PLoS ONE: Cannabinoid HU210 Beschermt Geïsoleerde Rat Maag tegen Impairment Veroorzaakt door Serum van ratten met experimentele Acute Pancreatitis

Abstract

Acute alvleesklierontsteking (AP), in het bijzonder ernstige acute pancreatitis veroorzaakt vaak extra-alvleesklier complicaties, zoals acute gastrointestinale mucosale laesie (AGML) die gepaard gaat met een aanzienlijk hoge mortaliteit, maar de pathogenese van AP-geïnduceerde AGML is nog niet volledig begrepen. In dit rapport, onderzochten we de veranderingen van serum componenten en maag-endocriene en exocriene functies bij ratten met experimentele acute pancreatitis, en bestudeerde de mogelijke bijdragen van deze wijzigingen in de pathogenese van AGML. Daarnaast hebben we de tussenkomst effecten van cannabinoïde-receptor agonist HU210 en antagonist AM251 op geïsoleerde en-serum doorbloed maag rat. Onze resultaten toonden dat de AGML zich na 5 h AP replicatie en het lichaam homeostase werd verstoord AP ratten met verhoogde pancreasenzymen, lipopolysaccharide (LPS), proinflammtory cytokines en chemokines in het bloed, en een verstoring van de maag secretie functie. Perfusie van de geïsoleerde rattenmaag met AP rat serum veroorzaakt morfologische veranderingen in de maag, vergezeld van een aanzienlijke toename van pepsine en [H ^{+] afgifte en verhoogde en verlaagde gastrine somatostatine secretie. HU210 keerde de-AP-serum geïnduceerde rat pathologische veranderingen, met inbegrip van de omkering van de transformatie van de maag morfologie bepaalde mate. De resultaten van deze studie tonen dat de ontstekingsreacties en de onbalans van de maagzuurafscheiding bij de ontwikkeling van AP verantwoordelijk zijn voor de pathogenese van AGML en stel het therapeutisch potentieel van HU210 voor AGML bij acute pancreatitis.}

Visum: Cao Mh, Li Yy, Xu J, Feng Yj, Lin Xh, Li K, et al. (2012) Cannabinoid HU210 Beschermt Geïsoleerde Rat Maag tegen Impairment Veroorzaakt door Serum van ratten met experimentele Acute Pancreatitis. PLoS ONE 7 (12): e52921. doi: 10.1371 /journal.pone.0052921

Editor: Vinod K. Yaragudri, Nathan Kline Instituut voor Psychiatric Research en New York School of Medicine, de Verenigde Staten van Amerika

Ontvangen: 9 mei 2012; Aanvaard: 21 november 2012; Gepubliceerd: 28 december 2012

Copyright: © 2012 Cao et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Financiering:. Dit werk werd gesteund door de National Natural Science Foundation of China (Grant No. 81.270.477 en 81.141.050 Dr Yong-yu Li). http://www.nsfc.gov.cn/. De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript

Competing belangen:.. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

Acute pancreatitis (AP), bijzonder ernstig AP, een potentieel dodelijke ontstekingsziekte van pancreas wat vaak leidt tot extra pancreas complicaties, zelfs meerdere systemische orgaandysfuncties. Er is beschreven dat 52% van de patiënten met acute pancreatitis ontwikkelen acute gastro- intestinale mucosale laesie (AGML) of stress ulcus [1], [2]. Hoewel de endoscopische waarneming blijkt dat het merendeel van de patiënten slechts meerdere ondiepe erosies in het maagdarmkanaal, de optimale farmacologische interventie steeds ter discussie, en de pathogenese van AGML onduidelijk.

Sommige onderzoekers rapporteren dat de stressvolle staat met acute pancreatitis veroorzaakt de verminderde bloedtoevoer of hypoperfusie in het maagslijmvlies, en de contra-diffusie van maag- waterstofion (H ^{+) is een belangrijke factor voor AGML en [3], [4]. Andere onderzoeken ontdekt dat het serum en ascites vloeistof van AP patiënten en proefdieren bevatte een grote hoeveelheid toxische stoffen, zoals pancreasenzymen, endotoxinen, ontstekingsmediatoren [5], [6], wat kan bijdragen tot de meervoudige orgaandysfuncties acute pancreatitis [7], [8].}

