HER2 uttrykk og relevante clinicopathological funksjoner i mage og gastroøsofageal krysset adenokarsinom i en kinesisk population

HER2 uttrykk og relevante clinicopathological funksjoner i mage og gastroøsofageal krysset adenokarsinom i en kinesisk befolkning
Abstract
Bakgrunn
Med varierte immunhistokjemi scoring kriterier og pasient kohorter, HER2-positivitet priser i magekreft (GC) og gastroøsofageal krysset (GEJ) adenokarsinom er rapportert med et bredt spekter. Nylig standardisert scoring kriterier for GC og GEJ kreft er etablert og anbefales. I denne studien ble hyppigheten av HER2 uttrykk og forholdet mellom HER2 uttrykk og clinicopathological funksjoner undersøkt i en stor kohort av kinesisk GC og GEJ kreftpasienter.
Metoder
Totalt 1463 pasienter, inkludert 929 primær GCer og 534 primær GEJ adenokarsinomer, ble retrospektivt analysert for økt forekomst av HER2 ved immunhistokjemi (IHC). Fluorescens in situ
hybridisering (FISH) analyse ble brukt i 308 GCS og GEJ adenokarsinom tilfeller å vurdere HER2
genamplifisering.
Resultater
økt forekomst av HER2 (3+) ble påvist i 9,8% av karsinomer og oftere observert i GEJ krefttilfeller, i tarmtype, og i brønnen eller moderat differensiert type (P
= 0.003, 0.000 og 0.000, henholdsvis). HER2 tvetydig (2+) ble påvist i 14,4% av tilfellene. Som for de 308 sakene som ble analysert ved FISH, 39 (av 40, 97,5%) IHC 3+ tilfeller, 11 (av 38, 28,9%) IHC 2+ tilfeller, og 3 (av 230, 1,3%) IHC 1 + /0 saker viste HER2
genamplifisering. En høy samstemmighet (98,5%) mellom IHC og FISH ble demonstrert.
Konklusjoner
Omtrent 10% av kinesiske pasienter med primær GC og GEJ adenokarsinom var HER2-positiv på IHC. Økt forekomst av HER2 var assosiert med GEJ nettstedet, tarmkreft subtype, og godt eller moderat differensierte karsinomer
virtuelle lysbilder
virtuelle lysbilde (er) for denne artikkelen finner du her:. Http: //www. Diagnosticpathol logi. diagnomx. eu /vs /1935951199941072.
nøkkelord
HER2 Magekreft kreft~~POS=HEADCOMP gastroøsofageal krysset adenokarsinom Chineses Clinicopathological har bakgrunn
Magekreft kreft~~POS=HEADCOMP (GC) er den fjerde hyppigste kreft kreft og nest vanligste årsaken til kreftrelaterte dødsfall i verden [1]. Det har vært antydet at forekomsten av gastroøsofageal krysset (GEJ) adenokarsinom ble økt de siste årene [2, 3]. Til tross for noen fremskritt i forebyggelse og behandling av mavekreft, forblir 5 års overlevelse på rundt 20% i de fleste deler av verden. HER2 er nå godt anerkjent som en viktig faktor i utviklingen av visse solide humane tumorer, særlig i brystkreft. HER2
genamplifisering og protein overekspresjon, som forekommer hos 20% til 25% av brystkreftpasienter, har blitt anerkjent som prognostiske og prediktive markører for behandling [4]. Det er etablert flere deteksjonsmetoder for å undersøke HER2
gen status og protein uttrykk [5-8]. Trastuzumab, et rekombinant monoklonalt antistoff rettet mot HER2 protein, blir nå brukt ikke bare i metastatisk brystkreft tilfeller, men også til lokale saker som adjuvant behandling [9, 10]. En fersk fase III randomisert studie (toga) viste at kombinasjonsbehandling med trastuzumab og kjemoterapi betydelig forbedret overlevelse hos pasienter med avansert GC eller GEJ kreft med økt forekomst av HER2 [11]. Dermed trastuzumab ble nylig godkjent for behandling av metastatisk adenokarsinomer i mage og GEJ i mange land [12-17].
