Prognostični vpliv odkrivanju uspešnih krožijo tumorskih celic pri bolnikih z rakom želodca uporabo virusno sredstvo telomeraze specifične: bodoči study

prognostični vpliv odkrivanju uspešnih krožijo tumorskih celic pri bolnikih z rakom želodca uporabo virusno sredstvo telomeraze specifične: prospektivna študija
Povzetek
Ozadje
identifikacijo obtoku tumorske celice (CTCs) v periferni krvi je uporaben pristop za oceno prognoze, spremlja napredovanje bolezni, in meriti učinke zdravljenja v različnih malignih bolezni. Vendar Klinični pomen CTCs je sporna. Poskusili smo odkriti izvedljivih CTCs v periferni krvi bolnikov z rakom želodca uporabljajo virusni sredstvo telomeraze specifična.
Metode
smo odvzeli 7,5-mililitrski vzorec krvi od 65 bolnikov želodca rakom zdravljenja negativnih pred operacijo in 10 zdravih prostovoljci. Zaznali smo izvedljive CTCs v vzorcih krvi, potem ko ju inkubiramo z, replikacije selektiven, onkolitični adenovirusno posrednik telomeraze specifične nosi zeleni fluorescenčni protein (GFP) gen (OBP-401). GFP-pozitivnih CTCs bili opredeljeni kot premera najmanj 7.735 um; Ta prag je bila določena s sprejemnikom značilne delovne analizo krivulje. DKP-pozitivne celice štejejo pod fluorescenčnim mikroskopom.
Rezultati
je prišlo do pomembne razlike v celotnem preživetju med bolniki s 0-4 in tiste z ≥ 5 GFP-pozitiven CTCs v fazi I-IV skupine bolezen in faza II-IV skupina napredovalo boleznijo. Število GFP-pozitivnih CTCs ni povezana s stopnjo raka. Med patološkimi ugotovitvami, je število GFP-pozitivnih CTCs samo močno povezana z vensko invazije, čeprav so trendi v smeri bolj GFP-pozitiven CTCs z napredovanjem bolezni (globina tumorja, bezgavk metastaz, oddaljene metastaze, limfne invazije, in histološki tip ).
Sklepi
je bilo pomembno razmerje med številom GFP-pozitivnih CTCs in celokupno preživetje pri bolnikih z rakom želodca. Odkrivanje CTCs uporabo OBP-401 so lahko koristne za prognostičnega vrednotenje.
Registracija Trial
bolnišnica Univerzitetni klinični informacijska mreža na Japonskem, UMIN000002018.
Ključne besede
Obratna tumorske celice raka želodca telomeraze Ozadje
daljni metastaze trdnega tumorja je močan prognostični faktor [1-3]. Obstoj obtoku tumorske celice (CTCs) v periferni krvi kažejo, da je pacient v fazi sistemske bolezni [4]. Identifikacija CTCs v periferni krvi je koristen pristop za ocenitev prognoze, spremljanje napredovanja bolezni in merjenje učinkov zdravljenja v dojke, prostate, kože, debelega črevesa in gastrointestinalnih malignostmi. Zato so bile razvite različne metode za odkrivanje CTCs in občasno uporablja v kombinaciji. Skupna tehnike za obogatitev in odkrivanje CTCs sta gostota gradient ločitev [5], neposredno obogatitev s filtracijo [6, 7], imunomagnetni ločitev [8], citometrija [9], v realnem času povratne transkriptaze verižne reakcije s polimerazo (RT PCR) [10, 11], in mikročip tehnologijo [12].
Cell obogatitev z ločevanjem gostota gradientno se izvede z uporabo komercialnih kompletov kot OncoQuick® (Greiner, Frickenhausen, Nemčija) [13] in Lymphoprep® (Nycomed, Oslo , Norveška) [14]. Gostota gradient ločevanje temelji na teoriji, da se različne vrste celic lahko ločimo glede na njihovo gostoto. Zato je težko izločiti vse CTCs zaradi migracije celic. RT-PCR je eden izmed najpogostejših metod odkrivanja tumorskih celic zaradi svoje visoke občutljivosti in specifičnosti, ob predpostavki ustrezno premaz in oblikovanje sonde. Vendar pa lahko pride do lažno pozitivnih rezultatov zaradi svoje tehnične prefinjenosti in visoko občutljivostjo [15, 16].