eeuwenlang Wietplant en de extracten werden gebruikt om symptomen van gastro-intestinale ontstekingsziekten verlichten. Vastgesteld is dat D ^{9-tetrahydrocannabinol, het belangrijkste psychoactieve bestanddeel van cannabis, oefent zijn primaire cellulaire acties hoewel twee G-eiwit gekoppelde receptoren, cannabinoïde 1 (CB1) en cannabinoïde 2 (CB2) receptoren [9] - [ ,,,0],11]. Sindsdien zijn deze twee receptoren erkend als de belangrijkste regulatoren van fysiologische en pathologische processen [12]. Cannabinoïden kan gastro-intestinale afscheiding [13] te verminderen, en de activering van CB1 receptor vertoont beschermende rol tegen stress geïnduceerde AGML [14], [15], maar de mechanismen van hun optreden blijft ongrijpbaar.}

Het doel van de dit werk was te onderzoeken, zowel in vivo als in vitro experimenten, de veranderingen in het serum componenten, de wijzigingen van maag endocriene en exocriene functies AP rat model, en de mogelijke bijdragen van deze wijzigingen in de pathogenese van AGML. Ook geprobed werden de effecten van interventie CB1 door de agonist en antagonist HU210 AM251, in een poging om de pathofysiologische mechanismen van AP-geassocieerde AGML en antiulcer mogelijkheden van deze cannabinoïde middelen beter te helderen.

Materialen en Werkwijzen

Dieren

Mannelijke Sprague-Dawley ratten (220-250 g) werden verkregen uit de Experimental Animal Center van Fudan University, Shanghai, China. Voorafgaand aan de experimenten werden alle dieren gehuisvest gedurende 1 week onder normale omstandigheden met vrije toegang tot water en laboratorium chow. Hieronder alle experimentele procedures waren in overeenstemming met internationale richtlijnen voor de zorg en het gebruik van proefdieren en werden goedgekeurd door de Animal Ethics Committee van Tongji University, Shanghai, China.

Inductie van acute pancreatitis bij ratten

De ratten werden willekeurig verdeeld in twee groepen: AP en sham-operatie groep met 24 dieren in elke groep. De ratten werden gedurende de nacht vasten met alleen water mag voor de operatie. AP model werd geïnduceerd door de werkwijze ontwikkeld door Aho et al [16]. Kort samengevat, de ratten kregen laparotomie (-3 cm-abdominale incisie) volgens de standaard aseptische procedure en onder algehele anesthesie met intraperitoneale injectie van 20% ethylcarbamaat in 10 ml /kg. De biliopancreatic duct werd tijdelijk afgesloten in de lever hilus met een fijne zachte microvasculaire klem oprisping van de gegoten materiaal voorkomen naar de lever. Een retrograde injectie van 3% natriumdeoxycholaat in de biliopancreatic duct werd vervolgens uitgevoerd (0,1 ml /100 g lichaamsgewicht). De klem werd verwijderd na de injectie. Sham-operatie werd daarom uitgevoerd zonder de natriumdeoxycholaat injectie, en de operatie werd met abdominale gelaagde sluiting gesloten. Op het vijfde uur na de operatie werd het bloed verzameld uit de abdominale aorta onder verdoving punctie. Alle bloedmonsters werden gecentrifugeerd en de bovenstaande vloeistof (serum) werd verzameld, in porties verdeeld en bewaard bij -20 ° C voor latere aanvragen. De pancreas werd verwijderd, verdeeld in twee delen, en een deel werd bij -20 ° C gedurende GeneChip analyse in Trizol onmiddellijk slaan gezet, als anderzijds werd gefixeerd met 10% paraformaldehyde. De maag werd verwijderd, geopend langs de grote bocht, en met 10% paraformaldehyde vastgesteld voor daaropvolgende pathologisch onderzoek.

histologisch onderzoek

De histologische evaluatie werd uitgevoerd op ratten pancreas en maag die in werden vastgesteld 10% paraformaldehyde en ingebed in paraffine. Daarna werden 5 micrometer dik secties gesneden op een Leica RM2126 microtoom (Leica, Shanghai, China) en gekleurd met hematoxyline (0,5%) en eosine (0,5%), gevolgd door observatie onder een Motic BA300 microscoop (Motic China Group Co Ltd ., Xiamen, China). Histologische Scoren werd beoordeeld op de pancreas secties met een aangepaste criterium van Nathan JD, et al [17]. De evaluatie werd gemaakt op tien willekeurig gekozen microscopische velden dia elk dier en herhaald in drie ratten /groep op een blinde wijze. En de totale histologische score (0-9) werd uitgedrukt als de som van oedeem (0-3), infiltratie van ontstekingscellen (0-3), en weefselnecrose (0-3).

