Interlevkin-23A je povezana z rastjo tumorja pri raku s Helicobacter-povezanih pylori humane želodčne

Interlevkin-23A je povezana z rastjo tumorja pri Helicobacter pylori-
-povezana raka človeškega želodca
Abstract
Ozadje
interlevkin (IL) -23 je eden izmed novo ugotovljenih vnetnih citokinov in vnetje je prav je znano, da so povezani z razvojem raka želodca (GC). Vloga IL-23 raka želodca, pa je precej znana. V tej študiji smo raziskovali izraz in možno vlogo IL-23A v človeški GC.
Metode
izražanje IL-23A in IL-17A s človeškimi GC tkivih je določena z imunohistokemijo ter odnos med IL-23A izraz in klinične značilnosti GC bila raziskana. Serumska koncentracija IL-23A in IL-17A smo testirali tudi z ELISA. Vir in vloga IL-23A v GC so raziskovali in vitro
jih pretočna citometrija, MTS (Owen reagent) test in Western blot.
Rezultati
IL-23A, IL-23 receptor (IL-23R) in IL-17A bili vsi prekomerno v človeških tkivih GC, raven IL-23A je tudi korelacija z IL-17A v GC tkivih kot tudi v pacientovem serumu. Makrofagov in GC celice so bile glavni vir izločanja IL-23A na stimulacijo H. pylori
lizat. Poleg tega smo ugotovili, da IL-23A spodbuja širjenje GC celičnih linij z IL-17A /IL-17 antagonista (IL-17RA) /jedrska faktor κB (NF-κB) signalizacijo.
Sklepi
Visoko izražanje IL-23A je povezana z GC. IL-23A mogoče spodbujati rast GC celice z indukcijo izločanje IL-17A tumorja mikrookolja. Naši rezultati kažejo, da je serumska koncentracija IL-23A dobra biomarker slabe klinične prognozo pri bolnikih GC.
Ključne besede
interlevkin-23A interlevkin-17A Jedrska faktor-κB Rak želodca Ozadje
IL-23A je podenote heterodimernega citokinov, IL-23, ki ga pare z drugo podenoto, P40 (IL-12). Znano je, da je IL-23A izraža in izloča makrofagov in dendritičnih celic. IL-23 lahko aktivira signalnega transduktorja in aktivator prepisovanja 4 (STAT4) z IL-23R porazdeljeno na membrani več vrst imunskih celic, vključno s celicami T, naravna killer (NK) celice, monocite in dendritske celice. In IL-23 sodeluje imunske odzive pri prepoznavanju tujih snovi in ​​brani telo pred okužbami in boleznimi [1], [2].
IL-23A je vključen v vnetnega odziva preko spodbujanja matrične metaloproteaze 9, povečanje angiogenezo in zmanjšanje CD8 + T celic infiltracija [3], [4]. S sodelovanjem z IL-6 in transformirajoči rastni faktor-β1 lahko IL-23 spodbujanje diferenciacije CD4 + naivnih celic T na Th17 celic, ki je ena od dobro sprejetih celica pomagalka podskupine [5] - [ ,,,0],7]. Th17 celice izločajo vnetnih citokinov IL-17A, ki lahko povzroči Th17 odziv s stimulacijo proizvodnje drugih vnetnih molekul, kot so IL-1β, IL-6, tumorje nekrotizirajočega faktorja-a (TNF-alfa) in kemokinov, zaradi vnetja. Ugotovljeno je bilo, da je bil IL-17 je tesno povezan z GC [8], [9]. Zveza študija genoma vsej je pokazala, da -197G > Polimorfizma na položaju -197 v IL-17 promotorja regiji močno povečal GC tveganje v splošni populaciji [10], [11], medtem ko je povečano izražanje IL-17 je pokazala pri bolnikih z GC. IL-17 je vključen tudi napredovanje GC s spodbujanjem angiogeneze v mikrookolju tumorja [12]. Poleg tega lahko obstojne vnetje povzroča delno IL-17 prispeva k želodčne sluznice patologijo, s čimer se poveča tveganje za GC [9] [11] [13].
Primerjavi s položajem IL-17A, študij v zvezi z vloga IL-23A v človeški GC so v veliki meri primanjkuje. V tej raziskavi smo preiskali izražanje IL-23A v GC, in so bili vključeni klinični pomen in mogoče mehanizem.
