Выражение HER2 и соответствующие клинико-патологические особенности в желудке и желудочно-пищеводного соединения аденокарциномы в китайской популяции

Выражение HER2 и соответствующие клинико-патологические особенности в желудке и желудочно-пищеводного соединения аденокарциномы в китайской популяции
Аннотация
Справочная
с различными иммуногистохимических критериев подсчета очков и когорт пациентов, ставки HER2-положительности в рак желудка (GC) и желудочно-пищеводного соединения ( GEJ) аденокарциномы было зарегистрировано с широким диапазоном. Недавно стандартизированы критерии подсчета очков для GC и GEJ рак был создан и рекомендуется. В этом исследовании частота экспрессии HER2 и взаимосвязь между экспрессией HER2 и клинико-патологическими особенностями были рассмотрены в большой когорте китайских GC и онкологических больных GEJ.
Методы
В общей сложности 1463 пациентов, в том числе 929 первичного ШС и 534 первичных GEJ аденокарциномы, ретроспективно анализировали на гиперэкспрессией HER2 методом иммуногистохимии (IHC). Флуоресцентная Ситу
гибридизация (FISH) анализа в была использована в 308 GCs и GEJ случаев аденокарциномы для оценки Her2
амплификации гена.
Результаты
гиперэкспрессией HER2 (3+) был обнаружен в 9,8% карцином и чаще наблюдается в тех случаях рака GEJ, в типе кишечника, а также в скважине или умеренно дифференцированной типа (P
= 0.003, 0.000 и 0.000, соответственно). HER2 неоднозначны (2+) был выявлен в 14,4% случаев. Что касается 308 случаев, проанализированных FISH, 39 (40, 97,5%) IHC 3+ случаев, 11 (38, 28,9%) IHC случаев 2+ и 3 (230, 1,3%) IHC 1 + /0 случаев показал Her2
амплификации гена. Высокий уровень конкорданс (98,5%) между IHC и FISH была продемонстрирована.
Выводы
Около 10% китайских пациентов с первичной ГХ и GEJ аденокарциномы были HER2-положительным на ВВК. Гиперэкспрессией HER2 был связан с сайтом GEJ, кишечная подтипа рака, а также или умеренно дифференцированных карцином
Виртуальные слайды
Виртуальный слайд (ы) для этой статьи можно найти здесь:. HTTP:. //WWW diagnosticpathol логии. diagnomx. ес /против /1935951199941072.
Ключевые слова
HER2 Желудочный Гастроэзофагеального рак узел аденокарциномы китайцам клинико-патологическими особенности фона
рака желудка (GC) является четвертым наиболее часто диагностировали рак и второй наиболее распространенной причиной смертности от онкологических заболеваний во всем мире [1]. Было высказано предположение о том, что уровень заболеваемости желудочно-пищеводного соединения (GEJ) аденокарциномы был увеличен в последние годы [2, 3]. Несмотря на некоторые успехи в профилактике и лечении рака желудка, 5-летняя выживаемость остается на уровне около 20% в большинстве частей мира. HER2 настоящее время широко признается в качестве ключевого фактора в развитии некоторых твердых опухолей человека, особенно при раке молочной железы. Her2
амплификации гена и белка суперэкспрессия, которые имеют место в 20% до 25% больных раком молочной железы, были признаны в качестве прогностических и прогностических маркеров для лечения [4]. Несколько методов обнаружения были созданы для изучения HER2
