l'impact pronostique de la détection des cellules circulantes viables tumorales chez les patients atteints de cancer gastrique en utilisant un agent viral spécifique de la télomérase: une étude prospective

l'impact pronostique de la détection des cellules circulantes viables tumorales chez les patients atteints de cancer gastrique en utilisant un agent viral spécifique de la télomérase: une étude prospective
Résumé de l'arrière-plan
L'identification de cellules tumorales circulantes (CTC) dans le sang périphérique est une approche utile pour estimer le pronostic, surveiller la progression de la maladie, et de mesurer les effets du traitement dans diverses tumeurs malignes. Cependant, la pertinence clinique de CTCs est controversée. Nous avons essayé de détecter CTCs viables dans le sang périphérique des patients atteints de cancer de l'estomac à l'aide d'un agent viral spécifique de la télomérase.
Méthodes
Nous avons pris un échantillon de sang de 7,5 ml à partir de 65 patients atteints de cancer gastrique traitement négatif avant la chirurgie et 10 en bonne santé volontaires. Nous détectons CTCs viables dans les échantillons de sang après leur incubation avec une télomérase spécifique à la réplication sélective, un agent oncolytique adénoviral portant la protéine fluorescente (GFP), le gène vert (OBP-401). GFP-positives CTC ont été définies comme ayant un diamètre d'au moins 7,735 um; ce seuil a été déterminé par le récepteur d'exploitation analyse de la courbe caractéristique. Résultats de cellules GFP-positives ont été comptées sous un microscope à fluorescence.
Il y avait une différence significative de la survie globale chez les patients atteints de 0-4 et ceux avec ≥5 CTCs GFP-positives dans la phase de groupes de la maladie I-IV et II-IV groupe avancé de la maladie de stade. Le nombre de CTCs GFP-positives n'a pas été associée à l'étape du cancer. Parmi les conclusions pathologiques, le nombre de CTCs GFP-positives n'a été significativement liée à l'invasion veineuse, bien que des tendances à plus CTCs GFP-positives avec une progression de la maladie (la profondeur de la tumeur, métastase ganglionnaire, métastases à distance, invasion lymphatique, et le type histologique Conclusions de).
Il y avait une relation significative entre le nombre de CTCs GFP-positives et la survie globale chez les patients atteints de cancer gastrique. l'enregistrement de première instance de la détection de CTCs utilisant OBP-401 peut être utile pour l'évaluation pronostique.
Réseau d'information médicale hôpital universitaire au Japon, UMIN000002018.
Mots-clés
Cellules tumorales circulantes cancer gastrique télomérase Contexte
Les métastases à distance d'une tumeur solide est un facteur pronostique forte [1-3]. L'existence de cellules tumorales circulantes (CTC) dans le sang périphérique suggère que le patient se trouve dans une phase de maladie systémique [4]. L'identification des CTC dans le sang périphérique est une approche utile pour estimer le pronostic, surveiller la progression de la maladie, et de mesurer les effets du traitement au niveau du sein, de la prostate, de la peau, du colon et de tumeurs malignes gastro-intestinales. Par conséquent, diverses méthodes ont été développées pour détecter CTCs et sont parfois utilisés en combinaison. techniques communes pour l'enrichissement et la détection de CTCs sont la séparation par gradient de densité [5], l'enrichissement directe par filtration [6, 7], séparation immunomagnétique [8], par cytométrie de flux [9], en temps réel transcriptase inverse polymerase chain reaction (RT- PCR) [10, 11], et la puce de la technologie [12].
cellule d'enrichissement par séparation de gradient de densité est effectuée en utilisant des kits commerciaux tels que OncoQuick® (Greiner, Frickenhausen, Allemagne) [13] et Lymphoprep® (Nycomed, Oslo , Norvège) [14]. séparation par gradient de densité est basée sur la théorie selon laquelle les différents types de cellules peuvent être séparées en fonction de leur densité. Par conséquent, il est difficile d'extraire tous CTCs en raison de la migration cellulaire. RT-PCR est une des méthodes les plus courantes de détection des cellules tumorales en raison de sa grande sensibilité et spécificité, en supposant que l'amorce adéquate et la conception de la sonde. Cependant, les résultats faussement positifs peuvent se produire en raison de sa finesse technique et une sensibilité élevée [15, 16].
