Prognostički utjecaj otkrivanje održivih cirkulirajućih stanica tumora u bolesnika s karcinomom želuca pomoću telomeraze specifične virusne agent: ciljana studija

Prognostički utjecaj otkrivanje održivih cirkulirajućih stanica tumora u bolesnika s karcinomom želuca pomoću telomeraze specifične virusne agent: prospektivno istraživanje pregled apstraktne pregled pozadine
identifikaciju cirkulirajućih stanica tumora (CTCs) u perifernoj krvi je koristan pristup procijeniti prognozu, pratiti napredovanje bolesti, i mjeriti učinke liječenja u različitim malignih bolesti. Međutim, klinički značaj CTCs je sporno. Pokušali smo otkriti održive CTCs u perifernoj krvi bolesnika s rakom želuca pomoću telomeraze specifične virusne sredstvo.
Metode pregled mi je uzeo 7,5 ml uzorak krvi od 65 pacijenata s rakom želuca liječenih negativne prije operacije i 10 zdravih volonteri. Otkrili smo izvediv CTCs u uzorcima krvi nakon potom se inkubiraju sa telomeraze specifična, replikacija-selektivni, uništenje adenovirusnog agensa koji nosi zeleni fluorescentni protein (GFP) genom (Obp-401). GFP-pozitivno CTCs definirana da ima promjer od najmanje 7.735 mm; Ovaj prag određen je prijemnik analize karakteristične krivulje. GFP-pozitivne stanice su izbrojene pod fluorescentnim mikroskopom. Pregled Rezultati
Postoji značajna razlika u ukupnom preživljavanju među pacijentima s 0-4 i onih s ≥5 GFP-pozitivne CTCs u fazi I-IV grupa bolesti a faza II-IV grupa uznapredovale bolesti. Broj GFP-pozitivne CTCs nije bila povezana s pozornice raka. Među patološkim nalazima, broj GFP-pozitivne CTCs samo je značajno povezana s venskom invazije, iako su trendovi prema više GFP-pozitivne CTCs s napredovanjem bolesti (dubina tumora, limfnih čvorova metastaza, udaljenim metastazama, limfnog invaziju i histološke tipa ) pregled. Zaključci
Postojala je značajna povezanost između broja GFP-pozitivne CTCs i ukupno preživljenje u bolesnika s karcinomom želuca. Otkrivanje CTCs koriste Obp-401 može biti korisno za prognostički procjenu. Pregled, registracija Suđenje pregled Sveučilišna bolnica Medicinski Information Network u Japanu, UMIN000002018. Pregled Ključne riječi pregled cirkulirajućih stanica tumora Rak želuca telomeraze Pozadina pregled udaljene metastaze čvrstog tumora je snažno prognostički faktori [1-3]. Postojanje cirkulirajućih stanica tumora (CTCs) u perifernoj krvi upućuje na to da je pacijent u fazi sistemske bolesti [4]. Identifikacija CTCs u perifernoj krvi je koristan pristup za procjenu prognozu, praćenje progresije bolesti i mjerenje djelovanja tretmana na dojke, prostate, kože, debelog crijeva i gastrointestinalnih malignih bolesti. Stoga, različite metode razvijene za otkrivanje CTCs, a ponekad se koriste u kombinaciji. Uobičajene tehnike za obogaćivanje i otkrivanje CTCs su gustoća gradijent razdvajanje [5], izravna obogaćivanje filtracijom [6, 7], imunomagnetskih odvajanje [8], protočna citometrija [9], real-time preokrenuti transkriptaze lančana reakcija polimeraze (rt PCR) [10, 11] i mikročip tehnologija [12]. pregled Cell obogaćivanje separacijom gradijenta gustoće izvodi uporabom komercijalnih kitova, kao što su OncoQuick® (Greiner, Frickenhausen, Njemačka) [13] i Lymphoprep® (Nycomed, Oslo Norveška) [14]. Gustoća gradijent odvajanja zasniva se na teoriji da različiti tipovi stanica mogu se odvojiti u skladu s njihovom gustoćom. Stoga je teško izdvojiti sve CTCs zbog migracije. RT-PCR je jedna od najčešćih metoda otkrivanja tumorskih stanica zbog svoje visoke osjetljivosti i specifičnosti, uz pretpostavku adekvatan primer i probe dizajn. Međutim, lažno pozitivni rezultati mogu se pojaviti zbog tehničkih poslastica i visokom osjetljivošću [15, 16].