Obogatitev imunomagnetni celic, kot je ta, ki ga CellSearch System® (Veridex, LLC, Raritan, NJ, ZDA), ki potekajo [ ,,,0],17], je trenutno najbolj pogosto uporabljena tehnika za obogatitev in odkrivanje CTCs [18-21]. Prednost ločitve imunomagnetno celic je, da se CTCs lahko vizualizirajo s fluorescentnim mikroskopom. ugotovljene s protitelesi proti epitelijskih označevalcev (epitelijskih celičnih adhezijskih molekul; EpCAMs) celice so odločeni, da bodo CTCs. Zato se lahko ta metoda zagotavlja lažno pozitivnih rezultatov, ki temelji na normalnih epitelijskih marker izražanja, ki ga ni tumorskih celic, rezultati lažno negativni pojavijo se lahko na podlagi pomanjkanja selektivne izražanja označevalca na tumorskih celicah. Kot posledica omejitev, povezanih z zgornjimi pristopov, je potrebna nova metoda za odkrivanje izvedljivih CTCs natančno.
Telomeraze igra pomembno vlogo pri karcinogenezi, raka invazije in metastaz [22-24]. Smo razvili tehniko za izkoriščanje visoko aktivnost telomeraze v celicah. Ta tehnika uporablja, replikacije selektiven modificiran virusni sredstvo telomeraze specifično (OBP-401; TelomeScan®, Oncolys Biopharma, Tokio, Japonska), v kateri je človeška telomeraze reverzne transkriptaze (TERT
) gen promotor vstavljen v območju E1 in je fluorescentni protein (GFP) gena zeleno pod kontrolo promotorja citomegalovirusa v regiji E3 kot označevalec virusne replikacije [25]. Ugotovljeno je bilo, da se OBP-401 se lahko uporablja za odkrivanje izvedljive CTCs med normalnih krvnih celic [26, 27].
Tu smo uporabili metodo za odkrivanje izvedljive CTCs z možnostjo metastaz pri bolnikih z rakom želodca. Zaznali smo GFP-pozitiven CTCs. V nasprotju s tem pa je možno, da niso rakave celice oddajajo GFP fluorescence po okužbi OBP-401 [28]. Zato smo izbrali celice večje od praga s primerjavo med zdravih prostovoljcih in bolnikih določena, ker so CTCs večje od normalnih krvnih celic [7, 29, 30]. . Študirali smo združenje GFP-pozitivna števila CTC s preživetje in patoloških indeksi napredovanja bolezni
Metode
bolnikih in zdravih prostovoljcev
Bolniki v tej predhodni študiji, so bili tisti, potekalo načrtovano kirurško zdravljenje; bolnikov, ki so bili primerni za endoskopsko sluznico resekcijo ali endoskopsko Submukozno seciranje so bili izključeni. kriteriji za vključitev so bila: (i) histološko dokazano adenokarcinom želodca, ki ga endoskopsko biopsijo; (Ii) klinične samotarsko tumor; (Iii) ni pred endoskopsko resekcijo, kemoterapijo ali radioterapijo; (Iv) starost 20-80 let; (V) stanje zmogljivosti Eastern Cooperative Oncology Group [31] 0 ali 1; (Vi) zadostno delovanje organov; in (vii) pisna soglasja. Merila za izključitev so bili: (i) sinhrono ali metachronous malignost; (Ii) nosečnice ali doječe matere; (Iii) aktivno ali kroničnega virusnega hepatitisa; (Iv) aktivna bakterijsko ali glivično infekcijo; (V) sladkorna bolezen; (Vi) sistemsko dajanje kortikosteroidov; in (vii) nestabilen hipertenzija. Faza bolezni pri bolnikih, ki so patološko označena z sedmo izdajo klasifikaciji TNM Mednarodne unije proti raku [32]. Globina tumorja pri treh bolnikih brez želodca in regionalnega statusa bezgavk petih bolnikih brez zadostne limfadenektomijo so diagnosticirali kirurško.
