Interleukin-23A er forbundet med tumorvækst i Helicobacter-pylori-relaterede human gastrisk cancer

Interleukin-23A er forbundet med tumorvækst i Helicobacter-pylori
relaterede human mavekræft
Abstract
Baggrund
Interleukin ( IL) -23 er en af ​​de nyligt identificerede inflammatoriske cytokiner, og inflammation er også kendt for at være forbundet med udviklingen af ​​gastrisk cancer (GC). Rollen af ​​IL-23 i gastrisk cancer, er imidlertid stort set ukendte. I den foreliggende undersøgelse undersøgte vi ekspressionen og mulige rolle af IL-23A i human GC. Salg Fremgangsmåder
Ekspressionen af ​​IL-23A og IL-17A i humane GC væv blev bestemt ved immunhistokemi, og forholdet mellem IL-23A ekspression og kliniske karakteristika for GC blev undersøgt. Serumkoncentrationen af ​​IL-23A og IL-17A blev også testet ved ELISA. Kilden og rolle IL-23A i GC blev undersøgt in vitro
med flowcytometri, MTS (Owen reagens) assay og Western blot.
Resultater Salg IL-23A, IL-23 receptor (IL-23R) og IL-17A blev alle overudtrykt i humane GC væv, og niveauet af IL-23A var godt korreleret med IL-17A i GC væv samt i patientens serum. Makrofager og GC celler var den vigtigste kilde til IL-23A sekretion ved stimulering af H. pylori
lysat. fundet vi desuden, at IL-23A fremmet proliferation af GC cellelinier via IL-17A /IL-17-receptorantagonist (IL-17RA) /nuklear faktor-KB (NF-KB) signalering.
Konklusioner
Den høje ekspression af IL-23A er forbundet med GC. IL-23A kan fremmes vækst GC-celler ved at inducere sekretion af IL-17A i tumormikromiljøet. Vores resultater antyder, at serum koncentrationen af ​​IL-23A er en god biomarkør for dårlig klinisk prognose i GC patienter.
Nøgleord
Interleukin-23A Interleukin-17A Nuclear faktor-KB mavekræft Baggrund
IL-23A er en underenhed af det heterodimere cytokin, IL-23 ved parring med den anden underenhed, p40 (IL-12). Det er kendt, at IL-23A udtrykkes og udskilles af makrofager og dendritiske celler. IL-23 kan aktivere signal transducer og aktivator af transkription 4 (STAT4) gennem IL-23R fordelt på membranen af ​​flere typer immunceller, herunder T-celler, naturlige dræberceller (NK) celler, monocytter og dendritiske celler. Og IL-23 deltager immunresponser identificere fremmede stoffer og forsvare kroppen mod infektion og sygdom [1], [2].
IL-23A er involveret i det inflammatoriske respons ved at fremme matrixmetalloprotease 9, stigende angiogenese og reducere CD8 + T-celler infiltration [3], [4]. Ved at arbejde sammen med IL-6 og transformerende vækstfaktor-β1, kan IL-23 fremmer differentiering af CD4 + naive T-celler til Th17 celler, som er en af ​​de godt accepteret T hjælper celle delmængder [5] - [ ,,,0],7]. Th17 celler udskiller proinflammatoriske cytokin IL-17A, der kan inducere Th17 respons ved at stimulere produktionen af ​​andre proinflammatoriske molekyler, såsom IL-1β, IL-6, tumornekrosefaktor-α (TNF-α) og chemokiner, hvilket resulterer i inflammation. Det er blevet rapporteret, at IL-17 blev tæt forbundet med GC [8], [9]. Genom-sammenslutning undersøgelse har afsløret, at -197G > En polymorfisme ved position -197 i IL-17-promotorregionen signifikant øget GC risiko i den almindelige befolkning [10], [11], mens forøget ekspression af IL-17 blev fundet i patienter med GC. IL-17 er også involveret i progressionen af ​​GC ved at fremme angiogenese i tumormikromiljøet [12]. Desuden kan vedvarende inflammation induceret delvist af IL-17 bidrager til gastrisk mucosal patologi, derved øge risikoen for GC [9], [11], [13].
