espressione di HER2 e le caratteristiche clinico-patologici rilevanti gastrico e gastroesofageo adenocarcinoma giunzione in una popolazione cinese

espressione di HER2 e le caratteristiche clinico-patologici rilevanti gastrico e gastroesofageo adenocarcinoma giunzione in una popolazione cinese
Abstract
sfondo
Con criteri di vario immunoistochimica di punteggio e coorti di pazienti, i tassi di HER2-positività in carcinoma gastrico (GC) e giunzione gastro-esofagea ( GEJ) adenocarcinoma sono stati segnalati con una vasta gamma. standardizzato Recentemente criteri di valutazione per GC e cancro GEJ è stato stabilito e consigliato. In questo studio, la frequenza di espressione di HER2 e il rapporto tra l'espressione di HER2 e le caratteristiche clinico-patologici sono stati esaminati in un'ampia coorte di GC cinese e pazienti affetti da cancro GEJ.
Metodi
Un totale di 1463 pazienti, di cui 929 primarie e GC 534 primaria adenocarcinomi GEJ, è stato retrospettivamente analizzato per HER2 mediante immunoistochimica (IHC). Fluorescenza in situ
ibridazione (FISH) analisi è stata utilizzata in 308 CGS e GEJ casi di adenocarcinoma per valutare HER2
amplificazione del gene.
Risultati
iperespressione di HER2 (3+) è stata rilevata nel 9,8% dei carcinomi e osservati più frequentemente in casi di cancro GEJ, nel tipo intestinale e nel pozzo o tipo moderatamente differenziato (P
= 0.003, 0.000 e 0.000, rispettivamente). HER2 equivoci (2+) è stata rilevata nel 14,4% dei casi. Per quanto riguarda i 308 casi analizzati mediante FISH, 39 (di 40, 97,5%) casi IHC 3+, 11 (di 38, 28,9%) casi IHC 2+, e 3 (230, 1,3%) IHC 1 + /0 casi ha mostrato HER2
amplificazione del gene. è stato dimostrato un alto tasso di concordanza (98,5%) tra il IHC e FISH.
Conclusioni
Circa il 10% dei pazienti cinesi con GC primaria e GEJ adenocarcinoma erano HER2-positivo su IHC. HER2 è stato associato con il sito GEJ, intestinale sottotipo di cancro, e carcinomi ben differenziati o moderatamente
diapositive virtuali
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Parole
HER2 cancro gastrico gastroesofageo giunzione adenocarcinoma Cinesi clinicopatologico dispone Sfondo
cancro gastrico (GC) è il quarto tumore più comunemente diagnosticato e la causa la seconda più comune di decessi correlati al cancro in tutto il mondo [1]. E 'stato suggerito che il tasso di incidenza della giunzione gastroesofagea (GEJ) adenocarcinoma è stata aumentata negli ultimi anni [2, 3]. Nonostante alcuni progressi nella prevenzione e nel trattamento del cancro gastrico, sopravvivenza a 5 anni resta intorno al 20% nella maggior parte del mondo. HER2 è ormai riconosciuto come un fattore chiave per lo sviluppo di alcuni tumori umani solidi, in particolare nel cancro al seno. HER2
amplificazione del gene e della proteina iperespressione, che si verificano nel 20% al 25% dei pazienti affetti da cancro al seno, sono stati riconosciuti come marcatori prognostici e predittivi per il trattamento [4]. metodi di rilevamento multipli sono stati istituiti per esaminare HER2
stato del gene e l'espressione della proteina [5-8]. Trastuzumab, un anticorpo monoclonale ricombinante mira la proteina HER2, viene ora applicata non solo nei casi di cancro al seno metastatico, ma anche per i casi localizzati come terapia adiuvante [9, 10]. Un recente studio di fase III randomizzato (ToGA) ha rivelato che il trattamento di combinazione con trastuzumab e chemioterapia significativamente migliorato la sopravvivenza nei pazienti con GC avanzato o cancro GEJ con iperespressione di HER2 [11]. Così, trastuzumab è stato recentemente approvato per il trattamento degli adenocarcinomi metastatico dello stomaco e GEJ in molti paesi [12-17].