Vsi bolniki so se redno udeleževali naši bolnišnici po operaciji, in so preverili vsake 3 mesece. Bolniki doživel tudi endoskopijo in CT vsaj enkrat na leto, glede na njihovo stopnjo bolezni in poteku.
Tudi zaposlili zdravih prostovoljcev, da deluje kot kontrole. Vse zdravih prostovoljcih so bili zaposleni SYSMEX Corporation in je sestavljena iz sedmih moških (povprečna starost 31,4 let, razpon 24-39 let) in tri ženske (povprečna starost 33,7 let, razpon 26-48 let). Vsi prostovoljci opravili zdravniške preglede na zaposlovanje in na leto; check-up vključene medicinske intervjuje, avskultacijo, radiografijo prsih in kri in analiz urina. Poleg tega smo opravili individualne razgovore pred zbiranjem vzorcev; Vsak prostovoljec, ki je trenutno zdravljenjem, noseče ali dojijo, ali ki so darovali kri v preteklem mesecu je bila izključena.
Virus
OBP-401, A, replikacija selektivni adenovirusno sredstvo telomeraze specifična, v katerem TERT
promotorski element poganja ekspresijo EIA
in EIB
genov, in v katerem je gen GFP je vključena, je bil uporabljen v tej študiji. Občutljivost in specifičnost testa s pomočjo OBP-401 so že preučevali Kim et al. [27]. Test smo ponovili petkrat preizkusili v vzorcu, vključno z 1 MDA-MB-468 (karcinom dojke) celic in 7.5 ml krvi in ​​številke GFP-pozitivnih celic, je bilo 1, 1, 1, 2 in 3; V vzorcu vključno 20 MDA-MB-468 (karcinom dojke) celice, številke GFP-pozitivne celice so bile 15, 17, 19, 22 in 24. Virusni Vzorce smo shranili pri -80 ° C.
celičnih linij in kultura
A549 (pljučni karcinom) The, HepG2 (hepatocelularni karcinom), je bilo HEC-1 (endometrija adenokarcinom), Kato-III (karcinom želodca) in SBC-3 (nedrobnocelični pljučni karcinom) celičnih linij, pridobljenih iz Health znanstveno raziskovalni viri Bank (Osaka, Japonska). LNCaP (adenokarcinom prostate) in OVCAR-3 (karcinom jajčnikov) celične linije smo dobili od Riken Cell banko (Tokyo, Japonska). Celice gojimo v skladu z navodili prodajalca. MDA-MB-468 celice smo gojili kot je opisano predhodno [27].
Priprava vzorca in celično štetje
A 7,5 ml periferno vzorca veno krvi smo dobili iz vsakega pacienta pred operacijo in iz vsakega prostovoljca. Vzorci so bili pripravljeni v epruvete, ki vsebujejo citronsko kislino, fosforno kislino, in dekstroza, in shranili pri 4 ° C. Test smo začeli v 48 urah.
Vzorce smo centrifugirali 5 minut pri 540 g in plazme fazo odstranimo. Celice smo nato sprali štirikrat s fosfatnim pufrom (PBS) in dvakrat z Roswell Park Spomenik Institute mediju. Vzorci so bili okuženi s 4 x 10 8-plaketo tvorijo enot (PFU) iz OBP-401 virusov z inkubacijo v mediju 24 ur pri 37 ° C.
Po mrtvega barvanje celic z rdeče-fluorescentna reaktivnega barvilo L23102 (Life Technologies Corporation, Carlsbad, CA, USA) so OBP-401 virusi inaktivirani in celice so bile določene z 2% paraformaldehidom (PFA) za 20 minut pri sobni temperaturi.
