Prognostic Impakt vun fonnt liewensfäeg libre entholl Zellen zu gastric Kriibs Patienten mat engem telomerase-spezifesch Haren Agent: mèi study

Prognostic Impakt vun fonnt liewensfäeg libre entholl Zellen zu gastric Kriibs Patienten engem telomerase-spezifesch Haren Agent benotzt: e mèi Etude VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung D'Identifikatioun vun entholl Zellen (CTCs) zu Randerscheinung Blutt libre ass eng nëtzlech Approche hätt ze schätzen, Krankheet Werdegang kontrolléieren, a Behandlung Auswierkunge vun verschiddenen malignancies moossen. Allerdéngs, Medeziner Relevanz vun CTCs ass ëmstridden. Mir versicht ze halen CTCs an der Randerscheinung Blutt vun gastric Kriibs Patienten entdecken engem telomerase-spezifesch Haren Agent benotzt. VerfÜgung Method VerfÜgung Mir huet eng 7.5-ml Blutt Prouf vu 65 Behandlung-negativ gastric Kriibs Patienten virum Agrëff an 10 gesond Fräiwëlleger. Mir fonnt liewensfäeg CTCs am Blutt Echantillon no hinnen mat engem telomerase-spezifesch, Gedächtnis-selektiv, oncolytic adenoviral Agent incubating déi gréng unisse FAQ (GFP) Gentherapie (OBP-401) Droen. GFP-positiv CTCs sech als e Duerchmiesser vun op d'mannst 7,735 μm definéiert; Dës loung war vun Receiver Fonctionnementskäschten charakteristesche rop Analyse alles. GFP-positiv Zellen sech ënnert engem fluorescence microscope gezielt. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Et war e wesentlechen Ënnerscheed an Punkto Iwwerliewe ënnert de Patiente mat 0-4 an déi mat ≥5 GFP-positiv CTCs an der Bühn ech-IV Krankheet Grupp a Etapp II-IV fortgeschratt Krankheet Grupp. D'Zuel vun GFP-positiv CTCs war zu Kriibs Etapp net dinn. Ënnert der agebousst Conclusiounen, war d'Zuel vun GFP-positiv CTCs just vill ze Schwächt Invasioun dinn, obschonn Trends Richtung méi GFP-positiv CTCs mat Krankheet Werdegang waren (entholl Déift, lymph Node Metastasen, wäit Metastasen, lymphatic Invasioun, an histological Typ ). VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung Et e wesentleche Relatioun tëschent der Zuel vun GFP-positiv CTCs a Punkto Iwwerliewe vun de Patienten mat gastric Kriibs huet. Der Detektioun vun CTCs OBP-401 benotzt kënne fir prognostic Evaluatioun nëtzlech gin. VerfÜgung Optakt Umeldung VerfÜgung University Hospital Medical Informatiounen Network am Japan, UMIN000002018. VerfÜgung Schlësselwieder VerfÜgung libre entholl Zellen Gastric Kriibs Telomerase Background VerfÜgung wäit Metastasen vun engem massive entholl ass eng staark prognostic Faktor [1-3]. D'Existenz vun libre entholl Zellen (CTCs) zu Randerscheinung Blutt hindeit, datt e Patient an eng systemesch Krankheet Phas ass [4]. D'Identifikatioun vun CTCs zu Randerscheinung Blutt ass eng nëtzlech Approche hätt ze schätzen, Krankheet Werdegang kontrolléieren, a Behandlung Effekter an Broscht, Aarbecht, Haut, Colon an gastrointestinal malignancies moossen. Dofir, hun verschidde Methoden entwéckelt CTCs ze entdecken, an zu geschéckt heiansdo benotzt ginn. Gemeinsam Techniken fir de Räichtum an erkennen CTCs sinn Dicht packt Trennung [5], direkt Beräicherung vum filtration [6, 7], immunomagnetic Trennung [8], cytometry Flux [9], real-Zäit ëmgedréint transcriptase polymerase Kette Reaktioun (RT- Hinnen alleguer) [10, 11], an microchip Technik [12]. VerfÜgung Zell Beräicherung vum packt Trennung Dicht erkléngt benotzt kommerziell Trikoten wéi OncoQuick® (Greiner, Frickenhausen, Däitschland) [13] an Lymphoprep® (Nycomed, Osloer , Norwegen) [14]. Dicht packt Trennung ass op der Theorie baséiert datt verschidden Zorte vun Zellen kann laut hir Dicht getrennt ginn. Dofir, et ass schwéier all CTCs ofzebauen well vun Zell Migratioun. RT-Hinnen alleguer ass eent vun de meescht genannten Methode vun entholl Zell ze erkennen, well seng héich Empfindlechkeet a Spezifizitéit, adequate primer an Studiebäihëllefe Design unzehuelen. Mä