pylorigenotypes Helicobacter identificados en muestras de biopsias gástricas de pacientes jordanos

Helicobacter pylori
genotipos identificados en muestras de biopsias gástricas de pacientes jordano Resumen Antecedentes

La diversidad genética de Helicobacter pylori
puede analizarse en dos niveles diferentes: la variación genómica entre cepas procedentes de diferentes individuos, y la variación en las poblaciones de bacterias dentro de un host individual. Nos informó por primera vez que el H. pylori en pacientes con genotipos
jordanos con enfermedades gastrointestinales.
Métodos
La endoscopia superior se realizó en 250 pacientes con síntomas de enfermedades gastrointestinales. muestras de biopsia gástrica múltiples se tomaron de la antro. Todas las biopsias fueron probados por PCR para la H. pylori
genes de virulencia vacA
, cagA
, y iceA
, y 151 fueron probados por la histología.
Resultados
Las biopsias positivas para H. pylori fotos: por PCR fueron 110/250 (44%), y por la histología 117/151 (77,5%), y estos resultados fueron altamente asociados (P Hotel < 0,02). Los análisis de los genes de virulencia revelaron que iceA2 gratis (73,6%) fue el genotipo predominante, la vacA s2
alelo se identificó con más frecuencia que el vacA s1
alelo, mientras que el genotipo cagA
fue baja (26,4 %). La presencia de ciertos genotipos podría asociarse entre sí, pero la presencia de ciertos genotipos no se asoció significativamente con la edad o el sexo del paciente.
Conclusión
Los resultados ilustran la naturaleza geográfica de la diversidad genética de las H. pylori
, como los genotipos identificados son similares a los reportados en los países vecinos. Este estudio proporciona un conjunto de datos de referencia de H. pylori genotipos
identificados en muestras de biopsias gástricas de Jordan, que sirve como una herramienta epidemiológica de gran alcance para posibles investigaciones para comprender mejor la diversidad genética de este patógeno.
Antecedentes
Helicobacter pylori
es un patógeno que infecta crónicamente gástrica más de la mitad de todas las personas en todo el mundo. En los países en desarrollo, el 70-90% de la población es portadora de H. pylori
; casi todos ellos adquieren la infección antes de la edad de 10 años [1]. En los países desarrollados, la prevalencia es más baja, que van desde 25 a 50% (8) [1], debido a la mejora de las condiciones socioeconómicas en las últimas décadas [2]. Por lo tanto la infección por H. pylori
en los países en desarrollo puede contribuir a la desnutrición infantil y aumentar el riesgo o la gravedad de la infección por otros patógenos gastrointestinales tales como Vibrio cholerae
[3]. La mayoría de los individuos infectados son asintomáticos o tienen gastritis crónica [1, 4]. Las diferencias en la evolución de la enfermedad pueden ser el resultado de una serie de factores que incluyen; factores del huésped, factores ambientales, y las diferencias en la prevalencia o la expresión de factores de virulencia bacteriana [4, 5]. La diversidad genética de H. pylori
puede analizarse en dos niveles diferentes: la variación genómica entre cepas procedentes de diferentes individuos, y la variación en las poblaciones de bacterias dentro de un host individual [6]. Mediante el uso de amplificado al azar polimórficos de ADN-PCR y huella de ADN, se ha demostrado que las cepas de pacientes infectados no relacionados tenían impresiones únicas de los dedos, mientras que las cepas aisladas a partir de miembros de la familia tenían muy similar, aunque no idénticos patrones [7]. Estos resultados implican que las diferencias observadas entre las cepas que infectan a los miembros individuales de la familia se produjo después de la infección primaria. Tal diversidad genética se puede observar entre H. pylori
genes de virulencia; cagA
, vacA
, y iceA
.
una citotoxina vacuolating que daña a las células epiteliales está codificada por el gen vacA
[8, 9], que contiene al menos dos partes variables [10] . Las vacas
región (que codifica el péptido señal) existe como los tipos alélicos S1 o S2, entre las cepas de tipo s1, subtipos S1A, S1B, y s1c se han identificado [11]. La región (medio) m se produce como ellas1 o el tipo alélico m2, entre tipo m2, dos subtipos han sido identificados, M2A y M2B designado. En general, m1 tipo s1 y tipo cepas s1 m2 producen niveles altos y moderados de toxina, respectivamente, mientras que las cepas m2 s2 muestran poca o novacuolating actividad de la toxina [10].
La ICEA
gen, que codifica para una restricción putativo enzima, que parece ser inducido cuando H. pylori
encuentra con células epiteliales muestra la variación alélica de acuerdo con mutación puntual, lo que resulta en dos tipos alélicos, la iceA1
y iceA2
[6]. Un estudio de H. pylori
infección en los pacientes sometidos a una endoscopia digestiva alta en Jordania informó de alta prevalencia [12], y confirmó que su presencia se asoció significativamente con la gastritis y úlcera péptica. Los informes de los estudios actuales, por primera vez en Jordania el H. pylori
genotipos identificados en muestras de biopsias gástricas
. Métodos Pacientes

