de la este trabajo fue explorar, por tanto in vivo como in vitro experimentos, los cambios en los componentes del suero, las alteraciones de las funciones endocrinas y exocrinas gástricas en ratas modelo de AP, y las posibles contribuciones de estas alteraciones en la patogénesis de la AGML. También probaron fueron los efectos de la intervención de CB1 utilizando su HU210 agonistas y antagonistas AM251, en un esfuerzo para aclarar mejor los mecanismos fisiopatológicos de AGML asociado-AP y los potenciales de estos agentes antiulcerosos de cannabinoides.

Materiales y Métodos

Animales

ratas macho Sprague-Dawley (220-250 g) se obtuvieron del Centro Experimental Animal de la Universidad de Fudan, Shanghai, china. Antes de los experimentos, todos los animales se alojaron durante 1 semana bajo condiciones estándar con acceso libre al agua y de laboratorio Chow. Todos los procedimientos experimentales a continuación estaban de acuerdo con las directrices internacionales para el cuidado y uso de animales de laboratorio y fueron aprobadas por el Comité de Ética Animal de la Universidad de Tongji, Shanghai, China.

La inducción de la pancreatitis aguda en ratas

Las ratas fueron asignados al azar en dos grupos: AP y el grupo de operación simulada con 24 animales en cada grupo. Las ratas se mantuvieron en ayunas durante la noche con sólo agua permitido antes de la cirugía. modelo de AP fue inducida por el método desarrollado por Aho et al [16]. Brevemente, las ratas recibieron una laparotomía (~ 3 cm de la incisión abdominal de la línea media) siguiendo el procedimiento aséptico estándar y bajo anestesia general con inyección intraperitoneal de 20% de carbamato de etilo en 10 ml /kg. El conducto biliopancreática se ocluyó temporalmente en el hilio hepático con una pinza microvascular fino y suave para prevenir el reflujo del material de infusión para el hígado. Se realizó entonces una inyección retrógrada de desoxicolato de sodio 3% en el conducto biliopancreática (0,1 ml /100 g de peso corporal). La pinza se retira después de la inyección. Sham-operación se realizó en consecuencia sin la inyección de desoxicolato de sodio, y la cirugía se concluyó con cierre estratificado abdominal. En la quinta hora después de la cirugía, se recogió la sangre de la punción aorta abdominal bajo anestesia. Todas las muestras de sangre se centrifugaron y se recogió el líquido sobrenadante (suero), alícuotas, y se almacenaron a -20 ° C para aplicaciones posteriores. El páncreas se retiró, se divide en dos partes, y una parte se puso en Trizol inmediatamente y se almacena a -20 ° C para el análisis de GeneChip, como la otra parte se fijó con paraformaldehído al 10%. También se eliminó el estómago, se abrió a lo largo de la curva grande, y se fija con un 10% de paraformaldehído durante subsiguiente examen patológico.

Evaluación histológica

La evaluación histológica se realizó en el páncreas y el estómago de ratas que fueron corregidos en 10% de paraformaldehído y embebidos en parafina. A partir de entonces, a 5 micras de espesor secciones se cortaron con un microtomo Leica RM2126 (Leica, Shanghai, China) y se tiñeron con hematoxilina (0,5%) y eosina (0,5%), seguida de la observación al microscopio BA300 de Motic (Motic de China Group Co. Ltd. ., Xiamen, china). Histológico La puntuación se aprecia en las secciones pancreáticas utilizando un criterio modificado de Nathan JD, et al [17]. La evaluación se realizó en diez campos microscópicos elegidos aleatoriamente de diapositivas de cada animal, y se repitió en tres ratas /grupo en una forma ciega. Y la puntuación histológica total (0-9) se expresó como la suma de edema (0-3), la infiltración de células inflamatorias (0-3), y la necrosis del tejido (0-3).