Microarray hybridisatie assay

Microarray analyse werd gebruikt om transcriptie profielen van enkele inflammatoire indices te identificeren in de pancreas van ratten met acute pancreatitis. Array hybridisaties werden uitgevoerd met drie biologische replicaten van RNA-monsters geëxtraheerd uit de pancreas van AP en controleratten. Probe voorbereiding, chip hybridisatie, en primaire data-analyse werd uitgevoerd door Capital Bio Corporation (een stevige gelicentieerd en goedgekeurd door Affymetrix om te werken in Beijing, China). Arrays werden gescand met behulp van de GeneChip Scanner 3000 7G (Affymetrix, Santa Clara, CA, USA). Kwantitatieve analyse werd uitgevoerd met behulp van Affymetric MicroArray Suite 5.0-Specifieke Voorwaarden (Statistical Algorithms) GCOS (Affymetrix GeneChip Operating Software) Versie 1.4. De differentieel tot expressie gebrachte genen werden geïdentificeerd met SAM (Significant Analyse van Microarray) software en geselecteerd op basis van hun veelvoudveranderingen (> 2-voudig) vergeleken met de controlemonsters

Immunohistochemische analyse
.

Immunohistochemie vlekken op paraffine secties van de maag en pancreas rat werden uitgevoerd met behulp van konijnen polyklonaal anti-CB1 en anti-CB2 antilichamen (Cat nr.: ALX-210-314 voor anti-CB1 en Cat nr.: ALX-210-315 voor anti-CB2, Enzo, Plymouth Meeting, PA, USA) zoals eerder beschreven [18]. De glasplaatjes met secties van de maag en pancreas ratten werden overnacht geïncubeerd bij 4 ° C met anti-CB1 of CB2 anti-antilichamen, en het biotine-gelabelde geit anti-konijn IgG werkfluïdum (Cat nr.: SP0023; Biosynthese Biotechnology Co. ., Beijing, China) werd vervolgens aangebracht op elke glijbaan en geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 15 minuten, gevolgd door incubatie met HRP-gemerkt streptavidine werkoplossing bij 37 ° C gedurende 15 minuten en objectglaasjes werden grondig gespoeld. Tenslotte de glasplaatjes werden gekleurd DAB en nucleaire opnieuw gekleurd met hematoxyline. De slides van de negatieve controle werden verwerkt door de identieke stappen, maar het primaire antilichaam werd vervangen door PBS. Afbeelding analyse werd uitgevoerd met behulp van digitale Motic Med image 6,0 analysesysteem. (Motic; China Group Co, Ltd, Xiamen, China)

Western Blotting voor het meten van CB1 en CB2 Expression

CB1 en CB2 eiwitexpressie in de pancreas en maag werden geëvalueerd door Western blotting. Zoals eerder beschreven [19] Na incubatie met de primaire antilichamen in een verdunning 1:250 afzonderlijk (konijn polyklonaal anti-CB1 en CB2 anti-antilichamen, Cat nr.:. ALX-210-314 voor anti-CB1 en Cat nr: ALX-210-315 voor anti-CB2, Enzo, Plymouth Meeting, PA, USA), de geblotte nitrocellulose membranen (Whatman, Dassel, Duitsland) werden grondig gespoeld en het geschikte secundaire antilichaam geconjugeerd met mierikswortelperoxidase werd gedurende 1 uur bij kamertemperatuur. Voor interne referentie, polyklonaal konijn anti-muis-β-actine antilichaam (1:2,000 verdunning) (Abmart, Shanghai, China) werd gebruikt. Tenslotte antilichaambinding werd gedetecteerd door blootstelling aan ECL Western blotting detectie reagentia (Cat nr.: SC-2048, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) en opgenomen op film