Rezultati
IL-23A, IL-23R in IL-17A so pretirani človeški GC
Da bi raziskali izražanje IL-23A in povezanih molekul v človeškem GC, so bile 141-parafin vgrajeni tkiva študiral za izražanje in distribucijo IL-23A, IL-23R in IL-17A uporabo imunohistokemično. Prvič, smo ugotovili, da so IL-23A, IL-23R in IL-17A vse značilno prekomerno v človeški GC primerjavi z običajnimi kontrolami. Čeprav je bilo več mogoče zaznati v običajnih želodčnih žlez in rahlo pozitiven infiltracije vnetnih celic, je IL-23A zaznan na visoki ravni v infiltracije vnetnih celic in rakave celice v tumorskih tkivih (slika 1A). IL-23R je bilo izraženo izključno v infiltracije vnetnih celic v obeh rakom in normalnih tkivih, vendar je raven izražanja in razmerje je bilo precej višje v tumorskih tkivih (slika 1B). IL-17A je bila s sedežem v glavnem v infiltrirana vnetnih celic v GC (slika 1C). Bomo naslednjič raziskovali odnos med ekspresijo IL-23A in različnih kliničnih značilnosti, in ugotovila, da je raven IL-23A, povezane s H. pylori
bremena okužbe in tumorja (tabela 1). Slika 1 Izražanje in distribucijo IL-23A, IL-23R in IL-17A v človeški GC in normalno želodčnega tkiva. (A) Izražanje in distribucijo IL-23A je bila analizirana z imunohistokemijo na humani GC in normalno želodčnega tkiva. Povprečna integrirana optična gostota je bila pridobljena z analizo pet področij namenom za vsako preparatih Image-Pro Plus 5.0 ocenjuje. (B) Izraz, distribucija in povprečna integrirana optična gostota IL-23R. (C) Izraz, distribucija in povprečna integrirana optična gostota IL-17A. ** P
< 0.01.
Tabela 1 Klinične značilnosti 141 GC pacientov
pacientov demografije
IL-23 pozitiven
IL-23 negativen
Pvaluea

Age, y (razpon)
59 (32-85)
ND
ND
Sex
0,730
moški
89
45
44
ženska
52
28
24
Glavna lokacija
0.613
U
74
36
38
ML
67
29
38
velikosti, cm (razpon)
0.028b
> 5
97
74
23
< 5
44
25
19
globina invazije
0,519
T1 /T2
88
24
14
T3 /T4
53
29
24 uvrstitev
Lauren
0,372
Črevesne
94
45
49
razpršenih
47
27
20
bezgavka metastaze
0.401
pozitivno
69
37
32
Negative
72
33
39
H. pylori
okužbe
< 0.0001c
Pozitivna
84
74
10
Negative
57
28
29
Stage
0,215
I
32
16
16
II
45
23
22
III
43
20
23
IV
21
10
11
ND = ni določeno
aχ2 preizkus
BP
<..; 0.05
cP
. ≪ 0.01.
IL-23A, povezana z izločanjem IL-17A v človeški GC
so nedavne študije pokazale, da je izločanje IL-23A je bil eden izmed glavnih dejavnikov pri normalnem diferenciacije Th17 celic. vprašljiva smo, ali je IL-23A povezana tudi s Th17 celico v PK. Dejansko je povišana IL-23A izraz sovpadal s povečano ekspresijo IL-17A (Slika 2A). Raziskati nadaljnje odnose med njimi, smo kvantitativno izražanje obeh citokinov v IHC barvanjem bolnikov GC in pokazala, da je IL-23A izraz bistveno povezana z IL-17A izražanja s preskusom linearne korelacije (r 2 = 0,7148, P
< 0,001) (Slika 2B). Slika 2 IL-23A je povezana z izločanjem IL-17A v človeški GC. (A) Korelacija med IL-23A in IL-17A v tumorskih tkivih bolnikov GC je preiskovala imunohistokemija. (B) Korelacija med IL-23A in IL-17A v IHC barvanjem bolnikov GC je bila naložena z linearno testom korelacije.