Microarray Ensayo de hibridación se utilizó

análisis de microarrays para identificar los perfiles de transcripción de algunos índices inflamatorios en el páncreas de rata con pancreatitis aguda. gama hibridaciones se llevaron a cabo utilizando tres repeticiones biológica de RNA de muestras extraídas del páncreas de AP y de control de ratas. preparación de la sonda, la hibridación de chips, y el análisis de datos primarios se realizaron por Capital Bio Corporation (una empresa certificada y autorizada por Affymetrix para operar en Beijing, China). Las matrices fueron escaneados utilizando el escáner GeneChip 7G 3000 (Affymetrix, Santa Clara, CA, EE.UU.). El análisis cuantitativo se realizó mediante Affymetric Microarray Suite 5.0 Condiciones Específicas (Algoritmos de Estadística) SMOC (Affymetrix GeneChip operativo de software) Versión 1.4. Los genes expresados ​​diferencialmente se identificaron utilizando software SAM (Análisis Significativo de Microarray), y se seleccionan sobre la base de sus cambios veces (> 2 veces) en comparación con las muestras de control

Análisis Inmunohistoquímica
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tinción inmunohistoquímica en secciones de parafina de estómago de rata y el páncreas se realizaron con policlonal de conejo anti-CB1 y CB2 anticuerpos anti-(Cat. no: ALX-210-314 para anti-CB1 y Cat. no: ALX-210-315 para anti-CB2, Enzo, Plymouth Meeting, PA, EE.UU.) como se describe anteriormente [18]. Los portaobjetos con las secciones del estómago de rata y el páncreas se incubaron durante la noche a 4 ° C con anticuerpos anti-CB2 o anti-CB1, y el marcado con biotina de cabra anti-IgG de conejo fluido de trabajo (Cat. No: SP0023; Biosíntesis Biotecnología Co. Ltd ., Beijing, china) fue entonces aplicada sobre cada portaobjetos y se incubó a 37 ° C durante 15 minutos, seguido de incubación con una solución de trabajo de estreptavidina marcada con HRP a 37 ° C durante 15 minutos, y portaobjetos se enjuagaron a fondo. Por último, los portaobjetos se tiñeron-DAB y nuclear re-teñidas con hematoxilina. Los portaobjetos de control negativo se procesaron a través de los pasos idénticos, pero el anticuerpo primario se sustituyó por PBS. Análisis de imágenes se realizó utilizando digitales Motic Med sistema de análisis de imágenes 6.0. (Motic; de China Group Co. Ltd., Xiamen, China)

Western Blot para la medición de CB1 y CB2 Expresión

CB1 y CB2 expresión de la proteína en el páncreas y el estómago se evaluaron por transferencia de Western. Como se ha descrito anteriormente [19], después de la incubación con los anticuerpos primarios en un (policlonal de conejo 1:250 dilución individual anticuerpos anti-anti-CB2 y CB1, Cat. No:. ALX-210-314 para anti-CB1 y Cat no: ALX-210-315 para anti-CB2, Enzo, Plymouth Meeting, PA, EE.UU.), las membranas de nitrocelulosa manchada (Whatman, Dassel, Alemania) se lavaron a fondo, y el anticuerpo secundario apropiado conjugado con peroxidasa de rábano picante se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente. Como referencia interna, se utilizó conejo policlonal anti-ratón de actina β-anticuerpo (1:2,000 dilución) (Abmart, Shanghai, China). Por último, la unión del anticuerpo se detectó por la exposición a reactivos de detección ECL Western Blot (Cat. No: SC-2048, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, EE.UU.) y se registra en una película

Preparación de Isolated- vascularmente. perfundido de rata de estómago

rata se anestesió y la aislada, de estómago de rata perfundido vascularmente se preparó como se describe anteriormente [20]. En pocas palabras, se abrió el abdomen con una incisión en la línea media en condiciones estériles. Después de la ligadura de la aorta abdominal justo por encima de la ramificación de la arteria celíaca, se insertó una cánula en la arteria celíaca a través de una incisión colocado en la aorta. Dos mililitros de solución salina que contiene 600 U de heparina se inyectan en la arteria gástrica a través de la cánula arterial. Posteriormente, una tibia (37 ° C) modificó solución de Krebs-Ringer burbujear con una mezcla de 95% de O _{2 y 5% de CO 2 se introdujo. El efluente venoso se recogió a través de una cánula de la vena porta. Un tubo de polietileno para perfundido lumen gástrico se inserta en el esófago y la punta situada en la parte luminal del estómago. Después, la unión piloroduodenal fue expuesto, y otro tubo de polietileno se introdujo en el estómago a través de una incisión en el duodeno, a continuación, fijada por una ligadura alrededor del píloro. El estómago perfundido de rata se aisló y se coloca en un ambiente cálido (37 ° C) pequeña cámara con solución de Krebs-Ringer.}