Imunomagnetskih stanica obogaćivanje, kao što je ona koju provodi CellSearch System® (Veridex, LLC, RARITAN, NJ, USA) [ ,,,0],17], trenutno je najčešće korištena tehnika obogatiti i otkrivanje CTCs [18-21]. Prednost odvajanja imunomagnetskim stanica je da CTCs mogu vizualizirati sa fluorescentnim mikroskopom. Stanice otkrivena s antitijelima protiv epitelnih markera (molekula epitelne stanične adhezije, EpCAMs) se utvrdi da CTCs. Dakle, ova tehnika može pružiti lažno pozitivne rezultate na temelju normalnog epitela marker izražavanja ne-tumorske stanice i lažno negativni rezultati mogu nastati na temelju nedostatka selektivnog markera izrazom na tumorske stanice. Kao rezultat ograničenja povezanih s navedenim pristupima je nova tehnika potrebna za otkrivanje izvediv CTCs precizno. Pregled telomeraze igra važnu ulogu u procesu karcinogeneze, invazije raka i metastaziranja [22-24]. Mi smo razvili tehniku ​​iskoristiti visoku aktivnost telomeraze u stanicama. Ova tehnika koristi telomeraze specifičan, replikacija-selektivni modificiranog virusnog sredstva (Obp-401, TelomeScan®, Oncolys BioPharma, Tokyo, Japan), u kojima je humani telomeraze reverzne transkriptaze (tert pregled) promoter gen umeće u E1 regiju i zeleni fluorescentni protein (GFP), gen stavljen pod kontrolu promotora citomegalo u E3 području kao biljeg virusne replikacije [25]. To je izvijestio da je Obp-401 može se koristiti za otkrivanje održive CTCs među normalnim krvnim stanicama [26, 27].
Evo, primijenili smo test za otkrivanje održive CTCs s potencijalom za metastaza u bolesnika s rakom želuca. Otkrili smo GFP-pozitivne CTCs. Suprotno tome, moguće je da stanice nisu raka emitiraju GFP fluorescenciju nakon Obp-401 infekcije [28]. Stoga, odabrali smo stanice veći od praga određuje usporedbom zdravih volontera i pacijenata, jer CTCs su veće od normalnih krvnih stanica [7, 29, 30]. . Istraživali smo povezanost GFP-pozitivne CTC broj uz opstanak i patološkim pokazateljima progresije bolesti pregled Metode
bolesnika i zdravih dobrovoljaca pregled Pacijenti uključeni u ovu preliminarne studije su bili oni prolaziti kroz planirano kirurško liječenje; pacijenti koji su bili pogodni za endoskopske resekcije sluznice ili endoskopske submukozne seciranja su isključeni. Kriteriji za uključivanje bili su: (i) histološki dokazano adenokarcinom želuca s endoskopske biopsije; (Ii) klinički usamljeni tumor; (Iii) ne prije endoskopske resekcije, kemoterapija, radioterapija ili; (Iv) u dobi 20 - 80 godina; (V) status performanse Eastern Cooperative Oncology Group [31] 0 ili 1; (Vi) dovoljna funkcije organa; i (vii) pisani pristanak. Kriteriji za isključenje bili su: (i) sinkroni ili metachronous maligna bolest; (Ii) trudnice ili dojilje; (Iii) aktivni ili kronični virusni hepatitis; (Iv) aktivni bakterijske ili gljivične infekcije; (V) dijabetes melitus; (Vi) sistemska primjena kortikosteroida; i (vii) nestabilna hipertenzija. Pozornica bolesti u bolesnika koji su patološki karakterizira pomoću sedmo izdanje klasifikacije TNM Međunarodne unije protiv raka [32]. Dubina tumora u tri bolesnika bez gastrektomije i status regionalnog limfnog čvora od pet pacijenata bez dovoljno Limfadenektomija je dijagnosticirano kirurški.