falsch-positiv Resultater ka wéinst sengen technesche Nabellerei geschéien an héich Empfindlechkeet [15, 16]. VerfÜgung Immunomagnetic Zell Beräicherung, wéi dat vun der CellSearch System® (Veridex, Firmechef, Raritan, NJ, USA) standing [ ,,,0],17], ass de Moment déi allgemeng benotzt technique ze beräicheren an z'entdecken CTCs [18-21]. De Virdeel vun immunomagnetic Zell Trennung ass, datt CTCs kann mat engem unisse microscope visualized ginn. Zellen mat antibodies géint epithelial lues fonnt (epithelial Zell Haftung Molekülle; EpCAMs) bestëmme CTCs gin. Dofir, kann dës Technik déi falsch-positiv Resultater baséiert op normal epithelial Bewaacher Ausdrock vun Net-entholl Zellen, a falschen-negativ Resultater kënnen op de Mangel vun selektiv Bewaacher Ausdrock op entholl Zellen opwerft baséiert. Als Folleg vun de mat de virun Approche verbonne Aschränkungen, ass eng nei Technik waren zu präzis liewensfäeg CTCs z'entdecken. VerfÜgung spillt Telomerase wichteg Roll an carcinogenesis, Kriibs Invasioun, an Metastasen [22-24]. Mir hunn eng Technik exploitéieren héich telomerase Aktivitéit vun Zellen entwéckelt. Dës Technik benotzt engem telomerase-spezifesch, Gedächtnis-selektiv geännert Haren Agent (OBP-401; TelomeScan®, Oncolys BioPharma, Tokyo, Japan) an deem d'Mënscherechter telomerase transcriptase (TERT VerfÜgung) Gentherapie Promoteur ëmgedréint ass an der E1 Regioun hin , an déi gréng unisse FAQ (GFP) Gentherapie ass ënnert der Kontroll vun der cytomegalovirus Promoteur an der E3 Regioun als Bewaacher vun Haren Gedächtnis [25] gesat. Et ass confirméiert datt OBP-401 benotzt ka liewensfäeg CTCs ënner normal Blutt Zellen ze entdecken [26, 27]. VerfÜgung Hei, mir der assay liewensfäeg CTCs mat de Potential fir Metastasen zu gastric Kriibs Patienten ze entdecken applizéiert. Mir fonnt GFP-positiv CTCs. Am Géigesaz, ass et méiglech, dass Net-Kriibs Zellen GFP fluorescence der OBP-401 Wonn Marke [28]. Dofir, ausgewielt mir Zellen grouss wéi enger loung Vergläich tëschent gesond Fräiwëlleger sech an Patienten, well CTCs grouss sinn wéi normal Blutt Zellen [7, 29, 30]. . Mir studéiert der Associatioun vun GFP-positiv CTC Zuel mat Iwwerliewe an agebousst bestinn vun Krankheet Werdegang VerfÜgung Method VerfÜgung kennen a gesond Fräiwëlleger VerfÜgung D'Patienten zu dësem virleefeg Etude abegraff waren déi geplangten chirurgesch Behandlung Jongen; Patienten, déi fir Bild mucosal resection oder Bild submucosal dissection gëeegent huet sech ausgeschloss. Der Inclusioun Critèren goufen: (ech) histologically adenocarcinoma vun de Mo duerch Bild Fro bewisen; (II) Medeziner eenzel entholl; (III) keen Welpen Bild resection, Chimiotherapie goen, oder radiotherapy; (IV) Alter 20-80 Joer; (V) Osteuropa Coopérative Zukunft Group Leeschtung Status [31] 0 oder 1; (VI) genuch Uergel Funktioun; an (VII) Awëllegung geschriwwen. Der Exklusioun Critèren goufen: (ech) Synchron- oder metachronous malignancy; (II) schwanger oder niert Fraen; (III) aktiv oder chronesch Haren hepatitis; (IV) aktiv bakteriell oder fungal opzerafen; (V) Zockerkrank; (VI) systemesch Administratioun vun corticosteroids; an (VII) onbestänneg finanzéieren. D'Krankheet Etapp an der Behandlung war pathologically charakteriséiert déi siwent Editioun vum TNM Klassifikatioun vun der International Union Géint Cancer benotzt [32]. D'Déift vun der entholl zu dräi Patienten ouni gastrectomy an der regional lymph Node Status vu fënnef Patienten ouni genuch lymphadenectomy sech surgically diagnostizéiert. VerfÜgung de All Patienten eis Spidol regelméisseg an der Chirurgie assistéiert, an sech all 3 Méint kontrolléieren. D'Patienten mécht och endoscopy an berechnen tomography op d'mannst eemol am Joer, no hirer Krankheet Etapp an natierlech. VerfÜgung Mir rekrutéiert och gesond Fräiwëlleger den Kontrollen ze maachen. All gesond Fräiwëlleger sech Mataarbechter vun