Helicobacter pylorigenotypes opredeljene v želodcu biopsijo iz Jordanski patients

Helicobacter pylori
genotipov, opredeljenih v želodčnih biopsijo iz jordanske bolnikov
Abstract
Ozadje
genetske raznovrstnosti Helicobacter pylori
lahko analiziramo na dva različna ravni: genomsko razlike med sevi, ki izvirajo iz različnih posameznikov, in razlike v bakterijskih populacij znotraj posameznega gostitelja. poročali smo prvič na H. pylori
genotipov pri jordanskih bolnikih z boleznimi prebavil.
Metode
je Zgornja endoskopija izvajajo na 250 bolnikov s simptomi bolezni prebavil. Več želodca biopsije so bili osebki odvzeti iz antruma. Vse biopsije so bili testirani s PCR za H. pylori
virulence genov Váca
, cagA
in ICEA
, in 151 so bile testirane s histologijo.
Rezultati
biopsije pozitivni za H. pylori
s PCR je bilo 110/250 (44%), in s histologijo 117/151 (77,5%), in ti rezultati so bili zelo povezana (P
< 0,02). Analize virulentnih genov je pokazala, da je bila iceA2
(73,6%) prevladuje genotip, na Vaca
s2 alel je bila pogosteje opredeljena kot Váca
s1 alel, medtem ko je bil v cagA
genotip nizka (26,4 %). Prisotnost določenih genotipov se lahko povezana med seboj, temveč prisotnost določenih genotipov ni bila pomembno povezana s starostjo, ali spol pacienta.
Zaključek
Rezultati prikazujejo geografske narave genske raznolikosti H. pylori
, kot so opredeljeni genotipi podobna tistim v sosednjih državah. Ta študija zagotavlja osnovne podatke H. pylori
genotipov, opredeljenih v želodčnih biopsijo iz Jordanije, ki služi kot močan epidemiološko orodje za bodoče preiskave za boljše razumevanje genetske raznolikosti tega patogena.
Ozadje
Helicobacter pylori
je želodčni bolezni, ki kronično okuži več kot polovica vseh ljudi po vsem svetu. V državah v razvoju, 70-90% prebivalstva opravlja H. pylori
; Skoraj vsi ti okužijo pred starostjo 10 let [1]. V razvitih državah je razširjenost je nižja, in sicer od 25 do 50% (8) [1], zaradi izboljšanih socialno-ekonomskih razmer v zadnjih nekaj desetletjih [2]. Zato lahko H. pylori
okužbe v državah v razvoju prispevajo k otroštva podhranjenosti in poveča tveganje ali resnost okužbe z drugimi prebavil mikroorganizmi, kot so bakterije Vibrio cholerae
[3]. Večina okužene osebe so brez simptomov ali imajo kronične gastritis [1, 4]. Razlike v rezultatu bolezni so lahko posledica številnih faktorjev, ki vključujejo; gostiteljske dejavniki, okoljski dejavniki in razlike v razširjenosti ali izraz bakterijskih virulentnih dejavnikov [4, 5]. Genetska raznolikost H. pylori
lahko analiziramo na dveh različnih ravneh: genomske razlike med sevi, ki izvirajo iz različnih posameznikov, in razlike v bakterijskih populacij v posameznem gostitelju [6]. Z uporabo naključno dopolnjena polimorfna DNA-PCR in DNA prstnih odtisov, se je izkazalo, da je seve od nepovezanih bolnikih, okuženih edinstvene prstne odtise, medtem ko sevi izolirane od družinskih članov je imel zelo podoben, čeprav niso enaki vzorci [7]. Ti rezultati pomenilo, da so razlike, opažene med sevi bakterije povzročiteljice posameznih družinskih članov je prišlo po primarni okužbi. Takšna genetska raznovrstnost je mogoče opaziti med H. pylori
virulentnih genov; cagA
, Vaca
in ICEA
.
A vacuolating citotoksina da poškoduje epitelne celice so kodirane s Váca
gen [8, 9], ki vsebuje vsaj dve spremenljivi del [10] . The Vacas
regija (ki kodira signalni peptid) obstaja kot S1 ali S2 alelne vrst, med sevi tipa s1, podtipe s1a, s1b in s1c je bilo ugotovljeno, [11]. M (srednji) regija pojavlja kot them1 ali vrsto alelov m2, med tipa m2, sta bili ugotovljeni dve podtipi, imenovani m2a in m2b. Na splošno velja, vrsta s1 m1 in vrsta sevi s1 m2 proizvodnjo visoko in zmerno stopnjo toksina, v tem zaporedju, medtem ko s2 m2 sevi kažejo malo ali novacuolating aktivnosti toksina [10].
