HER2 izraz in ustrezne clinicopathological funkcije v želodcu in gastroezofagealno križišča adenokarcinoma v kitajskega prebivalstva

HER2 izraz in ustrezne clinicopathological funkcije v želodcu in gastroezofagealno križišča adenokarcinoma v kitajskega prebivalstva
Abstract
Ozadje
Z merili različni imunohistokemija točkovanja in skupin bolnikov, stopnje HER2-pozitivnosti v raka želodca (GC) in gastroezofagealnem prehodu ( gej) adenokarcinom so poročali o širokem razponu. Pred kratkim standardizirana merila točkovanja za GC in gej raka je bila ustanovljena, in priporočil. V tej študiji so bili proučeni pogostost HER2 izražanja ter odnos med HER2 izražanja in clinicopathological funkcije v veliki kohorti kitajske GC in bolnikov z rakom gej.
Metode
A skupaj 1463 bolnikov, vključno z 929 primarne GK in 534 primarni gej adenokarcinomov, je bila naknadno analizirali glede čezmernega izražanja HER2 jih imunohistokemično (IHC). Fluorescence in situ
hibridizacije analizo (FISH) je bil uporabljen v 308 GK in gej primerih adenokarcinom za oceno HER2
amplifikacijo gena.
Rezultati
čezmernega izražanja HER2 (3+) je bila odkrita v 9,8% karcinomov in pogosteje pojavlja v primerih raka gej, v črevesni tipa, in v vodnjaku ali zmerno razlikuje vrste (P
= 0,003, 0,000 in 0,000, v tem zaporedju). HER2 dvoumni (2+) je bila odkrita v 14,4% primerov. Kot je za 308 analiziranih primerih, ki jih FISH, 39 (40, 97,5%), IHK 3+ primerih, 11 (od 38, 28,9%) IHC 2+ primerih, in 3 (230, 1,3%) IHC 1 + /0 primeri pokazala HER2
amplifikacijo gena. Visoka stopnja skladnost (98,5%), med IHC in FISH bila dokazana.
Sklepi
Približno 10% kitajskih bolnikih s primarno GC in gej adenokarcinom so HER2 pozitivni na IHC. Čezmerno izražanje HER2 je bila povezana z gej stran, črevesne podvrste raka, in dobro ali zmerno diferenciranih karcinomov
Virtualni drsi
Virtualni drsnik (e) za ta članek lahko najdete tukaj. Http: //. Www diagnosticpathol vili. diagnomx. eu /vs /1935951199941072.
Ključne besede
HER2 rak želodca gastroezofagealnem prehodu adenokarcinom chineses Clinicopathological ima Ozadje
raka želodca (GC) je četrta najpogosteje diagnosticiran rak in drugi najpogostejši vzrok smrti zaradi raka na svetu [1]. Predlagano je bilo, da je stopnja pojavnosti gastroezofagealni stičišča (gej) adenokarcinom v zadnjih letih [2, 3] povečala. Kljub nekaterim napredkom pri preprečevanju in zdravljenju raka želodca, 5-letno preživetje ostaja na ravni okoli 20% v večini delov sveta. HER2 je zdaj priznana kot ključni dejavnik pri razvoju nekaterih trdnih človeških tumorjev, predvsem pri raku dojke. HER2
pomnoževanje genov in beljakovin čezmernim, ki se pojavi pri 20% do 25% bolnikov z rakom dojke, ki so bili priznani kot prognostičnih in predvidevanjem označevalcev za zdravljenje [4]. je bila ustanovljena več metod za odkrivanje preučiti HER2
stanje genov in proteinov izražanje [5-8]. Trastuzumab, rekombinantno monoklonsko protitelo ciljanje HER2 proteina, ki se sedaj uporablja ne le v metastaznih primerov raka na dojki, pa tudi za lokalizirano primerih kot adjuvantno terapijo [9, 10]. Nedavna faze III randomizirana študija (toga) je pokazala, da kombinirano zdravljenje s trastuzumabom in kemoterapije bistveno izboljšalo preživetje pri bolnikih z napredovalim PK ali raka gej z čezmernega izražanja HER2 [11]. Tako je trastuzumab nedavno odobren za zdravljenje metastatskih adenokarcinoma želodca in gej v številnih državah [12-17].