Sysmex Corporation an dorënner siwe Männer (mengen Alter 31,4 Joer, Gamme 24-39 Joer) an dräi Fraen (mengen Alter 33,7 Joer, Gamme 26-48 Joer). All Fräiwëlleger mécht medezineschen Check-up'en, op Aarbechtsplazen an jäerlech; Check-up'en, dorënner medezinesch Interviewen, auscultation, Këscht radiographs, a Blutt an Pipi analyséiert. Ausserdeem, standing mir eenzelne Interviewen virun Prouf Kollektioun all Fräiwëllegen deen sech am Moment medezinesch Behandlung feieren, schwanger oder niert, oder déi Blutt bannent de leschte Mount gespent hat ausgeschloss war. VerfÜgung Virus VerfÜgung OBP-401, e telomerase-spezifesch, Gedächtnis-selektiv adenoviral Agent an deem d'TERT VerfÜgung Promoteur Element fiert den Ausdrock vun der EIA VerfÜgung an EIB VerfÜgung Genen, an an deem de GFP Gentherapie integréiert ass, huet zu dëser Etude benotzt. Empfindlechkeet a Spezifizitéit vun der assay OBP-401 mat hutt virdru vun Kim et al studéiert ginn. [27]. Den Test war fënnef mol an der Prouf dorënner 1 MDA-MB-468 (Broscht carcinoma) Zellen an 7.5 ml Blutt Test widderholl, an d'Zuel vun GFP-positiv Zellen sech 1, 1, 1, 2 an 3; an der Prouf dorënner 20 MDA-MB-468 (Broscht carcinoma) Zellen, goufen d'Zuelen vun GFP-positiv Zellen 15, 17, 19, 22 a 24. Haren Echantillon bei -80 ° C gespäichert goufen. VerfÜgung Zell Linnen an Kultur VerfÜgung den A549 (haett carcinoma), HepG2 (hepatocellular carcinoma), HEC-1 (endometrial adenocarcinoma), Kato-III (gastric carcinoma), an SBC-3 (kleng Zell haett carcinoma) Zell Strecken aus der Gesondheet kritt Science Research Resources Bank (Rekorder, Japan). D'LNCaP (Aarbecht adenocarcinoma) an OVCAR-3 (spillt carcinoma) Zell Linnen vum Riken Zell Bank (Tokyo, Japan) kritt huet. D'Zellen sech cultured no de Spezifikatioune d'Verkeefer. MDA-MB-468 Zellen cultured sech als virdru beschriwwen [27]. VerfÜgung Sample Virbereedung an Zell VerfÜgung A 7.5-ml Randerscheinung verfeelt Blutt Prouf Zielen war vun all Patient virum Agrëff an aus all Bénévole kritt. D'Echantillon waren an iech Wolleken Zitrounesaier wouvun, Säin Seier, an dextrose, an bei 4 ° C gespäichert. D'assay war bannent 48 h huet. VerfÜgung d'Echantillonen fir 5 min bei 540 g an de Plasma Phase centrifuged sech war geläscht. D'Zellen sech dann véier Mol mat phosphate-gefiermt Salins (PBS) an zweemol mat Roswell Park Memorial Institut mëttelfristeg gewäsch. D'Echantillon waren mat 4 × 10 8 Plack-administrativ Ënnerdeelunge (PFU) vun OBP-401 Viren fir 24 Stonnen op 37 ° C an déi mëttel- vun incubation infizéiert. VerfÜgung No dout Zell staining déi rout-unisse reaktiv Hoerfaarw L23102 (Life Technologies Corporation, Karlsbad CA, USA), OBP-401 Viren waren inactivated an Zellen sech fir 20 min bei Raumtemperatur mat 2% paraformaldehyde (PFA) fest. VerfÜgung D'Echantillon mat enger Fläch-aktiv behandelt goufen Agent (Emalgen 2025 G; Kao Chemikalien, Tokyo, Japan) fir 10 min bei 40 ° C rout Blutt Zellen ze dauert. Endlech war, 7.5 ml Blutt benotzt Echantillon fir microscopic Analyse zwee Glas Rutsch ze schafen. All GFP-positiv Zellen op den zwou drënner waren gezielt, e Computer-kontrolléiert unisse microscope benotzt (IX71; Olympus, Tokyo, Japan) an eng fir d 'Prouf Detailer blinded examiner. D'total assay Zäit war 27,5 h (Dorënner 1). Figur 1 Protokoll an Prozedur vun der "GFP-CTC Assay". All 7.5-ml Randerscheinung verfeelt Blutt Prouf war vun Patienten virum Agrëff an aus Fräiwëlleger kritt. D'Echantillon waren an iech Wolleken Zitrounesaier wouvun, Säin Seier an dextrose. D'Echantillon waren centrifuged an de Plasma Phase gouf geläscht. Hëllef PBS an Roswell Park Memorial Institut mëttelfristeg der Zell wäschen, goufen d'Echantillonen mat 4 × 108 PFU vun OBP-401 Virus infizéiert. OBP-401 Virus gouf inactivated an Zellen sech mat 2% paraformaldehyde (PFA) fest. D'Echantillon waren mat enger Fläch-aktiv Agent behandelt ze rout