vzorce smo obdelali s površinsko aktivno sredstvo (Emalgen 2025 G, Kao kemikalije, Tokio, Japonska) za 10 min pri 40 ° C, da se razgradijo rdečih krvnih celic. Nazadnje je bil uporabljen 7,5 ml krvi za oblikovanje dveh steklenih drsnih vzorce za mikroskopsko analizo. Vse DKP-pozitivnih celic na obeh diapozitivi so bili prešteti, s pomočjo računalniško nadzorovan fluorescenčni mikroskop (IX71, Olympus, Tokio, Japonska) in izpitne slepo na vzorčnih podatkov. Skupni čas Preizkus je bil 27,5 ur (slika 1). Slika 1 Protokol in postopek za "GFP-CTC Vsebnost". Vsak 7,5-ml periferne vzorec venske krvi smo dobili od bolnikov pred operacijo in od prostovoljcev. Vzorci so bili pripravljeni v epruvete, ki vsebujejo citronsko kislino, fosforno kislino in dekstrozo. Vzorce smo centrifugirali in faza plazmi je bil odstranjen. Po izpiranju celic z uporabo PBS in Roswell Park Spominski Institute medij, so bili vzorci okuženi s 4 x 108 PFU na OBP-401 virusom. virus OBP-401 je inaktivirano in celice so bile določene z 2% paraformaldehidom (PFA). Vzorci so bili obdelani s površinsko aktivnim sredstvom, da se razgradijo rdečih in belih krvnih celic. Dva steklena drsna vzorci iz 7,5 ml krvi so bili pripravljeni za mikroskopsko analizo. Vse DKP-pozitivnih celic na obeh diapozitivih smo šteli s pomočjo računalniško nadzorovan fluorescentno mikroskopom.
Določitev praga intenzivnosti GFP fluorescence
je prag intenzivnosti GFP fluorescence določi, kakor sledi. Približno 30.000 kultivirane celice so poskočilo na 7,5-ml vzorce krvi pri zdravih prostovoljcih, ki so obogatenih z različnimi raka celičnih linijah: A549, HepG2, HEC-1, KATO-III, SBC-3, LNCaP, MDA-MB-MB468 in ovčar -3. Vzorce krvi so bili izpostavljeni CTC testom za odkrivanje, nato pa so bile zaznavne celice prešteti s fluorescenčno mikroskopijo. Več kot 100 celic smo analizirali v vsakem vzorcu. Ugotovili smo, 2,85 x 10 7 pomeni enako fluorokromnega biti prag intenzivnosti GFP signala z minimalno stopnjo intenzivnosti GFP opazili v krvi vzorcih obogatenih z celičnih linij (slika 2). Podatki so predstavljeni kot število GFP-pozitivnih CTCs na 7,5 ml perifernega krvnega vzorca. Slika 2 DKP signalov intenzivnosti iz različnih raka celičnih linijah. Spodnji in zgornji del škatle sta spodnja in zgornja Kvartili ter pas škatle je mediana. Črte na koncu brki so minimalna in maksimalna. Y os predstavlja GFP jakost signala na logaritemsko merilo
imunskim barvanjem
fikoeritrin označenih CD45 protitelesa proti človeškim (BioLegend, San Diego, CA, USA) je bil razredčen 1:. 5 in Pacific Blue-označenega protitelesa proti človeškim CD326 (EpCAM) protitelesa (BioLegend) smo razredčili 1:10 v PBS, ki vsebuje 2% fetalnega govejega seruma. Celice inkubiramo z razredčenimi protitelesi za 30 minut pri 25 ° C. Po spiranju s PBS, ki vsebuje 2% fetalnega govejega seruma smo celice nameščen na steklenih ploščicah in analizirali s pomočjo fluorescence mikroskopa. (IX71; Olympus)
Statistična analiza
bila statistično analizo izvedemo z uporabo jmp statističnega Discovery 9.0.2 (SAS Institute, Cary, NC, ZDA). Za določitev praga premera celic, so bile ugotovljene DKP-pozitiven CTCs analizirali z sprejemnik deluje značilno (ROC) krivulja med vzorcev bolnikov z rakom želodca in tistih iz prostovoljcev. Za multiple primerjave skupin, je homogenost variance oceni testa Levenejev. Za parametrične primerjave smo uporabili analizo variance, in za ne-parametrične primerjavah smo uporabili Wilcoxonov in preskuse Kruskal-Wallis. Uporabili smo Fisher je natančen in χ
2 testa z 2 × 2 in tabeli 4 x 2, v tem zaporedju, za primerjavo clinicopathological znake v skupini bolnikov. Kaplan-Meier krivulje preživetja ocenjene brez bolezni in celokupno preživetje je bilo ustvarjenih, in primerjave med skupinami smo izvedli s pomočjo dvostranskega test log-rang. P
vrednosti ≤0.05 so bile upoštevane statistično značilne.
