pylorigenotypes Helicobacter identificados em amostras de biópsia gástrica de patients

jordaniano Helicobacter pylori
genótipos identificados em amostras de biópsia gástrica de pacientes jordanianos da arte abstracta
Fundo
A diversidade genética de Helicobacter pylori
pode ser analisada em dois diferentes níveis: a variação genômica entre as linhagens provenientes de diferentes indivíduos, ea variação das populações bacterianas dentro de um host individual. Nós relatamos pela primeira vez que o H. pylori
genótipos em pacientes jordanianas com doenças gastrointestinais.
Métodos
A endoscopia foi realizada em 250 pacientes com sintomas de doenças gastrointestinais. Várias amostras de biópsias gástricas foram tomadas a partir do antro. Todas as biópsias foram testadas por PCR para o H. pylori
genes de virulência vacA
, cagA
e iceA
, e 151 foram testados pela histologia.
Resultados
As biópsias positivas por H. pylori
por PCR foram 110/250 (44%) e pela histologia 117/151 (77,5%), e estes resultados foram altamente associados (P Art < 0,02). As análises de genes de virulência revelou que iceA2
(73,6%) foi o genótipo predominante, o vacA
s2 alelo foi mais frequentemente identificadas que a vacA
s1 alelo, enquanto o cagA
genótipo foi baixa (26,4 %). A presença de certos genótipos podem ser associados uns aos outros, mas a presença de certos genótipos não foi significativamente associado com a idade ou sexo do paciente.

Conclusão Os resultados ilustram a natureza geográfica da diversidade genética de H. pylori
, como os genótipos identificados são semelhantes aos relatados em países vizinhos. Este estudo oferece dados de base do H. pylori
genótipos identificados em amostras de biópsia gástrica de Jordan, servindo como uma ferramenta epidemiológica poderoso para investigações prospectivas para melhor compreender a diversidade genética deste patógeno.
Fundo
Helicobacter pylori
é um patógeno gástrico que cronicamente infecta mais de metade de todas as pessoas no mundo. Nos países em desenvolvimento, 70-90% da população é portadora de H. pylori
; quase todas estas adquirem a infecção antes da idade de 10 anos [1]. Nos países desenvolvidos, a prevalência é mais baixa, variando de 25 a 50% (8) [1], devido às condições socioeconómicos melhorado ao longo das últimas décadas [2]. Portanto H. pylori
infecção nos países em desenvolvimento pode contribuir para a desnutrição e infância aumentam o risco ou gravidade da infecção por agentes patogénicos gastrointestinais, tais como Vibrio cholerae
[3]. A maioria dos indivíduos infectados são assintomáticos ou têm gastrite crónica [1, 4]. As diferenças nos resultados da doença pode ser o resultado de um número de factores, que incluem; fatores do hospedeiro, fatores ambientais, e as diferenças na prevalência ou expressão de fatores de virulência bacteriana [4, 5]. A diversidade genética de H. pylori
pode ser analisado em dois níveis diferentes: a variação genômica entre as linhagens provenientes de diferentes indivíduos, ea variação das populações bacterianas dentro de um host individual [6]. Ao utilizar amplificado aleatoriamente ADN polimórfico-PCR e identificação de DNA, tem sido demonstrado que estirpes de doentes infectados não relacionados tinham cópias únicas dos dedos, enquanto que as estirpes isoladas a partir de membros da família teve muito semelhantes, embora não idênticas padrões [7]. Estes resultados implicaram que as diferenças observadas entre as estirpes que infectam os membros da família ocorreu após a infecção primária. Tal diversidade genética pode ser observada entre H. pylori
genes de virulência; cagA
, vacA
e iceA
.
Uma citotoxina vacuolar que fere células epiteliais é codificada pelo gene vacA
[8, 9], que contém pelo menos duas partes variáveis ​​[10] . As vacas e região (que codifica o péptido de sinal) existe como formas alélicas S1 ou S2, entre as estirpes do tipo S1, subtipos S1A, S1B e S1C foram identificados [11]. O m (médio) região ocorre como them1 ou do tipo alélica m2, entre tipo m2, dois subtipos foram identificados, designados M2A e M2B. Em geral, m1 tipo S1 e estirpes tipo s1 m2 produzir níveis elevados e moderados de toxina, respectivamente, enquanto as estirpes m2 s2 mostrar a actividade da toxina pouco ou novacuolating [10].