Tratamiento del estómago de rata aislada

El estómago aislado se perfundió con vascularmente modificado solución de Krebs-Ringer durante 30 minutos de equilibrio antes de los experimentos formales. La perfusión se efectúa a continuación secuencialmente con tres fluidos y cada fluido durante 20 minutos, con un total de 60 minutos. El grupo de control recibió: 1) solución de Krebs-Ringer, 2) suero de ratas normales de control, 3) de solución de Krebs-Ringer. El grupo AP consiguió: 1) solución, 2) de suero de Krebs-Ringer a partir de ratas AP, solución de Krebs-Ringer 3). El grupo de AP + HU consiguió: 1) solución de Krebs-Ringer + HU210 (10 ^{-7M), 2) AP + suero HU210 (10 -7M), 3) solución de Krebs-Ringer. Y el grupo de AP + AM consiguió: 2) AP + suero AM251 (10 -7M), 3) Solución 1) solución de Krebs-Ringer + AM251 (10 -7M), Krebs-Ringer. La luz gástrica del estómago aislado se perfundieron con solución salina normal (pH 7,0). Todos los fluidos de perfusión corrieron a una velocidad constante de 1 ml /min mediante el uso de bombas de micro-infusión. Mientras tanto, las soluciones y los órganos aislados se mantuvieron a 37 ° C por unidades termostáticas todo el experimento. Se recogieron las muestras de efluente venoso o de efluentes lumen gástrico, al final de cada 20 minutos, en tubos de ensayo refrigerados que se almacenaron inmediatamente a -80 ° C para los experimentos de medición posteriores.}

amilasa y lipopolisacárido niveles

los ensayos de amilasa y niveles de lipopolisacáridos (LPS) en el suero de AP o de control de ratas se lleva a cabo basándose en el fabricante recomienda procedimientos (Cat No: C016 para el kit de ensayo de amilasa, Jiancheng Tecnología, Nanjing, china, y. Cat. No:. CE32545 para el kit de ensayo de LPS, chino del cangrejo de herradura Reactivo Co. Ltd., Xiamen, china)

Los ensayos para mediadores de la inflamación

Los niveles de interleucina-6 (IL-6 ) y de citoquinas inducida por neutrófilos quimioatrayente 1 (CINC1 /KC) en el suero de la rata y en el efluente venoso desde el aislado de estómago de rata se cuantificaron usando el kits KC de ELISA de IL-6 y de rata basado en el fabricante recomienda protocolos (Cat. no : F01731D para la interleucina 6 rata kits ELISA; Cat. no: F01723D de rata kits ELISA KC. H-Y Biológica Co. Ltd., Shanghai, China). Se determinó la densidad óptica a 490 nm de absorbancia en un instrumento de ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (lector de microplacas, Modelo ELx800; BioTek, Winooski, VT, EE.UU.). Cada muestra se midió tres veces y la medición se repitió en 6 muestras de ratas de cada grupo. Los datos en el efluente venoso del estómago de rata aislado se presentó con la diferencia de IL-6 o KC nivel entre la perfusión y el efluente, siendo considerado como la liberación de IL-6 y KC desde el estómago de rata.

gastrina y somatostatina niveles de especímenes animales

la gastrina y somatostatina niveles en el suero de los animales y en el efluente venoso aislado estómago se midieron usando kits de radioinmunoensayo de gastrina y somatostatina disponibles comercialmente (kit de gastrina: Cat. Nº G01PJB , Instituto del Norte de Tecnología biológica, Beijing, china somatostatina Kit:. Cat. No. S111013, Segunda Universidad médica Militar, Shanghai, china). Los procedimientos de medición se basan en las recomendaciones del fabricante como se describió anteriormente [21]. Como mismo que el anterior, cada muestra se midió tres veces y la medición se repitió en 6 muestras de ratas de cada grupo. Los datos en el efluente venoso desde la aislada estómago de rata se presentó con las diferencias de nivel de gastrina o somatostatina entre la perfusión y el efluente, siendo considerada como la liberación de gastrina y somatostatina del estómago de rata.