Je odobril revizijski odbor institucionalne Univerze Showa, Severni Yokohama Bolnišnica študijo. Smo pojasnili protokol študija na bolnikih in prostovoljcih, preden so dali jih zapisali soglasja. Ta študija je bila registrirana pri bolnišnici University Medical informacijsko omrežje na Japonskem, številko 000002018.
Rezultati
značilnosti udeleženca
petinšestdeset bolnikov z adenokarcinomom želodca (46 moških in 19 žensk, povprečna starost 58,8 let, razpon 33 -76 let), ki so imeli operacijo v centru za bolezni prebavnega od Showa University Northern Yokohama bolnišnici med septembrom 2009 in majem 2011 so bili vključeni v to študijo. Devetindvajset imel distalni želodca, 32 je bilo celotnega želodca, in štiri so imela raziskovalno laparotomijo. Značilnosti bolnikov so povzeti v preglednici 1. Osemindvajset od 65 bolnikov s kemoterapijo po operaciji. Kontrolna skupina je obsegala 10 zdravih volunteers.Table 1 značilnosti bolnika in patološke ugotovitve
parametrov,
Število bolnikov
seks
moški
46
Ženski
19
Age (pomeni, razpon)
58.8, 33-76
želodca
distalnem
29
Skupaj
32
Brez
4
Kirurški pristop
laparoskopija
54
Odpri laparotomijo
11
Curability
R0
57
R1
0
R2
8
TNM faza
sem
40
II
6
III
10
IV
9
tumorja globina invazije
T1
36
t2
8
T3
9
T4
12
bezgavko metastaze
N0
39
N1
5
N2
6
N3
15
Distant metastaze
M0
56
M1
9
Glavni histološki tip †
diferencirana
25
Raznovrstna
40
Limfna invazija
LX
4
L0
35
L1
26
Venska invazija
VX
4
V0
35
V1-2
26
† dobro ali zmerno diferencirani adenokarcinom in papilarni adenokarcinom so kategorizirane kot diferencirane vrste. karcinom Signet-obroč celic, slabo diferenciran adenokarcinom in mucinozni adenokarcinom so kategorizirane kot nediferencirano tipa.
GFP-pozitivnih CTCs v periferni krvi
Uporaba fluorescence mikroskop, celice s fluorescenčnimi emisij ≥2.85 × 10 7 pomenijo enakovredno fluorokromom so bili kot GFP-pozitivnih celic
Različne velikosti GFP-pozitivnih celic v vsakem vzorcu so opazili.; Zato je bilo težko določiti eno reprezentativno celico med GFP-pozitivnih celic za primerjavo med bolniki in zdravih prostovoljcih. Zato, da bi se izognili uporabi poljubno vrednost, smo se odločili za optimalen prag, ki izhaja iz analize ROC, ki temelji na velikosti celic, to je 7.735 mikrona, kar je prag za opredelitev GFP-pozitiven CTCs (slika 3). Slika 3: Primerjava premer celic med pacienti in prostovoljci. Za določitev praga, smo primerjali premere celicah bolnikov želodca z rakom in nadzorne analize ROC. Tam je bila velika razlika med želodca rakavih bolnikov in kontrol (p
< 0,001; površina pod krivuljo = 0,57; 95% interval zaupanja = 0,54-0,60)
Z imunohistokemičnim barvanjem uporabo proti EpCAM in. anti-CD45 protitelesa, smo potrdili, da so GFP-pozitivnih CTCs EpCAM-pozitivnih in CD45-negativna (slika 4). Slika 4 Primeri mikroskopskih slik. Reprezentativni slike iz dveh želodca vzorcev z rakom GFP-pozitivnih CTCs in imunocitokemijski analizo anti-EpCAM- in anti-CD45 pozitivnih celic. Celice smo šteli s pomočjo računalniško nadzorovan fluorescentnega mikroskopa z izpraševalcem slepi s statusom vzorca. Lestvica bar, 10 mikrometrov.