Sammenlignet med den af ​​IL-17A, undersøgelserne vedrørende rolle IL-23A i humant GC er stort set mangler. I den foreliggende undersøgelse, vi undersøgte udtryk for IL-23A i GC, og dens kliniske betydning og mulig mekanisme var involveret.
Resultater
IL-23A, IL-23R og IL-17A er for vidtgående i human GC
for at undersøge ekspressionen af ​​IL-23A og de relaterede molekyler i human GC, blev 141 paraffinindlejrede væv undersøgt for ekspression og distribution af IL-23A, IL-23R og IL-17A under anvendelse immunohistokemi. Først, vi observeret, at IL-23A, IL-23R og IL-17A alle var signifikant overudtrykt i human GC sammenlignet med normale kontroller. Selv om det var ikke påviselig i de normale gastriske kirtler og svagt positiv i infiltrerende inflammatoriske celler, blev IL-23A detekteres på et højt niveau i infiltrerende inflammatoriske celler og cancerceller i cancervæv (figur 1A). IL-23R blev udelukkende udtrykt i infiltrerende inflammatoriske celler i både cancer og normale væv, men ekspressionsniveauet og forholdet var meget højere i cancervæv (figur 1b). IL-17A var placeret hovedsagelig i de infiltrerede inflammatoriske celler i GC (Figur 1C). Derefter undersøgte vi forholdet mellem ekspression af IL-23A og forskellige kliniske karakteristika, og fandt, at niveauet af IL-23A var forbundet med H. pylori
infektion og tumorbelastning (tabel 1). Figur 1 Ekspression og distribution af IL-23A, IL-23R og IL-17A i human GC og normal gastrisk væv. (A) Ekspression og distribution af IL-23A blev analyseret ved immunohistokemi i både human GC og normal gastrisk væv. Gennemsnitlig integreret optisk tæthed blev opnået ved at analysere fem synsfelter for hvert dias evalueret af Image-Pro Plus-versionen 5.0. (B) Ekspression, distribution og gennemsnitlig integreret optisk densitet af IL-23R. (C) Ekspression, distribution og gennemsnitlig integreret optisk densitet af IL-17A. ** P
< 0,01.
Tabel 1 Kliniske karakteristika af 141 GC patienters
Patientdemografi
IL-23 positive
IL-23 negative
Pvaluea

Age, y (interval)
59 (32-85)
ND
ND
Sex
0.730
Mand
89
45
44
Female
52
28
24
Main placering
0,613
U
74
36
38
ML
67
29
38
Størrelse, cm (interval)
0.028b
> 5
97
74
23
< 5
44
25
19
dybde invasion
0,519
T1 /T2
88
24
14
T3 /T4
53
29
24
Lauren klassifikation
0,372
Intestinal
94
45
49
Diffus
47
27
20
Lymfeknude metastase
0,401
Positiv
69
37
32
Negativ
72
33
39
H. pylori
infektion
< 0.0001c
Positiv
84
74
10
Negativ
57
28
29
Stage
0,215
I
32
16
16
II
45
23
22
III
43
20
23
IV
21
10
11
ND = ikke bestemt
aχ2 test
bP
<..; 0.05
cP
<.; 0,01.
IL-23A er korreleret med IL-17A-sekretion i humant GC
Nylige undersøgelser har vist, at sekretion af IL-23A var en af ​​de vigtigste faktorer i normal Th17 celledifferentiering. Vi spørgsmålstegn ved, om IL-23A også var forbundet med Th17 celle i GC. Faktisk forhøjede IL-23A ekspression faldt sammen med forøget ekspression af IL-17A (figur 2A). At udforske yderligere forholdet mellem dem, vi kvantificeres udtryk for begge cytokiner inden IHC farvning af GC patienter og viste, at IL-23A udtryk var signifikant korreleret med IL-17A udtryk gennem en lineær sammenhæng test (r 2 = 0,7148, P
< 0,001) (Figur 2B). Figur 2 IL-23A er korreleret med IL-17A-sekretion i humant GC. (A) Korrelationen mellem IL-23A og IL-17A i cancervæv af GC patienter blev undersøgt ved immunohistokemi. (B) Korrelationen mellem IL-23A og IL-17A inden IHC-farvning af GC patienter blev åbnet af lineær korrelation test.
