Helicobacter pylorigenotypes, выявленные в желудочной биопсии из иорданских пациентов

Хеликобактерной
генотипы, выявленные в желудочной биопсии из иорданских пациентов
Аннотация
Справочная информация
Генетическое разнообразие Helicobacter Pylori
могут быть проанализированы на двух различных уровнях: геномные различия между штаммами, происходящих из различных физические лица, а также различия в популяциях бактерий внутри отдельного хозяина. Мы сообщали, впервые в H. Pylori
генотипов в иорданских больных с заболеваниями желудочно-кишечного тракта.
Методы
Верхняя эндоскопия была выполнена на 250 пациентов с симптомами желудочно-кишечных заболеваний. Несколько образцов желудочной биопсии были взяты из антрального отдела. Все биопсии были проверены с помощью ПЦР для H. Pylori
генов вирулентности Вака
, CaGa
и ICEA
, и 151 были протестированы с помощью гистологии.
Результаты
биопсий положительных для антихеликобактерную
с помощью ПЦР были 110/250 (44%), а гистологически 117/151 (77,5%), и эти результаты были весьма связаны (P
≪ 0,02). Анализ генов вирулентности показало, что iceA2
(73,6%) был преобладающим генотипом, был идентифицирован чаще
в Вака s2 аллель, чем
в Вака s1 аллель, в то время как CaGa
генотипа была низкой (26,4 %). Присутствие некоторых генотипов могут быть связаны друг с другом, но наличие определенных генотипов не было в значительной степени связано с возраста или пола пациента.
Заключение
Результаты иллюстрируют географический характер генетического разнообразия Г. пилори
, поскольку выявленные генотипы сходны с таковыми в соседних странах. Данное исследование предоставляет базовые данные H. генотипов пилори
выявленных в желудочной биопсии из Иордании, выступающей в качестве мощного инструмента для эпидемиологического перспективных исследований, чтобы лучше понять генетическое разнообразие этого возбудителя.
Предпосылки
хеликобактер пилори
является желудочный патоген, хронически заражает более половины всех людей во всем мире. В развивающихся странах 70-90% населения несет H. Pylori
; почти все они приобретают инфекцию в возрасте до 10 лет [1]. В развитых странах распространенность ниже, в пределах от 25 до 50% (8) [1], в связи с улучшением социально-экономических условий в течение последних нескольких десятилетий [2]. Поэтому H. Pylori
инфекции в развивающихся странах может способствовать детским истощением и повышают риск или тяжесть заражения других желудочно-кишечных патогенов, таких как холерного вибриона
[3]. Большинство инфицированных являются бессимптомными или иметь хронический гастрит [1, 4]. Различия в исход заболевания может быть результатом целого ряда факторов, которые включают; факторы хозяина, факторы окружающей среды, а также различия в распространенности или экспрессии бактериальных факторов вирулентности [4, 5]. Генетическое разнообразие хеликобактерной
можно проанализировать на двух различных уровнях: геномная различия между штаммами, происходящих из разных индивидуумов, а также различия в популяциях бактерий внутри отдельного хозяина [6]. При использовании случайным образом амплифицированной полиморфной ДНК-ПЦР и ДНК-дактилоскопии, было показано, что штаммы из неродственных инфицированных пациентов имели уникальные отпечатки пальцев, в то время как штаммы, выделенные из членов семьи были очень похожи, хотя и не идентичные картины [7]. Эти результаты подразумевали, что наблюдаемые различия между штаммами, заражающих отдельных членов семьи произошло после первичной инфекции. Такое генетическое разнообразие можно наблюдать среди H. Pylori
генов вирулентности; CaGa
, Вака
и ICEA
.
A вакуолизирующий цитотоксин, что повреждает эпителиальные клетки кодируетс Вака
гена [8, 9], который содержит по меньшей мере две части переменных [10] , Vacas
область (которая кодирует сигнальный пептид) существует как S1 или S2 аллельных типов, среди штаммов s1 типа, подтипы S1a, s1b и S1C были идентифицированы [11]. М (средний) регион происходит them1 или м2 типа аллельного, в том числе типа м2, два подтипа были идентифицированы, обозначены M2a и M2B. В общем случае, тип S1 m1 и типа штаммов S1 м2 производят высокие и умеренные уровни токсина, соответственно, в то время как s2 m2 штаммы проявляют мало или novacuolating активность токсина [10].