pepsina y H + los niveles en muestras de animales

los ensayos de nivel de pepsina en el jugo gástrico de rata y en el efluente lumen gástrico desde el estómago de rata aislados se realizaron utilizando el fabricante recomienda protocolos (Cat. No. A081- 1, Jiancheng Tecnología, Nanjing, china), como [H ^{+] en estas muestras se midieron por Delta 320 pH-metro (Mettler-Toledo Inc. Zurich, Suiza) y las lecturas se convierte a continuación en [H +].}

Soluciones y Productos Químicos

HU210 [(6aR) trans-3- (1,1-dimetilheptilo) -6A, 7,10,10a-tetrahidro-1-hidroxi -6,6-dimetil 6H-dibenzo [b, d] piran-9-metanol], AM251 [(N- (piperidin-1-il) -5- (4-yodofenil) -1- (2,4- diclorofenil) - 4-metil-1H-pirazol-3-carboxamida)], se compraron de Tocris (Tocris-Bioscience, Ellisville, MO, EE.UU.). Ambos productos químicos se disolvieron en un disolvente consistía en etanol, Tween 80 y solución salina normal (NS), relación de volumen 1:01:18, a la concentración de 10 ^{-2M, a 37 ° C usando un ultrasonicador, y luego se diluyeron adicionalmente en NS a 10 -5 M, y de nuevo a 10 -7M con líquido de perfusión justo antes de usarse en las condiciones que se determinaron en el estudio piloto [22]. La solución de Krebs-Ringer modificada se compone de NaCl 117,5 mM, KCl 4,7 mM, CaCl 2,4 mM _{2, MgCl 1,1 mM 2, NaH 1,1 mM 2 PO 4, bicarbonato sódico 25 mM 3, glucosa 11,1 mM, 0,05% de albúmina de suero bovino, y 4% de dextrano. Otros agentes, si las fuentes no fueron mencionadas anteriormente, fueron adquiridos de Sigma (Shanghai, China).}}

Análisis de Datos

Todos los datos se expresan como media ± SEM. de la t de Student o el análisis de un solo factor de la varianza (ANOVA) se realizó utilizando el software SPSS 13.0 (SPSS Co. Ltd., Shanghai, China). P-valores de < 0,05 se consideraron estadísticamente significativas

Resultados

resultados del experimento En Vivo

Los cambios patológicos en el páncreas de ratas AP. .

en el microscopio óptico era evidente que después del tratamiento con taurocolato de sodio, ratas desarrollaron pancreatitis aguda grave con edema obvio, vacuolización y necrosis graves en las células acinares de los tejidos pancreáticos. Y los resultados histológicos en ratas AP eran mucho más altos que los de las ratas de control (Fig. 1). En combinación con el aumento del nivel de actividad de la amilasa en el suero de ratas AP, los resultados demostraron que la replicación del modelo AP en ratas se ha realizado correctamente.

Los cambios patológicos en el estómago de ratas AP.

el estómago de las ratas con pancreatitis aguda, los cambios patológicos graves surgió, exhibiendo edema de la mucosa, la erosión y hemorragias como se demuestra por tanto macrografía (Fig 2A y 2B.) y los exámenes microscópicos (Fig. 2D); y estas lesiones se reunían principalmente en el antro gástrico.

GeneChip análisis.

Tal como se muestra en la Fig. 3A, los gráficos de dispersión representados genes con doble y mayor expresión estaban en el límite superior (rojo), mientras que los genes con doble y una menor expresión en el límite inferior (verde); y los genes modificados directamente relacionadas con la pancreatitis aguda se muestran en los patrones de agrupamiento (Fig. 3B). Era obvio que en el perfil de expresión, los genes con diferencial significativamente expresiones (≥2 veces, P < 0,05) son principalmente aquellos que se relaciona con las enzimas digestivas pancreáticas, mediadores de la inflamación y las vías de transducción de señales, que fueron blanco y que figuran con su nombre de genes y el Banco Genético ID en la Tabla 1.

cambios de IL-6, los niveles de KC y LPS en el suero AP.