Enrichissement cellulaire immunomagnétique, telle que celle réalisée par le CellSearch System® (Veridex, LLC, Raritan, NJ, USA) [ ,,,0],17], est actuellement la technique la plus couramment utilisée pour enrichir et détecter CTCs [18-21]. L'avantage de la séparation cellulaire immunomagnétique est que les CTC peuvent être visualisées avec un microscope à fluorescence. Les cellules détectées avec des anticorps contre des marqueurs épithéliaux (épithéliales des molécules d'adhésion cellulaire; EpCAMs) sont déterminés à être CTCs. Par conséquent, cette technique peut donner des résultats faussement positifs sur la base de l'expression des marqueurs épithéliale normale par des cellules non tumorales, et des résultats faussement négatifs peuvent survenir sur la base de l'absence d'expression de marqueur sélectif sur les cellules tumorales. Il en résulte des limitations associées aux approches ci-dessus, une nouvelle technique est nécessaire pour détecter CTCs viables avec précision.
Télomérase joue un rôle important dans la carcinogenèse, les cancers envahissants et les métastases [22-24]. Nous avons mis au point une technique pour exploiter une activité élevée de télomérase dans les cellules. Cette technique utilise un spécifique de la télomérase, la replication sélective agent viral modifié (OBP-401; TelomeScan®, Oncolys BioPharma, Tokyo, Japon) dans lequel la télomérase transcriptase inverse humaine (TERT
), le promoteur de gène est inséré dans la région E1 et la protéine fluorescente (GFP), le gène vert est placé sous le contrôle du promoteur du cytomégalovirus dans la région E3 comme marqueur de la réplication virale [25]. Il a été rapporté que l'OBP-401 peut être utilisé pour détecter CTCs viables parmi les cellules sanguines normales [26, 27].
Ici, nous avons utilisé le test pour détecter CTCs viables avec le risque de métastases chez des patients atteints de cancer gastrique. Nous avons détecté CTCs GFP-positives. En revanche, il est possible que les cellules non cancéreuses émettent une fluorescence GFP après l'infection OBP-401 [28]. Par conséquent, nous avons sélectionné des cellules plus grandes à un seuil déterminé par la comparaison entre les volontaires sains et des patients, parce CTCs sont plus grandes que les cellules sanguines normales [7, 29, 30]. . Méthodes de Nous avons étudié l'association de la GFP-positives numéro CTC avec survie et pathologiques indices de progression de la maladie
patients et volontaires sains
Les patients inclus dans cette étude préliminaire étaient ceux qui subissent un traitement chirurgical prévu; les patients qui ont été adaptés pour la résection endoscopique de la muqueuse ou endoscopique dissection sous-muqueuse ont été exclus. Les critères d'inclusion étaient les suivants: (i) histologiquement prouvée adénocarcinomes de l'estomac par biopsie endoscopique; (Ii) la tumeur solitaire clinique; (Iii) aucune avant résection endoscopique, la chimiothérapie ou la radiothérapie; (Iv) 20-80 ans d'âge; (V) le statut de performance Eastern Cooperative Oncology Group [31] 0 ou 1; (Vi) de la fonction d'organe suffisante; et (vii) le consentement éclairé. Les critères d'exclusion étaient les suivants: (i) synchrone ou malignité métachrone; (Ii) les femmes enceintes ou qui allaitent; (Iii) l'hépatite virale active ou chronique; (Iv) bactérienne active ou une infection fongique; (V) le diabète sucré; (Vi) l'administration systémique de corticostéroïdes; et (vii) l'hypertension instable. Le stade de la maladie chez les patients a été pathologiquement caractérisé en utilisant la septième édition de la classification TNM de l'Union internationale contre le cancer [32]. La profondeur de la tumeur chez trois patients sans gastrectomie et le statut régional des ganglions lymphatiques de cinq patients sans lymphadénectomie suffisante ont été diagnostiqués chirurgicalement.