Anche se molti studi hanno precedentemente valutato lo status di HER2 in GC, le coorti di pazienti e dei criteri di punteggio hanno variato, con conseguente discrepanze nei tassi di HER2-positività che variano da circa il 4% al 53%, con un tasso medio del 18% [18]. Lo studio ToGA ha sviluppato una nuova serie di IHC criteri di valutazione sulla base dello studio di Hofmann et al. [19] ed ha trovato HER2-positivo (definito come IHC 3+ o IHC 2 + /FISH +) tumori in 16% dei casi GC metastatici. L'efficacia di trastuzumab per il trattamento GC metastatico con iperespressione di HER2 dimostrato nello studio ToGA è anche promettente per il cancro gastrico operabile HER2-positivo. Tuttavia, sono stati condotti pochi studi per esaminare la frequenza di tumori HER2-positivi determinati dai nuovi criteri nel cancro resecabile gastrica [20, 21], soprattutto in un'ampia coorte cinese. In questo studio, l'analisi IHC secondo i criteri di valutazione standardizzati è stato utilizzato per valutare l'incidenza di HER2-positività in CG primaria asportato e campioni di cancro ġej in un C9pt >? Il rapporto tra iperespressione di HER2 e l'amplificazione del gene è stata anche esaminata in GC e GEJ . adenocarcinoma
Metodi
campioni
Un totale di 1.463 pazienti con GC primaria o GEJ adenocarcinoma, che ha ricevuto la chirurgia curativa (senza storia di chemioterapia neoadiuvante) in Cancer Institute & Ospedale, Accademia cinese delle scienze mediche (CICAMS), Pechino, Cina, tra agosto 2009 e febbraio 2012, è stato incluso in questo studio retrospettivo. Tutti i campioni di tumore sono stati fissati in 10% formalina tamponata neutra per 24-48 ore e inclusi in paraffina, e regolarmente diagnosticati presso il Dipartimento di Patologia, CICAMS, Pechino. Il protocollo di studio è stato approvato dal Institutional Review Board (IRB). I pazienti 'cartelle cliniche sono state riviste per ottenere dei pazienti parametri clinico-patologici, tra cui l'età al momento della diagnosi, il sesso, localizzazione del tumore, la classificazione istologica, e lo stadio TNM patologico. classificazione istologica è stato determinato in base alla classificazione dell'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) e la classificazione di Lauren.
immunoistochimica
Automated IHC è stata eseguita su sezioni di 4 micron di spessore con un coloratore scivolo automatico, il Benchmark XT Ventana (Ventana Medical Systems , Tucson, AZ, USA), secondo le istruzioni del produttore, per la Ventana CONFERMA ™ HER2 /neu (4B5) Coniglio anticorpo monoclonale primario. HER2 IHC è stato valutato con il sistema di punteggio proposto da Hofmann et al. [19] nella coorte ToGA di cancro gastrico (punteggio ToGA) e Ruschoff et al. [22] come segue: 0, senza macchie o reattività di membrana in < 10% delle cellule tumorali; 1+, debole /appena percettibile reattività di membrana in ≥10% delle cellule tumorali (le cellule sono reattivi solo in parte della loro membrana); 2+, debole a moderata completa, basolaterale o laterale reattività membranoso in ≥10% delle cellule tumorali; e 3+, completo, basolaterale o laterale reattività membranosa di forte intensità in ≥10% delle cellule tumorali.
campioni punteggio IHC 0 o IHC 1+ sono stati considerati negativi per HER2, mentre i campioni di punteggio IHC 3+ sono stati considerati positivi per HER2. I campioni di punteggio IHC 2+ sono stati considerati equivoci per HER2.
Fluorescenza in situ
ibridazione in situ fluorescente

ibridazione (FISH) analisi è stata condotta con il kit della sonda PathVysion HER2 DNA e procedure (Vysis /Abbott, Abbott Park, IL, USA). Il kit contiene due sonde a DNA fluorocromi marcato, LSI HER2 (marcato con SpectrumOrange) e CEP17 (cromosoma 17 sonda enumerazione, etichettato con SpectrumGreen). Pretrattamento è stata effettuata con il pretrattamento Kit paraffina (VysisAbbott). I segnali HER2 e CEP17 segnali di 20 nuclei di cellule tumorali invasive in due aree diverse sono state contate utilizzando un microscopio a epifluorescenza Zeiss AxioImager M2 (Carl Zeiss, Oberkochen, Germania) dotato di un obiettivo × 100 olio di immersione e 4 ', 6'-diamidino -2-phenylindole (DAPI) /Spectrum verde /arancio filtri passa-banda singole e triple. L'HER2 /cromosoma 17 rapporti sono stati interpretati come segue: il rapporto HER2 /CEP17 superiore 2.2 è stata definita come amplificazione del HER2
gene, mentre un rapporto < 1.8 è stato definito come nessuna amplificazione del HER2
gene. Quando il rapporto era fra 1,8 e 2,2, segnali in altre 20 nuclei sono stati contati, e il rapporto HER2 /CEP17 in un totale di 40 nuclei stata determinata. Quando il rapporto è stato ≥2.0, è stata definita come l'amplificazione del HER2
gene; in caso contrario è stata definita come nessuna amplificazione del HER2
gene.