статус гена и экспрессию белка [5-8]. Трастузумаб, рекомбинантный моноклональное антитело, воздействующее на HER2 белка, в настоящее время применяется не только в метастатических случаев рака молочной железы, но и локализованных случаях в качестве адъювантной терапии [9, 10]. Недавно фаза III рандомизированное исследование (ТОГА) показали, что комбинированное лечение с выживанием трастузумаба и химиотерапии значительно улучшились у пациентов с распространенным раком ГХ или GEJ с гиперэкспрессией HER2 [11]. Таким образом, трастузумаб был недавно одобрен для лечения метастатической аденокарциномы желудка и GEJ во многих странах [12-17].
Хотя многие исследования ранее оценивали HER2 статус в GC, когорты пациентов и критериев оценки изменялись, в результате чего в расхождений в показателях HER2-позитивности колеблется от примерно 4% до 53%, со средней скоростью 18% [18]. Исследование ToGA разработала новый набор IHC критериев оценки на основе исследовании Hofmann и др. [19] и нашел HER2-положительным (определяется как IHC 3+ или IHC 2 + /FISH +) опухоли в 16% случаев метастатического GC. Эффективность трастузумаба для лечения метастатического GC с гиперэкспрессией HER2 продемонстрирована в исследовании ToGA также перспективен для резектабельного HER2-положительным раком желудка. Тем не менее, мало исследований было проведено с целью изучить частоту HER2-позитивных опухолей определяется новыми критериями в резектабельного рака желудка [20, 21], особенно в крупной китайской когорте. В данном исследовании анализ IHC в соответствии со стандартными критериями выставления оценки была использована для оценки заболеваемости HER2-позитивности в первичных резекцию ГХ и образцах рака GEJ в C9pt >? Взаимосвязь между гиперэкспрессией HER2 и амплификации гена был также рассмотрен в ГХ и GEJ . аденокарциномы
Методы
Образцы
в общей сложности 1463 пациентов с первичной ГХ или GEJ аденокарциномы, который получил хирургическое лечение (нет истории неоадъювантной химиотерапии) в Институте и усилителя рака; Больница, Китайская академия медицинских наук (CICAMS), Пекин, Китай, в период с августа 2009 года по февраль 2012 года был включен в это ретроспективное исследование. Все образцы опухоли фиксировали в 10% нейтральном забуференном формалине в течение 24-48 часов и заливали в парафин, и обычно диагностируется в отделении патологии, CICAMS, Пекин. Протокол исследования был одобрен Советом по институциональному (IRB). "Были рассмотрены медицинские документы для получения пациентов пациентов клинико-параметров, в том числе возраст на момент постановки диагноза, пола, локализации опухоли, гистологической классификации и патологической стадии TNM. Гистологическое классификация была определена в соответствии с Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) классификации и классификации Лорен.
Immunohistochemistry
Автоматизированная IHC проводили на 4-мкм срезы толщиной с использованием автоматического слайд Стайнер, тест XT Вентана (Ventana Medical Systems , Tucson, AZ, США), в соответствии с инструкциями изготовителя, для Ventana ПОДТВЕРДИТЕ ™ HER2 /Neu (4B5) Rabbit моноклонального первичного антитела. HER2, IHC оценивали с использованием схемы подсчета очков, предложенную Hofmann и соавт. [19] в ToGA когорты рака желудка (ToGA балла) и Ruschoff и др. [22] следующим образом: 0, отсутствие окрашивания или мембранную реактивность в &л; 10% опухолевых клеток; 1+, слабый /едва заметный перепончатая реактивность у ≥10% опухолевых клеток (клетки являются реактивными только в части их мембраны); 2+, слабый до умеренного полной, базолатеральных или боковой мембранную реактивность в ≥10% опухолевых клеток; и 3 +, полная, базолатеральная или боковой мембранозной реактивность сильной интенсивности в ≥10% опухолевых клеток.
