expression de HER2 et les caractéristiques clinico pertinentes gastrique et gastro- jonction adénocarcinome dans une population chinoise

expression de HER2 et les caractéristiques clinico pertinentes gastrique et gastro- jonction adénocarcinome dans une population chinoise
Background
Résumé Avec immunohistochimie variés critères de notation et des cohortes de patients, les taux positivité HER2 dans le cancer gastrique (GC) et gastroesophageal jonction ( GEJ) adénocarcinome ont été rapportés avec une large gamme. Récemment normalisé les critères de notation pour GC et le cancer GEJ a été établie et recommandée. Dans cette étude, la fréquence d'expression HER2 et la relation entre l'expression de HER2 et les caractéristiques clinico ont été examinés dans une grande cohorte de GC chinois et les patients atteints de cancer gej.
Méthodes
Un total de 1463 patients, dont 929 primaires et GC 534 primaire adénocarcinomes GEJ, a été rétrospectivement analysé pour la surexpression de HER2 par immunohistochimie (IHC). Résultats de Fluorescence hybridation (FISH) l'analyse in situ a été utilisé dans 308 GCS et gej cas d'adénocarcinome pour évaluer le gène de l'amplification de HER2.
surexpression de HER2 (3+) a été détectée dans 9,8% des carcinomes et plus fréquemment observée dans les cas de cancer gej, dans le type intestinal, et dans le puits ou modérément différencié de type (P
= 0,003, 0,000 et 0,000, respectivement). HER2 équivoque (2 +) a été détecté dans 14,4% des cas. En ce qui concerne les 308 cas analysés par FISH, 39 (de 40, 97,5%) 3+ cas IHC, 11 (de 38, 28,9%) 2+ cas IHC et 3 (230, 1,3%) IHC 1 + /0 cas ont montré une amplification de gène de HER2. Un taux de concordance élevé (98,5%) entre IHC et FISH a été démontrée.
Conclusions
Environ 10% des patients chinois avec GC primaire et GEJ adénocarcinome étaient HER2-positif sur IHC. Surexpression de HER2 a été associé avec le site GEJ, sous-type de cancer de l'intestin, et les carcinomes bien ou modérément différenciées
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Mots-clés
HER2 gastrique Gastroesophageal cancer jonction adénocarcinome Chineses clinicopathologique dispose Contexte
cancer gastrique (GC) est le quatrième cancer le plus souvent diagnostiqué et la deuxième cause la plus fréquente de décès liés au cancer dans le monde [1]. Il a été suggéré que le taux de jonction gastro-oesophagien (GEJ) adénocarcinomes d'incidence a augmenté au cours des dernières années [2, 3]. En dépit de quelques progrès dans la prévention et le traitement du cancer gastrique, la survie à 5 ans reste environ 20% dans la plupart des régions du monde. HER2 est maintenant bien reconnue comme un facteur clé dans le développement de certaines tumeurs humaines solides, notamment dans le cancer du sein. l'amplification du gène et de la protéine de la surexpression de HER2, qui se produisent dans 20% à 25% des patients atteints d'un cancer du sein, ont été reconnus comme des marqueurs pronostiques et prédictifs de traitement [4]. méthodes de détection multiples ont été établis pour examiner HER2
statut du gène et l'expression des protéines [5-8]. Trastuzumab, un anticorps monoclonal recombinant ciblant la protéine HER2, est maintenant appliquée non seulement dans les cas de cancer du sein métastatique, mais aussi à des cas localisés comme traitement adjuvant [9, 10]. Une récente étude de phase III randomisée (TOGA) a révélé que le traitement d'association avec le trastuzumab et la chimiothérapie améliore significativement la survie chez les patients atteints GC avancé ou de cancer GEJ avec surexpression de HER2 [11]. Ainsi, le trastuzumab a récemment été approuvé pour le traitement des adénocarcinomes métastatiques de l'estomac et GEJ dans de nombreux pays [12-17].