ICEA
gena, ki kodira domnevnega omejevanja encim, ki se pojavi bo povzročil, ko H. pylori
naleti epitelijskih celic kaže alelna variacija po točki mutacije, ki izhajajo iz dveh alelne vrstah je iceA1
in iceA2
[6]. Študija H. pylori
okužbe pri bolnikih, izpostavljenih do prebavil endoskopijo zgornjih v Jordaniji, poročajo visoko prevalenco [12], in potrdil, da je njegova prisotnost močno povezana z gastritisom in čira na želodcu. Sedanje poročil o študijah za prvič v Jordanijo H. pylori
genotipi, opredeljene v želodcu biopsijo.
Metode
Bolniki
A skupaj 250 zaporednih bolnikov, ki so obiskali kralja Abdullaha Hospital, in princesa Basma bolnišnica od julija 2003 do maja 2004, za zgornji endoskopijo so bili vključeni v raziskavo. Ti dve učne bolnišnice so povezana z Jordan univerzi za znanost in tehnologijo, kjer je bila izvedena študija. Biopsije vzorci so bili odvzeti iz antruma. Študija je odobril Odbor za etiko univerze. Vsak pacient podpisal pisno privolitev pred osebek zbirko in vse klinične vzorce smo testirali undercode
podatkov
informacije iz poročil o patologije ali datotek pacientov je bil posnet za vsakega bolnika, ki je vključeval:. Pacientovo število bolnišnično starost, spol, zgodovina, klinična diagnoza temelji na histologijo, endoskopijo in predhodno zdravljenje (npr anti-H. pylori
, trije so imeli zaviralce protonske črpalke ali antacidi). Simptomi, ki jih bolnikih, ki so v zgornjem delu prebavil endoskopijo poročali, so bolečine v trebuhu, epigastrične bolečine, bruhanje ali zgaga.
Histološke preiskave
Histološka preiskava je bila izvedena na 151 (60,4%) antralnih biopsijo. Pet primerki iz antruma sluznice so bili sprejeti s srednje velikimi kleščami. Dva vzorci so bili vgrajeni v parafin in parafinske odseki smo obarvali s pomočjo hematoksilina-eozin in metode Giemsa. Osebki sluznice je bila ocenjena s histološko preiskavo v skladu s klasifikacijo Sydney. Kodiranih mikroskopskih so mikroskopsko pregledati z enim samim patolog z visokimi moč (povečava × 400), in vsaj pet high-power polja so bili pregledani. Genotipizacija na osnovi PCR
treh virulentnih genov
testiran Vse 250 biopsije s PCR smo hranili pri -80 ° C v 70% etanola v Eppendorf cevi do obdelati. Te biopsije je vključeval 151 biopsije, ki so bile testirane s histologijo.
Osebki biopsije smo homogenizirali s sterilno mikro zdrobiti, in DNA je bila vzeta s pomočjo čarovnika genomske DNA čiščenje kit (Promega, Madison, WI, ZDA), po navodilih proizvajalca za čiščenje DNA iz živalskega tkiva. Prisotnost H. pylori
bil odkrit z ločenimi PCRs, katerih namen je cagA
, Vaca
s in m regije in ICEA
genotipov so bile določene z ločenim iceA1
- in iceA2
-specifične PCRs kot je opisano predhodno [13, 14]. Pet vrstno specifičnih začetnih oligonukleotidov kompleti (alfa DNA, Montreal, Kanada), so bili uporabljeni za ojačanje zelo ohranjene regije v okviru navedenih genih.
Statistična analiza
povezovanja med histologijo in rezultate PCR, in je bila analizirana povezava med genotipi uporabo Natančno in hi-kvadrat testi statistični sveženj Fisherjev za družbene vede (SPSS Inc. Chicago, Illinois ZDA). Razlika v povprečni starosti med moškimi in ženskami je bila izračunana tako neodvisnost vzorca t-testa.
Rezultati
Diagnoza H. pylori
je temeljil na histologijo in PCR metodo.