Čeprav so številne študije že ocenili statusa HER2 v GC, so kohorte bolnikov in merila točkovanja spreminjajo, zaradi česar neskladja v stopnjah HER2-pozitivnosti segajo od 4% do 53%, s srednjo stopnjo 18% [18]. Študija Toga razvila novo vrsto meril IHC točkovanje na podlagi študije Hofmann et al. [19] in ugotovil, HER2 pozitivnih (opredeljeno kot IHK 3+ ali IHC 2 + /FISH +) tumorjev na 16% metastatskih primerov GC. Učinkovitost trastuzumab za zdravljenje metastatskega GC s čezmernega izražanja HER2 dokazana v študiji Toga je tudi obetaven za odstranljivega raka želodca HER2 pozitivno. Vendar pa je bilo opravljenih le nekaj študij, ki bi preučila pogostost HER2-pozitivnih tumorjev z novimi merili iz odstranljivega rakom želodca [20, 21] določene, še posebej v veliki kitajski kohorte. V tej študiji, IHC analiza na podlagi standardiziranih meril točkovanja je bila uporabljena za oceno pojavnosti HER2-pozitivnosti v primarni odstranjenimi GC in vzorcev raka gej v C9pt >? Razmerje med čezmernega izražanja HER2 in gena ojačanje bila obravnavana tudi v GC in gej . adenokarcinomom
Metode
Vzorci
A skupaj 1.463 bolnikov s primarno PK ali gej adenokarcinoma, ki so prejeli kurativno operacijo (brez zgodovine neoadjuvantno kemoterapijo) v Cancer Institute & Hospital, kitajske akademije medicinskih znanosti (CICAMS), Peking, Kitajska, od avgusta 2009 do februarja 2012, je bila vključena v retrospektivni študiji. Vsi vzorci tumorja so bile določene v 10% nevtralnem zastalega formalina za 24-48 ur in vgrajeni v parafin in rutinsko diagnosticirali na oddelku za patologijo, CICAMS, Peking. Protokol študije je odobril revizijski odbor institucionalno (IRB). The bolnikov zdravstvene kartoteke so bili pregledani, da dobimo bolnikov clinicopathological parametre, vključno starost ob diagnozi, spola, lokacije tumorja, histološki razvrščanje in patološko fazi TNM. Histološka klasifikacija je bila določena v skladu s klasifikacijo Svetovne zdravstvene organizacije (WHO) in razvrščanja Lauren.
Imunohistokemija
Automated IHC smo izvedli na 4-mikrometrov debelih odseke z uporabo avtomatskega slide Stainer bo merilo XT Ventana (Ventana Medical Systems , Tucson, AZ, ZDA), v skladu z navodili proizvajalca, za Ventana POTRJUJEM ™ HER2 /neu (4B5) Rabbit monoklonskih Primarni protitelesa. HER2 IHC je dosegel s pomočjo sistema točkovanja, ki ga Hofmann et al predlagano. [19] v Toga kohorti raka želodca (ocena toga) in Ruschoff et al. [22], kot sledi: 0, brez obarvanje ali membranskih reaktivnosti < 10% tumorskih celic; 1+, šibek /komaj zaznaven membranska reaktivnost v ≥ 10% tumorskih celic (celice so reaktivne le del njihove membrane); 2+, šibko do zmerno popolno, basolateral ali stransko membranskih reaktivnost v ≥ 10% tumorskih celic; in 3+, so se šteje za popolno, basolateral ali lateralne membranska reaktivnost močne intenzivnosti ≥10% tumorskih celic.
Vzorci točkovanja IHC 0 ali IHC 1+ negativna čezmernega izražanja HER2, medtem vzorcev točkovanja IHK 3+ so bili ocenjeni kot pozitivni za čezmernega izražanja HER2. Vzorci točkovanja IHC 2+, so bile obravnavane dvoumen za čezmernega izražanja HER2.