Svi pacijenti prisustvovali bolnicu redovito nakon operacije, te su provjereni svaka 3 mjeseca. Pacijenti također prošao kroz endoskopiju i kompjutorizirana tomografija najmanje jednom godišnje, u skladu sa svojim stadiju bolesti i naravno. Pregled Također regrutiraju zdravih dobrovoljaca djelovati kao kontrola. Svi zdravi dobrovoljci bili su zaposlenici Sysmex Corporation i uključuje sedam muškaraca (prosječna dob 31,4 godina, raspon 24-39 godina) i tri žene (prosječna dob 33,7 godina, raspon 26-48 godina). Svi dobrovoljci su podvrgnuti liječničkim kontrolama nakon zapošljavanja i godišnje; check-up uključuje medicinske intervjue, auskultacijom, prsa rendgenskih snimaka, a krv i analize urina. Osim toga, proveli smo individualne razgovore prije uzimanja uzorka; bilo volonter koji je trenutno prima liječenje, trudni ili dojite, ili koji je donirao krv u posljednjih mjesec dana bio isključen. pregled Virus pregled Obp-401, A telomeraze specifičan, replikacija-selektivni adenovirusni sredstvo u kojem je tert
promotor element koji pokreće ekspresiju EIA Netlogu i EIB pregled gena, u koji GFP gen integriran, korišten u ovom istraživanju. Osjetljivost i specifičnost testa pomoću Obp-401 prethodno proučavali Kim et al. [27]. Ispitivanje je ponovljeno je pet puta test u uzorku, uključujući 1 MDA-MB-468 (karcinom dojke), stanicama i 7,5 ml krvi, a broj GFP-pozitivne stanice bile su 1, 1, 1, 2 i 3; u uzorku, uključujući 20 MDA-MB-468 (karcinom dojke), stanice brojeve GFP-pozitivne stanice su 15, 17, 19, 22 i 24. Virusni su uzorci pohranjeni na -80 ° C.
staničnih linija i kultura pregled A549 (karcinoma), HepG2 (hepatocelularnog karcinoma), HEC-1 (endometrija adenokarcinom), KATO III-(karcinom želuca) i SBC-3 (karcinom malih stanica pluća), stanične linije dobivene su od Health Science Research resursi banka (Osaka, Japan). LNCaP (adenokarcinom prostate) i OVCAR-3 (karcinom jajnika) stanične linije dobivene su od Riken Celi Bank (Tokyo, Japan). Stanice su kultivirane u skladu sa specifikacijama proizvođača. MDA-MB-468 stanice su kultivirane kao što je opisano [27]. Pregled Priprava uzoraka i brojanjem stanica pregled 7.5 ml periferne uzorak vena krvi je dobiven iz svakog pacijenta prije operacije, a iz svake dobrovoljca. Uzorci su uvučene u epruvete koje sadrže limunsku kiselinu, fosfornu kiselinu i dekstroza, i čuva na 4 ° C. Test se započne 48 sati.
Uzorci su centrifugirani kroz 5 min na 540 g, a faza plazma je uklonjen. Stanice su zatim isprane četiri puta s slanom otopinom puferiranom fosfatom (PBS), te dva puta s Roswell Park Memorial Institute medij. Uzorci su inficirane sa 4 × 10 8 jedinica koje formiraju plakove (PFU) u Obp-401 virusa inkubacije u mediju tijekom 24 sata pri 37 ° C. Nakon
mrtvih stanica bojanjem po crveno-fluorescentni reaktivni boja L23102 (Life Technologies Corporation, Carlsbad, CA, USA), Obp-401 virusa su inaktivirani i stanice su fiksirane s 2% paraformaldehidom (PFA) tijekom 20 minuta na sobnoj temperaturi.