Serum IL-23A koncentration er en indikator for dårlig prognose i GC patienter Salg Både IL-23A og IL-17A kan udskilles i blodet, derfor har vi den hypotese, at niveauet af IL-23A og IL-17A i serum fra GC patienter eller raske kontroller kan bestemmes ved ELISA som biomarkører. Vi først opdaget niveauet for begge cytokiner som 213 ± 75 pg /ml for IL-23A og 286 ± 101 pg /ml for IL-17A i 50 raske individer (figur 3A og B). Serumniveau begge cytokiner blev signifikant forøget i GC patienter som 517 ± 247 pg /ml for IL-23A og 422 ± 284 pg /ml for IL-17A (figur 3A og B). Og den lineære korrelation af serumkoncentration mellem IL-23A og IL-17A blev også set i GC patienter (r 2 = 0,5841, P
< 0,001) (figur 3C). Tærsklen for raske kontroller blev opnået ifølge den 95% konfidensinterval (CI), som var 285 pg /ml for IL-23A. Ifølge tærsklen blev GC patienterne opdelt i IL-23A høj og IL-23A lave delmængder. At sammenligne deres kliniske prognose mellem de to undergrupper af GC patienter blev serum IL-23A ekspression undersøgt under anvendelse af Kaplan-Meier-metoden. Vi fandt, at IL-23A-niveau (> 285 pg /ml) var signifikant associeret med kortere samlet overlevelse (OS) [P
= 0,027, hazard ratio (HR) 2,246, 95% CI: 1,212-4,160] (figur 3D). Figur 3 Serum IL-23A koncentration som indikator for dårlig prognose i GC patienter. (A) Serum koncentrationen af ​​IL-23A i GC patienter og raske kontrolpersoner. (B) Serum koncentrationen af ​​IL-17A i GC patienter og raske kontroller. (C) Korrelationen mellem IL-23A og IL-17A i serum af GC patienter blev åbnet af lineær korrelation test. (D) Kaplan-Meier-kurver for OS GC patienter med forskellig ekspression af IL-23A.
IL-23A kan secerneres af makrofager og GC celler
Immunohistokemisk farvning viste, at IL-23A rigeligt blev udtrykt i flere celletyper, herunder T-celler, makrofager og GC-celler (figur 1A). For at undersøge den nøjagtige oprindelse af IL-23A, adgang vi IL-23A udtryk i en in vitro
stimulation system ved hjælp af H. pylori
lysat som cytokin-fremkaldende middel, som er baseret på en tidligere observation, at H. pylori
var en robust inducer for sekretionen af ​​IL-23A. I T-celler, blev IL-23A sekretion steg lidt efter stimulering med H. pylori
lysat (figur 4A). I makrofager, antallet af IL-23A-positive celler steg fra 1,15 ± 0,18% til 13,21 ± 6,21% (figur 4B). Mens i GC cellelinjer, IL-23A-positive SGC-7901 celler steg fra 2,64 ± 1,12% til 13,11 ± 3,12%, og IL-23A-positive MKN45 celler steg fra 1,16 ± 0,46% til 17,55 ± 5,42% (figur 4C). Samlet, makrofager og GC celler viste H. pylori
lysat-induceret stimulering af IL-23A sekretion (figur 4D). Figur 4 IL-23A secerneres af makrofager og GC-celler. (A) Ekspressionen af ​​IL-23A og celleoverflademarkør CD3 blev påvist ved flowcytometri i T-celler med forskellig behandling. (B) Ekspression af IL-23A og celleoverflademarkør CD14 blev påvist ved flowcytometri i makrofager med forskellig behandling. (C) Ekspressionen af ​​IL-23A blev detekteret ved FCS i SGC-7901 og MKN45 celler behandlet med H. pylori
lysat. (D) forholdet mellem IL-23A-positive celler i T-celler, makrofager og GC-cellelinier.