Selv om mange studier som tidligere har vurdert HER2-status i GC, har pasienten kohorter og scoring kriterier variert, noe som resulterer i avvik i HER2-positivitet prisene varierer fra ca 4% til 53%, med en median rate på 18% [18]. Toga studien utviklet et nytt sett med IHC scoring kriterier basert på studier av Hofmann et al. [19] og fant HER2-positiv (definert som IHC 3+ eller IHC 2 + /FISH +) svulster i 16% av metastatiske GC tilfeller. Effekten av trastuzumab for behandling av metastatisk GC med økt forekomst av HER2 demonstrert i toga studien er også lovende for resectable HER2-positiv magekreft. Imidlertid har få studier blitt utført for å undersøke hyppigheten av HER2-positive tumorer bestemt ved de nye kriteriene i resectable magekreft [20, 21], spesielt i en stor kinesisk kohort. I denne studien IHC analyse i henhold til standardiserte scoring kriterier ble brukt for å vurdere forekomsten av HER2-positivitet i grunnskolen resected GC og GEJ kreftprøver i en C9pt >? Forholdet mellom økt forekomst av HER2 og genamplifisering ble også undersøkt i GC og GEJ . adenokarsinom
Metoder
Samples, En totalt 1.463 pasienter med primær GC eller GEJ adenokarsinom, som fikk kurativ kirurgi (ingen historie med neoadjuvant kjemoterapi) i Cancer Institute & Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences (CICAMS), Beijing, Kina, mellom august 2009 og februar 2012, ble inkludert i denne retrospektive studien. Alle tumorprøver ble fiksert i 10% nøytral bufret formalin for 24-48 timer og innebygd i parafin, og rutinemessig diagnostisert ved Avdeling for patologi, CICAMS, Beijing. Studien protokollen ble godkjent av Institutional Review Board (IRB). Pasientenes journaler ble gjennomgått for å få pasientenes clinicopathological parametere, inkludert alder ved diagnose, kjønn, tumor beliggenhet, histologisk klassifisering, og patologisk TNM stadium. Histologisk klassifikasjon ble bestemt ifølge Verdens helseorganisasjon (WHO) klassifisering og Lauren klassifisering.
Immunohistochemistry
Automated IHC ble utført på fire-mikrometer tykke seksjoner ved hjelp av en automatisert lysbilde Stainer, Ventana Benchmark XT (Ventana Medical Systems , Tucson, AZ, USA), i henhold til produsentens instruksjoner, for Ventana BEKREFT ™ HER2 /neu (4B5) Rabbit monoklonale primært antistoff. HER2 IHC ble scoret med scoring ordningen foreslått av Hofmann et al. [19] i toga kohort av magekreft (toga score) og Ruschoff et al. [22] som følger: 0 = ingen farging eller membran reaktivitet i < 10% av tumorceller; 1+, svak /knapt merkbar membran reaktivitet i ≥10% av tumorceller (celler er reaktive bare i en del av deres membran); 2+, svak til moderat komplett, basolateral, eller lateral membran reaktivitet i ≥10% av tumorceller; og 3+, komplett, basolateral, eller lateral membran reaktivitet av sterk intensitet i ≥10% av kreftceller.
Prøver scoring IHC 0 eller IHC 1+ ble vurdert negativt for økt forekomst av HER2, mens prøvene scoring IHC 3+ ble betraktet som positive for økt forekomst av HER2. Prøver scoring IHC 2+ ble ansett som tvetydig for økt forekomst av HER2.