a wäiss Blutt Zellen dauert. Zwee Glas Rutsch Echantillon vun 7.5 ml Blutt sech fir microscopic Analyse virbereet. All GFP-positiv Zellen op den zwou drënner waren mat engem Computer-kontrolléiert unisse microscope. VerfÜgung Entschlossenheet vun GFP fluorescence Intensitéit loung gezielt VerfÜgung D'loung fir GFP fluorescence Intensitéit alles war wéi follegt. Ongeféier 30.000 cultured Zellen sech jo an 7.5-ml Blutt Echantillon vun gesond Fräiwëlleger, déi mat verschiddene Kriibs Zell Linnen jo goufen: A549, HepG2, HEC-1, Kato-III, SBC-3, LNCaP, MDA-MB-MB468 an OVCAR -3. Bluttprouwen sech ze CTC erkennen assay ënnerworf, an duerno festgestallt Zellen sech duerch fluorescence microscopy gezielt. Méi wéi 100 Zellen sech an all Prouf analyséiert. Mir sech 2,85 × 10 7 gleichgestallt fluorochrome heeschen der loung fir GFP Signal Intensitéit vun der minimal GFP Intensitéit Niveau am Blutt Echantillon mat der Zell Linnen (Dorënner 2) jo observéiert ginn. Date sinn wéi d'Zuele vun GFP-positiven Rapport CTCs pro 7.5-ml Randerscheinung Blutt Prouf. Figur 2 GFP Signal intensities aus verschiddenen Kriibs Zell Linnen. Ënnen an uewen vun der Këscht sinn déi ënnescht an iewescht quartiles, an d'Band vun der Këscht ass de Steiren. D'Linnen op d'Enn vun der Schnurres sinn minimum a maximal. D'y Achs duerstellt GFP Signal Intensitéit op e Log Skala VerfÜgung Immunostaining VerfÜgung Phycoerythrin-Label anti-Mënsch CD45 antibody (BioLegend, San Diego, CA, USA) verdënntem war 1:. 5 a Pazifik Blue-Label anti-Mënsch CD326 (EpCAM) antibody (BioLegend) war 1:10 zu PBS mat 2% an et Bovine serum verdënntem. Zellen sech fir 30 min bei 25 ° C mat verdënntem antibodies incubated. Nom Wäschen mat PBS mat 2% An et Bovine serum, goufen Zellen op Glas drënner schéi an analyséiert engem fluorescence microscope benotzt. (IX71; Olympus) VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung statistique Analyse Leeschtung war mat JMP statistique Discovery 9.0.2 (SAS Institut, Cary, NC, USA). Ze bestëmmen, goufen d'Zell Duerchmiesser loung, de geneeë GFP-positiv CTCs analyséiert engem Receiver benotzt Fonctionnementskäschten charakteristesche (ROC) Linn tëscht dem Echantillon vun gastric Kriibs Patienten an deenen aus Fräiwëlleger. Fir Multiple Grupp Vergläicher, homogeneity vun Varianz war vun der Levene Test évaluéieren. Fir parametric Vergläicher benotzt mir Analyse vun Varianz, a fir Net-parametric Vergläicher benotzt mir de Wilcoxon an der Kruskal-Wallis Tester. Mir benotzt Fisher ass genau an χ VerfÜgung 2 Tester mat engem 2 × 2 an engem 4 × 2 Dësch, respektiv déi, déi clinicopathological Zeeche vun der Patient Grupp ze vergläichen. Kaplan-Meier Kéiren vun geschate Krankheet-gratis Iwwerliewe a Punkto Iwwerliewe sech generéiert, a Vergläicher ënnert d'Gruppen sech mat enger zwee-eesäitegen Log-Platz Test gesuergt. P VerfÜgung ≤0.05 Wäerter waren statistesch relevant considéréiert. VerfÜgung D'Etude gouf vun de Finanzpolitiker Kritik Verwaltungsrot vun der Showa University, Northern Yokohama Hospital guttgeheescht. Mir erkläert d'Etude Protokoll un de Patienten an Fräiwëlleger ier se Awëllegung geschriwwen huet. Dës Etude mat der Universitéit Hospital Medical Informatiounen Network an Japan registréiert huet, Nummer 000002018. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Leit erfaasst Charakteristiken VerfÜgung siechzeg-fënnef Patienten mat gastric adenocarcinoma (46 Männer an 19 Fraen; Alter 58,8 Joer heeschen, Gamme 33 -76 Joer) deen Agrëff bei der Digestive Genau Center vun der Showa University Northern Yokohama Hospital tëscht September 2009 a Mee 2011 mécht sech an dëser Etude mat abegraff. Twenty-néng haten distal gastrectomy, 32 am Ganzen gastrectomy haten, a véier haten Wa laparotomy. D'Patienten Charakteristiken sinn an Table zesummegefaasst 1. Twenty-aacht vun de 65 Patienten Chimiotherapie der Chirurgie dobäi. D'Kontroll Grupp aus 10 gesond volunteers.Table 1 Patienten- Beméien an agebousst Conclusiounen VerfÜgung Parameter