Fluorescence in situ
hibridizacija
fluorescence in situ
hibridizacije je (FISH) analiza, izvedena s sondo kit in postopkov PathVysion HER2 DNK (Vysis /Abbott, Abbott Park, IL, USA). Komplet vsebuje dva-fluorokromnega označene sonde DNA, LSI HER2 (označene z SpectrumOrange) in CEP17 (kromosom 17 naštevanje sonda, označeni z SpectrumGreen). Predhodna obdelava je bila izvedena z Parafinski predobdelavo Kit (VysisAbbott). HER2 signali in CEP17 signali 20 jeder invazivnih tumorskih celic v dveh različnih področjih so bili prešteti uporabo Zeiss AxioImager M2 epifluorescenčnim mikroskopom (Carl Zeiss, Oberkochen, Nemčija), opremljenega z x ciljem 100 Potopitev v olje in 4 ', 6'-diamidino -2-phenylindole (DAPI) /Spectrum Green /Orange enojne in trojne pasovni filtri. HER2 /kromosoma 17 razmerja bile razlagajo takole: a HER2 /CEP17 razmerje višje od 2,2 bil definiran kot pomnoževanje HER2
gena, razmerje <medtem, 1,8 bil definiran kot ne pomnoževanje HER2
gena. Ko je bilo razmerje med 1,8 in 2,2, preštejemo signali v naslednjih 20 jedra in določimo razmerje HER2 /CEP17 v skupno 40 jeder. Ko je bilo razmerje ≥2.0, je definirana kot pomnoževanje HER2
gena; sicer pa je bil opredeljen kot brez ojačitve HER2
gena.
Statistična analiza
Statistična analiza je bila opravljena s pomočjo hi-kvadrat test za analizo povezave med statusa HER2 in clinicopathological parametrov. U D
vrednost manj kot 0,05 je zdelo pomembno. Podatke smo analizirali s pomočjo statističnega programa programske opreme SPSS za Microsoft Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, ZDA).
Rezultati
čezmernega izražanja HER2 in clinicopathological značilnosti
skupno 1.463 bolnikov, je bila ocenjena z analizo IHC. clinicopathological značilnostmi bolnikov, so navedeni v tabeli 1. Njihova povprečna starost je bila 58 let (razpon od 20 do 82 let), z moško prevlado (75,5%). Od vseh bolnikov je bilo 650 primerov (44,4%) iz črevesne vrsti po razvrstitvi Lauren, 564 primerih (38,6%) kot difuzne tipa, in 249 primerov (17%) mešanega tipa. V zvezi z lokacijo tumorja, so bili približno dve tretjini tumorjev primarni želodčni rak (63,5%), in ena tretjina je bila primarna gej adenokarcinomi (36,5%). Tumorji so slabo diferencirane v 73,1%, zmerno diferenciran v 25,2%, in dobro diferencirani na 1,7%. Na splošno so bili pri večini bolnikov pri patološko fazi T3 (73,4%), z 14,1%, 10% in 2,5% v stadiju T1, T2 in T4 oz. V zvezi s patološkim fazo N, je bilo približno enako porazdelitev bolnikov po N0, N1, N2 ali N3 stopnjah (28,1%, 16,1%, 20,9%, 34,9%, v tem zaporedju). Večina bolnikov (97,7%) ni imela razdalje metastases.Table 1 primerjalno med statusa HER2 izražanja in clinicopathological parametrov
Skupna

HER2
HER2-

HER2-

Čezmerno
dvoumni
Negative
vrednost P
patološki funkcijo
n = 1463
n = 143 (%)
n = 211 (%)
n = 1109 (%)
Starost ob diagnozi
0,102
≥60 let
683
80 (11,7)
108 (15,8)
495 (72,5)
< 60 let
780
63 (8.1)
103 (13,2)
614 (78,7)
Sex
0.344
Moški
1104
109 (9,9)
171 (15,5)
824 (74,6)
ženski
359
34 (9,5)
40 (11,1)
285 (79,4)
Tumor lokacija
0,003
GC
929
65 (7,0)
121 (13.0)
