la expresión de HER2 y las características clínico-patológicas relevantes en el adenocarcinoma gástrico y la unión gastroesofágica en una población china

la expresión de HER2 y las características clínico-patológicas relevantes en el adenocarcinoma gástrico y la unión gastroesofágica en una población Chinese Resumen Antecedentes
Con criterios de puntuación de inmunohistoquímica variada y cohortes de pacientes, las tasas de positividad para HER2 en cáncer gástrico (CG) y la unión gastroesofágica ( UGE) adenocarcinoma se ha informado de una amplia gama. Recientemente estandarizado criterios de puntuación para GC y el cáncer de la UGE se ha establecido y recomendado. En este estudio, la frecuencia de expresión de HER2 y la relación entre la expresión de HER2 y características clinicopatológicas fueron examinados en una gran cohorte de GC chino y pacientes con cáncer de la UGE.
Métodos
un total de 1463 pacientes, incluyendo 929 GC primaria y 534 adenocarcinomas primarios de la UGE, se analizó de forma retroactiva para la sobreexpresión de HER2 por inmunohistoquímica (IHC). Fluorescencia en análisis de hibridación (FISH)
situ se utilizó en 308 GCs y Gej casos de adenocarcinoma de evaluar HER2
amplificación de genes.
Resultados
sobreexpresión de HER2 (3+) se detectó en el 9,8% de los carcinomas y más frecuentemente observado en casos de cáncer de la UGE, en el tipo intestinal, y en el bien o moderadamente diferenciado tipo (P
= 0,003, 0,000, y 0,000, respectivamente). HER2 equívoca (2+) se detectó en el 14,4% de los casos. En cuanto a los 308 casos analizados por FISH, 39 (de 40, 97,5%) IHC 3+ casos, 11 (de 38, 28,9%) casos de IHC 2+, y 3 (de 230, 1,3%) IHC 1 + /0 casos mostró HER2
amplificación de genes. Se demostró una alta tasa de concordancia (98,5%) entre IHC y FISH.
Conclusiones
Aproximadamente el 10% de los pacientes chinos con GC primario y adenocarcinoma UGE eran HER2-positivo en IHC. La sobreexpresión de HER2 se asocia con el sitio de la UGE, subtipo de cáncer intestinal, y los carcinomas bien o moderadamente diferenciados
diapositivas virtuales comentario El preparaciones virtuales (s) de este artículo se puede encontrar aquí:. Http: //www. Diagnosticpathol gía. diagnomx. eu /vs /1935951199941072.
Palabras clave
HER2 gástrico cáncer gastroesofágico cruce adenocarcinoma chinos Clinicopathological ofrece el fondo
cáncer gástrico (CG) es el cuarto tipo de cáncer y el más comúnmente diagnosticado segunda causa más común de muerte por cáncer en todo el mundo [1]. Se ha sugerido que la tasa de incidencia de la unión gastroesofágica adenocarcinoma (UGE) se incrementó en los últimos años [2, 3]. A pesar de algunos avances en la prevención y el tratamiento del cáncer gástrico, la supervivencia a los 5 años se mantiene alrededor del 20% en la mayoría de lugares del mundo. HER2 es ahora bien reconocida como un factor clave en el desarrollo de ciertos tumores sólidos humanos, especialmente en el cáncer de mama. HER2
amplificación de genes y la sobreexpresión de la proteína, que se producen en 20% a 25% de los pacientes de cáncer de mama, han sido reconocidos como marcadores de pronóstico y predictivo para el tratamiento [4]. Se han establecido múltiples métodos de detección para examinar el estado de HER2
expresión génica y proteica [5-8]. Trastuzumab, un anticuerpo monoclonal recombinante proteína de direccionamiento HER2, ahora se aplica no sólo en los casos de cáncer de mama metastásico, sino también para casos localizados como terapia adyuvante [9, 10]. Un reciente estudio de fase III aleatorio (TOGA) reveló que el tratamiento de combinación con la supervivencia trastuzumab y quimioterapia mejorado significativamente en los pacientes con GC avanzado o cáncer de la UGE con sobreexpresión de HER2 [11]. Por lo tanto, el trastuzumab fue aprobado recientemente para el tratamiento de los adenocarcinomas metastásicos del estómago y de la UGE en muchos países [12-17].