uzorci su tretirani s površinski aktivnim sredstvo (Emalgen 2025 G, Kao Chemicals, Tokyo, Japan), u trajanju od 10 min na 40 ° C da se razgradi crvenih krvnih stanica. Konačno, 7,5 ml krvi je bio korišten za stvaranje dva uzorka stakalce za mikroskopske analize. Svi GFP-pozitivne stanice na dva tobogana su izbrojani, koristeći računalno upravljani fluorescentnog mikroskopa (IX71, Olympus, Tokyo, Japan) i ispitivač zaslijepljeni uzorka detalje. Ukupno vrijeme testa bio je 27.5 h (slika 1). Slika 1 Protokola i postupak "GFP-CTC Testiranje". Svaki od 7,5 ml uzorka periferne venske krvi dobivene od pacijenata prije operacije, a iz dobrovoljaca. Uzorci su uvučene u epruvete koje sadrže limunsku kiselinu, fosfornu kiselinu i dekstrozu. Uzorci su centrifugirani i plazma faza uklonjena. Nakon ispiranja stanica pomoću PBS i Roswell Park Memorial Institute medij, uzorci su zaražene s 4 × 108 PFU Obp-401 virusa. Obp-401 virus inaktivira i stanice su fiksirane s 2% paraformaldehidom (PFA). Uzorci su tretirani s površinski aktivnog sredstva da se razgrađuje crvenih i bijelih krvnih stanica. Dva uzorka stakalce od 7,5 ml krvi bili pripremljeni za mikroskopske analize. Svi GFP-pozitivne stanice na dva stakalca su prebrojane uporabom fluorescentnog mikroskopa kontrolirano kompjutorom, pregled Određivanje praga GFP intenzitet fluorescencije pregled Prag intenziteta fluorescencije GFP je određena na slijedeći način. Oko 30.000 uzgojene stanice su pripravljena u uzorke od 7,5 ml krvi zdravih dragovoljaca koji su dopunjeni s različitim staničnim linijama raka: A549, HepG2, HEC-1, KATO-III, SBC-3, LNCaP, MDA-MB-MB468 i OVCAR -3. Uzorci krvi su podvrgnuti testu za detekciju CTC i zatim uočljivih stanice su prebrojane s mikroskopom za fluorescenciju. Više od 100 stanica su analizirani u svakom uzorku. Odredili smo 2,85 × 10 7 znači ekvivalent fluorokroma da se prag za intenzitet GFP signala iz minimalne razine intenziteta GFP promatrane u krvi uzorci unesen na stanične linije (slika 2). Podaci su prikazani kao broj GFP-pozitivne CTCs po 7,5 ml uzorka periferne krvi. Slika 2 intenziteti GFP signal iz različitih staničnih linija raka. Dno i vrh kutije su donji i gornji kvartila, a bend kutije je medijan. Linije na kraju brkovi su minimalni i maksimalni. Y os predstavlja jačinu signala na GFP logaritamsko mjerilo
Imunobojanje pregled phycoerytrin-označenim anti-humanim CD45 antitijelo (BioLegend, San Diego, CA, USA) razrijeđen je 1: 5. I Pacific Blue-označenim anti-humanim CD326 (EpCAM) antitijela (BioLegend) je razrijeđen 1:10 u PBS koji sadrži 2% fetalni goveđi serum. Stanice su inkubirane s razrjeđenim protutijelima kroz 30 min na 25 ° C. Nakon ispiranja s PBS koji sadrži 2% fetalni goveđi serum, stanice su postavljene na stakalca i analizirani pomoću fluorescencijskog mikroskopa. (IX71, Olympus) pregled Statistička analiza pregled Statistička analiza provedena je pomoću JMP statističkog otkriće 9.0.2 (SAS Institute, Cary, NC, USA). Utvrditi praga promjera stanica detektiran GFP-pozitivne CTCs analizirane su pomoću prijemnik karakterističan (RH) krivulje između uzorka iz bolesnika s karcinomom želuca i onih od volontera. Višestruke usporedbe grupe, homogenost varijancije procjenjuje se Levene testa. Za parametara usporedbe koristili smo analizu varijance, a za ne-parametarske usporedbama smo se Wilcoxon i testove Kruskal-Wallis. Koristili smo Fisherov egzaktni i χ pregled 2 ispitivanja s 2 × 2 i 4 × 2 tablice, odnosno usporediti kliničkopatološka znakove u bolesnika skupine. Kaplan-Meier krivulje procijenjene preživljavanja bez bolesti i ukupno preživljavanje su generirane i usporedbe među skupinama su provedena pomoću dvostranu log-rank test. P pregled vrijednosti ≤0.05 su smatrane statistički značajna.