Bereiding van Isolated- vasculair. geperfuseerde rat maag

rat werd verdoofd en het geïsoleerde, vasculair perfusie maag rat werd bereid zoals eerder [20] beschreven. In het kort werd het abdomen geopend met een middellijn incisie onder steriele toestand. Na ligatie van de buikaorta juist boven de vertakking van de slagader buikholte, werd een canule in de buikholte slagader via een incisie die in de aorta. Twee milliliter zoutoplossing bevattende 600 U heparine werden vervolgens geïnjecteerd in de maag slagader via de arteriële canule. Vervolgens werd een warme (37 ° C) gemodificeerde Krebs-Ringer oplossing geborreld met een mengsel van 95% O _{2 en 5% CO 2 werd geïntroduceerd. De veneuze effluent werd verzameld via een poortader canule. Een polyethyleen buis gastrische lumen perfusaat werd in de slokdarm en de punt gelegen in het luminale gedeelte van de maag. Daarna werd de pyloroduodenale knooppunt blootgesteld en een polyethyleen buis werd aan de twaalfvingerige darm in de maag gebracht via een incisie, en vervolgens gefixeerd door een ligatuur rond de pylorus. De perfusie maag rat werd geïsoleerd en geplaatst in een warm (37 ° C) kleine kamer met Krebs-Ringer oplossing.}

De behandeling van de geïsoleerde Rat Maag

Het geïsoleerde maag werd vasculair geperfuseerd met gewijzigde Krebs-Ringer-oplossing gedurende 30 minuten in evenwicht brengen vóór de formele experimenten. De perfusie werd vervolgens sequentieel uitgevoerd met drie vloeistoffen en elke vloeistof voor 20 minuten in totaal 60 minuten. De controlegroep kreeg: 1) Krebs-Ringer oplossing, 2) serum van normale controle ratten, 3) Krebs-Ringer oplossing. De AP-groep kreeg: 1) Krebs-Ringer oplossing, 2) serum van AP ratten, 3) Krebs-Ringer oplossing. De groep van AP + HU kreeg: 1) Krebs-Ringer oplossing + HU210 (10 ^{-7M), 2) AP serum + HU210 (10 -7M), 3) Krebs-Ringer oplossing. En de groep van AP + AM kreeg: 1) Krebs-Ringer oplossing + AM251 (10 -7M), 2) AP serum + AM251 (10 -7M), 3) Krebs-Ringer oplossing. De gastrische lumen van de maag geïsoleerde geperfuseerd met normale zoutoplossing (pH 7,0). Alle perfusie vloeistoffen liep op een constante snelheid van 1 ml /min met behulp van micro-infusiepompen. Ondertussen werden de oplossingen en de geïsoleerde organen op 37 ° C gehouden door thermostaat eenheden gedurende het experiment. De monsters van veneuze uitstroom of gastrische lumen effluent werden verzameld aan het einde van elke 20 minuten in gekoelde reageerbuizen die onmiddellijk bij -80 ° C voor daaropvolgende metingen experimenten werden opgeslagen.}

amylase en Lipopolysaccharide Niveaus

het testen van amylase en lipopolysaccharide (LPS) niveaus in het serum van AP of de controle ratten werden uitgevoerd op basis van de fabrikant aanbevolen procedures (Cat No: C016 voor amylase testkit, Jiancheng Technology, Nanjing, China, en. . Cat No:. CE32545 voor LPS testkit, Chinese Hoefijzer Krab reagens Co, Ltd, Xiamen, China)

Testen voor ontstekingsmediatoren

De niveaus van interleukine-6 ​​(IL-6 ) en cytokine geïnduceerde neutrofiel chemoattractant 1 (CINC1 /KC) in het serum van ratten en in de veneuze uitstroom uit de geïsoleerde rattenmaag werden gekwantificeerd met ratten IL-6 en KC ELISA kits die de fabrikant aanbevolen protocollen (cat. : F01731D voor rat interleukine-6 ​​ELISA-kits; Cat nr.: F01723D voor rat KC ELISA-kits. H-Y Biological Co, Ltd, Shanghai, China). De optische dichtheid werd bepaald bij 490 nm voor absorptie in een enzym-gebonden immuno assay instrument (Microplate Reader Model Elx800, BioTek, Winooski, VT, USA). Elk monster werd drie keer gemeten en de meting herhaald op 6 rat monsters van elke groep. De gegevens in de veneuze uitstroom uit de geïsoleerde rattenmaag was met het verschil van IL-6 en KC niveau tussen de perfusie en de effluent wordt geacht de afgifte van IL-6 en KC van de rattenmaag.

gastrine en somatostatine niveaus Animal Exemplaren

gastrine en somatostatine niveaus in het serum van dieren en in het geïsoleerde maag veneuze effluent werd gemeten met behulp van commercieel verkrijgbare gastrine en somatostatine radioimmunoassay Kits (gastrine Kit. Cat No. G01PJB , Noord-Instituut voor Biologische Technology, Beijing, China Somatostatine Kit:.. Cat No. S111013, Tweede Militaire Medische Universiteit, Shanghai, China). Meetprocedures waren gebaseerd op de aanbevelingen van de fabrikant zoals eerder beschreven [21]. Als hetzelfde als hierboven, werd elk monster driemaal gemeten en de meting herhaald op 6 rat monsters van elke groep. De gegevens in de veneuze uitstroom uit de geïsoleerde maag rat ontving de verschillen van gastrine of somatostatine niveau tussen de perfusie en de effluent wordt geacht de afgifte van gastrine en somatostatine van de rattenmaag.