Analisi statistica
analisi statistica è stata effettuata utilizzando il test chi-quadro per analizzare le associazioni tra lo status di HER2 e parametri clinico-patologici. Un valore di p
inferiore a 0,05 è stato considerato significativo. I dati sono stati analizzati utilizzando il programma software statistico SPSS per Microsoft Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
Risultati
iperespressione di HER2 e le caratteristiche clinico-patologici
Un totale di 1.463 pazienti è stata valutata mediante analisi IHC. caratteristiche clinico-patologici dei pazienti sono elencate nella tabella 1. La loro età media era di 58 anni (range, 20 a 82 anni), con una predominanza maschile (75,5%). Di tutti i pazienti, ci sono stati 650 casi (44,4%) di tipo intestinale di classificazione di Lauren, 564 casi (38,6%) di tipo diffuso, e 249 casi (17%) di tipo misto. In termini di localizzazione del tumore, circa i due terzi dei tumori erano tumori gastrici primari (63,5%), e un terzo era adenocarcinomi GEJ primaria (36,5%). I tumori sono stati scarsamente differenziati a 73,1%, moderatamente differenziato a 25,2%, e ben differenziati in 1,7%. In generale, la maggior parte dei pazienti erano in T3 stadio patologico (73,4%), il 14,1%, 10%, e 2,5% in fase T1, T2 e T4 rispettivamente. Per quanto riguarda la fase di N patologico, c'era una distribuzione approssimativamente uguale di pazienti a N0, N1, N2 o N3 stadi (28,1%, 16,1%, 20,9%, 34,9%, rispettivamente). La maggior parte dei pazienti (97,7%) non ha avuto metastases.Table distante 1 La correlazione tra lo stato di espressione di HER2 e parametri clinico-patologici
complesso
HER2
HER2

HER2

sovraespressione
Equivocal
negativo
valore P
caratteristica patologica
n = 1463
n = 143 (%)
n = 211 (%)
n = 1109 (%)
età alla diagnosi
0.102
≥60 anni
683
80 (11,7)
108 (15,8)
495 (72,5)
< 60 anni
780
63 (8.1)
103 (13.2)
614 (78,7)
Sex
0,344
Maschio
1104
109 (9,9)
171 (15.5)
824 (74,6)
femminile 359
34 (9.5)
40 (11.1)
285 (79,4)
Tumore posizione
0.003
GC
929
65 (7.0)
121 (13,0)
743 (80,0)
GEJ
534
78 (14,6)
90 (16,9)
366 (68,5)
Tumore sottotipo
(classificazione Lauren )
0.000
intestinale
650
109 (16.8)
111 (17.1)
430 (66,2)
Diffuse
564
13 (2.3)
63 (11.2)
488 (86,5)
misto 249
21 (8.4)
37 (14,9)
191 (76,7)
Tumore differenziazione
0.000
Bene
25 Pagina 4 (16)
9 (36)
12 (48)
moderatamente 369
74 (20.1)
70 ( 19,0)
225 (61,0)
mal
1069
65 (6.1)
132 (12.3)
872 (81,6)
pT stato
0,053
pT1
206
16 (7.8)
33 (16,0)
157 (76,2)
pT2
147
23 (15,6)
28 (19,0)
96 (65,3)
pT3
1074
102 (9.5)
145 (13,5)
827 (77,0)
pT4
36 Pagina 2 (5.6)
5 (13,9)
29 (80,6)
stato pN
0,074
pN0
411
39 (9.5)
66 (16.1)
306 (74,5 )
pN1
235
27 (11.5)
42 (17,9)
166 (70,6)
pN2
306
20 (6.5)
42 ( 13.7)
244 (79,7)
pN3
511
57 (11.2)
61 (11,9)
393 (76,9)
pM stato
0,571
PM0
1429
140 (9.8)
119 (8.3)
1080 (75,6)
PM1
34 Pagina 3 (8.8) Pagina 2 (5.9)
29 (85,3)
fasi pTNM
0,327
IA
162
14 (8.6)
29 (17,9)
119 (73,5)
IB
93 Pagina 8 (8.6)
17 (18,3)
68 (73,1)
IIA
201
25 (12.4)
33 (16,4)
143 (71.1 )
IIB
230
25 (10.9)
34 (14,8)
171 (74,3)
IIIA
264
15 (5.7)
37 ( 14.8)
212 (80,3)
IIIB
455
51 (11.2)
56 (12.3)
348 (76,5)
IIIC
24 Pagina 2 (8.3) Pagina 3 (12.5)
19 (79,2)
IV
34 Pagina 3 (8.8) Pagina 2 (5.9)