un total de 250 pacientes consecutivos que visitó el Hospital Rey Abdullah, y la princesa Basma , entre julio de 2003 y mayo de 2004, para la endoscopia superior se inscribieron en el estudio. Estos dos hospitales universitarios están afiliados a la Universidad de Jordania de Ciencia y Tecnología, donde se realizó el estudio. Las muestras de biopsia se tomaron del antro. El estudio fue aprobado por el Comité de Ética de la Universidad. Cada paciente firmó un consentimiento informado por escrito antes de la toma de la muestra, y todas las muestras clínicas fueron probados Undercode
Datos México La información proporcionada en los informes de patología o archivos de los pacientes se registró para cada paciente, lo que incluye:. Número de historia clínica del paciente , edad, sexo, antecedentes, diagnóstico clínico basado en la histología, la endoscopia y el tratamiento previo (por ejemplo, anti-H. pylori
, tres tenían inhibidores de la bomba de protones o antiácidos). Los síntomas reportados por los pacientes que se sometieron a una endoscopia gastrointestinal superior fueron dolor abdominal, dolor epigástrico, vómitos, o acidez.
Exámenes histológicos
El examen histológico se realizó en 151 (60,4%) muestras de biopsias antrales. Cinco muestras de la mucosa del antro fueron tomadas con pinzas de tamaño medio. Dos muestras se incluyeron en parafina y las secciones de parafina se tiñeron utilizando hematoxilina-eosina y Giemsa métodos. Las muestras de mucosa se evaluaron histológicamente según la clasificación de Sydney. portaobjetos codificados se examinaron microscópicamente por un solo patólogo utilizando una alta potencia (ampliación, × 400), y se examinaron al menos cinco campos de alta potencia. genotipado basado en la PCR Red de tres genes de virulencia
controlarán todas las 250 biopsias por PCR se almacenaron a -80 ° C en 70% de etanol en tubos eppendorf hasta su transformación. Estas biopsias incluidas las 151 biopsias que fueron probados por la histología.
Las muestras de biopsia se homogeneizaron con una mano de mortero micro estéril, y se extrajo el ADN utilizando el kit de purificación de ADN genómico Wizard (Promega, Madison, WI, EE.UU.), siguiendo las instrucciones del fabricante para la purificación de ADN a partir de tejido animal. La presencia de H. pylori
se detectó mediante PCR separadas destinadas a la cagA
, vacA
s y m regiones y la ICEA
genotipos se determinaron por separado iceA1 CD - y iceA2
PCR específicos de como se han descrito anteriormente [13, 14]. Cinco especies específicas de grupos de cebadores (ADN alfa, Montreal, Canadá) se utilizaron para amplificar regiones altamente conservadas dentro de los genes indicados.
El análisis estadístico
La asociación entre la histología y los resultados de la PCR, y la asociación entre los genotipos fueron analizados utilizando paquete estadístico exacto y pruebas de chi-cuadrado de Fisher para las ciencias sociales (SPSS Inc., Chicago, Illinois, EE.UU.). La diferencia en la edad media entre machos y hembras se calcula muestra la independencia t-test.
Resultados
Diagnóstico de H. pylori
se basó en histología y PCR método.
Los hallazgos histológicos
el examen histológico de las biopsias de 151 reveló que 117 (77,5%) pacientes fueron positivos para H. pylori
, por lo tanto, en realidad estaban infectadas, y 34 (22,5%) fueron negativos.
factores de virulencia
la presencia de la cagA
, vacA
s regiones y M y la iceA1
- y iceA2
genes fueron investigados en todas las 250 biopsias. Las biopsias positivas en la PCR para uno o más de los genes fueron 110 (44%), y 140 (56%) fueron negativos para todos los genes comentario El masculina:. Proporción femenina de la población de pacientes fue 58/110 (52,7 %) varones: 52/110 (47,3%) mujeres; (Edad media 42.03 + 15,135 años, rango 17 - 67 años)
H. pylori genotipos
Los resultados de genotipado en 110 biopsias se presentan en la Tabla 1 1.Table Prevalencia de Helicobacter pylori
genotipos detectados. en 110 biopsias
Genotipo
Prevalencia (%) guía empresas vacA s1