Pepsine en H + Levels in dierlijke specimens

de assays pepsine niveau in de rat maagsap en in de maag lumen effluent van de geïsoleerde maag rat werden uitgevoerd met behulp van de fabrikant aanbevolen protocollen (Cat. No. A081- 1, Jiancheng Technology, Nanjing, China), zoals [H ^{+] in deze monsters werden gemeten met delta 320 pH-meter (Mettler-Toledo Inc. Zürich, Zwitserland) en de aflezingen werden vervolgens omgezet [H +].}

Solutions and Chemicals

HU210 [(6aR) -trans-3- (1,1-dimethylheptyl) -6a, 7,10,10a-tetrahydro-1-hydroxy -6,6-dimethyl- 6H-dibenzo [b, d] pyran-9-methanol], AM251 [(N- (piperidine-1-yl) -5- (4-joodfenyl) -1- (2,4- dichloorfenyl) - 4-methyl-1H-pyrazool-3-carboxamide)], werden gekocht bij Tocris (Tocris-Bioscience, Ellisville, MO, USA). Beide stoffen werden opgelost in een oplosmiddel bestaande uit ethanol, Tween80 en normale zoutoplossing (NS), volumeverhouding 01:01:18, concentratie 10 ^{-2M, bij 37 ° C onder toepassing van een ultrasonicator, en vervolgens werden verder verdund in NS tot 10 -5 M, en opnieuw tot 10 -7M met perfusiefluïdum vlak voor gebruik onder de voorwaarden die werden bepaald in pilot-studie [22]. De gemodificeerde Krebs-Ringer oplossing was samengesteld uit 117,5 mM NaCl, 4,7 mM KCI, 2,4 mm CaCh _{2, 1,1 mm MgCl 2, 1,1 mm NaH 2PO 4, 25 mM NaHCO 3, 11,1 mM glucose, 0,05% runderserumalbumine en 4% dextraan. Andere middelen mogelijk bronnen die hierboven genoemd werden gekocht bij Sigma (Shanghai, China).}}

Gegevensanalyse

Alle gegevens worden uitgedrukt als gemiddelde ± SEM. T-toets of een enkele factor variantie-analyse (ANOVA) werd uitgevoerd met behulp van SPSS 13.0 software (SPSS Co. Ltd., Shanghai, China). P-waarden van < 0,05 werden beschouwd als statistisch significant

Resultaten

De resultaten van Experiment In vivo

Pathologische veranderingen in de alvleesklier van AP ratten. .

Onder lichtmicroscopie, was het duidelijk dat na behandeling met natrium taurocholaat, ratten ontwikkelden ernstige acute pancreatitis met duidelijke oedeem, vacuolisatie en ernstige necrose in de acinaire cellen van de pancreas weefsels. En de histologische scores AP ratten waren veel hoger dan die van controle ratten (Fig. 1). In combinatie met de verhoogde amylaseactiviteit in het serum van ratten AP, de resultaten toonden aan dat de replicatie AP model bij ratten geslaagd.

Pathologische veranderingen in de maag van ratten AP.

In de buik van de ratten met acute pancreatitis, ernstige pathologische veranderingen ontstaan, vertonen mucosale oedeem, erosie en bloedingen zoals aangetoond door zowel macrography (figuur 2A en 2B.) en microscopische onderzoeken (figuur 2D.); en deze letsels congregated voornamelijk in de maag antrum.

GeneChip analyse.

Zoals getoond in Fig. 3A, de spreidingsdiagrammen vertegenwoordigde genen met tweevoudige en hogere expressie waren in de bovenste (rode) grens, terwijl genen met tweevoudige en lagere expressie in de onderste (groene) grens; en de veranderde genen nauw verbonden met de acute pancreatitis werden getoond in de clustering patronen (afb. 3B). Het was duidelijk dat het expressieprofiel, de genen significant differentiële expressies (≥2-voudig, P < 0,05) zijn voornamelijk die welke zijn gerelateerd aan de alvleesklier spijsverteringsenzymen, ontstekingsmediatoren en de signaaltransductieroutes, die werden uitgekozen en vermeld met hun Gene Naam en Genenbank ID in Tabel 1

Veranderingen in IL-6, KC en LPS niveau in serum AP.