Tous les patients ont participé à l'hôpital régulièrement après la chirurgie, et on a vérifié tous les 3 mois. Les patients ont également subi une endoscopie et la tomodensitométrie au moins une fois par an, en fonction de leur stade de la maladie et bien sûr.
Nous avons également recruté des volontaires en bonne santé à agir en tant que témoins. Tous les volontaires en bonne santé étaient des employés de Sysmex Corporation et comprenaient sept hommes (âge moyen 31,4 ans, extrêmes 24-39 ans) et trois femmes (âge moyen 33,7 ans, extrêmes 26-48 ans). Tous les volontaires ont subi des examens médicaux sur l'emploi et par an; check-ups comprenaient des entrevues médicales, l'auscultation, les radiographies thoraciques, et de sang et analyses d'urine. En outre, nous avons effectué des entrevues individuelles avant le prélèvement d'échantillons; tout volontaire qui était en train de recevoir un traitement médical, enceintes ou qui allaitent, ou qui avaient donné du sang au cours du mois passé a été exclu.
Virus
OBP-401 un agent adénoviral de réplication sélective spécifique à la télomérase dans laquelle le TERT
élément promoteur conduit l'expression de la
EIA et les gènes de la BEI de, et dans lequel le gène de la GFP est intégré, a été utilisé dans cette étude. La sensibilité et la spécificité du dosage en utilisant l'OBP-401 ont été étudiés antérieurement par Kim et al. [27]. Le test a été répété cinq fois l'essai dans l'échantillon, y compris 1 cellules MDA-MB-468 (carcinome du sein) et 7,5 ml de sang, et le nombre de cellules GFP-positives étaient 1, 1, 1, 2 et 3; dans l'échantillon comprenant 20 cellules MDA-MB-468 (carcinome du sein), le nombre de cellules GFP-positives ont été 15, 17, 19, 22 et 24. Les échantillons viraux ont été stockés à -80 ° C.
lignées cellulaires et la culture The A549 (carcinome du poumon), HepG2 (carcinome hépatocellulaire), HEC-1 (adénocarcinomes de l'endomètre), KATO-III (carcinome gastrique) et SBC-3 (petit carcinome du poumon à petites cellules), les lignées cellulaires ont été obtenues à partir de la Santé sciences Research Resources Bank (Osaka, Japon). LNCaP (adénocarcinome de la prostate) et OVCAR-3 (cancer de l'ovaire), les lignées cellulaires ont été obtenues auprès de la banque de cellules Riken (Tokyo, Japon). Les cellules ont été cultivées selon les spécifications du fournisseur. MDA-MB-468 cellules ont été cultivées comme décrit précédemment [27] La ​​préparation de l'échantillon de.
Et le comptage A 7,5 ml périphérique échantillon de sang de la veine cellulaire a été obtenue à partir de chaque patient avant une intervention chirurgicale et à partir de chaque volontaire. Les échantillons ont été aspirées dans des tubes contenant de l'acide citrique, l'acide phosphorique, et le dextrose, et stockés à 4 ° C. L'essai a été commencé dans les 48 heures.
Les échantillons ont été centrifugés pendant 5 minutes à 540 g et on a éliminé la phase de plasma. Les cellules ont ensuite été lavées quatre fois avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) et deux fois avec rpmi. Les échantillons ont été infectées avec 4 x 10 8 unités de formation de plaques (PFU) de l'OBP-401 virus par incubation dans le milieu pendant 24 heures à 37 ° C. Le plus Après morte coloration des cellules par le rouge réactif fluorescent colorant L23102 (Life Technologies Corporation, Carlsbad, CA, USA), OBP-401 virus ont été inactivés et les cellules ont été fixées avec 2% de paraformaldehyde (PFA) pendant 20 min à température ambiante.