O gene iceA
, codificação para uma restrição putativa enzima, o que parece ser induzida quando H. pylori
encontra células epiteliais mostra a variação alélica de acordo com a mutação pontual, resultando em dois tipos alélicos, o iceA1
e iceA2
[6]. Um estudo da infecção por H. pylori
em pacientes submetidos a uma endoscopia digestiva alta na Jordânia relatou alta prevalência [12], e confirmou que sua presença foi significativamente associada com gastrite e úlcera péptica. O presente estudo relata pela primeira vez na Jordânia a H. pylori
genótipos identificados em amostras de biópsia gástrica.
Métodos
Pacientes
Um total de 250 pacientes consecutivos que visitou o rei Abdullah Hospital e princesa Basma Hospital entre julho de 2003 e maio de 2004, por endoscopia digestiva alta foram incluídos no estudo. Estes dois hospitais de ensino são filiados com a Universidade de Jordan de Ciência e Tecnologia, onde o estudo foi realizado. amostras de biopsia foram obtidos a partir do antro. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade do. Cada paciente assinou um consentimento informado por escrito antes da coleta da amostra, e todas as amostras clínicas foram testados Undercode
Dados
As informações fornecidas nos relatórios de patologia ou arquivos dos pacientes foi registrado para cada paciente, que incluiu:. Número hospitalar do paciente , idade, sexo, história, diagnóstico clínico baseado na histologia, endoscopia, e tratamento anterior (por exemplo, anti-H. pylori
, três tiveram os inibidores da bomba de protões ou antiácidos). Os sintomas relatados pelos pacientes que foram submetidos a endoscopia digestiva alta foram: dor abdominal, dor epigástrica, vómitos, ou azia.
Exames histológicos
O exame histológico foi realizado em 151 (60,4%) amostras de biópsia antrais. Cinco espécimes da mucosa do antro foram tiradas com uma pinça de médio porte. Duas amostras foram embebidas em parafina e as secções de parafina foram coradas utilizando os métodos de Giemsa hematoxilina-eosina e. Os espécimes foram avaliados histologicamente da mucosa de acordo com a classificação de Sydney. lâminas codificadas foram examinadas microscopicamente por um único patologista usando uma potência alta (ampliação, × 400), e pelo menos cinco campos de alta potência foram examinados. genotipagem baseada em PCR
de três genes de virulência
Todas as biópsias 250 testada por PCR foram armazenados a -80 ° C em 70% de etanol em tubos eppendorf até ser transformado. Essas biópsias incluídos os 151 biópsias foram testadas por que histologia.
As amostras de biopsia foram homogeneizados com um micro pilão estéril, e o ADN foi extraído utilizando Assistente ADN genómico (kit de purificação, Madison, WI, EUA Promega), seguindo as instruções do fabricante para a purificação de ADN a partir de tecido animal. A presença de H. pylori
foi detectada por PCR separadas destinadas à cagA
, foram determinados vacA
s e m regiões eo iceA
genótipos por iceA1
separado - e iceA2
PCRs espec�icos como descrito anteriormente [13, 14]. Cinco espécies específicas conjuntos de primers (DNA alfa, Montreal, Canadá) foram utilizados para amplificar regiões altamente conservadas dentro dos genes indicados.
Análise estatística
A associação entre a histologia e resultados da PCR, ea associação entre genótipos foram analisados ​​utilizando pacote estatístico exato e os testes do qui-quadrado de Fisher para as ciências sociais (SPSS Inc. Chicago, Illinois EUA). A diferença na média de idade entre homens e mulheres foi calculada pela amostra de independência t-teste.
Resultados
diagnóstico de H. pylori
foi baseado na histologia e PCR método.
