Interleukin-23A er forbundet med tumorvekst i Helicobacter-pylori-relaterte humane magekreft

Interleukin-23A er forbundet med tumorvekst i Helicobacter pylori-
-relaterte human magekreft
Abstract
Bakgrunn
interleukin (IL) -23 er en av de nylig identifiserte inflammatoriske cytokiner, og inflammasjon er også kjent for å være relatert til utviklingen av magekreft (GC). Rollen av IL-23 i magekreft, er imidlertid i stor grad ukjent. I den foreliggende studien undersøkte vi uttrykket og mulige rolle av IL-23A i human GC.
Metoder
ekspresjon av IL-23A og IL-17A i humane GC vev ble bestemt ved immunohistokjemi, og forholdet mellom IL-23A uttrykk og kliniske kjennetegn ved GC ble undersøkt. Serumkonsentrasjonen av IL-23A og IL-17A ble også testet ved hjelp av ELISA. Kilden og rolle IL-23A i GC ble studert in vitro
av flowcytometri, MTS (Owen reagens) analyse og Western blot.
Resultater
IL-23A, IL-23 reseptor (IL-23R) og IL-17A ble alle overuttrykt i humane vev GC, og nivået av IL-23A var godt korrelerte med IL-17A i GC vev, så vel som i pasientens serum. Makrofager og GC-celler var den viktigste kilden til IL-23A sekresjon ved stimulering av H. pylori
lysat. Videre fant vi at IL-23A fremmet spredning av GC cellelinjer via IL-17A /IL-17 reseptor antagonist (IL-17RA) /nukleær faktor-kB (NF-kB) signal-.
Konklusjoner
høy ekspresjon av IL-23A er forbundet med GC. IL-23A kan fremmes GC celler vekst ved å indusere utskillelsen av IL-17A i svulstens mikromiljø. Våre resultater tyder på at serumkonsentrasjonen av IL-23A er en god biomarkør av dårlig klinisk prognose i GC pasienter.
Nøkkelord
Interleukin-23A Interleukin-17A Nuclear faktor-kB Magekreft Bakgrunn
IL-23A er en subenhet av heterodimert cytokin, IL-23 ved sammenkobling med den andre subenhet, p40 (IL-12). Det er kjent at IL-23A blir uttrykt og utskilt av makrofager og dendrittiske celler. IL-23 kan aktivere signal transduser og aktivator av transkripsjon 4 (STAT4) til IL-23R fordelt på membranen av flere typer immunceller, deriblant T-celler, naturlige killer (NK) celler, monocytter og dendrittiske celler. Og IL-23 er med immunresponser for å identifisere fremmedstoffer og forsvare kroppen mot infeksjon og sykdom [1], [2].
IL-23A er involvert i den inflammatoriske respons ved å arbeide matriksmetalloprotease 9, økt angiogenese og reduserende CD8 + T-celler infiltrering [3], [4]. Ved å arbeide sammen med IL-6 og transformerende vekstfaktor-β1, kan IL-23 fremme differensieringen av CD4 + naive T-celler til Th17-celler, som er en av de vel akseptert T-hjelper-celleundergrupper [5] - [ ,,,0],7]. Th17 celler skiller proinflammatorisk cytokin IL-17A som kan indusere Th17 respons ved å stimulere produksjonen av andre proinflammatoriske molekyler slik som IL-1β, IL-6, tumor nekrose faktor-α (TNF-α) og kjemokiner, som resulterer i inflammasjon. Det er blitt rapportert at IL-17 var nært knyttet til GC [8], [9]. Et genom-wide forening studie har avdekket at -197G > En polymorfisme i posisjon -197 i IL-17-promoter-regionen betydelig økt risiko GC i den generelle befolkning [10], [11], mens økt ekspresjon av IL-17 ble funnet hos pasienter med GC. IL-17 er også involvert i utviklingen av GC ved å fremme angiogenese i tumoren mikromiljøet [12]. Videre kan vedvarende inflammasjon indusert delvis av IL-17 bidra til gastrisk mukosal patologi, for derved å øke risikoen for GC [9], [11], [13].
Sammenlignet med den i IL-17A, studiene vedrørende rollen til IL-23A i human GC er i stor grad mangler. I denne studien undersøkte vi uttrykket av IL-23A i GC, og den kliniske betydningen og mulig mekanisme var involvert.