Bien que de nombreuses études ont déjà évalué le statut HER2 dans GC, les cohortes de patients et les critères de notation ont varié, ce qui entraîne des écarts dans les taux de HER2-positivité variant d'environ 4% à 53%, avec un taux médian de 18% [18]. L'étude ToGA a développé une nouvelle série de IHC critères de notation sur la base de l'étude réalisée par Hofmann et al. [19] et a trouvé HER2-positif (défini comme IHC 3+ ou IHC 2 + /FISH +) des tumeurs dans 16% des cas de GC métastatiques. L'efficacité du trastuzumab pour le traitement GC métastatique avec surexpression de HER2 démontré dans l'étude ToGA est également prometteur pour le cancer gastrique HER2-positif résécable. Cependant, peu d'études ont été menées pour examiner la fréquence des tumeurs HER2-positives déterminées par les nouveaux critères dans le cancer gastrique résécable [20, 21], en particulier dans une grande cohorte chinoise. Dans cette étude, l'analyse IHC selon des critères de notation normalisés a été utilisé pour évaluer l'incidence de la positivité HER2 GC primaire réséqué et des échantillons de cancer gej dans un C9pt >? La relation entre la surexpression de HER2 et l'amplification du gène a également été examiné en GC et GEJ . adénocarcinome
Méthodes
échantillons
Un total de 1.463 patients avec GC primaire ou GEJ adénocarcinome, qui a reçu une chirurgie curative (pas d'antécédents de chimiothérapie néoadjuvante) à l'Institut du cancer & Hôpital, Académie chinoise des sciences médicales (CICAMS), Beijing, Chine, entre Août 2009 et Février 2012, a été inclus dans cette étude rétrospective. Tous les échantillons de tumeurs ont été fixés dans 10% du formol tamponné neutre pendant 24-48 h et inclus dans la paraffine, et régulièrement diagnostiqués dans le département de pathologie, CICAMS, Beijing. Le protocole d'étude a été approuvé par le comité d'examen institutionnel (IRB). Les patients de dossiers médicaux ont été examinés pour obtenir des patients paramètres clinicopathologiques, y compris l'âge au moment du diagnostic, le sexe, la localisation de la tumeur, la classification histologique et le stade TNM pathologique. classification histologique a été déterminée selon la classification de l'Organisation mondiale de la santé (OMS) et la classification de Lauren.
immunohistochimie
automatisé IHC a été effectuée sur des coupes de 4 um d'épaisseur en utilisant une coloration de lames automatisée, l'indice de référence XT Ventana (Ventana Medical Systems , Tucson, AZ, USA), selon les instructions du fabricant, pour la Ventana CONFIRM ™ HER2 /neu (4B5) Lapin anticorps monoclonal primaire. HER2 IHC a été marqué en utilisant le système de notation proposé par Hofmann et al. [19] dans la cohorte ToGA du cancer gastrique (score ToGA) et Rüschoff et al. [22] comme suit: 0, aucune coloration ou la réactivité membraneuse < 10% des cellules tumorales; 1+, faible réactivité membraneuse /à peine perceptible dans ≥10% des cellules tumorales (cellules sont réactifs en partie seulement de leur membrane); 2+, faible à modéré complète, basolatérale ou latérale réactivité membraneuse dans ≥10% des cellules tumorales; et 3+, complète, basolatérale ou latérale réactivité membraneuse de forte intensité dans ≥10% des cellules tumorales.
Samples notation IHC 0 ou IHC 1+ ont été considérés comme négatifs pour la surexpression de HER2, alors que les échantillons de notation IHC 3+ ont été considérés comme positifs pour la surexpression de HER2. Les échantillons de notation IHC 2+ ont été considérés comme équivoques pour la surexpression de HER2.