Les échantillons ont été traités avec une surface active un agent (G Emalgen 2025; Kao Chemicals, Tokyo, Japon) pendant 10 min à 40 ° C pour dégrader les globules rouges. Enfin, 7,5 de sang a été utilisé pour créer deux échantillons de diapositives de verre pour l'analyse microscopique. Toutes les cellules GFP-positives sur les deux lames ont été comptées en utilisant un microscope à fluorescence commandé par ordinateur (IX71, Olympus, Tokyo, Japon) et un examinateur en aveugle aux détails de l'échantillon. Le temps de dosage total était de 27,5 h (figure 1). Figure 1 Protocole et de la procédure de la «GFP-CTC Assay". Chaque échantillon de sang périphérique de la veine de 7,5 ml a été prélevé chez des patients avant une intervention chirurgicale et à partir de volontaires. Les échantillons ont été aspirées dans des tubes contenant de l'acide citrique, l'acide phosphorique et de dextrose. Les échantillons ont été centrifugés et on a éliminé la phase de plasma. Après le lavage des cellules en utilisant du PBS et Roswell Park Memorial Institute milieu, les échantillons ont été infectées avec 4 x 108 PFU de virus de l'OBP-401. virus OBP-401 a été inactivé et les cellules ont été fixées avec 2% de paraformaldehyde (PFA). Les échantillons ont été traités avec un agent tensio-actif pour dégrader les globules rouges et blancs. Deux échantillons de diapositives de verre de 7,5 de sang ont été préparés pour l'analyse microscopique. Toutes les cellules GFP-positives sur les deux lames ont été comptées en utilisant un microscope à fluorescence commandé par ordinateur.
Détermination du seuil de l'intensité de la fluorescence de la GFP The seuil pour l'intensité de la fluorescence de la GFP a été déterminée comme suit. Environ 30 000 cellules cultivées ont été injectés dans 7,5 ml des échantillons de sang provenant de volontaires sains, qui ont été dopés avec différentes lignées cellulaires de cancer: A549, HepG2, HEC-1, KATO-III, SBC-3, LNCaP, MDA-MB-MB468 et OVCAR -3. Des échantillons de sang ont été soumis à un test de détection de CTC, puis les cellules ont été comptées détectables par microscopie à fluorescence. Plus de 100 cellules ont été analysées dans chaque échantillon. Nous avons déterminé 2,85 × 10 7 signifie fluorochrome équivalent à être le seuil pour l'intensité du signal de la GFP à partir du niveau d'intensité de la GFP minimale observée dans le sang des échantillons enrichis avec les lignées cellulaires (figure 2). Les données sont rapportées comme le nombre de GFP-positives CTCs par 7,5 ml échantillon de sang périphérique. La figure 2 GFP intensités des signaux provenant de diverses lignées de cellules cancéreuses. Le bas et le haut de la boîte sont les quartiles inférieurs et supérieurs, et la bande de la boîte est la médiane. Les lignes à l'extrémité des barbes sont minimales et maximales. L'axe des ordonnées représente GFP intensité du signal sur une échelle logarithmique
immunocoloration
Phycoerythrin marqué anticorps CD45 anti-humain (BioLegend, San Diego, CA, USA) a été dilué 1:. 5 et Pacific Blue-étiqueté anti-humain CD326 (EpCAM) anticorps (BioLegend) a été diluée 1:10 dans du PBS contenant 2% de sérum bovin foetal. Les cellules ont été incubées avec des anticorps dilués pendant 30 minutes à 25 ° C. Après un lavage avec du PBS contenant 2% de sérum de veau fœtal, les cellules ont été montées sur des lames de verre et analysées en utilisant un microscope à fluorescence. (IX71, Olympus) Analyse statistique L'analyse statistique
a été réalisée en utilisant la statistique JMP découverte 9.0.2 (SAS Institute, Cary, NC, USA). Pour déterminer le seuil de diamètre des cellules, les CTCs GFP-positives détectées ont été analysées à l'aide d'un récepteur caractéristique de fonctionnement (ROC) courbe entre les échantillons provenant de patients atteints de cancer gastrique et ceux des bénévoles. Pour de multiples comparaisons de groupes, l'homogénéité de la variance a été évaluée par le test de Levene. Pour faire des comparaisons paramétriques, nous avons utilisé une analyse de variance et pour des comparaisons non paramétriques de Wilcoxon, nous avons utilisé les essais et Kruskal-Wallis. Nous avons utilisé de Fisher exacte et χ
2 essais avec un 2 × 2 et une table 4 × 2, respectivement, pour comparer les caractères clinicopathologiques dans le groupe de patients. Les courbes de Kaplan-Meier de la survie sans maladie et la survie globale estimée ont été générés, et les comparaisons entre les groupes ont été effectuées à l'aide d'un test log-rank recto-verso. P
valeurs ≤0.05 ont été considérées comme statistiquement significatives.