IL-23A fremmer overlevelsen af ​​GC celler gennem IL-17A /IL-17RA /nuklear faktor (NF) -κB signalering
for at undersøge virkningen af ​​IL-23A på tumorvækst blev en co-kultur-assay in vitro
udnyttes. Først fandt vi, at IL-23A havde ingen signifikant virkning på celleproliferation, når GC linjer SGC-7901 og MKN45 blev behandlet med humant rekombinant IL-23A direkte. Vi fandt ud, at der ikke var nogen signifikant virkning på tumorceller SGC-7901 eller MKN45 vækst co-dyrket med naive T lymfocytter i nærvær af IL-23A. den betydelige celle-vækstfremmende effekt blev imidlertid set når enten makrofager eller H. pylori
lysat blev tilsat til co-kultur-systemet. Når begge makrofager og H. pylori
blev tilsat, var virkningen synergistisk (figur 5A og B). Figur 5 IL-23A fremmer overlevelsen af ​​GC cellelinier gennem IL-17A /IL-17RA /NF-KB-signalering. (A) Cellen levedygtighed SGC-7901 med behandlingen blev undersøgt. (B) Cellen levedygtighed MKN45 med behandlingen blev undersøgt. (C) Koncentrationen af ​​IL-17A i celledyrkningsmediet af SGC-7901 og MKN45 blev bestemt ved ELISA. ** P
< 0,01. (D) Udtrykket af IL-17RA og IL-23R i både MKN45 og SGC-7901. (E) Udtrykket af p-IkBa, IkBa og CyclinD1 i både MKN45 og SGC-7901.
Vi undersøgte den mulige mekanismer for sammenhængen mellem IL-17A og IL-23A. Koncentration af IL-17A i dyrkningsmediet blev bestemt, og der var ingen signifikant forskel, når GC-celler blev behandlet med IL-23A alene eller IL-23A plus T-lymfocytter. Men sekretionen af ​​IL-17A øges, når enten H. pylori
lysat eller makrofager blev tilsat (figur 5C). Aktivering af NF-KB-signalering blev også undersøgt, og blev påvist ekspressionen af ​​både IL-17RA og IL-23R i både SGC-7901 og MKN45 celler, relativt stærk ekspression af IL-17RA og næsten ingen ekspression af IL-23R blev identificeret (figur 5D). Phosphoryleret kBa og cyclinD1, produkter af NF-KB-signalering, blev begge steg i SGC-7901 og MKN45 celler sammen med øget forekomst af IL-17A (figur 5E). IL-23A blev udskilt fra både makrofager og GC celler og fremmes kræft spredning gennem IL-17A /IL-17RA /NF-KB-signalering.
Diskussion
GC er den fjerde mest almindelige kræftform og den anden hyppigste årsag til kræft -relaterede dødsfald på verdensplan. Blandt flere histologiske typer, er intestinal type GC ofte forbundet med H.pylori
infektion, og dens forløb er karakteriseret ved akut gastritis, kronisk gastritis, gastrisk atrofi, intestinal metaplasi og endelig dannelsen af ​​GC [10].
de præcise årsager til GC er ukendt, men en række faktorer kan øge risikoen for sygdommen, herunder køn, race, genetik, geografi, blodtype, fremskreden alder, familie historie, og H. pylori
infektion af maven. H. pylori
inficerer slimhinden i maven og forårsager kronisk betændelse og sår. De detaljerede molekylære veje er ansvarlige for stimulering af H. pylori
er stadig ikke helt kendt [14] - [16].
Flere undersøgelser har rapporteret en immun effektor molekyler af H. pylori
, såsom CagA . CagA fremmes ekspression af de proinflammatoriske chemokiner IL-8, CXC-kemokin ligand 2 (også kendt som makrofag-inflammatorisk protein) og det antimikrobielle peptid humane β-defensin-2 ved aktivering af NF-KB signalering [17]. Andre undersøgelser har vist, at CagA translokeres ind epitelceller ved at inducere høje niveauer af IL-8 inficeret med visse H. pylori Salg stammer, ledsaget af induktion af et inflammatorisk respons [16], [18], [19]. Ras-afhængige kinaser, ekstracellulært signal-reguleret kinase (ERK) 1 og ERK2, der også aktiveres af CagA-udløst tyrosinphosphorylering, hvilket fører til aktivering af transkriptionsfaktorer NF-KB, aktivator protein-1, og i sidste ende, IL-8-produktion ved værtsceller [9].
mekanisme forbundet Hp-infektion og Th17 respons blev ikke fuldt afsløret. Nogle af de cytokiner, såsom IL-1β og IL-21 blev rapporteret at være forbundet. Lee et al. afslørede, at vedvarende Hp-infektion kan inducere Hp-specifikke Th17 celler, snarere end andre immunceller, der er også blevet beskrevet til at udskille IL-17A. Desuden blev IL-1β også vedvarende forhøjet, og neutralisation af IL-1β reducerede Hp-specifikke IL-17A respons, hvilket antyder en funktionel forbindelse mellem IL-1β, og vedvarende Th17 respons [20]. Andre gruppe afslørede også, at IL-21 regulerer Th1 og Th17 effektor reaktioner under kronisk H. pylori infektion i en STAT1- og STAT3-afhængig måde, derfor spiller en stor rolle kontrollerende H. pylori infektion og gastritis [21].