Fluorescence l'hybridation in situ de
Fluorescence dans l'hybridation de in situ (FISH) analyse a été réalisée avec le kit de sonde PathVysion ADN HER2 et des procédures (Vysis /Abbott, Abbott Park, IL, USA). Le kit contient deux sondes d'ADN fluorochrome marqué, LSI HER2 (marqué avec SpectrumOrange) et CEP17 (chromosome 17 sonde d'énumération, marqué avec SpectrumGreen). Le prétraitement a été réalisé avec le kit de pré-traitement à la paraffine (VysisAbbott). Les signaux de HER2 et CEP17 signaux des 20 noyaux des cellules tumorales invasives dans deux zones différentes ont été comptées en utilisant un microscope à épifluorescence Zeiss AxioImager M2 (Carl Zeiss, Oberkochen, Allemagne) équipé d'une 100 huile objectif × immersion et 4 ', 6'-diamidino -2-phénylindole (DAPI) /spectre vert /orange filtres passe-bande simple et triple. HER2 /chromosome 17 rapports ont été interprétés comme suit: un rapport HER2 /CEP17 supérieur à 2,2 a été définie comme une amplification du gène de HER2, tandis qu'un rapport < 1,8 a été définie comme aucune amplification du gène de la HER2. Lorsque le rapport est compris entre 1,8 et 2,2, les signaux dans 20 noyaux ont été comptés, et le rapport HER2 /CEP17 dans un total de 40 noyaux ont été déterminés. Lorsque le rapport est ≥2.0, il a été définie comme une amplification du gène de HER2; sinon il a été défini comme aucune amplification du gène de HER2.
analyse statistique
analyse statistique a été réalisée en utilisant le test du chi-carré pour analyser les associations entre le statut HER2 et les paramètres clinicopathologiques. Une valeur P
moins de 0,05 a été considérée comme significative. Résultats de données ont été analysées à l'aide du logiciel de statistique SPSS pour Microsoft Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
surexpression de HER2 et les caractéristiques clinico
Un total de 1463 patients a été évaluée par l'analyse IHC. caractéristiques clinico Les patients de sont énumérés dans le tableau 1. Leur âge médian était de 58 ans (plage, 20 à 82 ans), avec une prédominance masculine (75,5%). De tous les patients, il y avait 650 cas (44,4%) de type intestinal par la classification de Lauren, 564 cas (38,6%) de type diffus, et 249 cas (17%) de type mixte. En termes de localisation de la tumeur, environ deux tiers des tumeurs étaient des cancers gastriques primaires (63,5%), et un tiers était des adénocarcinomes de GEJ primaire (36,5%). Les tumeurs ont été mal différenciées dans 73,1%, modérément différencié dans 25,2%, et bien différencié dans 1,7%. Dans l'ensemble, la plupart des patients étaient au stade T3 anatomopathologique (73,4%), avec 14,1%, 10%, et de 2,5% au stade T1, T2 et T4, respectivement. En ce qui concerne la phase de N anatomopathologique, il y avait une distribution à peu près égal de patients à N0, N1, N2 ou N3 étapes (28,1%, 16,1%, 20,9%, 34,9%, respectivement). La majorité des patients (97,7%) avait aucun metastases.Table distant 1 La corrélation entre le statut d'expression de HER2 et paramètres clinicopathologiques
global
HER2
HER2-

HER2-

surexpression
Equivocal
négatif
valeur P
fonction pathologique
n = 1463
n = 143 (%)
n = 211 (%)
n = 1109 (%)
âge au moment du diagnostic
0.102
≥60 ans
683
80 (11.7)
108 (15,8)
495 (72,5)
< 60 ans
780
63 (8.1)
103 (13.2)
614 (78,7)
Sex
0,344
Homme
1104
109 (9.9)
171 (15.5)
824 (74,6)
Femme
359
34 (9.5)
40 (11.1)