29 (85,3) Illustrazione Di i 1463 pazienti, 143 (9,8%) pazienti sono stati segnati come HER2 (3+), mentre 211 (14,4%) e 1109 (1463, 75,8%) sono stati equivoci e negativo, rispettivamente. La tabella 1 riassume lo stato di espressione di HER2 per sottogruppo. HER2 è sovraespresso (score 3+) a 7,0% (65/929) dei casi GC e del 14,6% (78/534) dei casi di adenocarcinoma ġej (Figura 1A). espressione equivoca (2+) della proteina HER2 è stata osservata nel 13,0% (121/929) dei casi GC e il 16,9% (90/534) dei casi di adenocarcinoma GEJ (Figura 1B). HER2 è negativo (1 + /0) a 80,0% (743/929) dei casi GC e 68,5% (366/534) dei campioni di adenocarcinoma GEJ (Figura 1C e D). Una differenza significativa in HER2 è stata trovata tra CGS e GEJ adenocarcinomi (7,0% vs 14,6%, P
< 0,05). HER2 è stata associata con i intestinali di tipo carcinomi dalla classificazione Lauren (P
< 0,001): 16,8% vs. intestinale 2,3 /8,4% nei tumori di tipo misto diffuse- /. HER2 è stato anche correlato con carcinomi bene o moderatamente differenziati secondo la classificazione WHO. Nessuna correlazione è stata osservata tra HER2 sovraespresso e non sovraespresso casi in termini di età, sesso, Pt, N, M fattori, o stadio TNM patologico. Figura 1 casi rappresentativi di IHC colorazione e analisi FISH in GC e GEJ adenocarcinoma. A. HER2 IHC colorazione mostra completa, basolaterale o laterale reattività membranosa di forte intensità (3+) nelle cellule tumorali (ingrandimento originale, × 40). B. HER2 IHC colorazione mostra debole a moderata completa, basolaterale o laterale reattività di membrana (2+) nelle cellule tumorali (ingrandimento originale, × 100). C. debole /appena percettibile reattività di membrana (1+) nelle cellule tumorali (ingrandimento originale, × 200). D. alcuna colorazione (0) nelle cellule tumorali (ingrandimento originale, × 200). E. un caso GC con l'amplificazione HER2 utilizzando l'analisi FISH. segnali verdi riferiscono alla sonda di riferimento di Chr. 17 centromero, mentre i segnali rossi sono la sonda bersaglio per HER2
. caso F. Un GC senza amplificazione HER2 utilizzando l'analisi FISH.
Concordanza di HER2 IHC e analisi FISH
FISH è stata eseguita in 308 casi GC e GEJ adenocarcinoma selezionati casualmente, tra cui 40 casi con iperespressione di HER2 (IHC 3+), 38 casi con equivoco (IHC 2+), e 230 casi con negativo (IHC 1 + /0) espressione di HER2. HER2
l'amplificazione è stata osservata nel 97,5% (39/40) di HER2 IHC 3+ casi, 28,9% (11/38) di HER2 IHC 2+ casi, e il 1,3% (3/230) di HER2-negativo (1 + /0) casi, mostrando un tasso di concordanza del 98,5% tra IHC e FISH (Tabella 2) (Figura 1E e F) .table 2 Correlazione tra iperespressione di HER2 e l'amplificazione genica in GC e GEJ adenocarcinoma
FISH

IHC
totale
3+
2+
1 + /0

amplificazione
39 (97,5%)
11 (28,9%)
3 (1,3%)
53
nessuna amplificazione
1 (2,5%)
27 (71,1% )
227 (98,7%)
255
totale
40
38
230
308
Discussione
In questo studio, 143 del 1463 (9,8% ) di GC e casi di adenocarcinoma GEJ erano HER2-positivo (3+) di IHC in uno dei più grandi studi cinesi fino ad oggi. Nello studio ToGA, la percentuale di GC o pazienti affetti da cancro GEJ HER2-positivo (+ 2 /FISH positivo IHC 3+ o IHC) è stato del 22,1% in generale e circa 10,4% di IHC 3+ in campioni resecati [23], simili al risultato attuale. Studi recenti hanno inoltre riferito una gamma di 8,5% al ​​10,3% per HER2 in GC [20, 21, 24]. Recentemente, tre studi di casi CG cinesi applicati gli stessi reagenti approvati dalla FDA e criteri di valutazione e hanno riportato tassi di HER2 IHC 3+ del 9,0% (77/860) [25], il 6,9% (10/145) [26], e 5.8 % (4/69) [27], rispettivamente, tutti leggermente inferiore all'attuale risultato. Questa variazione può essere in parte spiegata con diversi set di campioni. Inoltre, HER2-positività variata sito del tumore, con tassi più elevati di HER2-positività in GEJ adenocarcinoma rispetto al cancro allo stomaco in questo studio (14,6% contro 7,0%, rispettivamente; P