Nummere vu Patienten
Sex VerfÜgung Männlech VerfÜgung 46 VerfÜgung Weiblech VerfÜgung 19 VerfÜgung Alter (mengen, Gamme) VerfÜgung 58,8, 33-76 VerfÜgung Gastrectomy VerfÜgung Distal VerfÜgung 29 VerfÜgung Total VerfÜgung 32 VerfÜgung Keen VerfÜgung 4 VerfÜgung Surgical Approche zur VerfÜgung Laparoscopy VerfÜgung 54 VerfÜgung Open laparotomy VerfÜgung 11 VerfÜgung Curability VerfÜgung R0 VerfÜgung 57 VerfÜgung R1 VerfÜgung 0 VerfÜgung R2 VerfÜgung 8 VerfÜgung TNM Etapp VerfÜgung ech VerfÜgung 40 VerfÜgung II VerfÜgung 6 VerfÜgung III 10
IV VerfÜgung 9 VerfÜgung klinescher Déift vun Invasioun VerfÜgung T1 VerfÜgung 36
T2 VerfÜgung 8 VerfÜgung T3 VerfÜgung 9 VerfÜgung T4 VerfÜgung 12 VerfÜgung Lymph Node Metastasen VerfÜgung N0 VerfÜgung 39 VerfÜgung N1 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung N2
6 VerfÜgung N3 VerfÜgung 15 VerfÜgung wäit Metastasen VerfÜgung M0 56 VerfÜgung M1
ënnerscheet VerfÜgung 9 VerfÜgung Main histological Typ † VerfÜgung 25 VerfÜgung Strenz VerfÜgung 40 VerfÜgung Lymphatic Invasioun VerfÜgung LX VerfÜgung 4 VerfÜgung L0 VerfÜgung 35 VerfÜgung L1 VerfÜgung 26 VerfÜgung Schwächt Invasioun VerfÜgung VX VerfÜgung 4 VerfÜgung V0 VerfÜgung 35 VerfÜgung V1-2 VerfÜgung 26 VerfÜgung † Ma oder mëttelméisseg ënnerscheet adenocarcinoma an papillary adenocarcinoma sech als ënnerscheet Typ klasséiert. Signet-Ring Zell carcinoma, schlecht ënnerscheet adenocarcinoma an mucinous adenocarcinoma sech als Strenz Typ klasséiert. VerfÜgung GFP-positiv CTCs zu Randerscheinung Blutt VerfÜgung engem fluorescence microscope benotzt, Zellen mat unisse Emissiounen ≥2.85 × 10 7 mengen gläichwäerteg fluorochrome sech als GFP-positiv Zellen gezielt VerfÜgung Verschidde Formen vun GFP-positiv Zellen an all Prouf observéiert goufen. also, et ass schwéier ee Vertrieder Zell ënnert der GFP-positiv Zellen tëscht Patienten a gesond Fräiwëlleger fir e Verglach ze identifizéieren. Dofir, fir dass en nët arbiträr Wäert benotzt, mir der beschtméiglecher loung aus der ROC Analyse op d'Zell Gréisst baséiert ofgeleet ze benotzen decidéiert, datt ass, 7,735 μm, wéi de loung GFP-positiv CTCs (Dorënner 3) ze definéieren. Figur 3 Se Zell Duerchmiesser tëschent Patienten a Fräiwëlleger. Fir d'loung festzestellen, am Verglach mir den Duerchmiesser vun Zellen aus gastric Kriibs Patienten a Kontrollen duerch ROC Analyse. Et war e groussen Ënnerscheed tëschent der gastric Kriibs Patienten an d'Kontrollen (p VerfÜgung &Si besteet; 0,001; Géigend ënner dem Bou = 0,57; 95% Vertraue nolauschterer = 0.54-0.60) VerfÜgung Vun immunohistochemical staining mat anti-EpCAM an. Anti-CD45 antibodies, confirméiert mir dat GFP-positiv CTCs EpCAM-positiven an CD45-negativ (Dorënner 4) waren. Figur 4 Beispiller vun microscopic Biller. Vertrieder Biller aus zwee gastric Kriibs Echantillon vun GFP-positiv CTCs an immunocytochemical Analyse vun Anti-EpCAM- an Anti-CD45-positiv Zellen. Zellen sech mat engem Computer-kontrolléiert fluorescence microscope duerch en zu der Prouf Status blinded examiner gezielt. Skala Bar, 10 μm. VerfÜgung D'Zuel vun GFP-positiv CTCs an der Randerscheinung Bluttprouwen sinn zu Well dës 5. Et war keen groussen Ënnerscheed tëschent der erkennen Tariffer vun GFP-positiv CTCs an der Echantillon all Kriibs Etapp vertrëtt. Figur 5 Zuel vun GFP-positiv Zellen. D'Punkte sinn d'Zuele vun GFP-positiv CTCs an de Patient Echantillon. Ënnen an uewen vun der Këscht ze vertrieden an iewescht quartiles, an der Band an der Këscht weist de Steiren. Déi ënnescht an iewescht Baren um Enn vun der Schnurres weisen déi ënnescht Donnéeën Punkt bannent 1.5 interquartile laut vun der ënneschten quartile, an der héchster Donnéeën Punkt bannent 1.5 interquartile Revéier vun den ieweschte quartile, bzw.. Déi