Istraživanje je odobreno od strane Institutional Review Board Sveučilišta Showa, Sjeverna Yokohama bolnici. Objasnili smo protokol studija s pacijentima i volontera prije nego su dali pisani pristanak. Ova studija je registrirana s University Hospital Medical Information Network u Japanu, broj 000002018. pregled Rezultati pregled obilježja Sudionik
šezdeset pet pacijenata sa želučanim adenokarcinom (46 muškaraca i 19 žena, prosječne dobi 58,8 godina, raspon 33 -76 godina) koji su podvrgnuti operaciji na bolesti probavnog Centra Sveučilišta Showa Sjeverna Yokohama bolnici u razdoblju od rujna 2009. do svibnja 2011. godine bili uključeni u ovu studiju. Dvadeset i devet imao distalni gastrektomije, 32 je ukupne gastrektomija, a četiri je imao istraživački laparotomije. Karakteristike pacijenata prikazani su u tablici 1. Dvadeset i osam od 65 pacijenata primila kemoterapiju nakon operacije. Kontrolna skupina sastavljena od 10 zdravih volunteers.Table 1 bolesnika karakteristike i patološki nalazi
parametre
broj pacijenata
Sex pregled muški pregled 46 pregled Female
19 pregled doba (mislim, raspon) pregled, 58,8, 33-76 pregled gastrektomije pregled distalnog pregled 29 pregled Ukupno pregled 32 pregled Nitko pregled 4 pregled Kirurško pristup pregled laparoskopija pregled 54 Netlogu Otvoreno laparotomija pregled 11 pregled izlječivost pregled R0 pregled, 57 pregled, R1
0 pregled R2 Netlogu 8 pregled TNM Faza pregled sam
40 pregled II pregled 6 pregled III
10 pregled IV pregled devet pregled tumora dubina invazije pregled T1 pregled 36
T2 pregled osam pregled T3 pregled devet pregled T4 pregled 12 pregled limfnih čvorova metastaze pregled N0 pregled 39 pregled N1 pregled 5 pregled N2
6 pregled N3 pregled 15 pregled udaljene metastaze pregled M0
56 pregled M1
9 pregled Glavni histološka tipa †
diferenciranog pregled 25 pregled Nediferencirani pregled, 40 pregled Limfna invazija pregled LX pregled 4
L0 pregled 35 pregled L1 pregled 26 pregled Venska invazija pregled VX pregled 4 Netlogu V0 pregled, 35 pregled V1-2 pregled 26 pregled † pa ili umjereno diferencirani adenokarcinom i papilarni adenokarcinom su kategorizirani kao diferencirani tipa. karcinom pečatni prsten, slabo diferencirani adenokarcinom i mucinozni adenokarcinom su kategorizirani kao nediferencirane tipa. pregled GFP-pozitivne CTCs u perifernoj krvi
Korištenje fluorescentnim mikroskopom, stanice s fluorescentnim emisija ≥2.85 × 10 7 znači ekvivalent fluorokromni su brojani kao GFP-pozitivne stanice
različitim veličinama GFP-pozitivne stanice su opažene u svakom uzorku. Stoga je teško odrediti jedan reprezentativni stanicu među GFP-pozitivne stanice za usporedbu između bolesnika i zdravih dobrovoljaca. Stoga, kako bi se izbjeglo korištenje proizvoljnu vrijednost, odlučili smo koristiti optimalne prag dobiven iz ROC analize na temelju veličine stanice, to jest, 7.735 um, kao što je prag za određivanje GFP-pozitivne CTCs (slika 3). Slika 3. Usporedba promjera stanica između pacijenata i volontera. Da bi odredili prag, dok smo promjere od stanica iz pacijenta rak želuca i kontrola ROC analizom. Postoji značajna razlika između bolesnika s karcinomom želuca i kontrolne skupine (p izvoznici &0,001; površina ispod krivulje = 0.57; 95% interval pouzdanosti = 0,54-0,60)
prema imunohistokemijski bojanjem pomoću protiv EpCAM i. anti-CD45 protutijela, utvrdili smo da su GFP-pozitivne CTCs su EpCAM-pozitivnih i CD45-negativne (Slika 4). Slika 4 Primjeri mikroskopskih slika. Reprezentativni slike iz dva uzorka GFP-pozitivne CTCs i imunocitokemijskog analiza anti-EpCAM- i anti-CD45-pozitivnih stanica želučanog karcinoma. Stanice su prebrojane uporabom kontrolirano kompjutorom fluorescencije mikroskopom ispitivač slijep na stanje uzorka. Skala, 10 um.