Histološki ugotovitve
Histološki pregled 151 biopsij je pokazala, da je bilo 117 (77,5%) bolnikov pozitivnih na H. pylori
, zato so bili dejansko okužen, in 34 (22,5%) sta bila negativna.
dejavnikov virulence
prisotnosti cagA
, Vaca
s in m regije in iceA1
- so bile preiskane in iceA2
geni v vseh 250 biopsije so. Biopsije, ki so bili PCR pozitiven za enega ali več genov, je bilo 110 (44%) in 140 (56%) so bili negativni za vse gene
Samec. Ženski razmerje populacije bolnikov je 58/110 (52,7 %) moški: 52/110 (47,3%), ženske; (Povprečna starost 42.03 + 15,135 let, razpon, 17 - 67 let)
H. pylori genotipi
Rezultati genotipizacije v 110 biopsije so predstavljeni v tabeli 1.Table 1 Razširjenost Helicobacter pylori odkritih
genotipi. v 110 biopsije
genotipa

Razširjenost (%)
Váca
s1
34 (45,3)
Váca
s2
41 (54,7)
Váca
m1
23 (48,9)
Váca
m2
24 (51,1)
Váca
s1m1
12 (46,2 )
Vaca
s2m2
12 (46.2)
Váca
s1m2
2 (7.7)
Váca
s2m1
0 (0.0)
cagA
29 (26,4)
iceA1
0 (0.0)
iceA2
81 (73,6)
Váca genotipi
velikostjo dopolnjena izdelki za vaca
s1 in Váca
s2 so 259 bp in 286 bp oz. Intenzivnost proizvodov razlikovala med osebki. Vaca
je regija je bila dopolnjena leta 75/110 (68,2%) biopsije. S1 variante so odkrili pri 34/75 (45,3%), oziroma 34/110 (30,9%), v primerjavi z s2 varianto, ki je bila odkrita 41/75 (54,7%), oziroma 41/110 (37,3%) s biopsije. V Vaca
m regija je bila odkrita v 47/110 (42,7%) biopsije. M1 variante so odkrili pri 23/47 (48,9%) ali 23/110 (20,9%), v primerjavi z m2 varianti odkrita 24/47 (51%), oziroma 24/110 (21,8%).
Kombinacija od tega Vaca
ih, je bila in m regije zazna 26/110 (23,6%) od biopsij. Oba Vaca
s1m1 in Vaca
s2m2 bili odkriti v približno enakih količinah v 12/26 (46,2%), od tega Vaca
sm genotipa ali 12/110 (10,9%), medtem ko Vaca
s1m2 je bila odkrita le 2/26 (7,7%), od tega Váca
sm genotipa ali 2/110 (1,8%). Nobena od biopsije pokazala Váca
s2m1 genotip ali več genotipov.
CagA genotip
velikosti cagA
pomnoženega produkta je 349 bp. V cagA
genotip so odkrili pri 29/110 (26,4%), in 81 (73,6%) sta bila negativna.
Pridružitvi med genotipi cagA in vacAs1
bil cagA
genotip, odkritih v 8 /17 (47,1%), od tega Váca
s1 genotipa, v primerjavi s samo 2/20 (10%), od tega Váca
s2 genotip.
ICEA genotipa
Nobena od 110 biopsije je pokazal, da ICEA
1 genotip, medtem ko je 81 (73,6%) je pokazala iceA2
genotip. iceA2
pomnoževanje dobimo tako 229 bp in 334 bp fragmenta, ta razlika v velikosti fragmenta je posledica prisotnosti 105 bp in - okvirju AMPLICON prisotne v 334 bp fragmenta, ki je odsotna v 229 bp fragmenta [ ,,,0],15].
pridružitvi med genotipi in spolu
Čeprav so nekateri genotipi zaznali več enega spola kot druge, njihova prisotnost ni pomembno, povezanih s starostjo, ali spola bolnika. Med genotipi, ki so bili pri moških odkrita je bila več kot samice Váca
s1 9/17 (53%), cagA
16/29 (55,2%), iceA2
45/81 (55,5%), Vaca
s1m1 12/07 (58,3%), in združenega Vaca
s1 cagA
genotipi 08/06 (75%). Med genotipi, ki so bile odkrite bolj pri ženskah so bili Váca
s2 11/19 (65%), Vaca
m2 15/20 (75%), Vaca
s2m2 11/08 (72,7%), in združenega Vaca
s2 cagA
genotipi 2/2 (100%). V Vaca
m1 in Vaca
s1m2 genotipi so odkrili pri približno enak znesek pri obeh spolih
Statistična analiza
celotnega pozitivnih rezultatov PCR so bili zelo povezana (P
< 0,02). Z Rezultati histološki. Analiza podatkov je pokazala značilno povezavo med hkratno odkrivanje tako cagA
in Váca
s1 genotipov (P
= 0,026), kombinacija obeh strani Váca
s1 in Vaca
m1 genotipi (P
< 0,0001) in hkratni uporabi obeh Váca
s2 in na Váca
m2 genotipov (P
< 0.0001). Po drugi strani pa je bilo opaziti nobene povezave med odkritjem obeh strani Váca
s2 in cagA
genotipov (P
= 0,102), odkrivanje več genotip z obeh starosti ali spola (P
> 0,05), kombinacija tako Vaca
s1 in na Vaca
m2 genotipi (P
> 0,05), in kombinacija tako Vaca
s2 in na Vaca
m1 genotipi (P
> 0,05).