Aunque muchos estudios han evaluado previamente el estado de HER2 en GC, las cohortes de pacientes y criterios de puntuación han variado, lo que resulta en discrepancias en las tasas de HER2-positividad que varía de aproximadamente 4% a 53%, con una tasa media de 18% [18]. El estudio ToGA desarrollado un nuevo conjunto de criterios de puntuación de IHC basado en el estudio de Hofmann et al. [19] y se encontró HER2 positivo (definido como IHC 3+ o IHC 2 + /FISH +) tumores en el 16% de los casos de CG metastásicos. La eficacia de trastuzumab para el tratamiento de GC metastásico con sobreexpresión de HER2 se demuestra en el estudio ToGA también es prometedor para el cáncer gástrico HER2 positivo resecable. Sin embargo, se han realizado pocos estudios para examinar la frecuencia de los tumores HER2 positivos determinados por los nuevos criterios en el cáncer gástrico resecable [20, 21], sobre todo en una gran cohorte de China. En este estudio, el análisis IHC de acuerdo con los criterios de puntuación estandarizada se utilizó para evaluar la incidencia de positividad para HER2 en GC primario resecado y muestras de cáncer de la UGE en un C9pt >? La relación entre la sobreexpresión de HER2 y amplificación de genes también se examinó en GC y la UGE . Métodos de adenocarcinoma

muestras
Un total de 1.463 pacientes con adenocarcinoma GC primaria o UGE, que recibieron cirugía curativa (sin antecedentes de la quimioterapia neoadyuvante) en el Instituto del cáncer & Hospital, Academia China de Ciencias Médicas (CICAMS), Beijing, China, entre agosto de 2009 y febrero de 2012, se incluyó en este estudio retrospectivo. Todas las muestras tumorales fueron fijadas en formol al 10% tamponado neutro durante 24-48 horas y se incluyeron en parafina, y rutinariamente diagnosticados en el Departamento de Patología, CICAMS, Beijing. El protocolo de estudio fue aprobado por la Junta de Revisión Institucional (IRB). Los pacientes fueron revisados ​​los expedientes médicos para obtener los pacientes clinicopathological parámetros, incluyendo la edad al momento del diagnóstico, el sexo, localización del tumor, la clasificación histológica, y el estadio TNM patológico. La clasificación histológica se determinó de acuerdo con la clasificación de la Organización Mundial de la Salud (OMS) y la clasificación de Lauren.
inmunohistoquímica automatizada
IHC se realizó en secciones de 4 micras de espesor utilizando una tinción de portaobjetos automatizado, el XT Benchmark de Ventana (Ventana Medical Systems , Tucson, AZ, EE.UU.), de acuerdo con las instrucciones del fabricante, para la Ventana CONFIRM ™ HER2 /neu (4B5) conejo monoclonal Anticuerpo primario. HER2 IHC se obtuvo utilizando el sistema de puntuación propuesto por Hofmann et al. [19] en la cohorte ToGA de cáncer gástrico (puntuación TOGA) y Ruschoff et al. [22] de la siguiente manera: 0, sin tinción o reactividad membranosa en < 10% de las células tumorales; 1+, la reactividad membranosa débil /apenas perceptible en ≥10% de las células tumorales (células son reactivos sólo en parte de su membrana); 2+, débil a moderada reactividad membranosa completa, basolateral o lateral en ≥10% de las células tumorales; y 3+, la reactividad membranosa completa, basolateral o lateral de fuerte intensidad en ≥10% de las células tumorales.
Las muestras con resultados IHC IHC 0 ó 1+ fueron considerados negativos para la sobreexpresión de HER2, mientras que las muestras con resultados IHC 3+ se consideraron positivos para la sobreexpresión de HER2. Las muestras con resultados IHC 2+ se consideraron equívoco en cuanto a la sobreexpresión de HER2.