gréng Baren weg mengen Wäert. VerfÜgung Association vun GFP-positiv CTCs mat Iwwerliewe VerfÜgung der heeschen Zuel vun GFP-positiv CTCs am Echantillon vun 10 gesond Fräiwëlleger war 4,8. Mir ënnerdeelt de Patienten an zwou Gruppen baséiert op der Zuel vun GFP-positiv CTCs: 0-4 a ≥5. D'clinicopathological Charakteristiken vun den zwou Gruppen an Table zesummegefaasst 2. Et war keen groussen Ënnerscheed tëschent den zwou Gruppen ausser datt et nëmmen eng Kategorie vu lymphatic metastasis.Table 2 Clinicopathological Zeeche vun zwee Patient Gruppen déi Zuel vun CTCs VerfÜgung Zuel vun den CTCs
0 - 4
5 ≤
P VerfÜgung Wäert
Zuel vun Sujeten VerfÜgung 41

24
TNM: Etapp VerfÜgung 0,1586 VerfÜgung Etapp ech VerfÜgung 29 zu 11 VerfÜgung Etapp II VerfÜgung 4 VerfÜgung 2 VerfÜgung Etapp III
4 VerfÜgung 6 VerfÜgung Etapp IV VerfÜgung 4 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung TNM: T Kategorie VerfÜgung 0,2753 VerfÜgung T1 VerfÜgung 26 zu 10 VerfÜgung T2 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 3 VerfÜgung T3 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 4 VerfÜgung T4 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 7 VerfÜgung TNM: N Kategorie VerfÜgung 0,0257 * VerfÜgung N0 VerfÜgung 27
12 VerfÜgung N1 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 0 VerfÜgung N2 VerfÜgung 4 VerfÜgung 2 VerfÜgung N3 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 10 VerfÜgung TNM: M Kategorie VerfÜgung 0,2121 VerfÜgung M0 VerfÜgung 37 zu 19 VerfÜgung M1 VerfÜgung 4 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung Main histological Typ VerfÜgung 0,6844 VerfÜgung ënnerscheet Typ VerfÜgung 15 zu 10 VerfÜgung Strenz Typ VerfÜgung 26 zu 14 VerfÜgung Lymphatic Invasioun VerfÜgung 0,3177 VerfÜgung LX VerfÜgung 2 VerfÜgung 2 VerfÜgung L0 VerfÜgung 25 zu 10 VerfÜgung L1 VerfÜgung 14 zu 12 VerfÜgung Schwächt Invasioun VerfÜgung 0,1293 VerfÜgung Vx VerfÜgung 2 VerfÜgung 2 VerfÜgung V0 VerfÜgung 26 VerfÜgung 9 VerfÜgung V1-2 VerfÜgung 13
13 VerfÜgung befënnt VerfÜgung 0,2124 VerfÜgung Curative resection VerfÜgung 38 zu 19 VerfÜgung non-curative resection VerfÜgung 1 VerfÜgung 3 VerfÜgung Nee resection VerfÜgung 2 VerfÜgung 2 VerfÜgung Wat haalt Dir dovun Chimiotherapie VerfÜgung 0,1672 VerfÜgung Präsenz VerfÜgung 15 zu 13 VerfÜgung Feele VerfÜgung 26 zu 11 VerfÜgung * * Grouss Ënnerscheed. VerfÜgung Dorënner 6a weist de Kaplan -Meier Kéiren fir globale Iwwerliewe vun de zwou Gruppen: d'Patienten mat 0-4 CTCs an déi mat ≥5. Et war e groussen Ënnerscheed tëschent den zwou Gruppen (p VerfÜgung = 0.0021). Ausserdeem, an der fortgeschratt gastric Kriibs Patienten mat Etapp II-IV Krankheet, et war e groussen Ënnerscheed tëschent den zwou Gruppen (p VerfÜgung = 0.0126) (Dorënner 6B). Figur 6 Allgemeng Survival. (En) Allgemeng Iwwerliewe vun all Patienten. (B) Am Ganzen Iwwerliewe vu Patienten mat Etapp II-IV Krankheet. Survival ass no der Zuel vun CTCs Verglach mat Kaplan-Meier Analyse an d'Logbuch-Platz war. ** P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, * p VerfÜgung &Si besteet; 0,05. VerfÜgung Association vun GFP-positiv CTCs mat agebousst bestinn VerfÜgung kee groussen Relatioun Et tëschent der Zuel vun GFP-positiv CTCs a Kriibs Etapp (p VerfÜgung = 0.2313) (Dorënner 5) war. Obwuel keng statistesch Bedeitung observéiert gouf, haten d'Zuel vun GFP-positiv CTCs mat de Werdegang vun der Primärschoul entholl (p VerfÜgung = 0.1521) (Dorënner 7A) ze erhéijen. D'Zuel vun CTCs am Echantillon vun Node-positiv Patienten war grouss wéi déi vun der Node-negativ Patienten (p VerfÜgung = 0.1752) (Dorënner 7b). Am Verglach mat den Patienten ouni fernen Investitiounen, déi déi mat fernen Investitiounen ähnlech Zuel vun GFP-positiv CTCs (p VerfÜgung = 0.5655) (Dorënner 7c). Et war net e groussen Ënnerscheed tëschent der ënnerscheet an Strenz Typ (p VerfÜgung = 0.8387) (Dorënner 7d). D'Zuel