Образцы забивают IHC 0 или IHC 1+ считались негативными для гиперэкспрессией HER2, в то время как образцы скоринг IHC 3+ считались положительными для гиперэкспрессией HER2. Образцы забивают IHC 2+ считались сомнительными для гиперэкспрессией HER2.
Флуоресценция Ситу
гибридизации
флуоресцентная in-situ гибридизации
в (FISH) анализ был проведен с комплектом зонда PathVysion HER2 ДНК и процедур (Vysis /Abbott, Abbott Park, IL, USA). Комплект содержит два Флуорохром-меченых ДНК зондов, БИС HER2 (метили SpectrumOrange) и CEP17 (хромосома 17 Перечисление зонда, метят SpectrumGreen). Предварительная обработка проводилась с парафиновой предварительной обработки Kit (VysisAbbott). Эти сигналы HER2 и CEP17 сигналы 20 ядер инвазивных опухолевых клеток в двух различных областях подсчитывали с использованием эпифлуоресцентной микроскопа Zeiss AxioImager M2 (Carl Zeiss, Оберкохен, Германия), оснащенный объективом × 100 масла погружения и 4 ', 6'-диамидино -2-фенилиндола (DAPI) /Спектр Зеленый /оранжевый одиночные и тройные полосовые фильтры. HER2 /хромосоме 17 рные интерпретируются следующим образом: отношение к HER2 /CEP17 выше, чем 2,2 определяли как амплификацию гена HER2 рецепторы
, в то время как соотношение ≪ 1,8 был определен как отсутствие амплификации HER2 рецепторы
гена. Когда соотношение составляет от 1,8 до 2,2, сигналы в еще 20 ядер подсчитывали, а отношение к HER2 /CEP17 в общей сложности 40 ядер определяли. Когда отношение было ≥2.0, он был определен как амплификации гена Her2
; в противном случае она была определена как отсутствие амплификации гена Her2
.
Статистический анализ
Статистический анализ проводился с использованием критерия хи-квадрат для анализа связей между HER2 статуса и клинико-патологическими параметрами. Значение меньше 0,05 P
считается значительным. Данные были проанализированы с помощью статистической программы SPSS программного обеспечения для Microsoft Windows (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США).
Результаты
гиперэкспрессией HER2 и клинико-патологическими характеристиками
В общей сложности 1463 пациентов оценивали с помощью анализа IHC. клинико-патологические характеристики пациентов приведены в таблице 1. Их средний возраст составил 58 лет (диапазон, от 20 до 82 лет), с преобладанием мужчин (75,5%). Из всех пациентов, было 650 случаев (44,4%) кишечного типа по классификации Лорен, 564 случая (38,6%) диффузного типа, и 249 случаев (17%) смешанного типа. С точки зрения расположения опухоли, приблизительно две трети опухолей были первичными рака желудка (63,5%), а одна треть была первичной GEJ аденокарциномы (36,5%). Опухоли были слабо дифференцированы в 73,1%, умеренно дифференцированы в 25,2%, а также дифференцированные в 1,7%. В целом, у большинства пациентов были на патологический стадии Т3 (73,4%), 14,1%, 10%, и 2,5% на стадии Т1, Т2 и Т4, соответственно. Что касается патологической стадии N, было примерно равное распределение больных по N0, N1, N2, N3 или стадий (28,1%, 16,1%, 20,9%, 34,9%, соответственно). У большинства больных (97,7%) не имели отдаленное metastases.Table 1 корреляции между статусом экспрессии HER2 и клинико-патологическими параметрами