Ген ICEA
, кодирование для мнимого ограничения фермента, который, как представляется, индуцированное при H. Pylori
встречает эпителиальные клетки показывает аллельных в соответствии с точечной мутацией, в результате чего два аллельных типов, то iceA1
и iceA2
[6]. Изучение H. Pylori
инфекции у пациентов, подвергшихся верхних отделов желудочно-эндоскопии в Иордании сообщили о высокой распространенности [12], и подтвердил, что его присутствие было в значительной степени связано с гастритом и язвенной болезни. Текущие отчеты исследования впервые в Иордании H. Pylori
генотипы, выявленные в биоптатах желудка.
Методы
Пациенты
В общей сложности 250 последовательных пациентов, которые посетили короля Абдаллы больнице, и принцесса Басма Больница в период с июля 2003 года по май 2004 года для эндоскопии были включены в исследование. Эти два учебных больницы связаны с Иорданским университетом науки и техники, где проводилось исследование. Биоптаты были взяты из антрума. Исследование было одобрено комитетом по этике Университета путем. Каждый пациент подписал письменное информированное согласие до сбора образцов, и все клинические образцы были испытаны Undercode
Данные изображения Информация, представленная в отчетах патологии или файлов пациентов регистрировали для каждого пациента, который включал:. Номер больницы пациента , возраст, пол, история, клинический диагноз на основании гистологического исследования, эндоскопии и предыдущего лечения (например, анти-H. пилори
, три имели ингибиторы протонной помпы или антациды). Симптомы, о которых сообщают у больных, перенесших верхних отделов желудочно-эндоскопия были боли в животе, боль в эпигастрии, рвота или изжога.
Гистологического исследования
Гистологическое исследование было проведено на 151 (60,4%) антральных биопсии. Пять образцов из антрального слизистой оболочки были взяты со средними щипцами. Два образца были помещены в парафин и парафиновые срезы окрашивали с помощью гематоксилин-эозином и методы Гимза. Слизистая образцы оценивались гистологически в соответствии с классификацией Sydney. Кодовые слайды исследуют под микроскопом одним патологоанатомом с использованием высокой мощности (увеличение, × 400), а также были рассмотрены по меньшей мере, пять полей высокой мощности.
ПЦР на основе генотипирование трех генов вирулентности
протестировали все 250 биопсий с помощью ПЦР, хранили при -80 ° с в 70% этаноле в пробирки Эппендорфа до обработки. Эти биопсий были включены 151 биопсий, которые были проверены на гистологию.
Образцы биопсии гомогенизировали с помощью стерильного микро пестиком и ДНК экстрагировали с использованием (, Madison, WI, USA Promega), следуя инструкциям производителя набора для очистки ДНК Wizard геномная для очистки ДНК из тканей животных. Наличие хеликобактерной
была обнаружена отдельными ДЗП, направленных на CaGa
, Вака
s и м регионы и ICEA
генотипов были определены отдельным iceA1
- и iceA2 <бр> -специфические ДЗП, как описано ранее [13, 14]. Пять видов специфичные наборы праймеров (альфа-ДНК, Монреаль, Канада) использовали для амплификации высоко консервативные области в пределах указанных генов.
Статистический анализ
ассоциации между гистологии и результатами ПЦР, а также связь между генотипами была проанализирована с использованием точные и хи-квадрат тесты статистический пакет Фишера для социальных наук (SPSS Inc. Чикаго, Иллинойс США). Разница в среднем возрасте между мужчинами и женщинами была рассчитана путем проб независимость Т-тест.

Результаты Диагноз антихеликобактерной
была основана на гистологию, и ПЦР-метод.
Гистологических
Гистологическое исследование 151 биопсий показали, что 117 (77,5%) пациентов были положительными на H. Pylori
, поэтому на самом деле были заражены, и 34 (22,5%) были отрицательными.