Tanto los niveles de IL-6 y KC en el suero de AP ratas muestran aumentos significativos en comparación con los de las ratas de control, con brotes de 145% y 186%, respectivamente (P < 0.05; Fig. 4). Un aumento similar pero más prominente se vio en el nivel de LPS en el suero de ratas AP, con un aumento tanto como 231 veces de la del grupo control (P < 0.01; Fig. 4A)

cambios. de los niveles de gastrina y de somatostatina en el suero de ratas AP.

en el suero de las ratas de AP, los niveles de gastrina y de somatostatina aumentaron significativamente en comparación con los de las ratas de control, con brotes de 169% y 147%, respectivamente ( en ambos casos, P < 0,05;. la Fig. 4B)

los cambios de los niveles de pepsina y [H ^{+] en el jugo gástrico de ratas AP}

Para evaluar los cambios gástrico. la función exocrina, los ensayos para el nivel pepsina y [H ^{+] se realizaron utilizando el jugo gástrico de AP y de control de ratas. Tanto nivel pepsina y [H +] en el jugo gástrico mostró un claro aumento en ratas AP en comparación con los de las ratas de control, con brotes de 177% y 347%, respectivamente (Fig. 4C).}

expresión de receptores CB1 y CB2 en páncreas de rata y el estómago
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se investigaron las características de expresión de receptores CB1 y CB2 en páncreas de rata y el estómago. Los resultados demostraron que las muestras de los animales del grupo de control presentaron ser débil tinción inmunohistoquímico para receptores CB1 y CB2 en el páncreas, mientras que los especímenes procedentes de ratas AP habían exhibido un aumento de expresión de receptores CB1 y CB2. Principalmente, las fuertes señales positivas de colorante marrón agrupados en el acinos pancreáticos (puntas de flecha Fig. 5 A). La UP-regulaciones de los receptores CB1 y CB2 en los tejidos pancreáticos de ratas AP se demostraron por análisis de transferencia de Western y se presentan en la figura 5. B. Los similares características de expresión de receptores CB1 y CB2 también fueron encontrados en el estómago de las ratas AP , como se ha demostrado tanto por tinción inmunohistoquímico y ensayo de transferencia Western (Fig. 5 C y 5 D). Las fuertes señales positivas de teñido de color marrón fueron principalmente en la mucosa gástrica (Fig. 5 C, puntas de flecha).

resultados del experimento in vitro

Efecto de los cannabinoides sobre gástrica cambios patológicos y en la liberación de gastrina y somatostatina.

Para investigar el efecto de CB1 HU210 agonista de los receptores en la función endocrina del estómago de rata aislado estimulado con suero de rata AP, se examinaron las alteraciones de los niveles de gastrina y somatostatina en el efluente venoso del estómago, con o sin la intervención de los receptores CB1 HU210 agonista y antagonista AM251. Los resultados mostraron que en comparación con el grupo control, el estómago de rata tratados con suero AP provocó una liberación de gastrina aumentó (P < 0,05), pero una menor liberación de somatostatina (P < 0,05), HU210 invierten los cambios de gastrina y de somatostatina inducida por el suero de ratas AP (P < 0,05) (Fig. 6)., mientras AM251 no mostraron un impacto detectable sobre la liberación de las dos hormonas

Efectos de los cannabinoides sobre la actividad de la pepsina y [H ^{+] en el efluente lumen gástrico.}

los efectos de los agentes HU210 y AM251 sobre la actividad de la pepsina y [H ^{+] en el efluente de la luz gástrica aislada estómago de rata se presentan en la Fig. 7. En comparación con los homólogos del grupo de control, suero AP estimuló la secreción de pepsina y la producción de ácido en el estómago aislado de rata (P < 0,05). La intervención de CB1 /2 agonista del receptor de HU210 atenuó el AP cambios en suero inducida de la secreción de pepsina y la producción de ácido (P < 0,05)., Mientras que el antagonista del receptor de AM251 no exhibir efecto obvio en estos dos parámetros}