vun CTCs waren ähnlech an der Echantillon vun Patienten mat an ouni lymphatic Invasioun (p VerfÜgung = 0.2054) (Dorënner 7). Fir eng Schwächt Invasioun, d'Zuel vun CTCs an der Echantillon vun de Patienten mat Invasioun war méi héich wéi déi vun den Kranken ouni Invasioun (p VerfÜgung = 0.0351) (Dorënner 7f). Figur 7 Bezéiung tëscht Zuel vun GFP-positiv CTCs zu engem 7.5-ml Blutt kennt aus gastric Kriibs Patienten an agebousst Conclusiounen vun de Patienten. D'Punkte sinn d'Zuele vun GFP-positiv CTCs an de Patient Echantillon. Ënnen an uewen vun der Këscht ze vertrieden an iewescht quartiles, an der Band an der Këscht weist de Steiren. Déi ënnescht an iewescht Baren um Enn vun der Schnurres weisen déi ënnescht Donnéeën Punkt bannent 1.5 interquartile laut vun der ënneschten quartile, an der héchster Donnéeën Punkt bannent 1.5 interquartile Revéier vun den ieweschte quartile, bzw.. engem, klinescher Invasioun Déift (T1-T4 weg méi Déift). b, Lymphatic Metastasen (N0 = negativ, N1-3 = positiv). c, wäit Metastasen (M0 = negativ, M1 = positiv). d, Histological Typ (ënnerscheet Typ an Strenz Typ). E, Lymphatic Invasioun (L0 = negativ, L1 = positiv). f, Schwächt Invasioun (V0 = negativ, V1 = positiv), * p VerfÜgung &Si besteet; 0,05. Obwuel nëmmen eng Schwächt Invasioun eng statistesch groussen Ënnerscheed ugewisen, do waren Werdegang puer Trends Richtung eng Erhéijung vun CTC Zuel mat waarden Krankheet. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung Dëse Pabeier Rapporten déi Korrelatioun tëscht CTCs an gastric Kriibs, deen zweete Spëtzekandidat Ursaach ass vun Kriibs-Zesummenhang weltwäit Doud. D'Nëtzlechkeet vun der Detektioun vun CTCs an der Diagnos, Estimatioun vun hätt, an eng Evaluatioun vun Behandlung Effekter huet scho fir Broscht gemellt ginn [27, 33], Aarbecht [34], haett [35] an digestive TRACT [11, 36, 37 ] Cancers. Dës Etude beweist dass et och nëtzlech fir gastric Kriibs ass. Eng grouss Resultat vun eiser Etude zu engem groussen Relatioun tëschent der Zuel vun CTCs an hätt war. Obwuel mir eng kuerz Suivi Period benotzt, hätt vu Patienten, déi zu hir 7.5-ml Randerscheinung Bluttprouwen ≥5 CTCs Équipe war aarmséileg. Patienten mat fréi Etapp Krankheet hunn normalerweis eng manner um Terrain Taux [38], an déi mat Etapp ech Krankheet déi eigentlech keen Terrain vun eiser Etude. Mir Iwwerliewe Taux och mat Etapp II-IV Krankheet zu fortgeschratt gastric Kriibs Patienten berechent, a gewisen, datt dës Patienten engem ähnleche Iwwerliewe Muster hat ech-IV Krankheet zu deene mat Etapp. Dës Resultater hindeit, datt preoperative Chimiotherapie oder ëmfaassend Behandlung fir fortgeschratt Krankheet Patienten ubruecht ass deen vill CTCs zu pretreatment Echantillon hunn wéinst hire aarmséileg hätt. VerfÜgung Ënnert eis agebousst Conclusiounen, just eng Schwächt Invasioun no engem wesentlechen Relatioun mat der Zuel vun CTCs. Dëst deit drophin Accord tëscht traditionell wirklech a modern molekulare Technik. Mir gleewen, datt de Mangel vun engem groussen Ënnerscheed tëschent der Zuel vun CTCs vun eiser assay erwëscht an déi aner agebousst bestinn, kann duerch Archipel Problemer wéi déi kleng Prouf Gréisst erkläert ginn. Eis Technik geschafft gutt wéi enger prognostic Evaluatioun Outil - Informatiounen iwwer de Besoin fir Thes adjuvant Therapie ze bidden - an et kënnt eng nëtzlech Weibëschof Hëllefsprogramm fir wirklech-baséiert Klassifikatioun déi VerfÜgung Et ass net kloer ass, ob all fonnt CTCs metastatic Potential hun.. Liewensfäeg CTCs waren an der Echantillon vun fréi-Etapp Kriibs Patienten am Moment Etude fonnt, mee bal all Etapp ech Grupp Patienten erëmfonnt ouni Terrain [38]. Mir wëlles confirméieren ob resistent géint Kriibs Zellen, wéi Kriibs Desaccord Zellen, an déi nogewise GFP-positiv Zellen präsent waren. Och, wäerte mir de Funktionalitéiten vum Statioune CTCs individuell der