743 (80,0)
gej
534
78 (14,6)
90 (16,9)
366 (68.5)
tumorja podtipa
(klasifikacija Lauren )
0.000
Črevesne
650
109 (16,8)
111 (17,1)
430 (66,2)
razpršenih
564
13 (2.3)
63 (11,2)
488 (86,5)
Mešani
249
21 (8,4)
37 (14,9)
191 (76,7)
tumorje diferenciacijo
0.000
No
25
4 (16)
9 (36)
12 (48)
Zmerno
369
74 (20,1)
70 ( 19.0)
225 (61,0)
Slabo
1069
65 (6.1)
132 (12,3)
872 (81,6)
pT stanja
0,053
PT1
206
16 (7,8)
33 (16,0)
157 (76,2)
PT2
147
23 (15,6)
28 (19,0)
96 (65,3)
PT3
1074
102 (9,5)
145 (13,5)
827 (77,0)
PT4
36
2 (5.6)
5 (13,9)
29 (80,6)
stanje PN
0,074
pN0
411
39 (9,5)
66 (16,1)
306 (74,5 )
pN1
235
27 (11,5)
42 (17,9)
166 (70.6)
pN2
306
20 (6.5)
42 ( 13.7)
244 (79,7)
pN3
511
57 (11,2)
61 (11,9)
393 (76,9)
AM Status
0.571
pM0
1429
140 (9.8)
119 (8.3)
1080 (75,6)
PM1
34
3 (8,8)
2 (5.9)
29 (85,3)
pTNM faze
0,327
IA
162
14 (8,6)
29 (17,9)
119 (73,5)
IB
93
8 (8.6)
17 (18,3)
68 (73,1)
IIA
201
25 (12,4)
33 (16,4)
143 (71,1 )
IIB
230
25 (10,9)
34 (14,8)
171 (74,3)
IIIA
264
15 (5.7)
37 ( 14.8)
212 (80,3)
IIIB
455
51 (11,2)
56 (12,3)
348 (76,5)
IIIC
24
2 (8.3)
3 (12,5)
19 (79,2)
IV
34
3 (8,8)
2 (5.9)
29 (85,3)
Of na 1463 bolnikov, je bilo 143 (9,8%) bolnikov dosegel kot čezmernega izražanja HER2 (3+), medtem ko je bilo 211 (14,4%) in 1109 (1463, 75,8%), dvoumni in negativna oz. Tabela 1 povzema stanje HER2 izraz po podskupinah. HER2 je prekomerno (rezultat 3+) na 7,0% (65/929) primerov GC in 14,6% (78/534) primerov adenokarcinoma gej (slika 1A). Dvoumen izraz (2+) za HER2 proteina so opazili pri 13,0% (121/929) primerov GC in 16,9% (90/534) primerov gej adenokarcinom (slika 1B). HER2 je bil negativen (1 + /0) na 80,0% (743/929) primerov GC in 68,5% (366/534) z gej adenokarcinom vzorcev (slika 1C in D). Občutne razlike v čezmernega izražanja HER2 je bilo med GK in gej adenokarcinome (7,0% v primerjavi z 14,6%, P
< 0,05). Čezmerno izražanje HER2 je bilo povezano s karcinomom na črevesno tipa po klasifikaciji Lauren (P
< 0,001): 16,8% v črevesju vs 2,3 /8,4% v razpršeni /raka mešanega tipa. Čezmerno izražanje HER2 je bilo povezano tudi z dobro ali zmerno diferenciranimi karcinomi po klasifikaciji Svetovne zdravstvene organizacije. Nobene povezave opazili med HER2 prekomerno in ne prekomerno primerov glede na starost, spol, pT, N, M dejavniki, ali patološkega fazi TNM. Slika 1 Reprezentativni primeri IHC barvanjem in analize FISH v GC in gej adenokarcinom. A. HER2 IHC barvanja kaže popolno, basolateral ali bočno membranskih reaktivnost močne intenzivnosti (3+) v tumorskih celicah (originalni povečavi × 40). B. HER2 IHC barvanja kaže šibko do zmerno popolno, basolateral ali stransko membranskih reaktivnost (2+) v tumorskih celicah (originalno povečava × 100). C. šibek /komaj zaznaven membranska reaktivnost (1+) v tumorskih celicah (original povečava, × 200). D. no obarvanje (0) v tumorskih celicah (original povečava, × 200). E. GC primeru HER2 ojačanje z uporabo analize FISH. Green signali se nanašajo na referenčno sondo Chr. 17 Centromera, medtem ko rdeči signali cilj sonda za HER2
. F. GC primer brez HER2 ojačanje z uporabo analize FISH.