факторов вирулентности
присутствие CaGa
, Вака
s и м областей и iceA1
- и iceA2
гены были исследованы во всех 250 биопсий. Биопсии, которые были ПЦР-положительными для одного или нескольких генов, были 110 (44%), и 140 (56%) были отрицательными для всех генов
мужчины:. Женский отношение популяции пациентов было 58/110 (52,7 %) мужчин: 52/110 (47,3%) женщин; (Средний возраст 42,03 + 15,135 лет, диапазон, 17 - 67 лет)
антихеликобактерную генотипы
Результаты генотипирования в 110 биопсий, представлены в таблице 1.Table 1 Распространенность хеликобактерной обнаруженным
генотипы. в 110 биопсий
генотипа

Распространенность (%)

Вака
s1
34 (45,3)
Вака
s2
41 (54,7)
Вака
m1
23 (48,9)
Вака
m2
24 (51,1)
Вака
s1m1
12 (46,2 )
Вака
s2m2
12 (46,2)
Вака
s1m2
2 (7.7)
Вака
s2m1
0 (0.0)
CaGa

29 (26,4)
iceA1

0 (0.0)
iceA2

81 (73,6)
Вака генотипы
размеры усиленные продукты для Вака
s1 и s2
Вака являются 259 б.п. и 286 б.п. соответственно. Интенсивность продуктов колебалась от образцов. Вака
s область амплифицировали в 75/110 (68,2%) биопсий. Вариант S1 был обнаружен в 34/75 (45,3%), или 34/110 (30,9%), по сравнению с вариантом, s2, который был обнаружен в 41/75 (54,7%), или 41/110 (37,3%) из биопсии. В Вака
м область была обнаружена в 47/110 (42,7%) биопсий. Вариант м1 был обнаружен в 23/47 (48,9%) или 23/110 (20,9%), по сравнению с вариантом м2 обнаруженного в 24/47 (51%) или 24/110 (21,8%).
Комбинация из Вака в
сек, и м регионах был обнаружен в 26/110 (23,6%) биопсий. Оба Вака
s1m1 и Вака
s2m2 были обнаружены примерно в равных количествах в 12/26 (46,2%), о Вака
см генотипа или 12/110 (10,9%), в то время как Вака
s1m2 был обнаружен только у 2/26 (7,7%) из Вака
см генотипа, или 2/110 (1,8%). Ни одна из биопсий не показала Вака
s2m1 генотип или нескольких генотипов.
CaGa генотип
от размера CaGa
амплифицированный продукт 349 п.н.. В CaGa
генотип был обнаружен у 29/110 (26,4%), и 81 (73,6%) были отрицательными.
Ассоциации между генотипами CaGa и vacAs1
The CaGa
генотип был обнаружен в 8 /17 (47,1%) из
Вака в s1 генотипа, по сравнению с только 2/20 (10%) из Вака
s2 генотипа.
ICEA генотипа
ни один из 110 биопсий не показала ICEA
1 генотип, в то время как 81 (73,6%) показали iceA2
генотипа. IceA2
амплификации дали оба 229 п.н. и 334 п.н. фрагментов, эта разница в размере фрагментов обусловлено наличием 105 п.о. - кадре ампликона, присутствующего в фрагмента 334 п.н., который отсутствует в фрагмента 229 п.н. [ ,,,0],15].
ассоциации между генотипом и пола
Хотя некоторые генотипы были обнаружены более одного пола, чем другие, их присутствие не было в значительной степени связано с возрастом, или пола пациента. Генотипы, которые были обнаружены более чем у самцов самки были Вака
s1 9/17 (53%), CagA
16/29 (55,2%), iceA2
45/81 (55,5%), Вака
s1m1 7/12 (58,3%), и объединенные Вака
s1 CaGa
генотипы 6/8 (75%). Генотипы, которые были обнаружены более у самок были Вака
s2 11/19 (65%), Вака
м2 15/20 (75%), Вака
s2m2 8/11 (72,7%), и объединенной Вака
s2 CaGa
генотипы 2/2 (100%). В Вака
m1, и Вака
s1m2 генотипы были обнаружены примерно равное количество представителей обоих полов
Статистический анализ
в целом положительные результаты ПЦР были высоко связаны (P &
л; 0,02). С результаты гистологии. Анализ данных показал статистически значимую связь между одновременного обнаружения как CaGa
и Вака
s1 генотипов (P = 0,026
), комбинация обоих Вака
S1, а Вака
m1 генотипы (P &
л; 0,0001), а также сочетание обоих Вака
S2, и Вака
м2 генотипов (P &
л; 0,0001). С другой стороны, не было обнаружено никакой связи между обнаружением обоих Вака
s2 и CaGa
генотипов (P
= 0,102), обнаружение более чем одного генотипа с любого возраста или пола (P
> 0,05), сочетание как Вака
S1, а Вака
m2 генотипы (P &
GТ; 0,05), а также сочетание как Вака
s2 и в Вака
m1 генотипы (P &
GТ; 0,05).