34 (45,3)
vacA s2 <
br> 41 (54,7)
vacA m1

23 (48,9)
vacA m2

24 (51,1)
vacA
s1m1 página 12 (46,2 )
vacA
s2m2 página 12 (46,2)
vacA
s1m2 que tenían página 2 (7.7)
vacA
s2m1
0 (0.0)
cagA
29 (26,4)
iceA1
0 (0.0)
iceA2
81 genotipos (73,6)
vacA Francia el tamaño de la productos amplificados para vacA s1
y vacA s2
son 259 pb y 286 pb, respectivamente. Las intensidades de los productos variaron entre muestras. La región de vacA
s se amplificó en 75/110 (68,2%) biopsias. Se detectó la variante s1 en 34/75 (45,3%), o 34/110 (30,9%), frente a la variante s2, que fue detectado en 41/75 (54,7%), o 41/110 (37,3%) de las biopsias. La región vacA
m se detectó en 47/110 (42,7%) biopsias. La variante m1 se detectó en 23/47 (48,9%) o 23/110 (20,9%), en comparación con la variante m2 detectado en 24/47 (51%), o 24/110 (21,8%).
Una combinación de la vacA
s, y regiones m se detectó en 26/110 (23,6%) de las biopsias. Tanto vacA
s1m1 y vacA
s2m2 se detectaron en cantidades aproximadamente iguales en 12/26 (46,2%), de la vacA
genotipo sm o 12/110 (10,9%), mientras que vacA
s1m2 que tenían se detectó en solamente 2/26 (7,7%) del vacA
genotipo sm, o 2/110 (1,8%). Ninguna de las biopsias mostró el genotipo vacA
s2m1, o múltiples genotipos.
Genotipo cagA Francia El tamaño de la cagA
producto amplificado fue de 349 pb. El genotipo cagA
se detectó en 29/110 (26,4%), y 81 (73,6%) fueron negativos. México La asociación entre los genotipos cagA y vacAs1
se detectó el genotipo cagA
en 8 /17 (47,1%) de la vacA s1
genotipo, en comparación con sólo 2/20 (10%) de Francia el vacA s2
genotipo. genotipo iceA
Ninguna de las 110 biopsias mostró la ICEA
1 genotipo, mientras que 81 (73,6%) mostraron la iceA2
genotipo. El iceA2
amplificación produjo dos fragmentos de 229 pb los y 334 pb, esta diferencia en el tamaño del fragmento se debe a la presencia de un 105 pb en - marco amplicón presente en el fragmento de 334 pb que está ausente en el fragmento de 229 pb [ ,,,0],15].
la asociación entre los genotipos y de género
Aunque ciertos genotipos se detectaron más de un sexo que el otro, su presencia no se asoció significativamente con la edad o el sexo del paciente. Los genotipos que fueron detectados más en los hombres que en las mujeres fueron el vacA s1
9/17 (53%), cagA
16/29 (55,2%), iceA2
45/81 (55,5%), vacA
s1m1 7/12 (58,3%), y el combinado vacA s1
cagA
genotipos 6/8 (75%). Los genotipos que fueron detectados más en las mujeres fueron el vacA s2
11/19 (65%), vacA m2
15/20 (75%), vacA
s2m2 8/11 (72,7%), y la vacA s2 combinado
cagA
genotipos 2/2 (100%). El vacA m1
, y vacA
genotipos s1m2 que tenían se detectaron en aproximadamente la misma cantidad en ambos sexos Análisis estadístico
Los resultados globales positivos de PCR fueron altamente asociada (P Hotel < 0,02). Con resultados histológicos. El análisis de los datos mostró una asociación significativa entre la detección simultánea de ambos cagA y vacA

s1 genotipos (P = 0,026
), la combinación de ambos la vacA s1
y vacA m1
genotipos (P
< 0,0001), y la combinación de ambos la vacA
s2 y la vacA
genotipos m2 (P
< 0,0001). Por otro lado, no se observó asociación entre la detección tanto de la vacA
s2 y cagA
genotipos (P = 0,102
), la detección de más de un genotipo con la edad o el sexo (P
> 0,05), la combinación de ambos la vacA
s1 y la vacA
genotipos m2 (P
> 0,05), y la combinación de ambos la vacA
s2 y la vacA
genotipos M1 (P Restaurant > 0,05).
Discusión
el presente estudio informa sobre la vacA, cagA