Brojevi GFP-pozitivne CTCs u uzorcima periferne krvi prikazani su na slici 5. Ne postoji značajna razlika između stope detekcije GFP-pozitivne CTCs u uzorcima koji predstavljaju svaku fazu raka. Slika 5 Broj GFP-pozitivne stanice. Točkice su brojevi GFP-pozitivne CTCs u uzorcima bolesnika. Dno i vrh kutije predstavljaju donjih i gornjih kvartila, a bend je preko okvira prikazuje medijan. Donje i gornje trake na krajevima brkovi pokazuju najnižu točku podataka unutar 1,5 interquartile rasponima donjeg kvartila, a najviša točka podataka unutar 1,5 interquartile rasponima gornjeg kvartila, respektivno. Zelene crtice pokazuju srednju vrijednost. Pregled, Udruga GFP-pozitivne CTCs s opstanak
srednji broj GFP-pozitivne CTCs u uzorcima iz 10 zdravih dobrovoljaca bio je 4,8. Podijelili smo pacijente u dvije skupine na temelju broja GFP-pozitivne CTCs: 0-4 i ≥5. U kliničkopatološkim karakteristike dviju skupina sažeti su u Tablici 2. Ne postoji značajna razlika između dviju skupina, osim da postoji samo jedna kategorija limfna metastasis.Table 2 kliničkopatološkim likove dviju skupina bolesnika po broju CTCs
Broj CTCs
0-4
5 ≤
P pregled vrijednost pregled
Broj predmeta
41 pregled
24
TNM: Faza
0,1586 pregled Faza I
29 pregled, 11 pregled Faza II pregled, 4
2 pregled, Faza III
4
6 pregled Faza IV pregled 4
5 pregled TNM: T kategorija pregled 0.2753 pregled T1 pregled, 26 pregled, 10 pregled T2 Netlogu 5. pregled 3
T3 pregled 5
4
T4 pregled 5
7 pregled TNM: N kategorija pregled 0,0257 * pregled N0 pregled 27
12 pregled N1 pregled 5
0 pregled N2 pregled 4
2 pregled, N3 pregled 5
10 pregled TNM: kategorija M pregled 0.2121 pregled M0
37 pregled, 19 pregled M1
4 pregled 5
Glavna histološka tipa
0,6844 pregled diferenciranog tipa
15 pregled, 10
nediferencirane tipa pregled, 26 pregled, 14 pregled Limfna invazija
0,3177 pregled Lx pregled 2 pregled, 2 pregled, L0 pregled 25 pregled, 10 pregled L1 pregled 14 pregled, 12 pregled Venska invazija
0,1293 pregled Vx pregled 2 pregled, 2 pregled, V0 pregled 26 pregled, 9
V1-2 pregled 13
13 pregled kirurgija pregled 0.2124
kurativnih resekcija pregled, 38 pregled, 19 pregled Non-ljekovito resekcija
1 pregled 3
Ne resekcija
2 Netlogu 2. pregled Postoperativni kemoterapija pregled 0.1672 pregled prisutnosti pregled, 15 pregled, 13 pregled Absence
26 pregled, 11
* * Značajna razlika. pregled Slika 6a prikazuje Kaplan -Meier krivulje za ukupno preživljavanje u dvije skupine: bolesnici s 0-4 CTCs i one s ≥5. Postoji značajna razlika između dviju skupina (p pregled = 0,0021). Nadalje, u pacijenata s uznapredovalim rakom želuca sa Stage II-IV bolesti, postoji značajna razlika između dviju skupina (p pregled = 0,0126) (Slika 6b). Slika 6 ukupnog preživljavanja. (A) Ukupno preživljavanje svih pacijenata. (B) Ukupno preživljenje bolesnika s stadiju II-IV bolesti. Preživljavanje je u odnosu prema broju CTCs pomoću Kaplan-Meier analiza i statistika log-rank. ** P izvoznici < 0.01, * p izvoznici < 0,05. Pregled, Udruga GFP-pozitivne CTCs s patološkim indeksa
Ne postoji značajna povezanost između broja GFP-pozitivne CTCs i stadiju raka (p
= 0,2313) (Slika 5). Mada nije opažena statistički značaj, broj GFP-pozitivne CTCs tendenciju povećanja s napredovanjem primarnog tumora (p = 0,1521
) (Slika 7a). Broj CTCs u uzorcima iz pacijenata čvorova pozitivne bila veća od one kod pacijenata čvorova negativne (p = 0,1752 pregled) (slika 7b). U usporedbi s pacijentima bez udaljenih metastaza, one s udaljenim metastazama imali slične brojeve GFP-pozitivne CTCs (p
= 0,5655) (Slika 7c). Nije bilo značajne razlike između i slabo diferenciranog tipa (p
= 0,8387) (Slika 7d). Brojevi CTCs bile su slične u uzorcima iz pacijenata sa i bez limfna invazija (p