Razprava
sedanjih poročilih študije o Váca
, cagA
in ICEA
genotipov H. pylori
ki so bile ugotovljene pri želodčnih biopsije. Čeprav vsi sevi, opravlja kopijo gena Vaca z bodisi S1 ali S2 signalne sekvence, je Vaca
je regija krepila 75/110 (68,2%) biopsije. Podobne rezultate so poročali tudi druge študije kažejo, da lahko obstajajo dodatni poddružini s in m genotipi poleg znanih [16].
Prevladujočo genotip v 110 biopsije, ki so bili pozitivni na H. pylori
s PCR, je iceA2
(73,6%), sledijo Vacas
genotipa (68,2%); 34 (45,3%), od tega so jih v Váca
s1 alel, in 41 (54,7%) je bilo v Váca
s2 alel, medtem ko je bil v cagA
genotip pomnožili le 29/110 (26,4%) od biopsije. Naši rezultati so v dogovoru z drugimi študijami o izraelskih otrok [13], in egiptovskimi bolnikov [15], kjer je bil v cagA
genotip poročali pri 28% in 36% oz. Podobnost genotipov, opredeljenih v treh študijah je mogoče pojasniti s primarnim geografskega vpliva pomembno pri prilagajanju organizma na okolje in podnebne razmere [13], kljub očitnim razlikam gostiteljice v življenjskem slogu, v dveh sosednjih državah. Tesno podobnost sevov v sosednjih državah so poročali tudi v Bangladešu in Kalkuti, [3, 17], v Indiji, ki je zelo verjetno razmišlja o neposredni bližini obeh držav, podobnimi fiziološkimi okolja in življenjskih stilov gostitelja.
Večja razširjenost (67% ali več) v cagA
genotip v H. pylori
so poročali v Evropi, srednji in Južni Ameriki in vzhodni Aziji [15]. V Vaca
s2 alel je v vzorčnega odkrili v manj kot 30%, v večini teh držav. Razširjenost stopnje te genotipa podoben trenutne študije (54,7%) so poročali v Egiptu (50%) [15], medtem ko so poročali višje stopnje (65%) v izraelsko študije [11]. Študija v Kuvajtu so poročali, da so bili Vaca
S1 in S2 vrste odkrili pri približno enakih številk v biopsije, pridobljenih iz bolnikih srednji in vzhodni izvora, medtem ko so afriške Arabci večinoma okuženi z vrsto s2 [18]. Študija genotipov v štirih različnih državah, je poročala, da je cagA
in Vaca
s1ml iceA1
genotipov so prevladovale na Japonskem in v Koreji [14], in cagA
, Vaca
s1m1 so iceA2
genotipi pogosto opredeljena v Združenih državah Amerike, medtem ko je cagA
, Vaca
s1m1 so iceA2
genotipi prevladuje v Kolumbiji. Ista raziskava bolj razširjena v Váca
s1 od Váca
s2 genotip, in velike razširjenosti v cagA
genotip; Vendar pa je razširjenost iceA1
in iceA2
genotipi razlikovala med temi državami. Raziskava v Angliji so poročali, da je bil v Váca
s1m1 genotip ugotovljeno, da je manj pogosta v Angliji [19], medtem ko prevladujejo iceA1
alelov, cagA
in prisotnost Vaca
m1 opazili so alelov. Turški sevi preučeni pretežno imela na cagA
, vaca
s1m1 ali Váca
m2 genotipov, ki so bile značilne genotipe sevov iz zahodnih držav [20]. Prevlada na Váca
sl /m1 alelov kombinacijo in visoko razširjenost v cagA
gena (87%) so poročali tudi v Estoniji H. pylori
sevov [21]. Primerjavo na podlagi Prisotnost kombinacije od Vaca
s in m alelov, v Váca
s1 alel je bistveno povezana z Vaca
m1 (P
< 0,0001) in isto združenje opazili med na Vaca
s2 in na Vaca
m2 (P
< 0,0001) alelov. Vendar pa je bilo odkritje obeh Váca
s1 in Váca
m2 alelov neodvisno drug od drugega (P
> 0,05). V Vaca
s1m2 genotip je bila odkrita šele v 2/26 (7,7%), od tega Váca
sm kombinaciji. Poleg tega ni bilo pomembnega povezovanja med Váca
s2 in Vaca
m1, kar pomeni, da je odkrivanje vsake alel neodvisno od drugih (P
> 0,05). Ta ugotovitev lahko pojasni odsotnost kombinirane s2 /m1 genotipa iz izolatov v študiji, ki je bila prej [22, 23] poročali. Vendar pa so poročali prvi primer Váca
s2m1 H. pylori
izolata v razjedo dvanajstnika pacienta iz Južne Afrike [24].