Обсуждение
Настоящее исследование доклады об Вака
, CaGa
и ICEA
генотипов H. Pylori
которые были определены в желудочных биопсий. Хотя все штаммы несут копию гена Вака, либо с S1 или S2 сигнальных последовательностей, то Вака
s область амплифицировали в 75/110 (68,2%) биопсий. Аналогичные результаты были получены в других исследованиях, указывающих, что могут существовать дополнительные подсемейства с и м генотипами рядом с известными из них [16].
Преобладающий генотип в 110 биопсий, которые были положительными в отношении H. Pylori изображения с помощью ПЦР, был iceA2
(73,6%), за которым следуют Vacas
генотипа (68,2%); 34 (45,3%) из них были
в Вака s1 аллель, и 41 (54,7%) были
в Вака s2 аллель, в то время как CaGa
генотип амплифицировали только в 29/110 (26,4%) из биопсии. Наши результаты согласуются с результатами других исследований проводились на израильских детей [13], а также египетских пациентов [15], где CaGa
генотип сообщили в 28% и 36% соответственно. Сходство генотипов, выявленных в трех исследованиях можно объяснить первичным географическим влиянием важной в адаптации организма к окружающей среде и климатическим условиям [13], несмотря на очевидные различия хозяев в стиле жизни в двух соседних странах. Близкое сходство штаммов в соседних странах также сообщили в Бангладеш и Калькутта, Индия [3, 17], что вполне вероятно, учитывая тесную близость двух стран, подобных физиологических условиях и стилей жизни хозяина.
более высокая распространенность (67% или более) CaGa
генотипа в хеликобактерной
сообщили в Европе, Центральной и Южной Америки и Восточной Азии [15]. В Вака
s2 аллеля была обнаружена менее чем на 30% в исследуемой популяции в большинстве из этих стран. Показатели распространенности этого генотипа аналогично текущего исследования (54,7%) были зарегистрированы в Египте (50%) [15], в то время как более высокие показатели (65%) были зарегистрированы в израильском исследовании [11]. Исследование, проведенное в Кувейте сообщил, что Вака
S1 и S2 типа были обнаружены в приблизительно равное количество в биопсий, полученных от больных Ближневосточном происхождения, в то время как африканские арабы были преимущественно заражаются типа s2 [18]. Изучение генотипов в четырех разных странах сообщили, что в CaGa
и Вака
s1ml iceA1
генотипов преобладали в Японии и Корее [14], а CaGa
, Вака
s1m1 , iceA2
генотипы были определены часто в Соединенных Штатах, в то время как CaGa
, Вака
s1m1, iceA2
генотипы преобладают в Колумбии. То же исследование показало высокую распространенность Вака
s1, чем
в Вака s2 генотипа и высокой распространенность CagA
генотипа; Тем не менее, распространенность iceA1
и iceA2
генотипы варьировалась между этими странами. Исследование, проведенное в Англии сообщил, что Вака
s1m1 генотип оказался менее распространены в Англии [19], в то время как преобладание iceA1
аллели, CaGa
, и присутствие Вака
m1 наблюдались аллели. Турецкие штаммы исследовали преимущественно обладали CaGa
, Вака
s1m1 или Вака
м2 генотипов, которые были типичными генотипы штаммов из западных стран [20]. Преобладание Вака
SL /м1 комбинации аллелей, и высокая распространенность CagA
гена (87%) были также зарегистрированы в H. штаммов Эстонии пилори
[21]. На основе
наличие комбинации из Вака
s и м аллели, то Вака
s1 аллель значительно связанные с Вака
m1 (P &
л; 0,0001) наблюдалось, и та же связь между в Вака
S2, и Вака
m2 (P &
л; 0,0001) аллели. Тем не менее, обнаружение обоих вача
S1 и вача
м2 аллелями был независимо друг от друга (P
> 0,05). В Вака
s1m2 генотип был обнаружен только в 2/26 (7,7%) из Вака
комбинации см. Кроме того, не было никаких существенных связь между Вака
s2 и Вака
m1, а это означает, что обнаружение каждого аллеля не зависит от другого (P
> 0,05). Это открытие может объяснить отсутствие комбинированного s2 /м1 генотипа из изолятов в исследовании, которое было сообщалось ранее [22, 23]. Тем не менее, первый случай Вака
s2m1 H. Pylori
изолята сообщили в двенадцатиперстную пациента язва из Южной Африки [24].