Zell zortéieren, an z'identifizéieren CTCs mat metastatic Potential benotzen zousätzlech Instrumenter wéi DNA ploidy Analyse [39, 40] analyséieren. Ausserdeem, ënnert liewensfäeg CTCs profiling Gentherapie Ausdrock, dout Zellen, Primär- erhéijen, an metastatic erhéijen wäert wichteg Informatiounen zu de Mechanisme vun Kriibs Metastasen wëssenschaftlech opzeweisen. VerfÜgung Eis Resultater muss mat e puer eruwoen interpretéiert ginn, d'Limiten vun dëser Etude que. Éischt, variéiert d'Zuel vun CTCs dicht tëschent Persounen, dorënner Patienten a gesond Fräiwëlleger. Ausserdem, huet et net vun entholl Bühn oder d'Präsenz vun klinesch Magnéitfeld Investitiounen beaflosst. Den Zerfall, war et kee Associatioun tëscht der Präsenz vun Investitiounen (lymph Node oder wäiter) oder Invasioun an d 'Nummer vun CTCs, wat d'Benotzung vun CTCs an Fro bréngt metastatic Potential fir virauszesoen. Mä, ass et méiglech, datt de relativ klengen Echantillonen Gréisst de Potential real Differenzen tëscht dëse Gruppen vu Patienten ze entdecken limitéiert. Endlech, muss et Unerkannt sinn, dass eis Resultater an nëmmen applicabel sinn preoperative, Behandlung-granzt gastric Kriibs a soll net zu aneren Zorte vu Kriibs generaliséiert ginn. VerfÜgung kloer, méi Studien an engem erweiderten Bevëlkerung vu Patienten, a mat verschiddene Kriibs Zorte , si waren d'Medeziner Dës CTC erkennen ze klären. Mir sinn elo an enger Etude virbereeden d'Auswierkunge vun gastric Kriibs Behandlung op der Zuel vun CTCs ze ermëttelen, déi hir Relatioun mat Zukunft Krankheet Werdegang gedoe hëllefe soll an ob CTC Grof guidetherapy Choix hëllefe kann. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung Et war e groussen Ënnerscheed zu Iwwerliewe tëscht Patienten mat 0-4 CTCs an déi mat ≥5. Mä, et ass net kloer, ob all CTCs richteg metastatic Potential hun, an weider Studien gebraucht ginn. VerfÜgung Deklaratioune VerfÜgung Arbeschterlidder VerfÜgung Dëst Fuerschung war zu Deel ënnerstëtzt vun engem Grant-zu-Hëllef fir Wat Wa Fuerschung (23659308) aus der Japan Society fir d'Promotioun vun Science (JSPS). D'Finanzéiere Kierper huet keng Roll an der Etude Design; vun der Kollektioun, Analyse, oder Interpretatioun vun den Donnéeën; am Schreiwen vun der mëttelalterlech Handschrëft; oder an der Decisioun déi mëttelalterlech Handschrëft fir Publikatioun ze validéieren. Mir sinn dankbar fir all d'Patienten a Fräiwëlleger déi Blutt op dëser Etude gespent. Mir wëllen gären Professer Toshiyoshi Fujiwara (Okayama University CSL School vun Medezin, Okayama, Japan) fir déi hëllefräich Kommentaren a Suggestiounen ze soen; Här Yasuo Urata (Oncolys BioPharma, Tokyo, Japan) fir Ravitaillements der OBP-401; Dr Yukio Tsujino, Dr Toshiyuki Jäeregen an Dr Akinori Masago (Sysmex Corporation, Kobe, Japan) fir hir wertvoll Ënnerstëtzung; an Dr Rebecca Devon (Genetik Eenheetspräis an Universitéit Edinburgh, Edinburgh, UK) fir kritiséiert a Redaktioun vun der mëttelalterlech Handschrëft. Mir sinn och am dankbar fir Medeziner Personal. VerfÜgung Auteuren 'original deposéiert Fichieren fir Biller VerfÜgung sinn ennen d'Linken op d'Auteuren' original deposéiert Fichieren fir Biller. 12885_2012_3365_MOESM1_ESM.tiff Auteuren 'original Datei fir Figur 1 12885_2012_3365_MOESM2_ESM.tiff Auteuren' original Datei fir Figur 2 12885_2012_3365_MOESM3_ESM.pdf Auteuren 'original Datei fir Figur 3 12885_2012_3365_MOESM4_ESM.pdf Auteuren' original Datei fir Figur 4 12885_2012_3365_MOESM5_ESM.tiff Auteuren 'original Datei fir Figur 5 All Auteuren liesen an guttgeheescht der Finale mëttelalterlech Handschrëft. VerfÜgung

• Therapeutesch Potential vun Praxis-3 gezielt a Krankheete Bedeitung vun Praxis-3 Frankräich amplification zu gastric Kriibs
• Famill Geschicht vum Kriibs an gastroesophageal Entwécklungsstéierungen an Risiko vun esophageal an gastric adenocarcinomas: e Fall-Kontroll Etude