Koncentracija Serum IL-23A je pokazatelj slabo prognozo pri bolnikih GC
Oba IL-23A in IL-17A lahko izloča v kri, zato smo predpostavili, da se raven IL-23A in IL-17A v serumu pacientov GC ali zdravih kontrol, lahko določimo z ELISA kot biomarkerjev. Najprej smo zaznali raven obeh citokinov kot 213 ± 75 pg /ml za IL-23A in 286 ± 101 pg /ml za IL-17A pri 50 zdravih posameznikih (Slika 3A in B). Raven v serumu obeh citokinov so pri bolnikih GC znatno povečal 517 ± 247 pg /ml IL-23A in 422 ± 284 pg /ml IL-17A (Slika 3A in B). In linearna korelacija serumsko koncentracijo med IL-23A in IL-17A so opazili tudi pri bolnikih, GC (r 2 = 0,5841, P
< 0,001) (slika 3C). Prag zdravih kontrol je bila pridobljena s 95% intervalu zaupanja (CI), ki je 285 pg /ml IL-23A. Glede na prag, so pacienti GC razdeljena na IL-23A visoko in IL-23A nizko podskupin. Primerja njihovo klinično prognozo med podskupinah bolnikov GC je serum IL-23A izraz preučila metodi Kaplan-Meier. Ugotovili smo, da je raven IL-23A (> 285 pg /ml) je bila značilno povezana s krajše celokupno preživetje (OS) [P
= 0,027, razmerje ogroženosti (HR) 2.246, 95% IZ: 1,212-4,160] (Slika 3D). Slika 3 Serum IL-23A koncentracijo kot kazalnik slabo prognozo pri bolnikih GC. (A) serumsko koncentracijo IL-23A v GC bolnikih in zdravih kontrol. (B) koncentracija v serumu IL-17A v GC bolnikih in zdravih kontrol. (C) Korelacija med IL-23A in IL-17A v serumu bolnikov GC je bila naložena z linearno testom korelacije. (D) Kaplan-Meier krivulje OS bolnikov GC z različno izražanje IL-23A. Se
IL-23A lahko izločajo makrofagi in GC celic
Imunohistokemijsko dokazale, da je IL-23A izobilju izražena na več celični tipi, vključno T-celic, makrofagov in GC celic (slika 1A). Da bi preverili natančen izvor IL-23A, smo pogledali IL-23A izraz v vitro
sistemu spodbujanja uporabe H. pylori
lizat kot sredstvo za citokinov indukcijo, ki temelji na predhodni ugotovitvi, da H. pylori
bil trden induktor za izločanje IL-23A. V T celic, je IL-23A izločanje nekoliko povečalo na stimulacijo s H. pylori
lizata (slika 4A). V makrofagov število IL-23A-pozitivnih celic večja od 1,15 ± 0,18% do 13.21 ± 6.21% (slika 4B). Medtem ko je v celičnih linijah GC, IL-23A-pozitiven SGC-7901 celic povečal iz 2,64 ± 1,12% na 13,11 ± 3,12%, in IL-23A pozitivne MKN45 celice povečal iz 1,16 ± 0,46% na 17,55 ± 5,42% (slika 4C). Na splošno, makrofagi in GC celice pokazala H. pylori
-lizat povzroča stimulacijo izločanja IL-23A (slika 4D). Slika 4 IL-23A izločajo makrofagov in GC celic. (A) Izražanje IL-23A in celična površinska označevalca CD3 so odkrile pretočna citometrija v celicah T z različno obdelavo. (B) Izražanje IL-23A in celična površinska označevalca CD14 so odkrile pretočna citometrija v makrofagih z različno obdelavo. (C) Izražanje IL-23A je bila odkrita s FCS v SGC-7901 in MKN45 celic tretiranih s H. pylori
lizat. (D) Razmerje IL-23A pozitivnih celic T celic, makrofagov in celičnih linij GC.