Resultater
IL-23A, IL-23R og IL-17A er overdreven i menneskelig GC
for å undersøke uttrykket av IL-23A og de relaterte molekyler i menneskelig GC, ble 141 parafininnstøpte vev studert for uttrykket og distribusjon av IL-23A, IL-23R og IL-17A ved hjelp av immunhistokjemi. Først, observerte vi at IL-23A IL-23R og IL-17A var alle betydelig overuttrykt i human GC sammenlignet med normale kontroller. Selv om det var umulig å oppdage i de normale gastriske kjertler og svakt positivt med infiltrering av inflammatoriske celler, ble IL-23A detekteres ved et høyt nivå i infiltrerende inflammatoriske celler og kreftceller i kreftvev (figur 1A). IL-23R var utelukkende uttrykt i infiltrerende inflammatoriske celler i både kreft og normale vev, men ekspresjonsnivået og forholdet var mye høyere i kreftvev (figur 1B). IL-17A ble plassert hovedsakelig i infiltrert betennelsesceller i GC (figur 1C). Vi neste undersøkte sammenhengen mellom ekspresjon av IL-23A og andre kliniske egenskaper, og fant at nivået av IL-23A er forbundet med Helicobacter pylori-infeksjon og
tumorbelastning (tabell 1). Figur 1 Ekspresjon og fordeling av IL-23A IL-23R og IL-17A i human GC og normal gastrisk vev. (A) Ekspresjon og fordeling av IL-23A ble analysert ved hjelp av immunhistokjemi i human- GC og normal gastrisk vev. Gjennomsnittlig integrert optisk tetthet ble oppnådd ved å analysere fem synsfelt for hvert lysbilde evaluert av Image-Pro Plus versjon 5.0. (B) Ekspresjon, fordeling og gjennomsnittlig integrert optisk tetthet av IL-23R. (C) Expression, fordeling og gjennomsnittlig integrert optisk tetthet av IL-17A. ** P
< 0.01.
Tabell 1 Kliniske karakteristika 141 GC pasientenes
Pasient demografi
IL-23 positive
IL-23 negative
Pvaluea

Age, y (range)
59 (32-85)
ND
ND
Sex
0.730
Mann fra 89
45
44
Kvinne
52
28
24 On Main plassering
0,613
U
74
36
38
ML
67
29
38
Størrelse, cm (range)
0.028b
> 5
97
74
23
< 5
44
25
19
Dybde invasjon
0,519
T1 /T2
88
24
14
T3 /T4
53
29
24
Lauren klassifisering
0,372
Tarm
94
45
49
Diffuse
47
27
20
lymfeknute metastase
0,401
Positive
69
37
32
Negativ
72
33
39
h.pylori
infeksjon
< 0.0001c
Positiv
84
74
10
Negativ
57
28
29
Stage
0,215
jeg
32
16
16
II
45
23
22
III
43
20
23
IV
21
10
11
ND = ikke bestemt
aχ2 test
BP
<..; 0,05
cP
<.; 0,01.
IL-23A er korrelert med IL-17A sekresjon i humant GC
Nyere studier har vist at sekresjon av IL-23A var en av de viktigste faktorene i normal Th17 celledifferensiering. Vi spurte om IL-23A ble også assosiert med Th17 celle i GC. Faktisk, forhøyet IL-23A uttrykk sammenfaller med økt uttrykk av IL-17A (figur 2A). For å utforske videre forholdet mellom dem, kvantifiseres vi uttrykket av både cytokiner innenfor IHC farging av GC pasienter og viste at IL-23A uttrykk var signifikant korrelert med IL-17A uttrykk gjennom en lineær korrelasjon test (r 2 = 0,7148, P
< 0,001) (figur 2B). Figur 2 IL-23A er korrelert med IL-17A sekresjon i humant GC. (A) Sammenhengen mellom IL-23A og IL-17A i kreftvevet GC pasienter som ble undersøkt ved Immunhistokjemi. (B) Korrelasjonen mellom IL-23A og IL-17A innenfor IHC farging av GC pasienter ble åpnet av lineær korrelasjon test.