= 0,2054) (Slika 7e). Za venskoj invazije, broj CTCs u uzorcima iz pacijenata s invazije je bila značajno viša od one u bolesnika bez invazije (p = 0,0351 pregled) (Slika 7f). Slika 7 odnos između broja GFP-pozitivne CTCs u 7,5 mL uzorka krvi kod pacijenata oboljelih od raka želuca i patoloških nalaza u pacijenata. Točkice su brojevi GFP-pozitivne CTCs u uzorcima bolesnika. Dno i vrh kutije predstavljaju donjih i gornjih kvartila, a bend je preko okvira prikazuje medijan. Donje i gornje trake na krajevima brkovi pokazuju najnižu točku podataka unutar 1,5 interquartile rasponima donjeg kvartila, a najviša točka podataka unutar 1,5 interquartile rasponima gornjeg kvartila, respektivno. a, tumora dubina invazije (T1-T4 ukazuju na povećanje dubine). b, Limfna metastaze (N0 = negativna, N1-3 = pozitivan). c, udaljene metastaze (M0 = negativna, M1 = pozitivan). d, Histološki tip (diferencirani tip i nediferencirane tipa). e, limfna invazija (L0 = negativna, L1 = pozitivan). f, Venska invazija (V0 = negativna, V1 = pozitivna), * p izvoznici < 0.05. Iako je samo venska invazija pokazao je statistički značajnu razliku, bilo je nekih trendovi prema povećanju CTC broja s povećanjem napredovanje bolesti. Pregled Rasprava pregled U radu je povezanost CTCs i raka želuca, koji je drugi vodeći uzrok rakom smrti širom svijeta. Korisnost otkrivanje CTCs u dijagnostici, procjeni prognoze i evaluaciju učinaka tretmana već prijavljen za dojke [27, 33], prostate [34], pluća [35] i probavnog trakta [11, 36, 37 ] raka. Ova studija pokazuje da je također koristan za rak želuca.
Jedan od glavnih rezultat našeg istraživanja bio je značajna povezanost između broja CTCs i prognozu. Iako smo se kratko follow-up period, prognoza za pacijente koji su imali ≥5 CTCs u svojim 7,5-ml uzorcima periferne krvi bila loša. Pacijenti s ranim stadijem bolesti obično imaju nižu stopu ponavljanja [38], a one s stadij I bolešću zapravo nisu imali recidiv u našem istraživanju. Također smo izračunali stopu preživljavanja u pacijenata s uznapredovalim rakom želuca s pozornice II-IV bolesti, te su pokazali da su ti pacijenti imali su sličan obrazac preživljavanja na one s pozornice I-IV bolesti. Ovi rezultati ukazuju na to da preoperativna kemoterapija ili sveobuhvatno liječenje je prikladno za napredne bolesnih pacijenata koji imaju mnogo CTCs u permanentne uzoraka zbog svoje loše prognoze.
Među našim patološkim nalazima, samo venska invazija imala značajan odnos s brojem CTCs. To sugerira sporazum između tradicionalne patologije i moderne molekularne tehnologije. Vjerujemo da je nedostatak značajna razlika između broja CTCs otkrivenih od strane naše probe i druga patološka indeksa može se objasniti metodološkim pitanjima kao što su male veličine uzorka. Naša tehnika je radio dobro kao prognostički ocjenjivanja alata - pružiti informacije o potrebi za postoperativni adjuvantna terapija - i to može poslužiti kao koristan pomoćni alat za patologiju na bazi klasifikacije
Nije jasno da li su svi otkriveni CTCs ima metastatski potencijal.. Održiva CTCs otkrivene su u uzorcima iz pacijenata oboljelih od raka u ranoj fazi u ovom istraživanju, ali gotovo svi pacijenti faza I grupe preživjeli bez recidiva [38]. Namjera nam je potvrditi da li otporne stanice raka, kao što su rak matične stanice, bili su prisutni u uočenim GFP-pozitivne stanice. Isto tako, mi ćemo analizirati funkcije održivih CTCs pojedinačno nakon staničnog sortiranja i identificirati CTCs s metastatskim potencijalom pomoću dodatnih alata kao što su DNA tumorskih stanica analizu [39, 40]. Nadalje, profila genske ekspresije među održive CTCs, mrtvih stanica primarnih tumora i metastatskih tumora će otkriti važne informacije u vezi s mehanizmima metastaza raka.