L'étude a été approuvée par le comité d'examen institutionnel de l'Université Showa, Hôpital Nord Yokohama. Nous avons expliqué le protocole d'étude pour les patients et les bénévoles avant qu'ils ont donné un consentement éclairé écrit. Cette étude a été enregistrée avec le Réseau d'information médicale hôpital universitaire au Japon, les résultats du numéro 000002018.
caractéristiques des participants
Soixante-cinq patients atteints d'un adénocarcinome gastrique (46 hommes et 19 femmes, âge moyen 58,8 ans, la gamme 33 -76 ans) qui ont subi une intervention chirurgicale au Centre des maladies digestives de l'Hôpital Nord Yokohama Université Showa entre Septembre 2009 et mai 2011 étaient inclus dans cette étude. Vingt-neuf avaient une gastrectomie distale, 32 avaient une gastrectomie totale, et quatre avaient une laparotomie exploratrice. Les caractéristiques des patients sont résumées dans le tableau 1. Vingt-huit des 65 patients ont reçu une chimiothérapie après la chirurgie. Le groupe de contrôle composé de 10 volunteers.Table 1 Caractéristiques des patients en bonne santé et les nombres de paramètres de résultats pathologiques
des patients
46
Femme
Sexe Homme 19
âge (moyenne, plage)
58,8, 33-76
32
Aucun de distal
29
total de gastrectomie 4
Surgical approche
54
laparoscopie Ouvrir laparotomie
57
R1
0
R2 de
11
curabilité
R0 8
TNM Etape
I
40
II
6
III
10
IV
9
tumeur profondeur de l'invasion de T1
36
8
T3 T2
9
12
ganglionnaire de métastases du T4
N0
39
N1
5
N2
6
N3
15
métastases à distance M0

56
M1
9
principal type histologique †
Differentiated
25
indifférencié
40
invasion lymphatique
LX 4
L0
35
L1
26
invasion Venous 4
de VX V0
35
V1-2
26
† Eh bien ou modérément adénocarcinome différencié et adénocarcinome papillaire ont été classés en tant que type différencié. carcinome chevalière, adénocarcinome peu différencié et adénocarcinome mucineux ont été classés en tant que type indifférencié. CTCs
GFP-positives dans le sang périphérique
l'aide d'un microscope à fluorescence, les cellules avec des émissions fluorescentes ≥2.85 × 10 7 équivalent moyen fluorochrome ont été comptés comme des cellules GFP-positives
Différentes tailles de cellules GFP-positives ont été observées dans chaque échantillon. Par conséquent, il est difficile d'identifier une cellule représentative parmi les cellules GFP-positives par comparaison entre les patients et les volontaires sains. Par conséquent, pour éviter d'utiliser une valeur arbitraire, nous avons décidé d'utiliser le seuil optimal provenant de l'analyse ROC sur la base de la taille des cellules, qui est, 7,735 pm, comme seuil pour définir CTCs positives pour la GFP (Figure 3). Figure 3 Comparaison du diamètre de la cellule entre les patients et les bénévoles. Pour déterminer le seuil, nous avons comparé les diamètres des cellules de patients et des contrôles de cancer gastrique par analyse ROC. Il y avait une différence significative entre les patients atteints de cancer gastrique et les contrôles (p
< 0,001; aire sous la courbe = 0,57; 95% intervalle de confiance = 0,54 à 0,60)
Par coloration immunohistochimique utilisant des anticorps anti-EpCAM et. des anticorps anti-CD45, nous avons confirmé que CTCs GFP-positives étaient EpCAM-positives et CD45-négative (Figure 4). La Figure 4 Exemples d'images microscopiques. Des images représentatives de deux échantillons de cancer gastrique de CTCs positives pour la GFP et l'analyse immunocytochimique de l'anti-EpCAM- et des cellules anti-CD45-positives. Les cellules ont été comptées en utilisant un microscope à fluorescence commandé par ordinateur par un examinateur en aveugle à l'état de l'échantillon. Barre d'échelle, 10 um.