Efectos de los cannabinoides en los niveles de IL-6 y KC en el efluente venoso gástrica de ratas
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Después de que las ratas recibieron el tratamiento del suero de AP, los niveles de IL-6 y KC significativamente elevados en el efluente venoso de la aislado estómago de rata; HU210 revertido los cambios IL-6 y KC inducida por el suero de las ratas de AP (P < 0,05)., Mientras que AM251 no tuvo un impacto detectable en los niveles de la citoquinas y quimioquinas en el efluente venoso (Fig. 8)

Discusión

En la clínica, los pacientes con pancreatitis aguda, especialmente con pancreatitis aguda grave, a menudo sufren AGML o úlcera de estrés, una complicación común de la AP. Los factores causantes de lesiones de estómago incluyen, pero no se limitan a, la tensión de la estimulación inflamatoria que puede inducir la activación del sistema de médula locus ceruleus-norepinefrina /simpático-adrenal y el sistema de corteza hipotálamo-pituitario-adrenal. Los aumentos secretas de catecolaminas y hormonas glucocorticoides son los factores más importantes de la tensión del cuerpo, para estos componentes provocan ácido gástrico hiper-secreción y el desplazamiento de flujo de sangre que causan isquemia de la mucosa gastrointestinal. Es importante destacar que la secuencialmente isquemia rebaja la capacidad de la mucosa gástrica para disponer de ácido back-difusión, lo que resulta en una disminución de pH intramural y la activación de la proteasa, y ulceración posterior [3], [4], [23]. Otros mecanismos, incluyendo los radicales libres derivados del oxígeno y algunos factores inciertos, también juegan un papel en la lesión gastrointestinal relacionada con pancreatitis aguda.

Investigaciones anteriores han encontrado que la AP plasma y el líquido ascítico relacionados con AP contienen una gran cantidad de sustancias tóxicas que son perjudiciales para el cuerpo [5], [6], [8], que causa el daño del hígado, riñón, pulmón y el sistema circulatorio, y disfunción gastrointestinal, etc. [24] - [28]. Nuestro estudio previo descubrió que las células acinares pancreáticas sufrieron la sobrecarga de calcio y la reducción de la vitalidad, como se incubaron con AP suero o fluido ascítico [8]. En este estudio, primero de forma experimental en ratas AP y demostró la inducción de modelo animal AP tuvo éxito al demostrar la alteración patológica de la morfología de páncreas y el aumento de las enzimas pancreáticas en el suero de rata después de la inducción. Tras la afirmación del modelo, hemos seguido para establecer un perfil de expresión génica para ilustrar la expresión de genes alterados de enzimas pancreáticas y mediadores inflamatorios, en un intento de rastrear los genes subrayado que jugaron papeles más importantes en la patogénesis de AGML asociado al AP. Y los resultados de AP y de control de ratas perfiladas utilizando el análisis de chip de genes fueron consistentes con los de los ensayos bioquímicos. Además, hemos probado si había efectos beneficiosos de los antagonistas y /o agonistas de cannabinoides en los animales con pancreatitis aguda experimental.

Basándose en los resultados antes mencionados, se abordó la cuestión de si la secreción gástrica, tanto la endocrina o exocrina funciones, se alterarían en ratas AP. Se sabe que la gastrina estimula la producción de ácido y la secreción de pepsina, como somatostatina contrarresta los efectos de la gastrina. Cuando la gastrina o la secreción de somatostatina no logra mantener un equilibrio básico, la pepsina excedentes y la liberación de ácido de forma desproporcionada, lo que resulta en daños y trastornos del estómago durante la pancreatitis aguda. Como se demuestra en este informe, encontramos un nivel aumentado de manera importante la gastrina en el suero, y los niveles de pepsina y el ácido elevadas en el jugo gástrico de las ratas de AP, que confirmó que las funciones endocrinas y exocrinas del estómago se alteraron en el modelo AP.