Achados histológicos
o exame histológico dos 151 biópsias revelou que 117 (77,5%) pacientes foram positivos para H. pylori
, portanto, foram realmente infectado, e 34 (22,5%) foram negativos.
fatores de virulência
a presença do cagA
, vacA
s e m regiões ea iceA1
- e iceA2
genes foram investigados em todos os 250 biópsias. As biópsias que foram PCR positivos para um ou mais dos genes foram 110 (44%), e 140 (56%) foram negativos para todos os genes
O macho:. Fêmea proporção da população paciente foi 58/110 (52,7 %) homens: 52/110 (47,3%) do sexo feminino; (Idade média de 42.03 + 15,135 anos; intervalo, 17 - 67 anos),
H. pylori genótipos
Os resultados da genotipagem em 110 biópsias são apresentados na Tabela 1 1.Table Prevalência de Helicobacter pylori
genótipos detectado. em 110 biópsias
genótipo
Prevalência (%)
vacA
s1
34 (45,3)
vacA
s2
41 (54,7)
vacA
m1
23 (48,9)
vacA
m2
24 (51,1)
vacA
s1m1
12 (46,2 )
vacA
s2m2
12 (46,2)
vacA
s1m2 Página 2 (7,7)
vacA
s2m1
0 (0,0)
cagA
29 (26,4)
iceA1
0 (0,0)
iceA2
81 genótipos (73,6)
vacA
os tamanhos do produtos amplificados para vacA
S1 e vacA
s2 são 259 pb e 286 pb, respectivamente. As intensidades dos produtos variou entre amostras. região
s vacA foi amplificado em 75/110 (68,2%) biópsias. A variante de S1 foi detectado em 34/75 (45,3%), ou 34/110 (30,9%), em comparação com a variante S2, o qual foi detectado em 41/75 (54,7%), ou 41/110 (37,3%) de as biópsias. O vacA região dos m foi detectada em 47/110 (42,7%) biópsias. A variante M1 foi detectado em 23/47 (48,9%) ou 23/110 (20,9%), em comparação com a variante m2 detectado em 24/47 (51%), ou 24/110 (21,8%). Uma combinação
do vacA
s, e m regiões foi detectada em 26/110 (23,6%) das biópsias. Ambos vacA
s1m1 e vacA
s2m2 foram detectados em quantidades aproximadamente iguais em 12/26 (46,2%), do vacA
genótipo sm, ou 12/110 (10,9%), enquanto vacA
s1m2 foi detectada em apenas 2/26 (7,7%) do genótipo vacA
SM, ou 2/110 (1,8%). Nenhuma das biópsias mostraram a vacA
genótipo s2m1 ou vários genótipos.
CagA genótipo
O tamanho do cagA
produto amplificado foi 349 bp. O cagA
genótipo foi detectada em 29/110 (26,4%), e 81 (73,6%) foram negativos.
A associação entre os genótipos cagA e vacAs1
O cagA
genótipo foi detectada em 8 /17 (47,1%) do vacA
S1 genótipo, em comparação com apenas 2/20 (10%) do
S2 genótipo vacA.
genótipo iceA
Nenhuma das biópsias 110 mostrou o iceA
1 genótipo, enquanto 81 (73,6%) mostrou a iceA2
genótipo. O iceA2
amplificação produziu dois fragmentos de 229 pb e 334 pb, esta diferença no tamanho dos fragmentos é devido à presença de um 105 bp de - amplicão quadro presente no fragmento de 334 pb que está ausente no fragmento de 229 pb [ ,,,0],15].
a associação entre os genótipos e sexo
Embora certos genótipos foram detectados mais em um sexo do que o outro, a sua presença não foi significativamente associados à idade ou sexo do paciente. Os genótipos que foram detectados mais nos machos do que fêmeas foram o vacA
s1 9/17 (53%), cagA
16/29 (55,2%), iceA2
45/81 (55,5%), vacA
s1m1 7/12 (58,3%), eo vacA combinada
s1 cagA
genótipos 6/8 (75%). Os genótipos que foram detectados mais nas mulheres foram o
s2 11/19 (65%) vacA, vacA
m2 15/20 (75%), vacA
s2m2 8/11 (72,7%), e vaca combinada
s2 cagA
genótipos 2/2 (100%). O vacA
m1, e vacA
genótipos s1m2 foram detectados valor em aproximadamente igual em ambos os sexos análise
Estatística
Os resultados globais de PCR positivos foram altamente associados (P Art < 0,02). Com resultados da histologia. A análise dos dados mostrou uma associação significativa entre a detecção simultânea de ambos cagA Comprar e vacA
s1 genótipos (P
= 0,026), a combinação de ambos os vacA
S1 e do vacA
m1 genótipos (P
< 0,0001), e a combinação de ambos a vacA
S2 e o vacA
genótipos m2 (P
< 0,0001). Por outro lado, não foi observada associação entre a detecção de ambos os vacA
s2 e cagA
genótipos (P
= 0,102), a detecção de mais de um genótipo com qualquer idade ou sexo (P
> 0,05), a combinação de ambos a vacA
S1 e o vacA
genótipos m2 (P
> 0,05), e a combinação de ambos a vacA
S2 e o vacA
genótipos m1 (P Restaurant > 0,05).