Le nombre de CTCs GFP-positives dans les échantillons de sang périphérique sont présentés dans la figure 5. Il n'y avait pas de différence significative entre les taux de CTCs GFP-positives dans les échantillons représentant chaque stade du cancer détection. La figure 5 Nombre de cellules GFP-positives. Les points sont les nombres de CTCs GFP-positives dans les échantillons de patients. Le bas et le haut de la boîte représentent les quartiles inférieurs et supérieurs, et la bande à travers la boîte de montre la médiane. Les barres inférieures et supérieures aux extrémités des moustaches montrent le point le plus bas de données dans 1,5 interquartiles du quartile inférieur, et le point de données le plus élevé au sein de 1,5 interquartiles du quartile supérieur, respectivement. Les barres vertes indiquent la valeur moyenne.
Association des CTCs GFP-positives avec la survie
Le nombre moyen de CTCs GFP-positives dans les échantillons provenant de 10 volontaires en bonne santé était de 4,8. Nous avons divisé les patients en deux groupes en fonction du nombre de CTCs GFP-positives: 0-4 et ≥5. Les caractéristiques clinicopathologiques des deux groupes sont résumés dans le tableau 2. Il n'y avait pas de différence significative entre les deux groupes, sauf qu'il n'y avait qu'une seule catégorie de lymphatiques metastasis.Table 2 caractères clinicopathologiques de deux groupes de patients par le nombre de CTCs s Nombre de CTCs
0-4
5 ≤
P valeur
Nombre de sujets
41

24
TNM: Stade
0,1586
Stage I
29
11
Stage II 4
2
Stage III
4
6
Stage IV 4
5
TNM: T catégorie
0,2753
26
10
T2 de
T1 5 3
T3
5 4
T4
5
7
TNM: N catégorie
0,0257 *
N0
27
12
N1
5
0
N2
4 2
N3
5
10
TNM: M catégorie
0,2121
M0
37
19
M1 4
5
principal type histologique
0,6844 Type
Differentiated
15
10
Type indifférencié
26
14
lymphatique invasion
0,3177
Lx 2
2
L0
25
10
L1
14
12
invasion Venous
0,1293
Vx 2
2
V0
26
9
V1-2
13
13
Chirurgie
0,2124
38
19
résection non curative de résection curative 1
3
Aucune résection 2
2
chimiothérapie postopératoires
0,1672
15
13
Absence de présence
26
11
* * différence significative.
Figure 6a montre le Kaplan courbes -Meier pour la survie globale dans les deux groupes: les patients avec 0-4 CTCs et ceux avec ≥5. Il y avait une différence significative entre les deux groupes (p = 0,0021
). En outre, chez les patients atteints de cancer gastrique avancé avec une maladie de stade II-IV, il y avait une différence significative entre les deux groupes (p = 0,0126
) (Figure 6b). Figure 6 La survie globale. (A) La survie globale des patients. (B) de la survie globale des patients atteints d'un cancer de stade II-IV. La survie a été comparé selon le nombre de CTC en utilisant l'analyse de Kaplan-Meier et les statistiques du log-rank. ** P
< 0,01, p *
< Association de 0,05. De CTCs GFP-positives avec des indices pathologiques
Il n'y avait pas de relation significative entre le nombre de CTCs GFP-positives et le stade du cancer (p = 0,2313
) (Figure 5). Même si aucune signification statistique n'a été observée, le nombre de CTC GFP-positives ont tendance à augmenter avec la progression de la tumeur primaire (p = 0,1521
) (figure 7a). Le nombre de CTC dans les échantillons des patients ganglionnaire était supérieure à celle des patients ganglionnaire (p = 0,1752
) (figure 7b). Par rapport aux patients sans métastases à distance, ceux qui ont des métastases à distance ont eu un nombre similaire de CTCs GFP-positives (p = 0,5655
) (Figure 7c). Il n'y avait pas de différence significative entre le type différencié et indifférencié (p = 0,8387
) (Figure 7d). Le nombre de CTC étaient similaires dans les échantillons provenant de patients avec et sans envahissement ganglionnaire (p = 0,2054
) (figure 7e). Pour invasion veineuse, le nombre de CTC dans les échantillons des patients avec envahissement était significativement plus élevé que celui des patients sans envahissement (p = 0,0351