Številke GFP-pozitiven CTCs v perifernih krvnih vzorcev so prikazani na sliki 5. ni bilo bistvene razlike med stopnjami detekcijskih GFP-pozitiven CTCs v vzorcih, ki predstavljajo vsako stopnjo raka. Slika 5 Število GFP-pozitivnih celic. Pike so številke GFP-pozitiven CTCs v vzorcih bolnikov. Spodnji in zgornji del škatle predstavlja spodnjo in zgornjo kvartilih in trak čez polje prikazuje mediano. Spodnja in zgornja palice na koncih laskov kažejo najnižjo točko podatkov znotraj 1,5 interkvartilni razponov nižjem kvartilu in največjo podatkovno točko znotraj 1,5 interkvartilni razpona zgornjega kvartilu oz. Zelene palice kažejo srednjo vrednost.
Association of GFP-pozitivnih CTCs s preživetjem
povprečno število GFP-pozitivnih CTCs v vzorcih iz 10 zdravih prostovoljcih je bila 4,8. smo razdelili bolnike v dve skupini, ki temelji na številu GFP-pozitivnih CTCs: 0-4 in več kot 5. V clinicopathological značilnosti obeh skupin so zbrani v tabeli 2. ni bilo bistvene razlike med obema skupinama, razen, da je bila samo ena kategorija limfnih metastasis.Table 2 Clinicopathological znakov dveh skupinah bolnikov po številu CTCs
Število CTCs
0 - 4 je
5 ≤
P
vrednost
Število predmetov
41

24
TNM: Stage
0,1586
Faza I
29
11
Stage II
4
2
Stage III
4
6
Stage IV
4
5
TNM: kategorija T
0.2753
T1
26
10
T2
5
3
T3
5
4
T4
5
7
TNM: kategorija N
0,0257 *
N0
27
12
N1
5
0
N2
4
2
N3
5
10
TNM: M kategorija
0.2121
M0
37
19
M1
4
5
Glavna histološki tip
0,6844
diferencirana tipa
15
10
Raznovrstna tip
26
14
Limfna invazija
0,3177
Lx
2
2
L0
25
10
L1
14
12
Venska invazija
0,1293
Vx
2
2
V0
26
9
V1-2
13
13
Surgery
0.2124
kurativno resekcijo
38
19
Non-kurativno resekcijo
1
3
Ne resekcijo
2
2
Pooperativna kemoterapija
0.1672
prisotnosti
15
13
odsotnosti
26
11
* Občutne razlike.
Slika 6a prikazuje Kaplan -Meier krivulje skupnega preživetja v dve skupini: bolniki z 0-4 CTCs in tiste z ≥ 5. Tam je bila velika razlika med obema skupinama (p
= 0,0021). Poleg tega je pri bolnikih z napredovalim želodca z rakom z boleznijo faza II-IV, je bila velika razlika med obema skupinama (p
= 0,0126) (slika 6b). Slika 6 Skupna preživetje. (A) celotno preživetje vseh bolnikov. (B) celotno preživetje bolnikov z boleznijo faza II-IV. Preživetje je v primerjavi glede na število CTCs uporabo Kaplan-Meier analizo in statistiko log ranga. ** P
< 0,01, * p
< 0,05.