Fluorescencia de hibridación in situ

fluorescencia de hibridación in situ
(FISH) El análisis se llevó a cabo con el kit y procedimientos sonda de ADN HER2 PathVysion (Vysis /Abbott, Abbott Park, IL, EE.UU.). El kit contiene dos sondas de ADN marcados con fluorocromos, LSI HER2 (marcado con SpectrumOrange) y CEP17 (cromosoma 17 de la sonda de enumeración, marcada con SpectrumGreen). El pretratamiento se llevó a cabo con el Kit de Pretratamiento de parafina (VysisAbbott). Las señales de HER2 y CEP17 señales de 20 núcleos de las células tumorales invasoras en dos áreas diferentes se contaron usando un microscopio de epifluorescencia Zeiss AxioImager M2 (Carl Zeiss, Oberkochen, Alemania) equipado con un 100 × aceite objetivo de inmersión y 4 ', 6'-diamidino -2-fenilindol (DAPI) espectro /verde /naranja filtros de paso de banda individuales y triples. El HER2 /cromosoma 17 coeficientes se interpretaron como sigue: una relación HER2 /CEP17 mayor que 2,2 se definió como la amplificación del HER2
gen, mientras que una relación < 1,8 se definió como no amplificación del HER2
gen. Cuando la relación fue de entre 1,8 y 2,2, señales en otros 20 núcleos se contaron, y se determinó la relación de HER2 /CEP17 en un total de 40 núcleos. Cuando la relación era ≥2.0, se define como la amplificación del HER2
gen; de lo contrario, se define como la ausencia de amplificación del gen HER2
.
El análisis estadístico
análisis estadístico se realizó mediante la prueba de chi-cuadrado para analizar las asociaciones entre el estado de HER2 y los parámetros clínico-patológicos. Un valor de p inferior a 0,05
fue considerado significativo. Los datos fueron analizados utilizando el programa estadístico SPSS para Microsoft Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, EE.UU.).
Resultados
sobreexpresión de HER2 y las características clinicopatológicas
Un total de 1.463 pacientes se evaluó mediante análisis IHC. características clínico-patológicas de los pacientes se enumeran en la Tabla 1. La edad media fue de 58 años (rango, 20 a 82 años), con un predominio del sexo masculino (75,5%). De todos los pacientes, había 650 casos (44,4%) de tipo intestinal por la clasificación de Lauren, 564 casos (38,6%) de tipo difuso, y 249 casos (17%) de tipo mixto. En cuanto a la ubicación del tumor, aproximadamente dos tercios de los tumores eran cánceres gástricos primarios (63,5%), y un tercio fue adenocarcinomas UGE primaria (36,5%). Los tumores fueron pobremente diferenciados en el 73,1%, moderadamente diferenciado en el 25,2%, y bien diferenciado en el 1,7%. En general, la mayoría de los pacientes estaban en el estadio patológico T3 (73,4%), con 14,1%, 10%, y 2,5% en la etapa T1, T2 y T4, respectivamente. En cuanto a la etapa patológica N, hubo una distribución aproximadamente igual de pacientes en N0, N1, N2, N3 o etapas (28,1%, 16,1%, 20,9%, 34,9%, respectivamente). La mayoría de los pacientes (97,7%) no tenía metastases.Table distante 1 La correlación entre el nivel de expresión de HER2 y parámetros clínico
general
HER2
HER2

HER2

sobreexpresión
equívoco
negativo
valor de p
característica patológica
n = 1463
n = 143 (%) = 211
n (%) n =
1109 (%)
edad media al diagnóstico
0.102
≥60 años
683
80 (11,7)
108 (15,8)
495 (72,5) Hotel < 60 años
780
63 (8.1)
103 (13,2)
614 (78,7) Sexo seguro
0.344
Hombre
1104
109 (9,9)
171 (15,5)
824 (74,6)
Mujer
359
34 (9,5)
40 (11,1)
285 (79,4)
Localización del tumor
0,003
GC
929
65 (7,0) 121
(13.0)
743 (80,0)
UGE