Vi rapporteret, at IL-23A blev udskilt fra GC-celler og makrofager. Vi fandt, at serumniveauet af IL-23A var en indikator for dårlig prognose i GC patienter, og dets ekspression var relateret til tumorvolumen og H. pylori
infektion. Vores resultater viste også, at IL-23A havde nogen direkte virkning på spredning af kræftceller. Men det påvirke tumormikromiljøet ved at øge sekretion af IL-17A, som er kendetegnende cytokin af Th17 celler. Afslutningsvis fandt vi, at IL-23A kunne være en potentiel indeks og mål for diagnose og behandling af GC.
Konklusioner
Afslutningsvis denne undersøgelse viste, at høj ekspression af IL-23A er forbundet med GC. IL-23A kan inducere sekretion af IL-17A aktivere IL-17A /IL-17RA /NF-KB signalering i tumormikromiljøet. Serum IL-23A koncentration er en indikator for dårlig prognose i GC patienter og IL-23A vil være en potentiel indeks og mål for diagnose og behandling af GC.
Materialer og metoder
Patienter
Den foreliggende undersøgelse omfattede 141 patienter med GC, som gennemgik kirurgi 2008-2013 på Kunshan Folkets Hospital, Kunshan, Jiangsu og Kunshan Hospital Tilknyttet til Nanjing University of Chinese Medicine. Dokumenteret informeret samtykke til genekspression analyser af alle væv blev opnået fra alle patienter før kirurgi. Denne undersøgelse blev godkendt af den lokale etiske komité i Kunshan Folkets Hospital. Histologisk undertype ifølge Laurens klassifikation [22] blev bestemt efter en gennemgang af tumor sektioner ved to patologer. Opfølgende data var tilgængelige fra alle GC patienter, som blev vurderet ved 3, 6,12 måneder og derefter hver 6. måned i 5 år eller indtil døden.
Immunhistokemi
Alle væv blev fjernet og fikseret i 4% paraformaldehyd natten over ved 4 ° C, behandles derefter og snit på 5 um tykkelse. Sektioneret objektglas blev farvet ved immunhistokemi for IL-23A, IL-23R og IL-17A (Santa Cruz Biotechnology) efterfulgt af inkubering med sekundært antistof ved 37 ° C i 30 minutter og omsætning med DAB-reagens i 5-10 min. Glassene blev monteret med neutral tyggegummi til mikroskopisk undersøgelse. Celler med brune intracellulære granulat (cytoplasma eller nucleus) blev anset for at være positivt farvede.
ELISA
Koncentration af IL-23A og IL-17A i serum af GC patienter og raske kandidater blev målt under anvendelse af kommercielt tilgængelige sandwich ELISA kits ( eBioscience).
Stimulering af IL-23A in vitro Salg T-celler og makrofager blev isoleret fra perifere blod-mononukleære celler ved hjælp af isolation kit til T-celler og monocyt henholdsvis (Miltenyi Biotec). T-celler og makrofager samt GC cellelinier (MKN45 og SGC-7901 blev erhvervet fra ATCC) blev holdt in vitro
og stimuleret af Helicobacter pylori
lysat (NCTC 11637, CagA + og VacA +) og analyseret ved intracellulær cytokin-farvning . Til intracellulær cytokin-farvning blev T-celler stimuleres ved 37 ° C i 5 timer med en leukocyt, Activation Cocktail (BD Pharmingen). Endvidere blev T-celler, makrofager og GC cellelinjer farvet med overflademarkører, fikseret og permeabiliseret med IntraPre Reagent (Beckman Coulter), og endelig farvet med intracellulære markører. Data blev erhvervet på FACSVantage SE og analyseret med CellQuest software. Fluorokromkonjugerede mAb'er mod IL-23A blev erhvervet fra BD Pharmingen (kat. 562.468).