Fluorescence in situ
hybridisering
Fluorescence in situ
hybridisering (FISH) analyse ble utført med PathVysion HER2 DNA probe kit og prosedyrer (Vysis /Abbott, Abbott Park, IL, USA). Settet inneholder to fluorokromkonjugerte merket DNA-prober, LSI HER2 (merket med SpectrumOrange) og CEP17 (kromosom 17 opplisting probe, merket med SpectrumGreen). Forbehandling ble gjennomført med Parafin forbehandling Kit (VysisAbbott). HER2 signaler og CEP17 signaler om 20 kjerner av invasive tumorceller i to forskjellige områder ble telt ved hjelp av en Zeiss AxioImager M2 epifluorescence mikroskop (Carl Zeiss, Oberkochen, Tyskland) er utstyrt med en × 100 oljeneddyppingsobjektivet og 4 ', 6'-diamidino -2-phenylindole (DAPI) /Spectrum grønt /oransje enkle og tremannsrom båndpassfiltre. HER2 /kromosom 17-forhold ble tolket som følgende: a HER2 /CEP17-forhold høyere enn 2,2 ble definert som amplifisering av HER2
gen, mens et forhold < 1,8 ble definert som ingen amplifikasjon av HER2
genet. Når forholdet var mellom 1,8 og 2,2, ble signalene i enda 20 kjerner telles og HER2 /CEP17-forholdet i totalt 40 kjerner ble bestemt. Når forholdet var ≥2.0, ble det definert som forsterkning av HER2
genet; ellers ble det definert som ingen forsterkning av HER2
genet.
Statistisk analyse
Statistisk analyse ble utført ved hjelp av chi-kvadrat test for å analysere sammenhenger mellom HER2 status og clinicopathological parametere. En P
verdi mindre enn 0,05 ble betraktet som signifikant. Data ble analysert ved hjelp av SPSS statistisk programvare program for Microsoft Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
Resultater
økt forekomst av HER2 og clinicopathological egenskaper, En totalt 1.463 pasienter ble vurdert ved IHC analyse. Pasientenes clinicopathological egenskaper er listet i tabell 1. Deres median alder var 58 år (range, 20 til 82 år), med en mannlig overvekt (75,5%). Av alle pasienter, var det 650 tilfeller (44,4%) av tarm typen av Lauren klassifisering, 564 tilfeller (38,6%) av diffust type, og 249 tilfeller (17%) av blandet type. I form av svulst plassering, omtrent to tredjedeler av svulster var primær mage kreft (63,5%), og en tredjedel var primær GEJ adenokarsinomer (36,5%). Svulstene var dårlig differensiert i 73,1%, moderat differensiert i 25,2%, og godt differensiert i 1,7%. Alt i alt, de fleste pasienter var på patologisk stadium T3 (73.4%), med 14,1%, 10%, og 2,5% i trinn T1, T2 og T4, respektivt. Når det gjelder den patologiske N trinnet, var det en tilnærmet lik fordeling av pasienter ved N0, N1, N2, N3 eller trinn (28,1%, 16,1%, 20,9%, 34,9% henholdsvis). Flertallet av pasientene (97,7%) hadde ingen fjern metastases.Table en Korrelasjonen mellom HER2 uttrykk status og clinicopathological parametere
Totalt
HER2
HER2-

HER2-

Overuttrykte
Tvil
Negativ
P-verdi
Pathologic funksjonen
n = 1463
n = 143 (%)
n = 211 (%)
n = 1109 (%)
Alder ved diagnose
0,102
≥60 år
683
80 (11,7)
108 (15,8)
495 (72,5)
< 60 år
780
63 (8,1)
103 (13,2)
614 (78,7)
Sex
0,344
Mann fra 1104
109 (9,9)
171 (15,5)
824 (74,6)
Kvinne
359
34 (9,5)
40 (11,1)
285 (79,4)
Tumor plassering
0,003
GC
929