534
78 (14,6)
90 (16,9)
366 (68,5)
subtipo tumoral gratis (clasificación de Lauren ): perfil del 0,000
intestinal
650
109 (16,8)
111 (17,1)
430 (66,2)
difuso
564 página 13 (2.3)
63 (11,2)
488 (86,5)
Mixta
249
21 (8,4)
37 (14,9)
191 (76,7)
tumor diferenciación
0.000
Bueno
25 página 4 (16) página 9 (36) página 12 (48) guía empresas Moderadamente 369
74 (20.1): perfil 70 ( 19.0)
225 (61,0)
mal
1069
65 (6.1)
132 (12,3)
872 (81,6)
pT estado
0,053
pT1
206
16 (7,8)
33 (16,0)
157 (76,2)
pT2
147
23 (15,6)
28 (19,0)
96 (65,3)
pT3
1074
102 (9,5)
145 (13,5)
827 (77,0)
pT4
36 página 2 (5.6)
5 (13,9)
29 (80,6)
estado pN
0,074
pN0
411
39 (9,5)
66 (16,1)
306 (74,5 )
pN1
235
27 (11,5)
42 (17,9)
166 (70,6)
pN2
306
20 (6,5)
42 ( 13.7)
244 (79,7)
pN3
511
57 (11,2)
61 (11,9)
393 (76,9)
pm estado de
0,571
pM0
1429
140 (9.8)
119 (8.3)
1080 (75,6)
pM1
34 página 3 (8,8) página 2 (5.9)
29 (85,3) Francia stages pTNM
0,327
IA
162 página 14 (8,6)
29 (17,9)
119 (73,5)
IB
93 página 8 (8.6)
17 (18,3)
68 (73,1)
IIA
201
25 (12,4)
33 (16,4)
143 (71,1 )
IIB
230
25 (10,9)
34 (14,8)
171 (74,3)
IIIA
264
15 (5,7)
37 ( 14.8)
212 (80,3)
IIIB
455
51 (11,2)
56 (12,3)
348 (76,5)
IIIC
24 página 2 (8.3) página 3 (12,5) página 19 (79,2)
IV
34 página 3 (8,8) página 2 (5.9)
29 (85,3) Red de los 1463 pacientes, 143 (9,8%) pacientes se anotó como la sobreexpresión de HER2 (3+), mientras que 211 (14,4%) y 1109 (1463, 75,8%) fueron equívocos y negativa, respectivamente. La Tabla 1 resume el estado de la expresión de HER2 por subgrupos. HER2 se sobreexpresa (puntuación 3+) en 7,0% (65/929) de los casos de GC y 14,6% (78/534) de los casos de adenocarcinoma Gej (Figura 1A). se observó expresión equívoca (2 +) de la proteína HER2 en 13,0% (121/929) de los casos de GC y 16,9% (90/534) de los casos de adenocarcinoma Gej (Figura 1B). HER2 era negativo (1 + /0) en 80,0% (743/929) de los casos de GC y 68,5% (366/534) de las muestras de adenocarcinoma Gej (Figura 1C y D). Se encontró una diferencia significativa en la sobreexpresión de HER2 entre grecochipriotas y Gej adenocarcinomas (7,0% vs. 14,6%, p Restaurant < 0,05). La sobreexpresión de HER2 se asocia con los carcinomas de tipo intestinal por la clasificación de Lauren (P Hotel < 0,001): 16,8% vs. intestinal 2,3 /8,4% en los cánceres de tipo mixto diffuse- /. La sobreexpresión de HER2 también se correlaciona con carcinomas bien o moderadamente diferenciados en función de la clasificación de la OMS. No se observó correlación entre HER2 sobreexpresado y no sobreexpresa casos en términos de edad, sexo, PT, N, factores M, o el estadio TNM patológico. Figura 1 Casos representativos de tinción IHC y FISH análisis de GC y el adenocarcinoma de la UGE. A. HER2 IHC tinción muestra la reactividad membranosa completa, basolateral o lateral de intensidad fuerte (3+) en las células tumorales (aumento original, × 40). B. HER2 IHC tinción muestra débil a moderada reactividad completa, basolateral o lateral membranosa (2 +) en las células tumorales (aumento original, × 100). C. reactividad débil /apenas perceptible membranosa (1+) en las células tumorales (aumento original, × 200). D. ninguna tinción (0) en las células tumorales (aumento original, × 200). E. un caso GC con la amplificación de HER2 utilizando el análisis de FISH. Señales verdes se refieren a la sonda de referencia de Chr. 17 centrómero, mientras que las señales rojas son la sonda objetivo para HER2
. Un caso F. GC sin amplificación de HER2 mediante análisis FISH.