Biti skladnost HER2 IHC in analiza FISH
FISH je bila izvedena v 308 naključno izbranih GC in gej adenokarcinom primerih, vključno z 40 primerov s čezmernega izražanja HER2 (IHC 3+), 38 primerov z nezanesljivo (IHC 2+) in 230 primeri z negativnimi (IHC 1 + /0) HER2 izraz. HER2
pomnoževanje so opazili pri 97,5% (39/40) z dne HER2 IHK 3+ primerov, 28,9% (11/38) z dne HER2 IHC 2+ primerov in 1,3% (3/230) na HER-2 negativno (1 + /0) primeri, ki kažejo stopnjo biti skladnost 98,5% med IHC in rib (tabela 2) (slika 1E in F) .table 2 Korelacija med čezmernega izražanja HER2 in gena ojačanje v PK in gej adenokarcinom
FISH


IHC
Skupaj
3+
2+
1 + /0

Amplification
39 (97,5%)
11 (28,9%)
3 (1,3%)
53
Ne ojačanje
1 (2,5%)
27 (71,1% )
227 (98,7%)
255
Skupaj
40
38
230
308
Razprava
V tej študiji so 143 1463 (9,8% ) GC in primerov adenokarcinoma gej so HER2 pozitivni (3+), ki ga IHC v eni od največjih kitajskih študij do danes. V toga sojenja, je bil odstotek HER2-pozitivnih (IHK 3+ ali IHC 2 + /FISH pozitiven) GC ali bolniki z rakom gej 22,1% na splošno in približno 10,4% od IHC 3+ v reseciranih vzorcev [23], ki so podobne prisotna rezultat. Nedavne študije poročajo tudi številne 8,5% na 10,3% za čezmernega izražanja HER2 v PK [20, 21, 24]. V zadnjem času, tri študije v kitajskih primerih GC uporabljajo enake FDA odobrila reagenti in merila točkovanja in poročali HER2 IHK 3+ mere za 9,0% (77/860) [25], 6,9% (10/145) [26], in 5,8 % (4/69) [27], oziroma vsi nekoliko nižja od sedanje rezultata. Ta sprememba lahko delno pojasnimo z različnimi vzorčnih nizov. Poleg tega, HER2-pozitivnosti spreminja s spletnega mesta tumorja, z višjimi stopnjami HER2-pozitivnosti v gej adenokarcinom kot pri raku želodca v tej raziskavi (14,6% v primerjavi z 7,0% v tem zaporedju; P
< 0,01), ki je v skladu z rezultati drugih študij [11, 20]. V toga preskušanju, države z največjim deležem gej: je bilo ugotovljeno, raka na želodcu, da imajo nadpovprečne stopnje HER2-pozitivnosti, ne glede na velikost vzorca [23]. Druga razlaga je drugačno razmerje črevesju: difuzna /mešano rak med študijem. Pozitivna povezava med HER2-pozitivnosti in raka črevesnih tipa je bilo ugotovljeno v tem in drugih študij [28-33]. V toga sojenju, na primer države z višjimi razmerji črevesju:. Difuzna /raka mešani so povečane stopnje HER2-pozitivnosti [23]
št korelacijo je bilo med čezmernega izražanja HER2 in PT, N ali M dejavnikov, ali TNM faze, v tej študiji. Prejšnje študije, vključno z vse patološke stopnje so poročali tudi korelacije med patološko fazi in prekomerno [20, 21, 24]. Korelacijo HER2-pozitivnosti v dobro ali zmerno diferenciranih karcinomov je bilo ugotovljeno v tej študiji (P
< 0,01). Vendar druge študije pokazale tako združenje, in nobene povezave med čezmernega izražanja HER2 in diferenciacijo tumorja [25, 32, 34, 35]. Ti nasprotujoči si podatki so lahko posledica različnih velikosti vzorca in nizke razširjenosti HER2 v PK in gej adenokarcinom. Poleg tega so bile uporabljene različne metode sistemov vrednotenja in točkovanja z različnimi rezano točk pred vzpostavitvijo standardne smernice za ocenjevanje HER2 izraz. Morda s trenutnimi doslednih smernic za oceno HER2 v tej bolezni, bodo prihodnje študije zagotavljajo večjo jasnost glede tega vprašanja.