Naši rezultati moraju tumačiti s određenim oprezom, s obzirom na ograničenja ove studije. Prvo, broj CTCs široko varira između pojedinaca, uključujući i bolesnika i zdravih dobrovoljaca. Štoviše, on nije bio pod utjecajem fazi tumora ili prisutnost klinički mogu detektirati metastaza. Isto tako, nije bilo povezanost između prisutnosti metastaza (limfnih čvorova ili daljoj) ili invazije i broju CTCs, što dovodi u pitanje korištenje CTCs predvidjeti metastaziranja. Međutim, moguće je da je relativno mali uzorak ograničen potencijal za otkrivanje prave razlike između tih skupina bolesnika. Na kraju, mora se priznati da su naši rezultati primjenjivi samo na preoperativnoj, liječenje-naivna raka želuca i ne treba generalizirati na druge vrste raka.
Jasno, više studija u većoj populaciji bolesnika, te s različitim vrstama raka potrebne su pojasniti kliničku primjenjivost otkrivanje CTC. Sada pripremamo studiju kako bi istražili učinke želuca liječenja raka na broj CTCs, što bi trebalo pomoći da se utvrdi njihov odnos s budućim progresije bolesti i da li CTC count može pomoći guidetherapy izbor.
Zaključci pregled Bilo je značajna razlika u preživljavanju između bolesnika s 0-4 CTCs i onih s ≥5. Međutim, nejasno je da li svi CTCs imaju pravi metastatski potencijal, te su potrebna daljnja istraživanja. Pregled deklaracija
Priznanja
ovog istraživanja bio je podržan u sklopu donacijom-u-Aid za zahtjevne Istraživačkog istraživanja (23659308) iz Japana društva za promicanje znanosti (JSPS). Tijelo sredstva igrao nikakvu ulogu u dizajnu studija; u zbirci, analize, ili tumačenje podataka; u pisanju rukopisa; ili u odluci da podnese rukopis za objavljivanje. Zahvalni smo svim pacijentima i volontera koji su donirali krv u ovoj studiji. Željeli bismo zahvaliti profesoru Toshiyoshi Fujiwara (Okayama University Graduate School of Medicine, Okayama, Japan) za pružanje korisne komentare i prijedloge; G. Yasuo Urata (Oncolys BioPharma, Tokyo, Japan) za dopremanje Obp-401; Dr. Yukio Tsujino, dr Toshiyuki Ozawa i dr Akinori Masago (Sysmex Corporation, Kobe, Japan) na korisnim potpore; i dr Rebecca Devon (Genetics jedinica i Sveučilište u Edinburghu, Edinburgh, Velika Britanija) za kritičko preispitivanje i uređivanje rukopisa. Također smo zahvalni kliničkog osoblja.
Autora originalne dostavljeni datoteke za slike
Ispod su linkovi na autora izvornika dostavljenih datoteka za slike. Izvorna datoteka za sliku 1 12885_2012_3365_MOESM2_ESM.tiff autora 12885_2012_3365_MOESM1_ESM.tiff autora izvorna datoteka za sliku 2 12885_2012_3365_MOESM3_ESM.pdf autorskim izvorne datoteke na Slici 3 12885_2012_3365_MOESM4_ESM.pdf autorskim izvorne datoteke za Slika 4 izvorne datoteke 12885_2012_3365_MOESM5_ESM.tiff pisaca za lik 5 Svi autori su pročitali i odobrili konačnu rukopis. Pregled

• Terapijski potencijal PRL-3 usmjerenosti i kliničkog značaja PRL-3 genomske pojačanja u želučanom cancer
• Obiteljska povijest raka i gastroezofagealni bolesti i rizik od jednjaka i želuca adenokarcinoma: a case-control studija