Zowel IL-6 en KC niveaus in het serum van AP ratten weergegeven aanzienlijke stijging in vergelijking met die van controleratten, met uitbarstingen van 145% en 186%, respectievelijk (P < 0,05; fig. 4). Een soortgelijk, maar zichtbare verhoging werd waargenomen bij de LPS niveau in het serum van AP ratten, met een toename maar liefst 231 keer die van de controlegroep (P < 0,01; fig. 4A)

Veranderingen. gastrine en somatostatine niveaus in het serum van ratten AP.

in het serum van ratten AP, gastrine en somatostatine significant verhoogd in vergelijking met die van controleratten, met uitbarstingen van 169% en 147%, respectievelijk ( in beide gevallen, P < 0,05;. fig. 4B)

wijzigingen pepsine niveaus en [H ^{+] in maagsap van AP ratten}

Om de wijzigingen van de maag te evalueren. exocriene functie assays voor pepsine niveau [H ^{+] werd uitgevoerd door het maagsap van AP en controleratten. Zowel pepsine niveau [H +] in het maagsap vertoonden een duidelijke toename van AP ratten in vergelijking met die van controleratten, met uitbarstingen van 177% en 347%, respectievelijk (Fig. 4C).}

expressie van CB1 en CB2-receptoren in ratten pancreas en maag.

De expressie kenmerken van CB1 en CB2-receptoren in ratten pancreas en maag werden onderzocht. De resultaten toonden aan dat de monsters van dieren in de controlegroep gepresenteerd slechts zwakke immunohistologische kleuring voor CB1 en CB2 receptoren in de alvleesklier, terwijl exemplaren uit AP ratten toegenomen uitingen van CB1 en CB2 receptoren hadden tentoongesteld. Vooral de sterke positieve signalen bruine verven geclusterd in de pancreas acini (fig. 5 A pijlpunten). De up-regelingen van CB1 en CB2 receptoren in de alvleesklier weefsels van AP ratten werden verder gedemonstreerd door western blot analyse en gepresenteerd in Fig.5 B. soortgelijke expressiekarakteristieken van CB1 en CB2 receptoren werden ook gevonden in de maag van de AP ratten , zoals blijkt uit zowel immunohistologische kleuring en Western blot assay (fig. 5 C 5 en D). De sterke positieve tekenen van bruin verven waren vooral in het maagslijmvlies (afb. 5 C, pijlpunten).

De resultaten van Experiment In Vitro

Effect van cannabinoïden op de maag pathologische veranderingen en gastrine en somatostatine afgifte.

Om het effect van CB1 receptor agonist HU210 op de endocriene functie van de geïsoleerde maag rat gestimuleerd met AP rattenserum onderzoeken, onderzochten we de veranderingen van gastrine en somatostatine niveaus in de veneuze effluent van de maag, met of zonder tussenkomst van CB1 receptor agonist en antagonist HU210 AM251. De resultaten toonden aan dat in vergelijking met de controlegroep, de maag rat behandeld met AP serum veroorzaakt een verhoogde gastrine afgifte (P < 0,05), maar een verminderde somatostatine afgifte (P < 0,05), HU210 omgekeerd de gastrine en somatostatine veranderingen bij serum van AP ratten (P < 0,05) (afb. 6)., terwijl de AM251 aantoonbaar effect niet vertoonde over de vrijlating van de twee hormonen

de effecten van cannabinoïden op pepsine activiteit en [H ^{+] in de gastrische lumen effluent.}

de werking van de middelen HU210 en AM251 op pepsine activiteit en [H ^{+] in het gastrische lumen effluent van de geïsoleerde rattenmaag gepresenteerd in Fig. 7. Vergeleken met de tegenhangers van de controlegroep, AP serum gestimuleerde de pepsine secretie en zuuropbrengst in het geïsoleerde rattenmaag (P < 0,05). De tussenkomst van CB1 /2-receptor agonist HU210 verzwakt de AP-serum geïnduceerde veranderingen pepsine secretie en zuurproductie (P < 0,05)., Terwijl de receptor antagonist AM251 niet duidelijk effect vertonen op deze twee parameters}

Effects van cannabinoïden op de niveaus van IL-6 en KC in de maag veneuze uitstroom van ratten.