285 (79,4)
Tumor emplacement
0,003
GC
929
65 (7.0)
121 (13,0)
743 (80,0)
GEJ
534
78 (14,6)
90 (16,9)
366 (68,5)
tumeur sous-type
(classification Lauren )
0.000
Intestinal
650
109 (16,8)
111 (17.1)
430 (66,2)
diffuse
564
13 (2.3)
63 (11.2)
488 (86,5)
Mixed 249
21 (8.4)
37 (14,9)
191 (76,7)
Tumor différenciation
0.000
Eh bien
25
4 (16)
9 (36)
12 (48)
Modérément 369
74 (20.1)
70 ( 19.0)
225 (61,0)
mal
1069
65 (6.1)
132 (12,3)
872 (81,6)
pT état
0,053
pT1
206
16 (7.8)
33 (16,0)
157 (76,2)
pT2
147
23 (15,6)
28 (19,0)
96 (65,3)
pT3
1074
102 (9.5)
145 (13.5)
827 (77,0)
pT4
36
2 (5.6)
5 (13,9)
29 (80,6)
état pN
0,074
pN0
411
39 (9.5)
66 (16.1)
306 (74,5 )
pN1
235
27 (11.5)
42 (17,9)
166 (70,6)
pN2
306
20 (6.5)
42 ( 13.7)
244 (79,7)
pN3
511
57 (11.2)
61 (11,9)
393 (76,9)
pM état
0,571
pM0
1429
140 (9.8)
119 (8.3)
1080 (75,6)
pM1
34
3 (8.8)
2 (5.9)
29 (85,3)
étapes de pTNM
0,327
IA
162
14 (8.6)
29 (17,9)
119 (73,5)
IB
93
8 (8.6)
17 (18,3)
68 (73.1)
IIA
201
25 (12,4)
33 (16.4)
143 (71,1 )
IIB
230
25 (10.9)
34 (14,8)
171 (74,3)
IIIA
264
15 (5.7)
37 ( 14.8)
212 (80,3)
IIIB
455
51 (11.2)
56 (12,3)
348 (76,5)
IIIC
24
2 (8.3)
3 (12,5)
19 (79,2)
IV
34
3 (8.8)
2 (5.9)
29 (85,3)
les 1463 patients, 143 (9,8%) patients ont été notés comme surexpression de HER2 (3+), tandis que 211 (14,4%) et 1109 (1463, 75,8%) étaient équivoques et négative, respectivement. Le tableau 1 résume le statut d'expression de HER2 par sous-groupe. HER2 est surexprimé (score 3+) à 7,0% (65/929) des cas de GC et 14,6% (78/534) des cas d'adénocarcinome gej (figure 1A). expression equivoque (2 +) de la protéine HER2 a été observée chez 13,0% (121/929) des cas de GC et 16,9% (90/534) des cas d'adénocarcinome gej (figure 1B). HER2 a été négative (1 + /0) à 80,0% (743/929) des cas de GC et 68,5% (366/534) des échantillons d'adénocarcinome gej (Figure 1C et D). Une différence significative dans la surexpression de HER2 a été trouvée entre GCS et gej adénocarcinomes (7,0% vs 14,6%, P
< 0,05). Surexpression de HER2 a été associée aux carcinomes de type intestinal par la classification Lauren (P
< 0,001): 16,8% vs intestinale 2,3 /8,4% dans les cancers de type mixte diffuse- /. Surexpression de HER2 a également été corrélée avec des carcinomes bien ou modérément différenciées selon la classification de l'OMS. Aucune corrélation n'a été observée entre HER2 surexprimé et non surexprimé cas en termes d'âge, de sexe, pT, N, facteurs M, ou le stade TNM histopathologique. Figure 1 cas représentatifs de coloration IHC et de l'analyse FISH en GC et GEJ adénocarcinome. A. HER2 coloration IHC montre terminée, basolatérale ou latérale réactivité membraneuse de forte intensité (3+) dans les cellules tumorales (grossissement d'origine, x40). B. HER2 coloration IHC montre une réactivité faible à modéré complet, basolatérale ou latérale membraneux (2 +) dans les cellules tumorales (grossissement d'origine, x 100). C. réactivité faible /à peine perceptible membraneuse (1+) dans les cellules tumorales (grossissement original, × 200). D. aucune coloration (0) dans les cellules tumorales (grossissement d'origine, x 200). E. Un cas de GC avec amplification HER2 en utilisant une analyse FISH. signaux verts se réfèrent à la sonde de Chr de référence. 17 centromère, tandis que les signaux rouges sont la sonde cible pour HER2
. cas F. Un GC sans amplification HER2 en utilisant une analyse FISH.