IL-23A spodbuja preživetje GC celic z IL-17A /IL-17RA /jedrske faktorja (NF) -κB signalizacijo
Da bi raziskali vpliv IL-23A na rast tumorja je bila uporabljena pomožna kultura test in vitro
. Najprej smo ugotovili, da je IL-23A nima pomembnega vpliva na proliferacijo celic, ko so GC linije SGC-7901 in MKN45 zdravljenih s humanim rekombinantnim IL-23A neposredno. Smo zraven ugotovila, da ni bilo pomembnega vpliva na tumorskih celic SGC-7901 ali rast MKN45 co-kultivirani z limfociti naivnih T v prisotnosti IL-23A. Vendar pa je pomembno celico za pospeševanje rasti učinek opazili, ko so bodisi makrofagov ali H. pylori
lizat dodan sistem co-kulture. Ko tako makrofagov in H. pylori
dodamo, je bil učinek sinergistično (slika 5A in B). Slika 5 IL-23A spodbuja preživetje GC celičnih linij z IL-17A /IL-17RA /NF-κB signalizacije. (A) je bila preučena Sposobnost preživetja celic iz SGC-7901 z zdravljenjem. (B) celica preživetja MKN45 s bila preučena zdravljenje. (C) Koncentracija IL-17A v mediju celične kulture z dne SGC-7901 in MKN45 smo določili z ELISA. ** P
< 0.01. (D) je izražanje IL-17RA in IL-23R tako MKN45 in SGC-7901. (E) Izraz p-IkBa, IkBa in CyclinD1 tako MKN45 in SGC-7901.
Smo raziskali možne mehanizem, ki podpira povezavo med IL-17A in IL-23A. Koncentracija IL-17A v gojitvenem mediju smo določili in ni bilo pomembne razlike, ko so GC celice obdelamo samo z IL-23A ali IL-23A plus T limfocitov. Vendar se izločanje IL-17A povečala, ko je bodisi H. pylori
lizat ali makrofagov dodamo (slika 5C). je bila preučena tudi do aktivacije NF-κB signalizacijo, in izraz tako IL-17RA in IL-23R je bila odkrita v obeh SGC-7901 in so bile ugotovljene MKN45 celice, razmeroma močna izražanje IL-17RA in skoraj brez izražanje IL-23R (Slika 5D). Fosforiliran IκBα in cyclinD1, proizvodi NF-κB signalizacijo, sta bila povečana v SGC-7901 in MKN45 celic, skupaj s povečano prisotnostjo IL-17A (Slika 5E). IL-23A je bil izločen iz obeh makrofagov in GC celic in spodbuja širjenje raka z IL-17A /IL-17RA /NF-κB signalizacijo.
Razprava
GC je četrti najpogostejši rak in drugi najpogostejši vzrok raka -povezana smrti po vsem svetu. Med več histoloških tipov, ki se črevesnega tip GC pogosto povezana s H. pylori
okužbo in njen potek je značilna akutni gastritis, kronični gastritis, želodčni atrofija, intestinalno metaplazijo in končno tvorba GC [10].
natančni vzroki za GC niso znane, vendar pa številni dejavniki lahko poveča tveganje za bolezni, vključno spola, rase, genetike, geografije, krvna skupina, starost, družinsko anamnezo, in H. pylori
okužba želodec. H. pylori
okuži sluznice želodca in povzroča kronično vnetje in razjede. Podrobni molekularnih poti, ki so odgovorni za stimulacijo H. pylori
še ni povsem znano, [14] - [16].
Številne študije so poročali o imunska molekule H. pylori
, kot CagA . CagA spodbuja izražanje vnetnih Kemokini IL-8, CXC-kemokin ligand 2 (znan tudi kot makrofagov vnetnih beljakovin) in antimikrobni peptid človek β-defenzin-2 do aktivacije NF-κB signalizacijo [17]. Druge študije so pokazale, da CagA prenesen v epitelnih celic s spodbujanjem visoke ravni IL-8, okuženih z nekaterimi H. pylori
sevov, skupaj z indukcijo vnetnega odziva [16] [18] [19]. Ras odvisnih kinaz, zunajcelični signal regulirano kinaze (ERK) 1 in ERK2 se aktivira tudi stranski CagA sprožila tirozinske fosforilacije, ki vodi do aktivacije transkripcijskih faktorjev NF-κB, aktivator protein-1, in na koncu, IL-8 produkcija s gostiteljske celice [9].
mehanizem povezane okužbe je HP in Th17 odgovor ni bil v celoti razkrila. Nekatere citokine, kot so IL-1β in IL-21, so poročali, da so povezani. Lee et al. je pokazala, da lahko trdovratna okužba HP povzroči HP-specifične Th17 celice, ne pa druge imunske celice, ki so bile prav tako opisane izločanje IL-17A. Poleg tega, IL-1β je tudi vztrajno povišana, in nevtralizacija IL-1β zmanjša odziv HP-specifične IL-17A, da gre za funkcionalno povezavo med IL-1β in vztrajno odgovor Th17 [20]. Druga skupina pa je tudi pokazala, da IL-21 ureja Th1 in Th17 efektornih odzive med kronično H. okužbo pylori v STAT1- in stat3 odvisnega način, zato igrajo pomembno vlogo pri kontroli H. pylori okužbe in gastritis [21].