, y iceA
genotipos de H. pylori
que fueron identificados en muestras de biopsia gástrica. Aunque todas las cepas llevan una copia del gen vacA, ya sea con el s1 o s2 secuencias de señal, la región de la vacA
s se amplificó en 75/110 (68,2%) biopsias. Resultados similares fueron reportados por otros estudios que indican que pueden existir subfamilias adicionales de S y M genotipos junto a los conocidos [16]. comentario El genotipo predominante en los 110 biopsias que fueron positivos para H. pylori fotos: por PCR, fue la iceA2 gratis (73,6%), seguido de las Vacas
genotipo (68,2%); 34 (45,3%) de ellos fueron el vacA s1
alelo, y 41 (54,7%) fueron los vacA s2
alelo, mientras que el genotipo cagA
se amplificó sólo en 29/110 (26,4%) de las biopsias. Nuestros resultados están de acuerdo con otros estudios realizados en niños israelíes [13], y los pacientes egipcios [15], donde se reportó el genotipo cagA
en el 28% y 36%, respectivamente. La similitud de los genotipos identificados en los tres estudios se podría explicar por una influencia geográfica primaria importante en la adaptación del organismo al medio ambiente y las condiciones climáticas [13], a pesar de las diferencias obvias de acogida en el estilo de vida en dos países vecinos. La estrecha semejanza de las tensiones en los países vecinos también se detectó en Bangladesh y Calcuta, India [3, 17], que es bastante probable teniendo en cuenta la proximidad de los dos países, los ambientes fisiológicos similares, y estilos de vida del huésped.
la mayor prevalencia (67% o más) de los cagA
genotipo de H. pylori
se informó en Europa, América central y del Sur y Este de Asia [15]. Se detectó el alelo vacA s2
en menos del 30% en la población estudiada, en la mayoría de estos países. Las tasas de prevalencia de este genotipo similar a la actual estudio (54,7%) se registraron en Egipto (50%) [15], mientras que las tasas más altas (65%) se informaron en el estudio israelí [11]. Un estudio en Kuwait informó que vacA
tipos S1 y S2 se detectaron en aproximadamente el mismo número en las biopsias obtenidas de pacientes de origen de Oriente Medio, mientras que los árabes africanos eran predominantemente infectado con el tipo s2 [18]. Un estudio de genotipos en cuatro países diferentes informó que el cagA
, y vacA
iceA1 s1ml
genotipos fueron predominantes en Japón y Corea [14], y la cagA
, vacA
s1m1 , iceA2
genotipos se identifican con frecuencia en los Estados Unidos, mientras que el cagA
, vacA
s1m1, iceA2
genotipos fueron predominantes en Colombia. El mismo estudio reportó un aumento en la prevalencia de la vacA s1
que el vacA s2
genotipo, y una alta prevalencia del genotipo cagA
; Sin embargo, la prevalencia de la iceA1 Opiniones y iceA2
genotipos variaron entre estos países. Un estudio realizado en Inglaterra informó que el genotipo vacA
s1m1 se encontró que era menos común en Inglaterra [19], mientras que un predominio de iceA1
alelos, cagA
, y la presencia de vacA m1
No se observaron alelos. turcas cepas examinadas predominantemente poseían la cagA
, vacA
s1m1, o vacA m2
genotipos, que eran los genotipos típicos en las cepas de los países occidentales [20]. El predominio de la vacA
combinación alélica sl /m1, y una alta prevalencia del gen cagA
(87%) también se registraron en Estonia cepas de H. pylori
[21]. Sobre la base de
la presencia de una combinación de la vacA
s y m alelos, el alelo vacA s1
se asoció significativamente con vacA m1
(P Hotel < 0,0001), y lo mismo se observó asociación entre la vacA s2
y la vacA
m2 (P <
; 0,0001) alelos. Sin embargo, la detección de tanto vacA
y vacA
alelos m2 s1 era independiente el uno del otro (P
> 0,05). El genotipo vacA
s1m2 que tenían sólo se detectó en 2/26 (7,7%) de la vacA
combinación sm. Además, no hubo una asociación significativa entre el vacA s2
y vacA m1