Ta študija je pokazala visoko stopnjo konkordančno, 98,5%, med IHC in ribe, ki je podoben drugi študiji kirurške resekcije od 145 kitajskih primerih GC, s hitrostjo preverjanje skladnosti z 94,5% [26]. Nasprotno, v študiji toga, je bila stopnja skladnost z IHC in FISH 87,2%, kot 7,5% IHC 1 + je bilo ugotovljeno, da so FISH-pozitivna [23] /0 vzorci in 54,6% za IHC 2+ primerov. Ena od možnih razlag za takšno neravnovesje lahko različne vrste vzorce in reagente. V študiji toga, so bili vključeni tako biopsije in kirurško odstranjenimi vzorci; stopnja HER2-pozitivnosti je v biopsije višja kot v kirurško odstranjenimi vzorcev (23,1% v primerjavi z 19,9%; P = 0,03) in biopsijo vzorci so bili tudi bolj verjetno, da bo HER2 ojačan od kirurške vzorce, ko analiziramo s FISH (P = 0,01), kot ga IHC [23]. Večina sedanjih študijah, ki uporabljajo standardne smernice za ugotavljanje HER2 izraz uporabljajo biopsije in tkivnih mikromrež (TMAs), ki so bili testirani analogen biopsije, zasliševali njen status v GC. Stopnja skladnost z IHC in FISH v teh študijah je gibala od 88,6% na 97,7% [20, 32, 36]. Izvedena je bila tudi posebna študija vrednotenje HER2 beljakovin izraz na odsekih celotnega tkiva in TMAs, kar kaže na razliko v HER2 izražanja na odsekih celotnega tkiv TMAs. Na primer, je bil delež IHC 2+ v oddelkih celotnega tkiva za 4,7%, medtem ko je znašala 8,6%, v TMAs, ki bi lahko delno pojasnimo z heterogeno HER2 izražanja [33]. Druga možnost, ki je razkrila študija, katere cilj je potrditi smernice za oceno HER2-izražanja v PK, je različne razlage barvanjem TMAs med opazovalci, čeprav je bila enotna usmeritev ocena sledi [22]. Zato lahko zanesljivo ločevanje IHC 1 + /0 in IHC 2+ v biopsijo vzorcev težko, in analizo FISH je treba uporabiti za dokončno razvrstitev.
Skratka, temeljito analizo 1463 primerov raka kitajski GC /gej uporabo FDA -approved reagenti pokazala čezmerno izražajo HER2 pri 9,8% karcinomov, pri kateri prevladuje gej lokacijo, črevesne podvrste raka, in dobro ali zmerno diferenciranih karcinomov. Približno 29% IHC 2+ primerih pokazala HER2
amplifikacijo gena, in je bila visoka stopnja skladnost (98,5%), med IHC in FISH v GC in gej adenokarcinom.
Deklaracij
Potrditve
Ta študija je podprta s sredstvi iz Hope posebnega sklada Pekingu Run (LC2012A08) in National Natural Science Foundation Kitajske (30801344).
avtorjev originalnih predloženi datoteke za slike
Spodaj so povezave do avtorjev izvirnih predložiti datotek slik. "Izvirno datoteko na sliki 1 13000_2013_758_MOESM2_ESM.pdf avtorjev 13000_2013_758_MOESM1_ESM.tiff avtorjev prvotni datoteki številka 2 13000_2013_758_MOESM3_ESM.pdf avtorjev prvotne datoteke za sliko 3 13000_2013_758_MOESM4_ESM.pdf avtorjev izvorne datoteke za sliko 4 13000_2013_758_MOESM5_ESM.pdf avtorjev prvotni datoteki sliki 5 "izvirno datoteko na sliki 6 13000_2013_758_MOESM7_ESM.pdf avtorjev 13000_2013_758_MOESM6_ESM.pdf avtorjev prvotne datoteke za sliko 7 Konkurenca interesov
nobeden izmed avtorjev je pripadnost ali navzkrižje interesov. prispevkov
avtorjev
Study koncept in oblikovanje : JY, NL. Analiza in interpretacija podatkov: LS, JY. Priprava rokopisa: LS, JY. Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• High-intenzivnost osredotočena ultrazvok zagotavlja paliativno za jetrne metastaze zapreti želodcu izhodu: primer report
• atosiban antagonist oksitocina /vazopresina receptor upočasnjuje praznjenje želodca o poltrdnega obroka, v primerjavi s fiziološko raztopino v human