Association of GFP-pozitivnih CTCs patoloških indeksov
ni bilo pomembno razmerje med številom GFP-pozitivnih CTCs in stopnji raka (p
= 0,2313) (slika 5). Čeprav niso opazili statistično značilnih razlik, število GFP-pozitivnih CTCs povečevala z napredovanjem primarnega tumorja (p
= 0,1521) (slika 7a). Število CTCs v vzorcih pacientov vozliščnih pozitivni bila večja kot pri bolnikih z negativnimi bezgavkami (p
= 0,1752) (slika 7b). V primerjavi z bolniki brez oddaljenih metastaz, tiste z oddaljenimi metastazami imel podobno število GFP-pozitiven CTCs (p
= 0,5655) (slika 7c). Ni bilo pomembne razlike med diferencirane in nediferencirane tipa (p
= 0,8387) (slika 7d). Število CTCs so bili podobni v vzorcih iz bolnikov z in brez limfni invazije (p
= 0,2054) (slika 7e). Za vensko invazije je bilo število CTCs v vzorcih pacientov z invazijo znatno višja kot pri bolnikih brez invazije (p
= 0,0351) (slika 7f). Slika 7 Razmerje med številom GFP-pozitivnih CTCs v 7,5 ml krvi vzorcu bolnikov želodca z rakom in patoloških ugotovitvah pri bolnikih. Pike so številke GFP-pozitiven CTCs v vzorcih bolnikov. Spodnji in zgornji del škatle predstavlja spodnjo in zgornjo kvartilih in trak čez polje prikazuje mediano. Spodnja in zgornja palice na koncih laskov kažejo najnižjo točko podatkov znotraj 1,5 interkvartilni razponov nižjem kvartilu in največjo podatkovno točko znotraj 1,5 interkvartilni razpona zgornjega kvartilu oz. A tumorja invazija globine (T1-T4 kažejo povečanje globine). b, limfna metastaze (N0 = negativna, N1-3 = pozitivno). c, Distant metastaze (M0 = negativna, M1 = pozitivno). d, histološki tip (različno vrsto in nediferencirani tip). e, limfna invazija (L0 = negativna, L1 = pozitivno). f, venske invazija (V0 = negativna, V1 = pozitivno), * p
< 0,05. Čeprav je le venska invazija pokazali statistično pomembne razlike, je bilo nekaj gibanja v smeri povečanja CTC števila z naraščajočo napredovanja bolezni.
Razprava
Ta papir poroča korelacijo med CTCs in raka želodca, ki je drugi najpogostejši vzrok smrti v svetu, povezanih z rakom. Uporabnost odkrivanje CTCs v diagnozo, oceno prognoze in vrednotenju učinkov zdravljenja je bilo že poročali, za prsi [27, 33], prostate [34], pljučni [35] in prebavnega trakta [11, 36, 37 ] raka. Ta raziskava kaže, da je koristen tudi za rak želodca.
Eden glavnih Rezultat raziskave je bil pomembno razmerje med številom CTCs in prognozo. Čeprav smo uporabili kratek nadaljnje obdobje, je prognoza bolnikov, ki so imeli ≥ 5 CTCs v svojih 7,5-ml perifernih krvnih vzorcih slaba. Bolniki z boleznijo v zgodnji fazi imajo običajno nižjo ponavljanja stopnjo [38], in tiste z boleznijo faza I dejansko imeli ponovitev v naši raziskavi. Prav tako izračunana stopnja preživetja pri bolnikih z napredovalim rakom želodca v stadiju bolezni II-IV, in je pokazala, da so imeli ti bolniki podobno preživetje vzorec tistim z boleznijo faza I-IV. Ti rezultati kažejo, da je predoperativno kemoterapijo ali celostna obravnava primerno za bolnike, napredovalo boleznijo, ki imajo veliko CTCs v predobdelavo vzorcev zaradi svoje slabo prognozo.
Med našimi patoloških ugotovitvah, imel le venska invazija pomemben odnos s številom CTCs. To kaže na dogovor med tradicionalno patologijo in sodobne molekularne tehnologije. Prepričani smo, da je pomanjkanje znatne razlike med številom CTCs z našim testom in drugih patoloških indeksov odkritih lahko pojasnimo z metodološkimi vprašanji, kot na majhnem vzorcu. Naša tehnika in delal kot prognostični evalvacijsko orodje - zagotoviti informacije o potrebi po pooperativne adjuvantno terapijo - in to lahko koristno dodatno orodje za razvrstitev, ki temelji na patologijo
Ni jasno, ali so vse ugotovljene CTCs metastatskega potenciala.. Izvedljivih CTCs so odkrili v vzorcih iz rakavih bolnikih v zgodnji fazi v tej študiji, ampak skoraj vsi bolniki skupine faza I preživela brez ponovitve [38]. nameravamo potrditi, ali, kot je rak matičnih celic, so bili prisotni na odkritih GFP-pozitivne celice odporne na rakave celice. Prav tako bomo analizirali funkcije sposobnih CTCs posamezno po celic razvrščanje in identifikacijo CTCs z metastatskim potencialom uporabo dodatnih orodij, kot so analiza DNA ploidnosti [39, 40]. Poleg tega bo izražanje genov profiliranje med sposobnih CTCs, mrtvih celic, primarnih tumorjev, in metastatskih tumorjev razkrijejo pomembne informacije v zvezi z mehanizmi raka metastaz.