Concordancia de HER2 IHC y FISH análisis
FISH se realizó en 308 casos de adenocarcinoma de GC y la UGE seleccionados al azar, incluyendo 40 casos con sobreexpresión de HER2 (IHC 3+), 38 casos con equívocos (IHC 2+), y 230 casos con negativo (IHC + 1/0) expresión de HER2. Se observó HER2
de amplificación en el 97,5% (39/40) de HER2 IHC 3+ casos, el 28,9% (11/38) de HER2 IHC 2+ casos, y el 1,3% (3/230) de HER2-negativo (1 + /0) casos, con una tasa de concordancia del 98,5% entre IHC y FISH (Tabla 2) (Figura 1 e y F) .Tabla 2 Correlación entre la sobreexpresión de HER2 y amplificación de genes en GC y el adenocarcinoma UGE
Fish &
IHC
total
3+ 2+

+ 1/0

amplificación
39 (97,5%) página 11 (28,9%) página 3 (1,3%)
53
Sin amplificación
1 (2,5%)
27 (71,1% )
227 (98,7%)
255
total
40
38
230 308

Discusión
En este estudio, 143 de 1463 (9,8% ) de los casos de adenocarcinoma Gej GC y eran HER2 positivo (3+) por IHC en uno de los mayores estudios chinos hasta la fecha. En el ensayo ToGA, el porcentaje de GC o los pacientes con cáncer Gej HER2 positivo (positivo + 2 /FISH IHC 3+ o IHC) fue del 22,1% en general y alrededor de 10,4% de IHC 3+ en muestras resecadas [23], similar a la resultado actual. Estudios recientes también informaron de un rango del 8,5% al ​​10,3% para la sobreexpresión de HER2 en GC [20, 21, 24]. Recientemente, tres estudios de casos de CG chinos aplican los mismos reactivos aprobados por la FDA y los criterios de puntuación y reportaron tasas HER2 IHC 3+ de 9,0% (77/860) [25], el 6,9% (10/145) [26], y 5.8 % (4/69) [27], respectivamente, todos ligeramente más bajo que el presente resultado. Esta variación puede explicarse en parte por los diferentes conjuntos de la muestra. Además, HER2-positividad variarse sitio del tumor, con tasas más altas de HER2-positividad en la UGE adenocarcinoma que en el cáncer de estómago en este estudio (14,6% vs. 7,0%, respectivamente; P
< 0,01), lo que es consistente con los resultados de otros estudios [11, 20]. En el ensayo ToGA, los países con la mayor proporción de la UGE: Se encontró que el cáncer de estómago a tener tasas de positividad para HER2 superiores a la media, independientemente del tamaño de la muestra [23]. Otra explicación es la diferente relación entre intestinal: cáncer difuso /mixto entre los estudios. Una asociación positiva entre la positividad para HER2 y los cánceres de tipo intestinal se identificó en este y otros estudios [28-33]. En el ensayo ToGA, por ejemplo, los países con tasas más altas de: intestinal. Difusa cáncer /mixta ha aumentado las tasas de positividad para HER2 [23]
no se encontró correlación entre la sobreexpresión de HER2 y PT, N o factores M, o TNM etapas, en el presente estudio. Estudios previos incluyendo todas las etapas patológicas también han informado de ninguna correlación entre el estadio patológico y la sobreexpresión [20, 21, 24]. Una correlación de HER2-positividad con carcinomas bien o moderadamente diferenciados fue encontrado en el presente estudio (P Hotel < 0,01). Sin embargo, otros estudios demostraron tanto una asociación y no hay asociación entre la sobreexpresión de HER2 y la diferenciación del tumor [25, 32, 34, 35]. Estos datos contradictorios pueden deberse a diferentes tamaños de muestra y la baja prevalencia de HER2 en GC y el adenocarcinoma de la UGE. Además, los métodos diferentes de sistemas de evaluación y de calificación