Concordance de HER2 IHC et de l'analyse FISH
FISH a été réalisée dans 308 cas de GC et GEJ adénocarcinome choisis au hasard, y compris 40 cas avec surexpression de HER2 (IHC 3+), 38 cas avec équivoques (IHC 2+) et 230 cas avec négatif (IHC 1 + /0) expression de HER2. HER2 de l'amplification a été observée chez 97,5% (39/40) de HER2 IHC 3+ cas, 28,9% (11/38) de HER2 IHC 2+ cas, et 1,3% (3/230) de HER2-négatif (1 + /0) des cas, montrant un taux de concordance de 98,5% entre IHC et FISH (tableau 2) (Figure 1E et F) .Table 2 corrélation entre la surexpression de HER2 et l'amplification du gène dans GC et GEJ adénocarcinome
FISH

IHC
total
3+
2+
1 + /0

39 (97,5%)
amplification
11 (28,9%)
3 (1,3%)
53
Aucune amplification
1 (2,5%)
27 (71,1% )
40
38
230
308
Discussion
Dans cette étude, 143 de 1463 (9,8%
total de 227 (98,7%)
255 ) du GC et les cas d'adénocarcinome gej étaient HER2-positif (3+) par IHC dans l'une des plus grandes études chinoises à ce jour. Dans l'essai ToGA, le pourcentage de HER2-positif (IHC 3+ ou IHC 2 + /FISH positive) GC ou patients atteints de cancer gej était de 22,1% dans l'ensemble et autour de 10,4% du IHC 3+ dans des échantillons réséqués [23], semblable à la résultat présent. Des études récentes ont également rapporté une gamme de 8,5% à 10,3% pour la surexpression de HER2 dans GC [20, 21, 24]. Récemment, trois études en cas de GC chinois ont appliqué les mêmes réactifs approuvés par la FDA et les critères de notation et rapporté des taux de HER2 IHC de 9,0% (77/860) [25], 6,9% (10/145) [26], et 5,8 % (4/69) [27], respectivement, tous légèrement inférieur au résultat actuel. Cette variation peut être expliquée en partie par différents ensembles d'échantillons. En outre, la positivité HER2 modifiée par site de la tumeur, avec des taux plus élevés de positivité HER2 dans GEJ adénocarcinome que dans le cancer de l'estomac dans cette étude (14,6% contre 7,0% respectivement; P
< 0,01), ce qui est compatible avec les résultats d'autres études [11, 20]. Dans l'essai ToGA, les pays ayant le ratio le plus élevé de GEJ: cancer de l'estomac ont été trouvés à avoir des taux de HER2-positivité supérieurs à la moyenne, quel que soit la taille de l'échantillon [23]. Une autre explication est le rapport différent de l'intestin: cancer diffus /mixte entre les études. Une association positive entre la positivité HER2 et les cancers de type intestinal a été identifié dans cette étude et d'autres [28-33]. Dans l'essai ToGA, par exemple, pays où le taux de intestinal supérieur:. Diffus /cancer mixte avaient une augmentation des taux de HER2-positivité [23]
Aucune corrélation n'a été trouvée entre la surexpression de HER2 et pT, N, ou des facteurs M, ou TNM stades, dans la présente étude. Des études antérieures, y compris tous les stades pathologiques ont également rapporté aucune corrélation entre le stade pathologique et la surexpression [20, 21, 24]. Une corrélation de positivité HER2 avec des carcinomes bien ou modérément différenciés a été trouvé dans la présente étude (P
< 0,01). Cependant, d'autres études ont démontré à la fois une association et aucune association entre la surexpression de HER2 et la différenciation de la tumeur [25, 32, 34, 35]. Ces données contradictoires peuvent être dues à différentes tailles d'échantillon et la faible prévalence de HER2 dans GC et GEJ adénocarcinome. En outre, diverses méthodes d'évaluation et de notation des programmes avec différents seuils ont été utilisés avant la mise en place d'une ligne directrice standard pour l'évaluation de l'expression HER2. Peut-être avec les lignes directrices cohérentes actuelles pour l'évaluation de HER2 dans cette maladie, les futures études fourniront plus de clarté en ce qui concerne cette question.