Общий

HER2

HER2-

HER2-:


Гиперэкспрессия

Сомнительный

Негативный

значение P

патологической функции
п = 1463
п = 143 (%)
п = 211 (%)
п = 1109 (%)
Возраст на момент постановки диагноза
0,102
≥60 лет
683
80 (11,7)
108 (15.8)
495 (72,5)
&л; 60 лет
780
63 (8.1)
103 (13,2)
614 (78,7) Любительские секс
0,344
Мужчины
1104
109 (9,9)
171 (15,5)
824 (74,6)
Женский
359
34 (9,5) 40
(11.1)
285 (79,4)
Опухоль местоположение
0,003
GC
929
65 (7.0)
121 (13,0)
743 (80,0)
GEJ
534
78 (14,6) 90
(16,9)
366 (68,5)
Опухоль подтип
(классификация Лорен )
0,000
Кишечные
650
109 (16.8)
111 (17,1)
430 (66,2)
Диффузный
564
13 (2.3)
63 (11,2)
488 (86,5)
Смешанная
249
21 (8.4)
37 (14,9)
191 (76,7)
Опухоль дифференциации
0,000
Ну
25
4 (16)
9 (36) 12
(48)
Умеренно
369
74 (20.1) 70
( 19,0)
225 (61,0)
Плохо
1069
65 (6.1)
132 (12.3)
872 (81,6)
пТл статус
0,053
pT1
206
16 (7,8) 33
(16,0)
157 (76,2)
pT2
147
23 (15,6) 28
(19,0) <бр> 96 (65,3)
pT3
1074
102 (9.5)
145 (13.5)
827 (77,0)
pT4
36
2 (5.6)
5 (13.9)
29 (80,6)
статус пН
0,074
pN0
411
39 (9,5) 66
(16.1)
306 (74,5 )
pN1
235
27 (11,5) 42
(17,9)
166 (70,6)
PN2
306
20 (6,5) 42
( 13,7)
244 (79,7)
pN3
511
57 (11.2) 61
(11.9)
393 (76,9)
Pm статус
0,571
Pm0
1429
140 (9.8)
119 (8.3)
1080 (75,6)
PM1
34
3 (8,8)
2 (5,9) <бр> 29 (85,3)
pTNM этапы
0,327
IA
162
14 (8.6)
29 (17,9)
119 (73,5)
IB
93
8 (8.6)
17 (18,3) 68
(73,1)
IIA
201
25 (12,4) 33
(16,4)
143 (71,1 )
IIB
230
25 (10,9)
34 (14.8)
171 (74,3)
IIIA
264
15 (5,7) 37
( 14.8)
212 (80,3)
IIIB
455
51 (11.2) 56
(12.3)
348 (76,5)
МНКР
24
2 (8.3)
3 (12,5)
19 (79,2)
IV
34
3 (8.8) страница 2 (5.9)
29 (85,3) Каталог 1463 пациентов, 143 (9,8%) пациентов оценивали как гиперэкспрессией HER2 (3+), а 211 (14,4%) и 1109 (1463, 75,8%) были сомнительными и отрицательные, соответственно. В таблице 1 приведены состояния экспрессии HER2 по подгруппе. HER2 был избыточно экспрессируется (оценка 3+) в 7,0% (65/929) случаев GC и 14,6% (78/534) случаев аденокарциномы GEJ (Рис. 1А) Сомнительный выражение (2+) белка HER2 наблюдалась в 13,0% (121/929) случаев GC и 16,9% (90/534) случаев аденокарциномы GEJ (рис 1В). HER2 был отрицательным (1 + /0) в 80,0% (743/929) случаев GC и 68,5% (366/534) из GEJ образцов аденокарциномы (рис 1C и D). Существенное различие в гиперэкспрессией HER2 была обнаружена между GCs и GEJ аденокарциномы (7,0% против 14,6%, P &
ЛТ; 0,05). Гиперэкспрессией HER2 было связано с карцином кишечного типа по классификации Lauren (P &
л; 0,001): 16.8% против прогноза в кишечном 2,3 /8,4% в диффузного /раков смешанного типа. Гиперэкспрессией HER2 также коррелируют с хорошо или умеренно дифференцированных карцином в соответствии с классификацией ВОЗ. Никакой корреляции не наблюдалось между HER2 избыточно экспрессируется и не избыточно экспрессируется случаев с точки зрения возраста, пола, поинты, N, M факторов, или патологической стадии TNM. Рисунок 1 Типичные случаи IHC окрашивания и анализа FISH в ГХ и GEJ аденокарциномы. A. HER2 IHC окрашивание показывает полное, базолатеральных или боковой мембранную реактивность сильной интенсивности (3+) в опухолевых клетках (исходное увеличение, × 40). B. HER2 IHC окрашивания показывает слабый до умеренного полной, базолатеральных или боковой мембранную реактивность (2+) в опухолевых клетках (исходное увеличение, × 100). C. слабый /едва заметная перепончатая реакционная способность (1+) в опухолевых клетках (исходное увеличение, × 200). Д. не Окрашивание (0) в опухолевых клетках (исходное увеличение, не × 200). Е. ГХ случае с HER2 амплификации с использованием анализа FISH. Зеленые сигналы относятся к эталонному зонду Chr. 17 центромеры, в то время как красные сигналы являются целевой зонд для HER2
. F. ГХ случай без HER2 амплификации с использованием анализа FISH.
Согласованность HER2 IHC и анализ FISH
FISH проводили в 308 случайно выбранных ГХ и GEJ аденокарциномы случаев, в том числе 40 случаев с гиперэкспрессией HER2 (ИГХ 3+), 38 случаев с двусмысленной (IHC 2+), а также 230 случаев с отрицательным (IHC 1 + /0) выражение HER2. Her2
усиление наблюдалась в 97,5% (39/40) из HER2 IHC 3+ случаев, 28,9% (11/38) в HER2 IHC 2+ случаев, и 1,3% (3/230) от HER2-отрицательных (1 + /0) случаях, показывающий скорость согласования 98,5% между IHC и FISH (таблица 2) (рис 1E и F) .table 2 корреляция между гиперэкспрессией HER2 и амплификации гена в ГХ и GEJ аденокарциномы
FISH