) (Figure 7f). Figure 7 Relation entre le nombre de CTCs GFP-positives dans un échantillon de sang de 7,5 ml de patients atteints de cancer de l'estomac et des conclusions pathologiques chez les patients. Les points sont les nombres de CTCs GFP-positives dans les échantillons de patients. Le bas et le haut de la boîte représentent les quartiles inférieurs et supérieurs, et la bande à travers la boîte de montre la médiane. Les barres inférieures et supérieures aux extrémités des moustaches montrent le point le plus bas de données dans 1,5 interquartiles du quartile inférieur, et le point de données le plus élevé au sein de 1,5 interquartiles du quartile supérieur, respectivement. un, Tumeur profondeur d'invasion (T1-T4 indiquent la profondeur croissante). b, Lymphatique métastase (N0 = négatif, N1-3 = positif). c, métastases à distance (M0 = négatif, M1 = positif). d, le type histologique (type différencié et le type indifférencié). e, invasion lymphatique (L0 = négatif, L1 = positif). f, invasion veineuse (V0 = négatif, V1 = positif), * p
< 0,05. Bien que l'invasion veineuse apparaît une différence statistiquement significative, il y avait des tendances à une augmentation du nombre CTC avec l'augmentation de la progression de la maladie. De la discussion
Ce document présente la corrélation entre les CTC et le cancer gastrique, qui est la deuxième principale cause de décès dans le monde liés au cancer. L'utilité de la détection des CTC dans le diagnostic, l'estimation du pronostic et l'évaluation des effets du traitement a déjà été rapporté pour la poitrine [27, 33], de la prostate [34], du poumon [35] et le tube digestif [11, 36, 37 ] cancers. Cette étude indique qu'il est également utile pour le cancer gastrique.
Un des principaux résultats de notre étude était une relation significative entre le nombre de CTC et le pronostic. Bien que nous avons utilisé une période de suivi à court, le pronostic des patients qui avaient ≥5 CTCs dans leurs 7,5 ml des échantillons de sang périphérique était pauvre. Les patients atteints de la maladie à un stade précoce ont généralement un taux de récidive plus faible [38], et ceux ayant une maladie de stade I avait effectivement aucune récidive dans notre étude. Nous avons également calculé le taux de survie chez les patients atteints de cancer gastrique avancé avec stade II-IV, et a montré que ces patients avaient un modèle de survie semblable à ceux qui ont une maladie de stade I-IV. Ces résultats suggèrent que la chimiothérapie préopératoire ou traitement complet est approprié pour les patients atteints de maladies avancées qui ont beaucoup de CTC dans des échantillons de prétraitement en raison de leur mauvais pronostic.
Parmi nos constatations pathologiques, que l'invasion veineuse avait une relation significative avec le nombre de CTC. Cela suggère un accord entre la pathologie traditionnelle et de la technologie moléculaire moderne. Nous pensons que l'absence de différence significative entre le nombre de CTC détectés par notre test et les autres indices pathologiques peut être expliquée par des problèmes méthodologiques tels que la petite taille de l'échantillon. Notre technique a bien fonctionné comme un outil d'évaluation pronostique - de fournir des informations au sujet de la nécessité d'un traitement adjuvant postopératoire - et il peut fournir un outil auxiliaire utile pour la classification à la pathologie
On ne sait pas si tous les CTCs détectés ont un potentiel métastatique.. CTCs viables ont été détectées dans les échantillons provenant de patients atteints de cancer à un stade précoce dans la présente étude, mais presque tous les patients du groupe de stade I ont survécu sans récidive [38]. Nous avons l'intention de confirmer si les cellules cancéreuses résistantes, comme les cellules souches du cancer, étaient présents dans les cellules GFP-positives détectées. Aussi, nous allons analyser les fonctions de CTCs viables individuellement après le tri de cellules, et d'identifier les CTCs avec un potentiel métastatique utilisant des outils supplémentaires tels que l'analyse ADN ploïdie [39, 40]. En outre, l'expression des gènes de profilage parmi les CTCs viables, les cellules mortes, les tumeurs primaires et les tumeurs métastatiques va révéler des informations importantes liées aux mécanismes de métastases du cancer.