La présente étude a révélé un taux élevé de concordance, 98,5%, entre IHC et FISH, qui est similaire à une autre étude de résections chirurgicales de 145 cas de GC chinois, avec un taux de 94,5% [26] de concordance. En revanche, dans l'étude ToGA, le taux de IHC et FISH concordance était de 87,2%, 7,5% de IHC 1 + 0 /échantillons et 54,6% des cas 2+ IHC ont été jugées FISH-positif [23]. L'une des explications possibles de cet écart pourrait être types d'échantillons différents et réactifs. Dans l'étude ToGA, les deux biopsies et des spécimens chirurgicalement réséquées ont été inclus; le taux positivité HER2 était plus élevé dans les biopsies que dans les échantillons chirurgicalement réséquées (23,1% vs 19,9%; P = 0,03), et des échantillons de biopsie étaient également plus susceptibles d'être HER2 amplifié que les échantillons chirurgicaux lors de l'analyse par FISH (P = 0,01) que par IHC [23]. La majorité des études actuelles en utilisant un guide standard pour l'évaluation de l'expression de HER2 biopsies utilisées et microarrays de tissu (AGT), qui ont été testés analogue à des biopsies, pour interroger le statut HER en GC. Le taux de concordance des IHC et FISH dans ces études variaient de 88,6% à 97,7% [20, 32, 36]. Une étude spécifique évaluant la protéine HER2 expression sur des sections entières de tissus et AGT a été effectuée, ce qui indique une différence dans l'expression HER2 sur des sections entières de tissus AGT. Par exemple, la proportion de IHC 2+ était de 4,7% dans les sections ensemble des tissus, alors qu'il était de 8,6% en AGT, ce qui pourrait être partiellement expliquée par l'expression de HER2 hétérogène [33]. Une autre possibilité, qui a été révélé par une étude visant à valider les lignes directrices pour l'évaluation HER2-expression dans GC, était des interprétations différentes de la coloration des AGT parmi les observateurs, même si une directive d'évaluation uniforme a été suivi [22]. Par conséquent, la séparation fiable de IHC 1 + /0 et IHC 2+ peut être difficile dans les échantillons de biopsie, et l'analyse FISH doit être utilisé pour le classement définitif.
En conclusion, une analyse approfondie des 1463 cas de cancer chinois GC /gej utilisant FDA réactifs CSEh ont montré une surexpression de HER2 dans 9,8% des carcinomes, avec une forte préférence pour GEJ emplacement, sous-type de cancer de l'intestin, et les carcinomes bien ou modérément différenciés. Environ 29% des cas IHC de gène a montré l'amplification de HER2, et il y avait un taux élevé de concordance (98,5%) entre IHC et FISH en GC et GEJ adénocarcinome.
Déclarations Remerciements
Cette étude a été pris en charge par des subventions du Fonds de Beijing espoir Run spécial (LC2012A08) et la national Natural science Foundation de Chine (30801344).
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Aucun des auteurs n'a une affiliation ou de conflit d'intérêts. les contributions des auteurs
concept d'étude et de conception : JY, NL. Analyse et interprétation des données: LS, JY. Rédaction du manuscrit: LS, JY. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

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