IHC


Total


3+

2+

1 + /0
<бр> амплификация
39 (97,5%)
11 (28,9%)
3 (1,3%)
53
нет амплификации
1 (2,5%)
27 (71,1% )
227 (98,7%)
255
Total
40
38
230
308
Обсуждение
В этом исследовании, 143 1463 (9,8% ) ГК и случаев аденокарциномы GEJ были HER2-положительными (3+) с помощью IHC в одном из крупнейших китайских исследований на сегодняшний день. В исследовании ToGA, процент HER2-положительного (IHC 3+ или IHC 2 + /FISH положительный) GC или больных раком GEJ составила 22,1% в целом и около 10,4% от IHC 3+ в резецированными образцах [23], подобно тому, Настоящий результат. Недавние исследования также сообщили о ряде 8,5% до 10,3% для гиперэкспрессией HER2 в GC [20, 21, 24]. В последнее время три исследования в китайских случаях GC применяются те же FDA одобренные реагенты и критерии подсчета очков и сообщили Her2 IHC 3+ цены на 9,0% (77/860) [25], 6,9% (10/145) [26], и 5,8 % (4/69) [27], соответственно, все немного ниже, чем в настоящем результата. Это изменение может быть частично объяснено различными наборами образцов. Кроме того, HER2-позитивности варьировать опухоли, с более высокими показателями HER2-позитивности в GEJ аденокарциномы, чем при раке желудка в этом исследовании (14,6% против 7,0% соответственно; P
&л; 0,01), что согласуется с результаты других исследований [11, 20]. В исследовании ToGA, страны с наивысшим соотношением GEJ: были обнаружены рак желудка иметь выше среднего уровня цены HER2-позитивность, независимо от размера образца [23]. Другим объяснением является различное отношение кишечника: диффузная /смешанная раком среди исследований. Положительная связь между HER2-позитивности и рака кишечного типа был выявлен в этой и других работах [28-33]. В исследовании ToGA, например, в странах с более высокими отношениями кишечника:. Диффузная /смешанный рак повышенные показатели HER2-позитивности [23] не
никакой корреляции была обнаружена между гиперэкспрессией HER2 и пТл, N или M факторов, или TNM этапы, в настоящем исследовании. Предыдущие исследования, включая все патологические этапы не также сообщили об отсутствии корреляции между патологической стадии и избыточной экспрессии [20, 21, 24]. Корреляция HER2-позитивности с хорошо или умеренно дифференцированной карциномой был обнаружен в настоящем исследовании (Р
≪ 0,01). Тем не менее, другие исследования показали, как связь и отсутствие связи между гиперэкспрессией HER2 и дифференцировки опухоли [25, 32, 34, 35]. Эти противоречивые данные могут быть обусловлены различными размерами выборки и низкой распространенностью HER2 в ГХ и GEJ аденокарциномы. Кроме того, были использованы различные методы оценки и подсчета очков схем с различными вырезами точками до создания стандартного руководства для оценки экспрессии HER2. Возможно, с нынешних согласованных руководящих принципов для оценки HER2 в этой болезни, будущие исследования обеспечат большую ясность по этому вопросу.