Nos résultats doivent être interprétés avec prudence, compte tenu des limites de cette étude. Tout d'abord, le nombre de CTC variait considérablement entre les individus, y compris les patients et volontaires sains. En outre, il n'a pas été influencée par le stade de la tumeur ou la présence de métastases cliniquement détectables. De même, il n'y avait pas d'association entre la présence de métastases (ganglionnaire ou à distance) ou de l'invasion et le nombre de CTC, ce qui remet en question l'utilisation de CTC pour prédire le potentiel métastatique. Cependant, il est possible que la taille relativement petite de l'échantillon limité le potentiel de détecter des différences réelles entre ces groupes de patients. Enfin, il faut reconnaître que nos résultats ne sont applicables qu'à préopératoire, le cancer gastrique naïfs de traitement et ne doivent pas être généralisés à d'autres types de cancer.
De toute évidence, plus d'études dans une population plus large de patients, et avec différents types de cancer , sont nécessaires pour clarifier l'applicabilité clinique de la détection de la CCT. Nous préparons actuellement une étude visant à étudier les effets du traitement du cancer gastrique sur le nombre de CTC, ce qui devrait aider à établir leur relation avec la future progression de la maladie et si le nombre de CTC peut aider à choisir guidetherapy.
Conclusions
Il y avait un différence significative de la survie entre les patients avec 0-4 CTC et ceux ≥5. Cependant, il est difficile de savoir si tous les CTCs ont vrai potentiel métastatique, et d'autres études sont nécessaires
. Déclarations de Remerciements
Cette recherche a été soutenue en partie par une subvention-in-Aid pour Challenging recherche exploratoire (23659308) de la Société japonaise pour la promotion de la science (JSPS). L'organisme de financement n'a joué aucun rôle dans la conception de l'étude; dans la collecte, l'analyse ou l'interprétation des données; dans l'écriture du manuscrit; ou dans la décision de soumettre le manuscrit pour publication. Nous sommes reconnaissants à tous les patients et les bénévoles qui ont donné du sang à cette étude. Nous tenons à remercier le professeur Toshiyoshi Fujiwara (Okayama University Graduate School of Medicine, Okayama, Japon) pour fournir des commentaires et des suggestions utiles; M. Yasuo Urata (Oncolys BioPharma, Tokyo, Japon) pour alimenter l'OBP-401; Dr Yukio Tsujino, Dr Toshiyuki Ozawa et le Dr Akinori Masago (Sysmex Corporation, Kobe, Japon) pour leur soutien utile; et le Dr Rebecca Devon (Unité de Génétique et de l'Université d'Edimbourg, Edinburgh, Royaume-Uni) pour examen critique et édition du manuscrit. Nous sommes également très reconnaissants au personnel clinique.
Auteurs fichiers originaux soumis pour les images
Voici les liens vers les auteurs originaux soumis les fichiers pour les images. de fichier d'origine pour la figure 1 12885_2012_3365_MOESM2_ESM.tiff Auteurs 12885_2012_3365_MOESM1_ESM.tiff Auteurs fichier d'origine pour de fichier d'origine pour la figure 3 12885_2012_3365_MOESM4_ESM.pdf Auteurs 'Figure 2 12885_2012_3365_MOESM3_ESM.pdf Auteurs fichier d'origine pour la figure 4 fichier original 12885_2012_3365_MOESM5_ESM.tiff Auteurs »pour la figure 5 Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

• Potentiel thérapeutique de PRL-3 ciblage et la signification clinique de PRL-3 amplification génomique en cancer
• Antécédents familiaux de troubles et le risque de l'oesophage et de l'estomac adénocarcinomes cancer et gastro-oesophagien: un cas-témoins study