65 (7,0)
121 (13,0)
743 (80,0)
GEJ
534
78 (14,6)
90 (16,9)
366 (68,5)
Tumor subtype plakater (Lauren klassifisering )
0.000
Tarm
650
109 (16,8)
111 (17,1)
430 (66,2)
Diffuse
564
13 (2,3)
63 (11,2)
488 (86,5)
Blandet
249
21 (8,4)
37 (14,9)
191 (76,7)
Tumor differensiering
0.000
Vel
25
4 (16)
9 (36)
12 (48)
Moderat
369
74 (20,1)
70 ( 19,0)
225 (61,0)
Dårlig
1069
65 (6,1)
132 (12,3)
872 (81,6)
pT status
0,053
PT1
206
16 (7,8)
33 (16,0)
157 (76,2)
pT2
147
23 (15,6)
28 (19,0)
96 (65,3)
pT3
1074
102 (9,5)
145 (13,5)
827 (77,0)
pT4
36
2 (5,6)
5 (13,9)
29 (80,6)
pN status
0,074
pN0
411
39 (9,5)
66 (16,1)
306 (74,5 )
PN1
235
27 (11,5)
42 (17,9)
166 (70,6)
pN2
306
20 (6,5)
42 ( 13.7)
244 (79,7)
pN3
511
57 (11,2)
61 (11,9)
393 (76,9)
pM status
0,571
pM0
1429
140 (9,8)
119 (8,3)
1080 (75,6)
PM1
34
3 (8,8)
2 (5,9)
29 (85,3)
pTNM stadier
0,327
IA
162
14 (8,6)
29 (17,9)
119 (73,5)
IB
93
8 (8.6)
17 (18,3)
68 (73,1)
IIA
201
25 (12,4)
33 (16,4)
143 (71,1 )
IIB
230
25 (10,9)
34 (14,8)
171 (74,3)
IIIA
264
15 (5,7)
37 ( 14.8)
212 (80,3)
IIIB
455
51 (11,2)
56 (12,3)
348 (76,5)
IIIC
24
2 (8.3)
3 (12,5)
19 (79,2)
IV
34
3 (8,8)
2 (5,9)
29 (85,3)
Of de 1463 pasientene, 143 (9,8%) pasienter ble scoret som økt forekomst av HER2 (3+), mens 211 (14,4%) og 1109 (1463, 75,8%) var usikre og negative, henholdsvis. Tabell 1 oppsummerer HER2 uttrykk status ved undergruppe. HER2 ble overexpressed (poengsum 3+) i 7,0% (65/929) av GC saker og 14,6% (78/534) av GEJ adenokarsinom tilfellene (figur 1A). Tvetydig uttrykk (2+) av HER2 protein ble observert hos 13,0% (121/929) av GC saker og 16,9% (90/534) av GEJ adenokarsinom tilfeller (Figur 1b). HER2 var negative (1 + /0) 80,0% (743/929) av GC saker og 68,5% (366/534) av GEJ adenokarsinom prøver (figur 1C og D). En vesentlig forskjell i økt forekomst av HER2 ble funnet mellom GCS og GEJ adenokarsinomer (7,0% vs 14,6%, P
< 0,05). Økt forekomst av HER2 var assosiert med intestinal-type karsinom ved Lauren klassifisering (P
< 0,001): 16,8% i tarm vs. 2,3 /8,4% i diffuse- /mixed-type kreft. Økt forekomst av HER2 ble også korrelert med godt eller moderat differensierte karsinomer ifølge WHO klassifisering. Ingen korrelasjon ble observert mellom HER2 overexpressed og ikke overexpressed tilfeller i form av alder, kjønn, PT, N, M faktorer, eller patologisk TNM stadium. Figur 1 representant tilfeller av IHC flekker og FISH analyse i GC og GEJ adenokarsinom. A. HER2 IHC-farging viser fullstendig, basolateral, eller lateral membran reaktiviteten av sterk intensitet (3+) i tumorceller (opprinnelig forstørrelse x 40). B. HER2 IHC-farging viser svak til moderat fullstendig, basolateral, eller lateral membran-reaktivitet (2+) i tumorceller (opprinnelig forstørrelse x 100). C. svak /knapt merkbar membran reaktivitet (1+) i tumorceller (opprinnelig forstørrelse x 200). D. ingen farging (0) i tumorceller (opprinnelig forstørrelse x 200). E. en GC tilfelle med HER2 forsterkning ved hjelp av FISH analyse. Grønne signaler referere til referansesonden av Chr. 17 cent, mens røde signaler er målet probe for HER2
. F. En GC saken uten HER2 amplifikasjon bruker FISH analyse.