con diferentes puntos de corte se utilizaron antes de la creación de una guía estándar para evaluar la expresión de HER2. Tal vez con las directrices actuales para la evaluación consistentes HER2 en esta enfermedad, los estudios futuros reforzarán la claridad con respecto a este tema. Francia El presente estudio reveló una alta tasa de concordancia, el 98,5%, entre IHC y FISH, que es similar a otro estudio de resecciones quirúrgicas de 145 casos de CG chinos, con una tasa de concordancia del 94,5% [26]. Por el contrario, en el estudio ToGA, la tasa de concordancia de IHC y FISH fue del 87,2%, un 7,5% de IHC + 1/0 se encontraron muestras y el 54,6% de los casos de IHC 2+ ser FISH-positivo [23]. Una de las posibles explicaciones para esta discrepancia puede haber diferentes tipos de muestras y reactivos. En el estudio ToGA, se incluyeron dos biopsias y muestras resecadas quirúrgicamente; la tasa de positividad para HER2 fue mayor en las biopsias que en las piezas resecadas quirúrgicamente (23,1% vs. 19,9%, p = 0,03), y las muestras de biopsia también eran más propensos a ser HER2-amplificado de muestras quirúrgicas cuando se analizó mediante FISH (P = 0,01) que por IHC [23]. La mayoría de los estudios actuales que utilizan una guía estándar para la evaluación de la expresión de HER2 biopsias utilizadas y microarrays de tejidos (TMA), que se probaron análoga a biopsias, para interrogar a su condición de GC. La tasa de concordancia de IHC y FISH en estos estudios varió de 88,6% a 97,7% [20, 32, 36]. Un estudio específico evaluación de expresión de la proteína HER2 en las secciones de todo el tejido y TMA se llevó a cabo, lo que indica una discrepancia en la expresión de HER2 en las secciones de todo el tejido de las TMA. Por ejemplo, la proporción de IHC 2+ fue del 4,7% en las secciones de todo el tejido, mientras que fue de 8,6% en las TMA, lo que podría explicarse en parte por la expresión de HER2 heterogénea [33]. Otra posibilidad, que fue revelado por un estudio con el objetivo de validar la base de la valoración HER2 expresión en GC, fue interpretaciones diferentes de tinción de las TMA entre los observadores, a pesar de una pauta uniforme de evaluación fue seguida [22]. Por lo tanto, la separación segura de IHC 1 + /2 + 0 y IHC puede ser difícil en muestras de biopsia y el análisis FISH debe ser utilizado para la clasificación definitiva.
En conclusión, un análisis exhaustivo de 1463 casos de cáncer de china GC /Gej utilizando la FDA -aprobada reactivos mostraron sobreexpresión de HER2 en el 9,8% de los carcinomas, con una fuerte preferencia por la UGE ubicación, subtipo de cáncer intestinal, y los carcinomas bien o moderadamente diferenciados. Aproximadamente el 29% de los casos de IHC 2+ mostró HER2
amplificación de genes, y había un alto índice de concordancia (98,5%) entre IHC y FISH en GC y el adenocarcinoma de la UGE.
Declaraciones
Agradecimientos Este estudio
con el apoyo de subvenciones del Fondo esperanza Beijing Ejecutar Especial (LC2012A08) y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (30801344).
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contribuciones de los autores concepto y el diseño del estudio JY, NL. Análisis e interpretación de datos: LS, JY. Redacción del manuscrito: LS, JY. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

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