Nadat de ratten ontvingen de behandeling van de AP serum, IL-6 en KC niveaus in de veneuze uitstroom aanzienlijk verhoogd van de geïsoleerde maag rat; HU210 de IL-6 en KC veranderingen bij serum van AP ratten (P < 0,05) omgekeerd., Terwijl AM251 geen duidelijk effect op de niveaus van het cytokine en chemokine in de veneuze uitstroom (fig. 8) had

Discussie

In de kliniek, de patiënten met acute pancreatitis, in het bijzonder met een ernstige acute pancreatitis, vaak last AGML of stress ulcus, een veel voorkomende complicatie van AP. De oorzakelijke factoren maag letsel omvatten, maar niet beperkt tot, de spanning van de inflammatoire stimulatie die de activering van de locus ceruleus-norepinefrine /sympathische bijniermerg-systeem en de hypothalamus-hypofyse-adrenale cortex systeem kan induceren. De geheime verhogingen van catecholamines en glucocorticoïde hormonen zijn de belangrijkste factoren voor body stress, voor deze componenten maagzuur hyper-secretie en bloedstroom verschuiven van gastrointestinale mucosale ischemie veroorzaken veroorzaken. Belangrijk is dat de ischemie achtereenvolgens degradeert het vermogen van het maagslijmvlies te ontdoen van back-diffunderende zuur, resulterend in een daling van intramurale pH en activering van protease en daaropvolgende ulceratie [3], [4], [23]. Andere mechanismen bestaan ​​van zuurstof afgeleide vrije radicalen en aantal onzekere factoren ook een rol spelen in het maag schade geassocieerd met acute pancreatitis.

Eerdere onderzoeken hebben aangetoond dat AP plasma en AP-gerelateerde ascites fluïdum bevatten een grote hoeveelheid giftige stoffen die schadelijk zijn voor het lichaam [5] zijn, [6], [8], waardoor de beschadiging van de lever, nieren, longen en bloedsomloop, en gastro-intestinale stoornissen, etc. [24] - [28]. Onze voorafgaande studie ontdekte dat de acinaire cellen leed calciumoverbelasting en verlaagde vitaliteit, zoals wordt geïncubeerd met AP serum of ascitesvloeistof [8]. In deze studie hebben we eerst experimenteel geïnduceerde AP in ratten en bleek de inductie van AP diermodel succes door het aantonen van de pathologische wijziging van alvleesklier- morfologie en de groei van pancreatische enzymen in rat serum na inductie was. Na bevestiging van het model bleven we een genexpressieprofiel stellen de veranderde genexpressie van pancreasenzymen en ontstekingsmediatoren illustreren, in een poging om de onderstreping genen die het meest cruciale rol in de pathogenese van AGML geassocieerde AP gespeeld traceren. En de resultaten van AP en controleratten geprofileerde behulp gen-chip analyse kwamen overeen met die van biochemische assays. Daarnaast testten we of er gunstige effecten van cannabinoïde-antagonisten en /of agonisten in de dieren met experimentele acute pancreatitis.

Op basis van de bovengenoemde resultaten onderzochten we de vraag of maagzuurafscheiding, zowel de endocriene en exocriene functies worden gewijzigd AP ratten. Het is bekend dat gastrine gestimuleerd zuurproductie en pepsine secretie, zoals somatostatine neutraliseert de effecten van gastrine. Wanneer gastrine of somatostatine secretie niet in slaagt om een ​​fundamenteel evenwicht, het overschot pepsine en zuur vrijlating onevenredig te behouden, wat resulteert in schade en disfuncties van de maag tijdens acute pancreatitis. Zoals aangetoond in dit rapport, vonden we een aanzienlijk verhoogd gastrine niveau in serum en verhoogde pepsine en zuur niveaus in het maagsap van AP ratten, waaruit bleek dat de endocriene en exocriene functies van de maag werden gestoord in de AP-model.