Значительный связь между
в Вака s1 аллеля и CaGa <бр> генотип (47,1%) в нашем исследовании было также сообщено в 50% израильских и египетских изолятов [13, 14]. Объединение более 85% изолятов было сообщено в других странах [15, 22], подтверждая, что два маркера, тесно связаны между собой. Наше исследование не показало значимой ассоциации в обнаружении двух генотипов в том же изолята, такие как CagA
с ICEA
2, Вака
м2 аллель с ICEA
2 генотипа и Вака
S2, м2 аллели с ICEA страница 2, указывающего, что обнаружение одного гена не зависит от другого. Кроме того, обнаружение комбинированного Вака
s1 m1 и ICEA
2 генотипы в несколько биопсий было незначительным (P
> 0,05), что указывает на обнаружение ICEA
2 не зависит от Вака
генотипов. Те же результаты были получены в предыдущем исследовании [22]. Ни один из штаммов не имели множественные VAC
A генотипов, о которых сообщалось в других странах, таких как северная часть Южной Америки [15].
Самки чаще переноске Вака
s2, и Вака
м2 генотипов (65%, и 75%, соответственно) по сравнению с (42%, и 25%) у мужчин. IceA2
(55,5%), CagA
(55,2%), и Вака
s1 (53%) генотипы были обнаружены более у мужчин, чем у женщин. Пол пациента и выявления определенных генотипов или комбинации генотипов не были связаны. Кроме того, H. Pylori
генотипы (P &
GТ; 0,05)., А также обнаружение более чем одного генотипа не имели значимую связь с любой из возраста или пола пациента
Общие положительные результаты ПЦР высоко связан (P &
л; 0,02) с результатами гистологии. Различия в гистологии, и результаты ПЦР может быть связано с неоднородным распределением H. Pylori
в желудке. Кроме того, ложные недостатки могут быть проблемы в генотипирования из биопсий, так как были найдены некоторые биопсию, чтобы содержать соединения, ингибирующие ПЦР [25]. Кроме того, тестирование более нескольких биопсий гистологически по сравнению с одним методом ПЦР увеличило возможность обнаружения бактерии, и объясняет более положительные результаты, полученные гистологии (77,5%), по сравнению с ПЦР (44%). Лечение больных с ингибиторами протонного насоса, антациды, или анти-H. Pylori
терапия может бы привести к отрицательным результатам в ходе испытаний, проведенных в этих больных [26].
Заключение
иорданские штаммы исследовали преимущественно обладали iceA2
аллеля,
в Вака s2 аллель обнаружено более чем Вака
s1 аллель, в то время как CaGa
генотипа была низкой. Обнаружение некоторых генотипов могут быть связаны друг с другом. Результаты показывают географическую природу генетического разнообразия антихеликобактерной
, поскольку выявленные генотипы сходны с таковыми в соседних странах.
Данное исследование представляет собой базовую основу антихеликобактерной
генотипов, определенных в желудочные биопсии, выступающей в качестве мощного инструмента для эпидемиологического перспективных исследований, чтобы лучше понять генетическое разнообразие этого возбудителя.
Заявления
Благодарности
авторы выражают благодарность гастроэнтерологи и медсестер в Департаменте эндоскопии на короля Абдаллы и принцесса Басма больницы, которые помогли в сборе образца. Исследование было поддержано грантом/04 от декана по исследованиям Иорданского университета науки &Amp; Технологии.
Конкурирующие интересы
автор (ы) заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

• Лечение злокачественной желудка с выпускным обструкции стенты: оценка представленных переменных для клинич…
• Эффективность предоперационной ПЭТ /КТ для прогнозирования излечимости в хирургии для местно-распространен…