Discussão
o presente estudo relata no vacA
, cagA
e iceA
genótipos de H. pylori
que foram identificados em biópsias gástricas. Embora todas as cepas carregam uma cópia do gene vacA, quer com o S1 ou S2 sequências de sinal, região
do vacA foi amplificado em 75/110 (68,2%) biópsias. Resultados semelhantes foram relatados por outros estudos que indicam que podem existir subfamílias adicionais de S e M genótipos ao lado os conhecidos [16].
O genótipo predominante nos 110 biópsias que foram positivas para H. pylori
por PCR, foi o iceA2
(73,6%), seguido por as vacas
genótipo (68,2%); 34 (45,3%) destes eram do vacA
s1 alelo, e 41 (54,7%) foram os vacA
s2 alelo, enquanto o cagA
genótipo foi amplificado apenas em 29/110 (26,4%) de as biópsias. Nossos resultados estão de acordo com outros estudos realizados em crianças israelenses [13], e pacientes egípcios [15], onde o cagA
genótipo foi relatado em 28% e 36%, respectivamente. A semelhança entre os genótipos identificados nos três estudos poderia ser explicado por uma influência geográfica primária importante na adaptação do organismo ao meio ambiente e condições climáticas [13], apesar das diferenças óbvias de acolhimento no estilo de vida em dois países vizinhos. A estreita semelhança das estirpes em países vizinhos também foi relatada em Bangladesh e Calcutá, na Índia [3, 17], que é bastante provável, considerando a proximidade dos dois países, os ambientes fisiológicos semelhantes, e estilos de vida do hospedeiro a maior prevalência (67% ou mais) do cagA
genótipo em H. pylori
foi relatado na Europa, América Central e do Sul, e na Ásia Oriental [15]. O vacA
alelo s2 foi detectada em menos de 30% na população estudada, na maioria desses países. As taxas de prevalência deste genótipo semelhante ao presente estudo (54,7%) foram relatados no Egito (50%) [15], enquanto as taxas mais elevadas (65%) foram relatados no estudo de Israel [11]. Um estudo realizado no Kuwait informou que vacA
tipos S1 e S2 foram detectados em aproximadamente números iguais em biópsias obtidas de pacientes de origem do Oriente Médio, enquanto os árabes africanos eram predominantemente infectado com o tipo s2 [18]. Um estudo de genótipos em quatro países diferentes informou que o cagA
e vacA
iceA1 s1ml
genótipos foram predominantes no Japão e na Coreia [14], eo cagA
, vacA
s1m1 , iceA2
genótipos foram frequentemente identificado nos Estados Unidos, enquanto o cagA
, vacA
s1m1, iceA2
genótipos foram predominantes na Colômbia. O mesmo estudo relatou maior prevalência do vacA
s1 do que o vacA
s2 genótipo, e uma alta prevalência do cagA
genótipo; no entanto, a prevalência da iceA1 Comprar e iceA2
genótipos variaram entre os diversos países. Um estudo realizado na Inglaterra informou que o vacA
genótipo s1m1 foi encontrado para ser menos comum na Inglaterra [19], enquanto que a predominância de iceA1
alelos, cagA
, ea presença de vacA
m1 foram observadas alelos. cepas turcos examinados predominantemente possuía a
cagA, vacA
s1m1 ou vacA
m2 genótipos, que foram os genótipos típicos em cepas de países ocidentais [20]. A predominância do vacA
combinações alélicas sl /m1, e uma alta prevalência do cagA
gene (87%) também foram relatados na Estónia H. pylori
estirpes [21]. Com base em
a presença de uma combinação do vacA
s, e m alelos, o vacA
alelo s1 foi significativamente associada com vacA
m1 (P Art < 0,0001), ea mesma associação foi observada entre vaca
s2 e (P Art < 0,0001) do vacA
m2 alelos. No entanto, a detecção de ambos
vacA e vacA
alelos s1 m2 foi independentes uns dos outros (P
> 0,05). O vacA
genótipo s1m2 foi detectada apenas em 2/26 (7,7%) do vacA
combinação sm. Além disso, não houve associação significativa entre a vacA
S2 e vacA
M1, o que significa que a detecção de cada alelo era independente do outro (P
> 0,05). Este resultado pode explicar a ausência do genótipo M1 /​​s2 combinado dos isolados no estudo que foi relatado anteriormente [22, 23]. No entanto, o primeiro caso de vacA
s2m1 H. pylori
isolado foi relatado em um paciente de úlcera duodenal da África do Sul [24].