Concordance av HER2 IHC og FISH
FISH analyse ble utført på 308 tilfeldig utvalgte GC og GEJ adenokarsinom tilfeller, inkludert 40 tilfeller med økt forekomst av HER2 (IHC 3+), 38 tilfeller med tvetydige (IHC 2+), og 230 tilfeller med negativ (IHC 1 + /0) HER2 uttrykk. HER2
forsterkning ble observert hos 97,5% (39/40) av HER2 IHC 3+ tilfeller, 28,9% (11/38) av HER2 IHC 2+ tilfeller, og 1,3% (3/230) av HER2-negative (1 + /0) tilfeller, viser en samstemmighet på 98,5% mellom IHC og FISH (tabell 2) (figur 1E og F) .table 2 Sammenheng mellom økt forekomst av HER2 og genamplifisering i GC og GEJ adenokarsinom
FISH
<.no> IHC
Total
3+
2+
1 + /0

Amplification
39 (97,5%)
11 (28,9%)
3 (1,3%)
53
Ingen forsterkning
1 (2,5%)
27 (71,1% )
227 (98,7%)
255
Total
40
38
230
308
diskusjon
i denne studien, 143 av 1463 (9,8% ) av GC og GEJ adenokarsinom tilfeller var HER2-positiv (3+) ved IHC i en av de største kinesiske studier så langt. I Toga rettssaken, andelen av HER2-positiv (IHC 3+ eller IHC 2 + /FISH positiv) GC eller GEJ kreftpasienter var 22,1% totalt og rundt 10,4% av IHC 3+ i resected prøver [23], ligner på nåværende resultat. Nyere studier rapporterte også et område på 8,5% til 10,3% for HER2-overekspresjon i GC [20, 21, 24]. Nylig, tre studier i kinesisk GC tilfeller brukes de samme FDA-godkjente reagenser og scoring kriterier og rapportert HER2 IHC 3+ priser på 9,0% (77/860) [25], 6,9% (10/145) [26], og 5,8 % (4/69) [27], henholdsvis, alt litt lavere enn det foreliggende resultat. Denne variasjonen kan delvis forklares med ulike prøvesettene. I tillegg HER2-positivitet varieres ved tumorlokalisering, med høyere forekomst av HER2-positivitet i GEJ adenokarsinom enn i magekreft i denne studien (14,6% vs. 7,0% henholdsvis; P
< 0,01), som er konsistent med resultatene fra andre studier [11, 20]. I Toga rettssaken, de landene med høyest ratio på GEJ: ble magekreft funnet å ha over gjennomsnittet HER2-positivitet priser, uavhengig av utvalgsstørrelse [23]. En annen forklaring er forskjellig forholdet mellom tarm: diffus /blandet kreft blant studiene. En positiv sammenheng mellom HER2-positivitet og intestinal-type kreft ble identifisert i denne og andre studier [28-33]. I toga rettssak, for eksempel land med høyere prosenter av tarm:. Diffus /blandet kreft hadde økt HER2-positivitet priser [23]
Ingen korrelasjon ble funnet mellom økt forekomst av HER2 og PT, N eller M faktorer, eller TNM trinn, i den foreliggende undersøkelsen. Tidligere studier inkludert alle patologiske stadier har også rapportert ingen sammenheng mellom patologisk stadium og overekspresjon [20, 21, 24]. En korrelasjon på HER2-positivitet med godt eller moderat differensierte karsinomer ble funnet i denne studien (P
< 0,01). Men andre studier viste både en forening og ingen sammenheng mellom økt forekomst av HER2 og tumor differensiering [25, 32, 34, 35]. Disse motstridende data kan skyldes ulike utvalgsstørrelser og den lave forekomsten av HER2 i GC og GEJ adenokarsinom. I tillegg ble det varierende metoder for evaluering og scoring ordninger med ulike cut-poeng brukes før etableringen av en standard retningslinje for vurdering av HER2 uttrykk. Kanskje med dagens konsekvente retningslinjer for HER2 vurdering i denne sykdommen, vil fremtidige studier gi mer klarhet om dette problemet.