Además, las enzimas activadas circulantes proteolíticas, proteínas vasoactivas y endotoxinas específicas para la patogénesis de la pancreatitis aguda puede ser responsable de AGML también. Por lo tanto, hemos explorado los efectos del suero de ratas AP en el aislado y perfundido de estómago de rata de tal manera que el órgano podría ignorar el estrés y los impactos sistémica. El aislado de estómago de rata estimulado por el suero de AP rata no sólo mostró la lesión de la mucosa ocular visible, sino que también presenta una serie de anomalías bioquímicas, incluyendo los niveles más altos de gastrina, citoquinas IL-6, quimioquinas KC, y el nivel inferior de la somatostatina en el efluente venoso gástrico, así como la pepsina elevada y la producción de ácido en el efluente lumen gástrico. Es razonable deducir que existe un desequilibrio entre el factor agresivo y el factor protector de la mucosa gástrica durante la pancreatitis aguda. En particular, el aumento de la gastrina, la producción de ácido gástrico y la pepsina desempeñar conjuntamente un papel importante en la patogénesis de la AGML, lo que agrava el daño del estómago y provocando círculo vicioso durante la pancreatitis aguda.

Durante la última década, un número de publicaciones han demostrado los efectos antiinflamatorios de los cannabinoides [29] - [32]. Varios estudios han demostrado que los cannabinoides inhiben la secreción de ácido gástrico y reducir las citoquinas inflamatorias y otro mediador en el plasma de los animales con AP [33], [34]. Nuestros resultados no sólo confirman estos descubrimientos anteriores, pero también demuestran que una HU210 química, presumiblemente un agonista del receptor cannabinoide, sirven funciones en la misma manera que los cannabinoides en la reducción de las citoquinas inflamatorias y otros mediadores, por lo tanto, mejorar los síntomas de AGML asociado-AP. Curiosamente, los resultados de este estudio demuestran que HU210 puede atenuar los cambios endocrinos y exocrinas gástrico en el estómago de rata aislado irritado por el suero AP, revertir los niveles anormalmente inflados de gastrina, ácido gástrico y pepsina y amortiguar el efecto de estos factores perjudiciales. En el otro lado, HU210 eleva el nivel de la somatostatina que inhibe la secreción de gastrina y ácido gástrico, por lo tanto, ejerce una acción protectora sobre la mucosa gástrica.

Los resultados del estudio proporcionan coherencia armónica de análisis de chip de genes y bioquímica datos de ensayo usando muestras a partir del modelo animal, lo que sugiere un nuevo mecanismo que el inicio de AGML es, al menos en parte, debido a la gastrina y ácido gástrico desequilibrio /somatostatina provocada por las toxinas en el suero de AP; y HU210 agonista cannabinoide restaura el equilibrio, por lo tanto, la protección. Los resultados apoyan que HU210 es beneficioso para el tratamiento de la pancreatitis aguda debido a su papel anti-inflamación y el efecto de prevención de la AGML relacionados con pancreatitis aguda. Los resultados que el antagonista de los receptores CB1 AM251 no desempeña ningún papel en el apoyo a las lesiones gástricas inducidas por AP nuestra postulación, lo que confirma el papel positivo de /2 receptores CB1.

En un experimento prospectivo para investigar si los inhibidores de la bomba de protones (IBP) puede proteger a los animales con pancreatitis experimental aguda, que el omeprazol administrado (OME, ip, 40 mg /kg de peso), un agente PPI representante, a un grupo de ratas al mismo tiempo en que se realizó la inducción de AP. Los resultados preliminares mostraron que OME aumentó la tasa de supervivencia de las ratas de AP (datos no mostrados). Sin embargo, puede ser necesario estudio multicéntrico para dilucidar si los IBP son beneficiosos como una opción terapéutica en la pancreatitis aguda de los seres humanos.

Teniendo todo anteriormente, los resultados de nuestra investigación experimental revelan que las respuestas inflamatorias y los trastornos de la gástrico funciones de secreción, tanto el endocrinas y exocrinas, son los resultados de la pancreatitis aguda, y que a su vez contribuyen a la patogénesis de AGML. Además, los resultados sugieren que cannabinoide HU210, el agonista del receptor CB1 /2, tiene el potencial terapéutico para AGML en la pancreatitis aguda mediante la atenuación de la inflamación y restablecer el equilibrio de gastrina /somatostatina, y a continuación, la disminución de la secreción de ácido gástrico y la pepsina.

• PLOS ONE: postoperatorio Quimioradioterapia Combinado con base-epirubicina trío quimioterapia para localmente avanzado Adenocarcinoma de estómago o gastroesofágico Junction
• PLOS ONE: Análisis del estómago y el intestino microbioma de la ostra (Crassostrea virginica) de Costa de Louisiana, USA