Serum IL-23A-konsentrasjonen er en indikator på dårlig prognose i GC pasienter
Både IL-23A og IL-17A kan skilles ut i blodet, og derfor vi antatt at nivået av IL-23A og IL-17A i serum fra GC pasienter eller friske kontroller kan bestemmes ved hjelp av ELISA som biomarkører. Vi først detektert nivået av både cytokiner som 213 ± 75 pg /ml for IL-23A og 286 ± 101 pg /ml for IL-17A i 50 friske individer (figur 3A og B). Serumnivået av begge cytokiner ble økt betydelig i GC pasienter som 517 ± 247 pg /ml for IL-23A og 422 ± 284 pg /ml for IL-17A (figur 3A og B). Og den lineære korrelasjonen av serumkonsentrasjon mellom IL-23A og IL-17A ble også observert i GC-pasienter (R '> 2 = 0,5841, P
< 0,001) (figur 3C). Terskelen av friske kontroller ble oppnådd i henhold til 95% konfidensintervall (CI), som var 285 pg /ml for IL-23A. I henhold til terskelen, ble pasientene delt i GC IL-23A høy og IL-23A lave undergrupper. Å sammenligne deres kliniske prognose mellom de to undergrupper av GC pasienter, ble serum IL-23A uttrykk undersøkt ved hjelp av Kaplan-Meier metoden. Vi fant ut at IL-23A nivå (> 285 pg /ml) ble signifikant assosiert med kortere total overlevelse (OS) [P
= 0,027, hazard ratio (HR) 2,246, 95% KI: 1,212 til 4,160] (Figur 3D). Figur 3 Serum IL-23A-konsentrasjonen som en indikator på dårlig prognose i GC pasienter. (A) Serum konsentrasjon av IL-23A i GC-pasienter og friske kontroller. (B) serumkonsentrasjon av IL-17A i GC-pasienter og friske kontroller. (C) Sammenheng mellom IL-23A og IL-17A i serum fra pasienter GC ble åpnet av lineær korrelasjon test. (D) De Kaplan-Meier kurver for OS av GC pasienter med forskjellig uttrykk for IL-23A.
IL-23A kan skilles ut av makrofager og GC-celler
Immunhistokjemisk farging viste at IL-23A ble rikelig uttrykt i flere celletyper, inkludert T-celler, makrofager og GC-celler (Figur 1a). For å undersøke den eksakte opprinnelsen til IL-23A, vist vi IL-23A uttrykk i en vitro
stimulering systemet med H. pylori
lysat som cytokin-induserende agent, som er basert på en tidligere observasjon at H. pylori
var en robust inducer for sekresjon av IL-23A. I T-celler, ble IL-23A sekresjon økte svakt ved stimulering med H. pylori
lysat (figur 4A). I makrofager, antallet av IL-23A-positive celler økte fra 1,15 ± 0,18% til 13,21 ± 6,21% (figur 4B). Mens i GC cellelinjer, IL-23A-positive SGC-7901 celler økte fra 2,64 ± 1,12% til 13,11 ± 3,12%, og IL-23A positive MKN45 celler økte fra 1,16 ± 0,46% til 17,55 ± 5,42% (Figur 4C). Overall, makrofager og GC-celler viste H. pylori
lysat-indusert stimulering av IL-23A sekresjon (figur 4D). Figur 4 IL-23A skilles ut av makrofager og GC-celler. (A) Ekspresjon av IL-23A og da celleoverflate-CD3 ble påvist ved flowcytometri i T-celler med annen behandling. (B) Ekspresjon av IL-23A og da celleoverflate-CD14 ble påvist ved flowcytometri i makrofager med annen behandling. (C) Ekspresjon av IL-23A ble påvist ved FCS i SGC-7901 og MKN45 celler behandlet med H. pylori
lysat. (D) Forholdet mellom IL-23A-positive celler i T-celler, makrofager og GC-cellelinjer.