Smo poročali, da je bil IL-23A izloča iz GC celic in makrofagov. Ugotovili smo, da je raven seruma IL-23A pokazatelj slabo prognozo pri bolnikih GC in njegov izraz je povezan z volumen tumorja in H. pylori
okužbe. Naši rezultati tudi navedla, da je IL-23A nima neposrednega vpliva na širjenje rakavih celic. Vendar pa to vpliva na mikrookolje tumorja s povečanjem izločanje IL-17A, ki je zaščitni znak citokin iz Th17 celic. Na koncu smo ugotovili, da bi lahko IL-23A potencialno indeks in cilj za diagnosticiranje in zdravljenje GC.
Sklepe
Skratka, ta študija je pokazala, da je visoka izražanje IL-23A, povezane z GC. IL-23A lahko povzroči izločanje IL-17A aktivirati IL-17A /IL-17RA /NF-κB signalizacije tumorja mikrookolju. serumska koncentracija IL-23A je pokazatelj slabo prognozo pri GC bolnikov in IL-23A bo potencialna indeks in cilj za diagnosticiranje in zdravljenje GC.
Materiali in metode
bolnikov
Ta študija je vključevala 141 bolniki z GC, ki so šli skozi operacijo od leta 2008 do leta 2013 na Kunshan Ljudska bolnišnica, Kunshan, Jiangsu in Kunshan Hospital povezan z Nanjing University kitajske medicine. Dokumentirani privolitev za genske ekspresije analize vseh tkiv je bilo pridobljeno od vseh bolnikov pred operacijo. Ta študija je odobril Odbor za lokalno etiko Kunshan ljudske Hospital. Histološki podtip po klasifikaciji Lauren [22] je bila določena po pregledu tumorskih odsekov z dvema patologi. Nadaljnji podatki so bili na voljo pri vseh bolnikih, GC, ki so bile ocenjene na 3, 6,12 mesecev, in nato vsakih 6 mesecev za 5 let ali do smrti.
Imunohistokemija
Vsa tkiva so odstranili in je določeno v 4% paraformaldehid preko noči pri 4 ° C, nato obdela in prerezana pri 5 um debeline. Deljiva drsi smo obarvali z imunohistokemijo na IL-23A, IL-23R in IL-17A (Santa Cruz Biotechnology), čemur sledi inkubacija s sekundarnih protiteles pri 37 ° C 30 min in reakcijo z DAB reagenta za 5-10 minut. Diapozitivi so bili nameščeni z nevtralnim lepilom za mikroskopski pregled. Celice z rjavimi znotrajceličnih granul (citoplazmi ali jedru) so menili, da je treba pozitivno obarvajo.
Elisa
Koncentracija IL-23A in IL-17A v serumu GC bolnikih in zdravih kandidatov so bile izmerjene z uporabo komercialno na voljo sendvič ELISA seta ( eBioscience).
Stimulacija IL-23A in vitro
T celic in makrofaga smo izolirali iz enojedrnih celicah periferne krvi s pomočjo izolacije komplet do T celic in monocitov oziroma (Miltenyi Biotec). T celic in makrofagov plus celičnih linij GC (MKN45 in SGC-7901 so bile kupljene iz ATCC) smo vzdrževali in vitro
in spodbujena z bakterijo Helicobacter pylori
lizat (NCTC 11637, CagA + in Vaca +) in analizirali z znotrajcelično citokinov barvanjem . Za znotrajcelične citokinov obarvanjem so celice T stimulirane pri 37 ° C 5 ur z levkocitov aktivacijskim Cocktail a (BD Pharmingen). Poleg tega so bile T celice, makrofagi in celične linije GC obarvajo z površinskih označevalcev, fiksni in permeabiliziramo z IntraPre Reagent (Beckman Coulter), in na koncu obarvali z znotrajceličnih označevalcev. Podatki so bili pridobljeni na FACSVantage SE in analizirali z Cellquest. Fluorokromom konjugiranih mAbs proti IL-23A smo nabavili pri BD Pharmingen (kat. 562.468).