Pomembnega povezovanja med Váca
s1 alel in cagA
genotip (47,1%), v naši raziskavi so poročali tudi pri 50% izraelskih in egiptovskih izolatov [13, 14]. Združenje več kot 85% izolatov je bilo v drugih državah [15, 22], ki potrjuje, da sta oba označevalci tesno povezani. Naša raziskava je pokazala nobenega pomembnega združenje pri odkrivanju dveh genotipov v istem izolata kot je cagA
z ICEA
2, v Vaca
alel m2 z genotipom ICEA
2 in Vaca
s2, m2 alelov z ICEA
2, ki kaže, da je bilo odkritje enega gena neodvisna od druge. Poleg tega je bilo odkrivanje kombinirane Váca
s1 M1, ICEA
2 genotipi v nekaj biopsije nepomembna (P
> 0,05), kar kaže, da je odkrivanje ICEA
2 neodvisna Vaca
genotipov. Iste ugotovitve so poročali v prejšnji raziskavi [22]. Nobena od sevov z multiplo vac
A genotipov, ki so poročali tudi v drugih državah, kot so severni Južni Ameriki [15].
Ženske so pogosteje knjigovodska Vaca
s2, in v Vaca
m2 genotipi (65% in 75%, v tem zaporedju) v primerjavi s (42% in 25%) pri moških. IceA2
(55,5%), cagA
(55,2%), in Vaca
s1 (53%) genotipi so odkrili več pri moških kot pri ženskah. Spol pacienta in odkrivanje določenih genotipov ali kombinacije genotipov ni pomembno povezana. Poleg tega je H. pylori
genotipi (P
> 0,05)., In odkrivanje več kot enega genotipa ni pomembno povezavi z obeh starosti ali spola bolnika
Skupni pozitivni rezultati PCR so bili zelo povezana (P
< 0,02), z rezultati histoloških. Razlike v histologijo in rezultati PCR so lahko posledica neenotno distribucijo H. pylori
v želodcu. Poleg tega lahko lažno negativnih problem v genotipizacijo biopsije, ker je bilo ugotovljeno, nekateri biopsije, da vsebujejo spojine, ki zavirajo PCR [25]. Poleg tega testiranje bolj več biopsije s histologijo v primerjavi z enim s PCR poveča možnost iskanju bakterije in pojasnjuje bolj pozitivne rezultate, ki jih histologijo (77,5%), v primerjavi s PCR (44%). Je zdravljenje bolnikov z zaviralci protonske črpalke, antacidov, ali anti-H. pylori
zdravljenje lahko privede do negativnih rezultatov pri preskusih, opravljenih v teh bolnikih [26].
Zaključek
jordanski sevi preučeni pretežno posedovala iceA2
alel, je bil na Vaca
s2 alel zazna več kot v Váca
alel s1, medtem ko je bil v cagA
genotip nizka. Odkrivanje nekaterih genotipov se lahko povezana drug z drugim. Rezultati prikazujejo geografsko narave genske raznolikosti H. pylori
, kot so opredeljeni genotipi podobna tistim v sosednjih državah.
Ta študija zagotavlja izhodiščno okvir H. pylori
genotipi, opredeljene v želodca vzorci biopsije, ki služijo kot močan epidemiološko orodje za bodoče preiskave za boljše razumevanje genetske raznolikosti tega patogena.
Izjave
Zahvala
avtorji zahvalil gastroenerologi in medicinske sestre na oddelku za endoskopijo na kralja Abdulaha in Princess Basma bolnišnice, ki so pomagali pri zbiranju vzorca. Študija je bila podprta z nepovratna/04 od Deanship raziskav na Jordan University of Science & Tehnologija.
Konkurenca interesov
avtorja (ev), navedejo, da nimajo konkurenčnih interesov.

• Zdravljenje malignega želodca obstrukcija izhodnega z opornic: Ocena sporočenih spremenljivk za kliničnim izidom
• Učinkovitost predoperativnega PET /CT za napovedovanje curability v kirurgiji za lokalno napredovalega raka želodca