IL-23A fremmer overlevelse av GC-cellene gjennom IL-17A /IL-17RA /nukleær faktor (NF) -κB signale
for å undersøke effekten av IL-23A på tumorvekst, ble en co-kultur assay in vitro
utnyttet. Først fant vi at IL-23A hadde ingen signifikant effekt på celleproliferasjon når GC linjene SGC-7901 og MKN45 ble behandlet med humant rekombinant IL-23A direkte. Vi neste fant ut at det var ingen signifikant effekt på tumorceller SGC-7901 eller MKN45 vekst co-dyrket med naive T-lymfocytter i nærvær av IL-23A. Imidlertid ble den vesentlige celle-vekstfremmende virkning sees når enten makrofager eller H. pylori
lysat ble tilsatt til ko-kultur-system. Når begge makrofager og H. pylori
ble lagt, var effekten synergis (figur 5A og B). Figur 5 IL-23A fremmer overlevelse av GC cellelinjer gjennom IL-17A /IL-17RA /NF-kB signalering. (A) Et cellelevedyktighet SGC-7901 med behandling ble undersøkt. (B) Et cellelevedyktighet MKN45 med behandling ble undersøkt. (C) Konsentrasjonen av IL-17A i cellekulturmediet av SGC-7901 og MKN45 ble bestemt ved hjelp av ELISA. ** P
< 0,01. (D) Uttrykket av IL-17RA og IL-23R i både MKN45 og SGC-7901. (E) Uttrykket p-IkBa, IkBa og CyclinD1 både MKN45 og SGC-7901.
Vi undersøkte mulig mekanisme som underbygger sammenhengen mellom IL-17A og IL-23A. Konsentrasjon av IL-17A i kulturmediet ble bestemt, og det var ingen signifikant forskjell når GC-celler ble behandlet med IL-23A alene eller IL-23A pluss T-lymfocytter. Imidlertid sekresjonen av IL-17A økes når enten H. pylori
lysat eller makrofager ble tilsatt (figur 5C). Aktivering av NF-kB signale ble også undersøkt, og ekspresjon av både IL-17RA og IL-23R ble påvist i både SGC-7901 og MKN45 celler, forholdsvis sterk ekspresjon av IL-17RA og nesten ingen ekspresjon av IL-23R ble identifisert (figur 5D). Fosforylert IκBα og cyclinD1, produkter av NF-kB signalering, ble begge økt i SGC-7901 og MKN45 celler sammen med økt tilstedeværelse av IL-17A (figur 5E). IL-23A ble utskilt fra både makrofager og GC-celler og fremmet kreft spredning gjennom IL-17A /IL-17RA /NF-kB signalering.
Diskusjon
GC er den fjerde vanligste kreftformen og den nest største årsaken til kreft -relaterte død på verdensbasis. Blant flere histologiske typer, er intestinal-type GC vanligvis forbindes med H.pylori
infeksjon, og dets kurs er karakterisert ved akutt gastritt, kronisk gastritt, gastrisk atrofi, intestinal metaplasi, og til slutt dannelse av GC [10].
de eksakte årsakene til GC er ukjent, men en rekke faktorer kan øke risikoen for sykdommen, blant annet kjønn, rase, genetikk, geografi, blodtype, høy alder, familiehistorie, og h.pylori
infeksjon magen. H. pylori
infiserer slimhinnen i magen og forårsaker kroniske betennelser og magesår. De detaljerte molekylære stier ansvarlig for stimulering av H. pylori
er fortsatt ikke helt kjent [14] -. [16]
Flere studier har rapportert en immuneffektormekanismer molekyler av H. pylori
som CagA . CagA fremmet ekspresjon av de proinflammatoriske kjemokiner IL-8, CXC-kjemokin-ligand 2 (også kjent som makrofag inflammatoriske proteiner) og det antimikrobielle peptidet humane β-defensin-2 til og aktivering av NF-kB signalering [17]. Andre studier har vist at CagA translokert inn i epitelceller ved å indusere høye nivåer av IL-8 infisert med visse H. pylori
stammer, fulgt av induksjon av en inflammatorisk respons [16], [18], [19]. Ras-avhengige kinaser, ekstracellulære signalregulerte kinase (ERK) 1 og ERK2, blir også aktivert av CagA-utløste tyrosinfosforylering, som fører til aktivering av transkripsjonsfaktorer NF-kB, aktivator protein-1, og til slutt, IL-8 produksjon av vertsceller [9].
mekanisme knyttet Hp-infeksjon og Th17 respons ble ikke fullt avslørt. Noen av cytokiner slik som IL-1β og IL-21 ble rapportert å være assosiert. Lee et al. avslørte at vedvarende Hp infeksjon kan indusere Hp-spesifikke Th17 celler, snarere enn andre immunceller som har også blitt beskrevet å utskille IL-17A. Videre IL-1β ble også vedvarende forhøyet, og nøytralisering av IL-1β redusert Hp-spesifikke IL-17A reaksjon, noe som tyder på en funksjonell sammenheng mellom IL-1β og den vedvarende Th17 reaksjon [20]. Andre gruppe også avdekket at IL-21 regulerer Th1 og Th17 effektor svar i løpet av kronisk H. pylori infeksjon i en STAT1- og STAT3 avhengig måte, derfor spiller en viktig rolle å kontrollere H. pylori infeksjon og gastritt [21].