Pretočna citometrija
Za znotrajcelične citokinov obarvanje smo celice stimuliramo pri 37 ° C 5 ur z Cocktail je levkocitov aktivacijskim (BD Pharmingen) . Celice smo nato obarvali z površinskih označevalcev, fiksni in permeabiliziramo z IntraPre Reagent (Beckman Coulter), in na koncu obarvali z znotrajceličnih označevalcev. Podatki so bili pridobljeni na FACSVantage SE in analizirali z Cellquest. Fluorokromom konjugiranih monoklonskih protiteles (mAb) proti IL-23A, CD3 služila kot pokazatelj za T-celic in CD14 služijo kot markerji za monocitov in makrofaga so bile kupljene od BD Pharmingen.
MTS testom
Gojeni celice zasadimo na gostoto 6 x 10 3 celic /tudi v 96-plošče in vzdrževana z DMEM plus 10% fetalnega telečjega seruma (Invitrogen). sposobnost preživetja celic je ocenil MTS testom. CellTiter 96Aqueous Ena Rešitev reagent (Promega) dodamo v vsako vdolbino v skladu z navodili proizvajalca, in plošče vrnjene v inkubator. Po 4 urah smo viabilnost celic določimo z merjenjem absorbance pri 490 nm s pomočjo računalniško nadzorovan ploščo-bralnik.
Western Blot
bili Proteini ekstrahiranega iz celic in kvantitativno s pomočjo testa protein (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Vzorci beljakovinski (30 ug) frak s SDS-PAGE in prenesli na nitrocelulozno membrano. Imunoblot smo izvedli s pomočjo protiteles proti p-IκBα, IκBα, CyclinD1 in IL-17RA (Santa Cruz Biotechnology). Rezultate smo prikazali s pomočjo sistema kemiluminiscenco zaznavanja (substrat zahodni sistem za zaznavanje madež Pierce ECL; Thermo Scientific) in izpostavljena avtoradiografija filma (Kodak XAR film)
Statistična analiza
so rezultati izražene kot povprečje ± SD, ki traja. najmanj trojnih poskusov. Primerjave med obema skupinama so bile izvedene s testom
Mann-Whitney U. Primerjava IL-23A izražanja med različnimi kliničnimi značilnostmi smo analizirali z 2 testa χ . Analiza korelacije med izražanje IL-23A in IL-17A v GC tkivih je bila izvedena z Spearman neparametrska analizo odnosa. Krivulji preživetja so bili ocenjeni z uporabo izdelka, mejna metoda Kaplan-Meier, in pomembne razlike med krivuljami preživetja smo določili s testom log-rang. P
< 0.05 smo imeli statistično značilno
Kratice
IL-23.
Interlevkin-23
GC:
rak želodca


IL-23R:
IL-23 receptor
IL-17RA:
IL-17 receptor podenota

NF-κB:
Jedrska faktor-κB
STAT4:
signalov pretvornik in aktivator transkripcije 4
NK:
Natural killer
deklaracij
Zahvala
Ta študija je bila podprta s tehnološkimi projekti socialnega razvoja Kunshan City, Kitajska (KS1255)
Avtorji ". originalni predloženi datoteke za slike
Spodaj so povezave do originalnih predloženih spisov avtorjev za slike. "Izvirno datoteko na sliki 1 12935_2014_104_MOESM2_ESM.gif avtorjev 12935_2014_104_MOESM1_ESM.gif avtorjev prvotne datoteke za prvotno datoteke za sliko 3 12935_2014_104_MOESM4_ESM.gif avtorjev Slika 2 12935_2014_104_MOESM3_ESM.gif avtorjev prvotne datoteke za sliko 4 prvotne datoteke 12935_2014_104_MOESM5_ESM.gif avtorjev za sliki 5 konkurenčni interesi
Avtorji izjavljajo, da nimajo konkurenčnih interesov. prispevkov
avtorjev
CL in WZ zasnovane in izdelane poskusov. CL, YZ, JZ, YZ, QW in HP izvedli eksperimente. CL in WZ izvedli statistično analizo vseh podatkov. CL napisal papirja. Vsi avtorji se strinjajo z vsebino rokopisa in to oddajo. Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• Statini in tveganje za raka želodca v diabetes patients
• Vključevanje faktorja tumorske nekroze-a v uravnavanjem CXCR4 raka želodca s Helicobacter pylori