Настоящее исследование показало высокую скорость согласование, 98,5%, между IHC и FISH, который похож на другого исследования хирургические резекция из 145 китайских случаев GC, с частотой согласования 94,5% [26]. В противоположность этому, в исследовании ToGA, скорость Согласованность IHC и рыбы составляет 87,2%, а 7,5% от IHC 1 были найдены + /0 образцы и 54,6% от IHC случаев 2+ быть FISH-положительными [23]. Одним из возможных объяснений такого несоответствия могут быть различные типы образцов и реагентов. В исследовании ToGA были включены оба биопсии и хирургическим резецированные образцов; скорость HER2-позитивности была в биопсий выше, чем в хирургически резецированных образцах (23,1% против 19,9%; P = 0,03), а также образцы биопсии были также более вероятно, будут HER2-амплифицируют, чем хирургических образцов при анализе с помощью FISH (P = 0,01), чем IHC [23]. Большинство современных исследований с использованием стандартного ориентиром для оценки экспрессии HER2, используемых биопсий и микрочипов ткани (TMAS), которые были испытаны аналогично биопсий, допрашивать ее статус в GC. Скорость согласование IHC и FISH в этих исследованиях варьировала от 88,6% до 97,7% [20, 32, 36]. Было проведено специальное исследование оценки экспрессии белка HER2 на участках цельной ткани и ТМА, что указывает на несоответствие в выражении HER2 на участках цельной ткани от ТМА. Например, доля IHC 2+ в секциях цельной ткани на 4,7%, в то время как он составил 8,6% в ТМА, которые могут быть частично объяснены гетерогенной экспрессии HER2 [33]. Еще одна возможность, которая была выявлена ​​в исследовании, с целью подтвердить ориентиром для оценки HER2-экспрессии в GC, были различные интерпретации окрашивания среди наблюдателей ТМА, хотя единая оценка основного положения последовало [22]. Таким образом, надежное разделение IHC 1 + /0 и IHC 2+ может быть затруднено в образцах биопсии, и анализ FISH следует использовать для окончательной классификации.
В заключение, тщательный анализ 1463 случаев рака Китайский GC /GEJ с использованием FDA реагенты показали обсуждения и гиперэкспрессией HER2 в 9,8% карцином, с сильным предпочтением GEJ место, кишечника подтипа рака, а также или умеренно дифференцированных карцином. Приблизительно 29% IHC 2+ случаев показал Her2
амплификации гена, и была высокая конкорданс ставка (98,5%) между IHC и FISH в ГХ и GEJ аденокарциномы.
Декларациях
Выражение признательности
Данное исследование была поддержана грантами от надежды Специального фонда Пекине Run (LC2012A08) и Национального фонда естественных наук Китая (30801344).
авторов оригинальные представленные файлы для изображений изображения Ниже приведены ссылки на авторов оригинальных файлов представлены для изображений. 'Исходный файл для фигурного 1 13000_2013_758_MOESM2_ESM.pdf Авторского 13000_2013_758_MOESM1_ESM.tiff авторов исходного файла для фигурного 2 13000_2013_758_MOESM3_ESM.pdf Авторского исходного файла для фигурного 3 13000_2013_758_MOESM4_ESM.pdf авторов исходного файла для фигурного 4 исходного файла 13000_2013_758_MOESM5_ESM.pdf Авторского на рисунке 5 "исходный файл для фигурного 6 13000_2013_758_MOESM7_ESM.pdf Авторского 13000_2013_758_MOESM6_ESM.pdf авторов исходного файла для фигурного 7 Конкурирующие интересы
ни один из авторов не имеет принадлежности или конфликт интересов.
взносов Авторского
Исследование концепция и дизайн : JY, NL. Анализ и интерпретация данных: LS, JY. Подготовка рукописи: LS, JY. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

• Высокоинтенсивный сфокусированный ультразвук обеспечивает паллиативное для метастазов в печени вызывает ж…
• Антагонист окситоцина /рецептора вазопрессина атозибан задерживает опорожнение желудка полутвердого еды по…