Naši rezultati je treba razlagati z določeno mero previdnosti, glede na omejitve iz te študije. Prvič, število CTCs med posamezniki zelo razlikuje, vključno z bolniki in zdravih prostovoljcih. Poleg tega ni vplivala fazi tumorja ali prisotnosti klinično zaznavnih metastaz. Prav tako ni bilo nobene povezave med prisotnostjo zasevkov (bezgavkah ali daljni) ali invazije in število CTCs, ki prinaša pod vprašaj uporabo CTCs napovedati metastatskega potenciala. Vendar pa je mogoče, da je relativno majhen vzorec omejen potencial za odkrivanje dejanske razlike med temi skupinami bolnikov. Na koncu je treba priznati, da so naši rezultati veljajo le za predoperativno, rak želodca, zdravljenje, naivni in se ne sme razširiti na druge vrste raka.
Jasno je, da več študij v večji populaciji bolnikov, in z različnimi vrstami raka so potrebne za razjasnitev klinično uporabnost odkrivanja CTC. Zdaj se pripravlja študijo, naj preuči učinke zdravljenja raka želodca o številu CTCs, ki naj bi pomagal vzpostaviti svoj odnos do prihodnjega napredovanja bolezni in ali CTC število lahko pomaga guidetherapy izbiro.
Sklepe
Tam je bil značilnih razlik v preživetju med bolniki z 0-4 CTCs in tiste z ≥ 5. Vendar pa ni jasno, ali imajo vsi CTCs pravi metastatskega potenciala, in so potrebne nadaljnje študije.
Deklaracij
Priznanja
raziskave je bil delno pa jo Grant-in-pomoč za izpodbijanje predhodne raziskave (23659308) iz japonskega združenja za promocijo znanosti (JSP). Organ financiranja imela nobene vloge pri oblikovanju študije; pri zbiranju, analizi ali interpretaciji podatkov; v pisni obliki rokopisa; ali v odločbi, da predloži rokopis za objavo. Hvaležni smo vsem bolnikom in prostovoljcev, ki so darovali kri v tej študiji. Radi bi se zahvalil prof Toshiyoshi Fujiwara (Okayama University Graduate School of Medicine, Okayama, Japonska) za zagotavljanje pripombe in predloge; G Yasuo Urata (Oncolys Biopharma, Tokio, Japonska) za dobavo OBP-401; Dr Yukio Tsujino dr Toshiyuki Ozawa in dr Akinori Masago (SYSMEX Corporation, Kobe, Japonska), za njihovo koristno podporo; in dr Rebecca Devon (Genetics enota in University of Edinburgh, Edinburgh, Velika Britanija) za kritični pregled in urejanje rokopisa. Prav tako smo najbolj hvaležni za zdravstveno osebje.
Avtorjev originalnih predloženi datoteke za slike
Spodaj so povezave do avtorjev prvotna predloženih spisov za slike. "Izvirno datoteko za sliko 1 12885_2012_3365_MOESM2_ESM.tiff avtorjev 12885_2012_3365_MOESM1_ESM.tiff avtorjev izvirna datoteka za prvotno datoteke za sliko 3 12885_2012_3365_MOESM4_ESM.pdf avtorjev Slika 2 12885_2012_3365_MOESM3_ESM.pdf avtorjev prvotne datoteke za sliko 4 prvotne datoteke 12885_2012_3365_MOESM5_ESM.tiff avtorjev za sliki 5 Vsi avtorji so prebrali in potrdil končni rokopis.

• Terapevtski potencial PRL-3 ciljno usmerjenostjo in klinični pomen PRL-3 genomske pomnoževanje pri raku želodca
• Družinsko anamnezo raka in gastroezofagealne težave in nevarnosti, požiralnika in želodca adenokarcinome: študija primerov in kontrol