Vi rapportert at IL-23A ble utskilt fra GC-celler og makrofager. Vi har funnet at serumnivået av IL-23A var en indikator på dårlig prognose i GC pasienter, og dens ekspresjon ble relatert til tumorvolum og H.pylori
infeksjon. Våre resultater viste også at IL-23A hadde ingen direkte effekt på proliferasjonen av kreftceller. Det imidlertid påvirke svulsten mikromiljøet ved å øke sekresjon av IL-17A, som er et kjennetegn cytokin av Th17 celler. Som konklusjon, har vi funnet at IL-23A kan være en potensiell indeks og mål for diagnose og behandling av GC.
Konklusjoner
Som konklusjon, denne studien viste at den høye ekspresjon av IL-23A er forbundet med GC. IL-23A kan indusere sekresjon av IL-17A aktiverer IL-17A /IL-17RA /NF-kB signalering i tumormikromiljøet. Serum IL-23A-konsentrasjonen er en indikator på dårlig prognose i GC pasienter og IL-23A vil være en potensiell indeks og mål for diagnose og behandling av GC.
Materialer og metoder Pasienter

Den foreliggende studien inkluderte 141 pasienter med GC som gjennomgikk kirurgi 2008-2013 på Kunshan Folkets sykehus, Kunshan, Jiangsu og Kunshan Hospital Affiliated til Nanjing University of Chinese Medicine. Dokumentert informert samtykke for genekspresjon analyser av alle vev ble innhentet fra alle pasienter før operasjonen. Denne studien ble godkjent av den lokale etikkkomité Kunshan Folkets sykehus. Histologisk subtype ifølge Lauren klassifisering [22] ble bestemt etter en gjennomgang av tumorsnitt av to patologer. Oppfølgingsdata var tilgjengelig fra alle GC pasienter som ble vurdert til 3, 6,12 måneder og deretter hver 6. måned i 5 år eller inntil døden.
Immunohistochemistry
Alle vev ble fjernet og fiksert i 4% paraformaldehyde over natten ved 4 ° C, deretter behandlet og i snitt på 5 um tykkelse. Snittede objektglass ble farget av immunhistokjemi for IL-23A IL-23R og IL-17A (Santa Cruz Biotechnology), etterfulgt av inkubasjon med sekundært antistoff ved 37 ° C i 30 minutter og omsetning med DAB-reagens i 5-10 min. Platene ble montert med nøytral tyggis for mikroskopisk undersøkelse. Celler med brune intracellulære granulater (cytoplasma eller nucleus) ble ansett for å være positivt farget.
ELISA
Konsentrasjon av IL-23A og IL-17A i serum av GC pasienter og friske kandidater ble målt ved bruk av kommersielt tilgjengelige sandwich-ELISA kits ( eBioscience).
Stimulering av IL-23A in vitro
T-celler og makrofagen ble isolert fra perifere mononukleære blodceller ved hjelp av isolasjonskit til T-celler og monocytter henholdsvis (Miltenyi Biotec). T-celler og makrofager pluss GC cellelinjer (MKN45 og SGC-7901 ble kjøpt fra ATCC) ble opprettholdt in vitro Hotell og stimulert av Helicobacter pylori
lysat (NCTC 11637, CagA + og Vaca +) og analysert ved intracellulær cytokin farging . For intracellulære cytokin-farging, ble T-celler stimulert ved 37 ° C i 5 timer med en Leukocytt aktiverings Cocktail (BD Pharmingen). Videre ble T-celler, makrofager og GC-cellelinjer farget med overflatemarkører, faste, og permeabilisert med IntraPre Reagens (Beckman Coulter), og til slutt farget med intracellulære markører. Data ble ervervet på FACSVantage SE og analysert med Cellquest programvare. Fluorokromkonjugerte konjugert mAb mot IL-23A ble innkjøpt fra BD Pharmingen (Cat. 562 468).