, lo que significa que la detección de cada alelo era independiente del otro (P Hotel > 0,05). Este hallazgo puede explicar la ausencia del genotipo m1 /s2 combinada de los aislados en el estudio que se había informado anteriormente [22, 23]. Sin embargo, se reportó el primer caso de vacA
s2m1 H. pylori
aislado en un paciente úlcera duodenal de Sudáfrica [24]. México La asociación significativa entre el alelo vacA s1
y cagA
genotipo (47,1%) en nuestro estudio también se detectó en el 50% de los aislamientos israelíes y egipcios [13, 14]. Una asociación de más de 85% de los aislamientos se informó en otros países [15, 22], lo que confirma que los dos marcadores están estrechamente relacionados. Nuestro estudio no mostró una asociación significativa en la detección de dos genotipos de la misma cepa como el cagA Vaya con el iceA página 2, el alelo vacA
m2 con el genotipo iceA página 2, y el vacA
s2, alelos m2 con la iceA
2 que indica que la detección de un gen era independiente de la otra. Por otra parte, la detección de la vacA m1
s1 combinado, y iceA
2 genotipos en algunas biopsias fue insignificante (P
> 0,05), lo que indica que la detección de iceA
2 era independiente de la vacA
genotipos. Los mismos resultados fueron publicados en un estudio anterior [22]. Ninguna de las cepas tenían múltiples vac
A genotipos, que fueron publicados en otros países, como el norte de América del Sur [15].
Las hembras fueron más a menudo llevando a la vacA s2
, y el vacA m2
genotipos (65%, y 75%, respectivamente) en comparación con (42% y 25%) en los hombres. El iceA2 gratis (55,5%), cagA gratis (55,2%), y vacA s1
(53%) se detectaron genotipos más en los hombres que en las mujeres. El sexo del paciente y la detección de ciertos genotipos o combinación de genotipos no se asociaron significativamente. Por otra parte, el H. pylori
genotipos (P Restaurant > 0,05)., Y la detección de más de un genotipo no tenía ninguna asociación significativa con la edad o el sexo del paciente Francia El resultado global de la PCR fueron positivos altamente asociada (P Hotel < 0,02) con los resultados histológicos. Las diferencias en la histología, y los resultados de PCR podría ser debido a la distribución irregular de la H. pylori
en el estómago. Por otra parte, los falsos negativos pueden ser un problema en el genotipado a partir de biopsias ya que se encontraron algunas biopsias para contener compuestos que inhiben la PCR [25]. Además, las pruebas más biopsias múltiples por histología en comparación con el uno por PCR aumenta la posibilidad de encontrar la bacteria, y explica los resultados más positivos obtenidos por la histología (77,5%), en comparación con la PCR (44%). Los tratamientos de los pacientes con los inhibidores de la bomba de protones, antiácidos, o anti-H. pylori
terapia puede haber dado lugar a los resultados negativos en las pruebas realizadas en estos pacientes [26].
Conclusión
cepas examinadas jordanos predominantemente poseían el alelo iceA2
, la vacA s2
alelo era detectado más de la vacA
alelo s1, mientras que el genotipo cagA
fue baja. La detección de ciertos genotipos podría estar asociado con cada uno otro. Los resultados ilustran la naturaleza geográfica de la diversidad genética de H. pylori
, ya que los genotipos identificados son similares a los reportados en los países vecinos.
Este estudio proporciona un marco de referencia de H. pylori genotipos identificados en
muestras de biopsias gástricas, que sirven como una herramienta epidemiológica de gran alcance para posibles investigaciones para comprender mejor la diversidad genética de este patógeno.
Declaraciones
Agradecimientos
los autores agradecen a los gastroenterólogos y enfermeros en el Departamento de Endoscopia en el rey Abdullah y hospitales princesa Basma, que ayudaron en la recolección de la muestra. El estudio fue apoyado por el subsidio/04 del Decanato de Investigación de la Universidad de Ciencia y Jordan & Tecnología.
Conflicto de intereses Francia El autor (s) declaran que no tienen intereses en competencia.

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