Denne studien viste en høy samstemmighet, 98,5%, mellom IHC og FISH, som er lik en annen studie av kirurgiske reseksjoner fra 145 kinesiske GC tilfeller, med en samsvarsrate på 94,5% [26]. I motsetning til i toga studien, samstemmighet av IHC og FISH var 87,2%, som 7,5% av IHC 1 + /0 prøver og 54,6% av IHC 2+ saker ble funnet å være FISH-positiv [23]. En av de mulige forklaringer på dette avviket kan være forskjellige prøvetyper og reagenser. I Toga studien ble både biopsier og kirurgisk-resected eksemplarer inkludert; HER2-positivitet hastigheten var høyere i biopsier enn i kirurgisk-resected prøver (23,1% vs. 19,9%, p = 0,03), og biopsiprøver var også mer sannsynlig å være HER2-forsterket enn kirurgiske prøver analysert ved FISH (P = 0,01) enn ved IHC [23]. De fleste av dagens studier med en standard retningslinje for HER2 uttrykk vurderings brukt biopsier og microarray (TMA), som ble testet analog til biopsi, for å avhøre henne status i GC. Den samstemmighet av IHC og FISH i disse studiene varierte fra 88,6% til 97,7% [20, 32, 36]. En spesifikk studie som undersøkte HER2 protein uttrykk på hel-vevssnitt og TMA ble gjennomført, noe som indikerer et avvik i HER2 uttrykk på hel-vevssnitt fra TMA. For eksempel, var andelen av IHC 2+ var 4,7% i hel-vevssnitt, mens den var 8,6% i TMA, som kan være delvis forklares ved heterogen HER2-ekspresjon [33]. En annen mulighet, som ble avslørt av en studie som mål å validere retningslinje for HER2-uttrykk vurdering i GC, var ulike tolkninger av farging av TMA blant observatører, selv om en ensartet vurdering retningslinje ble fulgt [22]. Derfor kan pålitelig separasjon av IHC 1 + /0 og IHC 2+ være vanskelig i biopsiprøver, og bør brukes FISH analyse for endelig klassifisering.
Konklusjon, en grundig analyse av 1463 kinesiske GC /GEJ krefttilfeller ved hjelp av FDA -godkjent reagenser viste økt forekomst av HER2 i 9,8% av karsinomer, med en sterk preferanse for GEJ beliggenhet, tarmkreft subtype, og godt eller moderat differensierte karsinomer. Omtrent 29% av IHC 2+ tilfeller viste HER2
genamplifisering, og det var en stor samstemmighet (98,5%) mellom IHC og FISH i GC og GEJ adenokarsinom.
Erklæringer
Takk
Denne studien ble støttet med tilskudd fra Beijing håp Run Special Fund (LC2012A08) og Natural Science Foundation National of China (30801344).
forfatternes opprinnelige innsendte filer for Images Nedenfor er linkene til forfatternes originale innsendt filer for bilder. 13000_2013_758_MOESM1_ESM.tiff Forfatteroriginalfilen for figur 1 13000_2013_758_MOESM2_ESM.pdf Forfatteroriginalfilen for figur 2 13000_2013_758_MOESM3_ESM.pdf Forfatteroriginalfilen for figur 3 13000_2013_758_MOESM4_ESM.pdf Forfatteroriginalfilen for figur 4 13000_2013_758_MOESM5_ESM.pdf Forfatteroriginalfilen for figur 5 13000_2013_758_MOESM6_ESM.pdf Forfatteroriginalfilen for figur 6 13000_2013_758_MOESM7_ESM.pdf Forfatteroriginalfilen for figur 7 konkurrerende interesser
Ingen av forfatterne har en tilknytning eller interessekonflikt. bidrag
forfatternes Study konsept og design : JY, NL. Analyse og tolkning av data: LS, JY. Utarbeidelse av manuskriptet: LS, JY. Alle forfattere lese og godkjent den endelige manuskriptet.

• Høy intensitet fokusert ultralyd gir lindring for levermetastaser som forårsaker mage utsalgsstedet hindringer: kasuistikk
• Den oxytocin /vasopressin reseptor antagonist Atosiban forsinker gastrisk tømming av et halvfast måltid sammenlignet med saltvann i menneskets