Bovendien, de geactiveerde circulerende proteolytische enzymen, vasoactieve eiwitten en endotoxine specifiek zijn voor de pathogenese van acute pancreatitis belast AGML ook. Daarom onderzochten we de effecten van het serum van ratten AP op de geïsoleerde geperfuseerde rattenmaag en zodanig dat het orgaan de systemische stress en effecten kunnen negeren. De geïsoleerde maag rat gestimuleerd door serum van AP ratten toonde niet alleen het oog zichtbare mucosale letsel, maar presenteerde ook een reeks van biochemische afwijkingen, met inbegrip van hogere niveaus van gastrine, cytokine IL-6, chemokine KC, en een lager niveau van somatostatine in de maag veneuze effluent, alsmede verhoogde pepsine en zuuropbrengst in de gastrische lumen effluent. Het is redelijk om te concluderen dat er een onbalans tussen de agressieve factor en de beschermende factor van het maagslijmvlies bij acute pancreatitis. Met name de verhoogde gastrine, maagzuur en pepsine uitgang gezamenlijk belangrijke rol spelen in de pathogenese van AGML, verergering van de schade aan de maag en triggering vicieuze cycli tijdens acute pancreatitis.

De laatste tien jaar is een aantal publicaties van de anti-inflammatoire effecten van cannabinoïden aangetoond [29] - [32]. Verschillende studies hebben aangetoond dat cannabinoïden remmen maagzuursecretie en in het plasma van dieren AP [33] verminderen inflammatoire cytokines en andere mediator, [34]. Onze resultaten niet alleen bevestigen deze eerdere ontdekkingen, maar tonen ook aan dat een chemische HU210, vermoedelijk een cannabinoïde receptor agonist, dienen functioneert op dezelfde wijze als cannabinoïden verminderen van de inflammatoire cytokinen en andere mediatoren, vandaar verbeteren de symptomen van AP-geassocieerde AGML. Interessant is dat de resultaten van deze studie tonen aan dat de maag HU210 endocriene en exocriene veranderingen in het geïsoleerde maag rat geïrriteerd door AP serum kan verzwakken, omgekeerde abnormaal opgeblazen niveaus van gastrine, maagzuur en pepsine en dempen het effect van deze schadelijke factoren. Aan de andere kant, HU210 verhoogt het niveau van somatostatine die afscheiding van gastrine en maagzuur remt dus oefent beschermende werking op het maagslijmvlies.

De resultaten van de studie geven harmonische samenhang van gen-chip analyse en biochemische analysegegevens behulp monsters van het diermodel, hetgeen duidt op een nieuw mechanisme dat het begin van AGML is, ten minste gedeeltelijk, door de gastrine en maagzuur /somatostatine onbalans veroorzaakt door de toxine in de AP serum; en cannabinoïde agonist HU210 herstelt het evenwicht, vandaar de bescherming. De bevindingen ondersteunen dat HU210 gunstig is voor de behandeling van acute pancreatitis vanwege zijn anti-ontsteking rol en het voorkomende effect op het AGML verband met acute pancreatitis. De resultaten die de CB1 receptor antagonist AM251 niet aan een rol in de AP-geïnduceerde maagschade steun onze postuleren spelen, bevestiging van de positieve rol van CB1 /2-receptoren.

In een prospectieve experiment om te onderzoeken of de protonpompremmers (PPI) kunnen dieren tegen experimentele acute pancreatitis, we toegediend omeprazol (OME, ip, 40 mg /kg gewicht), een representatieve PPI middel, een groep ratten op hetzelfde tijdstip AP inductie werd uitgevoerd. De voorlopige resultaten bleek dat OME verhoogd overlevingspercentage van AP ratten (gegevens niet getoond). Het kan echter multicenter studie moeten ophelderen als PPI voordelig als een therapeutische optie bij acute pancreatitis van mensen zijn.

nemen alle boven de resultaten van ons experimenteel onderzoek blijkt dat de ontstekingsreacties en stoornissen van de maag secretie, zowel de endocriene en exocriene functies, zijn de uitkomsten van acute pancreatitis, en zij op hun beurt bijdragen aan de pathogenese van AGML. Bovendien suggereren de resultaten dat cannabinoïde HU210, de CB1 /2 receptor agonist, heeft het therapeutische potentieel AGML acute pancreatitis dempt ontsteking en herstel gastrine /somatostatine-evenwicht, en het verminderen van de afscheiding van maagzuur en pepsine.

• PLoS ONE: Postoperatieve chemoradiotherapie met Gecombineerd met Epirubicine-Based Triplet Chemotherapie voor lokaal gevorderde adenocarcinoom van de maag of gastro-Junction
• PLoS ONE: Analyse van de maag en Gut microbiomes van de Oost-oester (Crassostrea virginica) uit Coastal Louisiana, USA