Flowcytometri
For intracellulære cytokin farging ble cellene stimulert ved 37 ° C i 5 timer med en Leukocytt aktiverings Cocktail (BD Pharmingen) . Cellene ble deretter farget med overflatemarkører, faste, og permeabilisert med IntraPre Reagens (Beckman Coulter), og til slutt farget med intracellulære markører. Data ble ervervet på FACSVantage SE og analysert med Cellquest programvare. Fluorokromkonjugerte konjugerte monoklonale antistoffer (mAbs) mot IL-23A, CD3 fungert som markør for T-celler og CD14 fungere som markører for monocytter og makrofagen ble kjøpt fra BD Pharmingen.
MTS analyse
dyrkede celler ble sådd ut i en tetthet av 6 x 10 3 celler /brønn i en 96-brønns plate og vedlikeholdes med DMEM pluss 10% føtalt kalveserum (Invitrogen). Cellelevedyktigheten ble evaluert ved MTS-analyse. CellTiter 96Aqueous En løsning Reagens (Promega) ble tilsatt til hver brønn i henhold til produsentens instruksjoner, og platene ble returnert til inkubatoren. Etter 4 timer ble cellelevedyktigheten bestemt ved å måle absorbansen ved 490 nm ved anvendelse av en datastyrt plateleser.
Western blot
Proteiner ble ekstrahert fra celler og kvantifisert ved anvendelse av en proteinanalyse (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Proteinprøver (30 ug) ble fraksjonert ved hjelp av SDS-PAGE og overført til en nitrocellulosemembran. Immunoblot ble utført ved hjelp av antistoffer mot p-IκBα, IκBα, CyclinD1 og IL-17RA (Santa Cruz Biotechnology). Resultatene ble visualisert ved anvendelse av en kjemiluminescens påvisningssystem (ECL Pierce substrat Western Blot påvisningssystem; Thermo Scientific) og utsatt for autoradiografi film (Kodak XAR film)
Statistisk analyse
Resultatene er uttrykt som gjennomsnitt ± SD av ved. minst tredoble eksperimenter. Sammenligninger mellom to grupper ble utført ved anvendelse av Mann-Whitney U-test
. Sammenligningen av IL-23A uttrykk mellom forskjellige kliniske karakteristika ble analysert ved anvendelse av χ 2-test. Korrelasjonsanalyse mellom ekspresjon av IL-23A og IL-17A i GC vev ble utført ved anvendelse av Spearman ikke-parametrisk analyse forhold. Overlevelseskurver ble beregnet ved hjelp av Kaplan-Meier produkt-limit metoden, og betydelige forskjeller mellom overlevelseskurver ble bestemt ved bruk av log-rank test. P
< 0,05 ble ansett som statistisk signifikant
Forkortelser
IL-23.
Interleukin-23
GC:
Magekreft


IL-23R:
IL-23 reseptor
IL-17RA:
IL-17 reseptor subenheten A

NF-kB:
Nuclear faktor-kB
STAT4:
Signal svinger og aktivator av transkripsjon 4
NK:
Natural drapsmann
Erklæringer
Takk
Denne studien ble støttet av Social Development Technology Prosjekter av Kunshan City, Kina (KS1255)
Forfattere '. opprinnelige innsendte filer for Images Nedenfor er linkene til forfatternes originale innsendte filer for bilder. 12935_2014_104_MOESM1_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 1 12935_2014_104_MOESM2_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 2 12935_2014_104_MOESM3_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 3 12935_2014_104_MOESM4_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 4 12935_2014_104_MOESM5_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 5 konkurrerende interesser
forfatterne hevder at de ikke har noen konkurrerende interesser.
forfatternes bidrag
CL og WZ unnfanget og designet forsøkene. CL, YZ, JZ, YZ, QW og Hp utførte eksperimentene. CL og WZ utføres statistisk analyse av alle data. CL skrev avisen. Alle forfatterne er i overensstemmelse med innholdet i manuskriptet, og dette brevet. Alle forfattere lese og godkjent den endelige manuskriptet.

• Statiner og risikoen for magekreft i diabetes patients
• Involvering av tumornekrosefaktor-α i oppregulering av CXCR4 uttrykk i magekreft forårsaket av Helicobacter pylori