Flowcytometri Hus Til intracellulær cytokin-farvning blev celler stimuleret ved 37 ° C i 5 timer med en leukocyt Activation Cocktail (BD Pharmingen) . Celler blev derefter farvet med overflademarkører, fikseret og permeabiliseret med IntraPre Reagent (Beckman Coulter), og endelig farvet med intracellulære markører. Data blev erhvervet på FACSVantage SE og analyseret med CellQuest software. Fluorokromkonjugerede monoklonale antistoffer (MAB) mod IL-23A, tjente CD3 som markør for T-celler og CD14 tjener som markører for monocyt og makrofag blev købt fra BD Pharmingen.
MTS assay
Dyrkede celler blev udsået med en tæthed 6 × 10 3 celler /brønd i en 96-brønds plade og opretholdt med DMEM plus 10% føtalt kalveserum (Invitrogen). Cellelevedygtighed blev evalueret ved MTS-assay. CellTiter 96Aqueous One Solution Reagent (Promega) blev tilsat til hver brønd i overensstemmelse med producentens anvisninger, og pladerne blev ført tilbage til inkubatoren. Efter 4 timer blev cellelevedygtighed bestemt ved at måle absorbansen ved 490 nm ved anvendelse af en computerstyret plade-læser.
Western blot
Proteiner blev ekstraheret fra celler og kvantificeret under anvendelse af et protein assay (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Proteinprøver (30 ug) blev fraktioneret ved SDS-PAGE og overført til en nitrocellulosemembran. Immunoblot blev udført under anvendelse af antistoffer mod p-kBa, kBa, CyclinD1 og IL-17RA (Santa Cruz Biotechnology). Resultaterne blev visualiseret under anvendelse af et kemiluminescerende påvisningssystem (Pierce ECL-substrat western blot detektionssystemet; Thermo Scientific) og eksponeret for autoradiografi film (Kodak XAR-film)
Statistisk analyse
Resultaterne er udtrykt som middel ± SD af på. mindst tredobbelte forsøg. Sammenligninger mellem to grupper blev udført ved anvendelse af Mann-Whitney U
test. Sammenligningen af ​​IL-23A ekspression mellem forskellige kliniske karakteristika blev analyseret ved anvendelse af χ 2 test. Korrelationsanalysen mellem ekspression af IL-23A og IL-17A i GC væv blev udført ved anvendelse Spearman ikke-parametrisk relation analyse. Overlevelseskurver blev estimeret ved anvendelse af Kaplan-Meier produkt-grænse-metoden, og signifikante forskelle mellem overlevelseskurverne blev bestemt ved anvendelse af log-rank test. P
< 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant
Forkortelser
IL-23:.
Interleukin-23
GC:
mavekræft


IL-23R:
IL-23 receptor
IL-17RA:
IL-17-receptor-subunit A

NF-KB:
Nuclear faktor-KB
STAT4:
Signal transducer og aktivator af transkription 4
NK:
Natural killer
erklæringer
Tak
Denne undersøgelse blev støttet af Social Development Technology Projekter af Kunshan City, Kina (KS1255)
Authors '. originale indsendte filer til Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendte filer til billeder. 12935_2014_104_MOESM1_ESM.gif Forfatternes oprindelige fil til figur 1 12935_2014_104_MOESM2_ESM.gif Forfatternes oprindelige fil til figur 2 12935_2014_104_MOESM3_ESM.gif Forfatternes oprindelige fil til figur 3 12935_2014_104_MOESM4_ESM.gif Forfatternes oprindelige fil til figur 4 12935_2014_104_MOESM5_ESM.gif Forfatternes oprindelige fil til figur 5 konkurrerende interesser
forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende interesser.
forfattere bidrag
CL og WZ udtænkt og designet eksperimenterne. CL, YZ, JZ, YZ, QW og Hp udførte eksperimenterne. CL og WZ udført statistisk analyse af alle data. CL skrev papiret. Alle forfattere er enige med indholdet af manuskriptet og dette anbringende. Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• Statiner og risikoen for mavekræft i diabetespatienter
• Inddragelse af tumornekrosefaktor-α i opregulering af CXCR4 ekspression i gastrisk cancer fremkaldt af Helicobacter pylori