A associação significativa entre o vacA
s1 alelo e cagA
genótipo (47,1%) em nosso estudo também foi relatado em 50% dos isolados de Israel e do Egito [13, 14]. Uma associação de mais do que 85% dos isolados foi relatada em outros países [15, 22], confirmando que os dois marcadores estão intimamente relacionados. Nosso estudo não mostrou associação significativa na detecção de dois genótipos no mesmo isolado, como o cagA
com o iceA Página 2, o vacA
alelo m2 com o genótipo iceA Página 2, e do vacA
S2, alelos m2 com as iceA
2 indicando que a detecção de um gene era independente do outro. Além disso, a detecção do vacA
M1 S1 combinada, e iceA
2 genótipos em algumas biópsias foi insignificante (P
> 0,05), indicando que a detecção de iceA
2 era independente da vacA
genótipos. Os mesmos resultados foram relatados por um estudo anterior [22]. Nenhuma das linhagens teve múltiplos vac of a genótipos, que foram relatados em outros países, como o norte da América do Sul [15].
As fêmeas foram mais frequentemente levando o vacA
s2, eo vacA
m2 genótipos (65%, e 75%, respectivamente) em comparação com (42%, e 25%) em homens. O
iceA2 (55,5%), cagA
(55,2%), e vacA
S1 (53%) genótipos foram detectados mais em homens do que mulheres. O sexo do paciente ea detecção de certos genótipos ou combinação de genótipos não foram significativamente associados. Além disso, o H. pylori
genótipos (P Restaurant > 0,05)., E a detecção de mais de um genótipo não teve associação significativa com qualquer idade ou sexo do paciente
Os resultados globais de PCR positivos foram altamente associado (P Art < 0,02), com resultados de histologia. As diferenças na histologia, resultados de PCR pode ser devido à distribuição desigual da H. pylori no estômago
. Além disso, falsos negativos pode ser um problema na genotipagem de biópsias uma vez que algumas biópsias foram encontrados para conter compostos que inibem a PCR [25]. Além disso, o teste mais múltiplos biópsias por histologia em comparação com um aumento por PCR a possibilidade de encontrar a bactéria, e explica os resultados mais positivos obtidos por histologia (77,5%), em comparação com PCR (44%). Os tratamentos de pacientes com os inibidores da bomba de protões, antiácidos ou anti-H. terapia pylori
pode ter levado aos resultados negativos nos testes realizados nestes pacientes [26].
Conclusão
estirpes jordanianos examinados predominantemente possuía a iceA2
alelo, o vacA
s2 alelo foi detectado mais do que o vacA
alelo s1, enquanto o cagA
genótipo foi baixa. A detecção de certos genótipos podem ser associados uns aos outros. Os resultados ilustram a natureza geográfica da diversidade genética de H. pylori
, como os genótipos identificados são semelhantes aos relatados em países vizinhos.
Este estudo fornece uma estrutura de base de H. pylori
genótipos identificados em amostras de biópsia gástrica, servindo como uma ferramenta epidemiológica poderoso para investigações prospectivas para compreender melhor a diversidade genética deste patógeno.
declarações
Agradecimentos
os autores agradecem os gastroenterologistas e enfermeiras do Departamento de Endoscopia do king Abdullah e hospitais princesa Basma, que ajudaram na coleta da amostra. O estudo foi apoiado pela concessão/04 da Reitoria de Pesquisa da Universidade Jordan of Science & Tecnologia.
Competindo interesses
O autor (s) declaram que não têm interesses conflitantes.

• O tratamento da obstrução da saída gástrica maligna com stents: Uma avaliação das variáveis ​​relatados para o resultado clínico
• A eficácia do pré-operatório PET /CT para a previsão de curabilidade em cirurgia para o carcinoma gástrico localmente avançado