< 0,01), che è coerente con i risultati di altri studi [11, 20]. Nello studio ToGA, i paesi con il più alto rapporto di GEJ: cancro allo stomaco sono stati trovati ad avere superiori alla media i tassi di HER2-positività, indipendentemente dalle dimensioni del campione [23]. Un'altra spiegazione è il diverso rapporto tra intestinale: cancro diffuso /misto tra gli studi. Una correlazione positiva tra HER2-positività e intestinale tipo di cancro è stato identificato in questo e in altri studi [28-33]. Nello studio ToGA, per esempio, i paesi con elevati rapporti di intestinale:. Diffuso il cancro /mista avevano aumentato i tassi di HER2-positività [23]
Nessuna correlazione è stata trovata tra iperespressione di HER2 e PT, N, o fattori M, o TNM stadi, nel presente studio. Studi precedenti, tra cui tutte le fasi patologiche hanno anche riferito alcuna correlazione tra stadio patologico e sovraespressione [20, 21, 24]. Una correlazione di HER2-positività con carcinomi bene o moderatamente differenziati è stato trovato in questo studio (P
< 0,01). Tuttavia, altri studi hanno dimostrato sia un'associazione e nessuna associazione tra HER2 e differenziazione del tumore [25, 32, 34, 35]. Questi dati contrastanti possono essere dovute a differenti dimensioni del campione e la bassa prevalenza di HER2 in GC e GEJ adenocarcinoma. Inoltre, diversi metodi di sistemi di valutazione e di punteggio con diversi cut-punti sono stati utilizzati prima della costituzione di una linea guida standard per valutare l'espressione di HER2. Forse con le attuali linee guida coerenti per la valutazione HER2 in questa malattia, gli studi futuri forniranno maggiore chiarezza per quanto riguarda questo problema.
Il presente studio ha rivelato un alto tasso di concordanza, 98,5%, tra il IHC e FISH, che è simile a un altro studio di resezioni chirurgiche da 145 casi GC cinese, con un tasso di concordanza del 94,5% [26]. Al contrario, nello studio ToGA, il tasso di concordanza di IHC e FISH è stato 87,2%, come il 7,5% della IHC 1 + 0 /campioni e 54,6% dei casi IHC 2+ sono risultati FISH-positivo [23]. Una delle possibili spiegazioni per questa discrepanza potrebbe essere diverso tipi di campioni e reagenti. Nello studio ToGA, entrambe le biopsie e campioni chirurgicamente asportati sono stati inclusi; il tasso di HER2-positività è stata maggiore nelle biopsie che nei campioni chirurgicamente resecati (23,1% vs 19,9%; p = 0.03), e campioni bioptici sono stati anche maggiori probabilità di essere HER2-amplificato rispetto ai campioni chirurgici quando analizzato da FISH (P = 0.01) che da IHC [23]. La maggior parte degli studi in corso che utilizzano una linea guida standard per la valutazione di espressione di HER2 biopsie utilizzati e microarray di tessuti (TMAs), che sono stati testati analogo a biopsie, per interrogare il suo status in GC. Il tasso di concordanza di IHC e FISH in questi studi variava da 88,6% al 97,7% [20, 32, 36]. Uno studio specifico valutare l'espressione della proteina HER2 su sezioni di tessuto intero e TMA è stata condotta, che indica una discrepanza di espressione di HER2 su sezioni con tutto il tessuto da TMA. Per esempio, la percentuale di IHC 2+ è stato del 4,7% nelle sezioni con tutto il tessuto, mentre era del 8,6% nel TMA, che potrebbe essere parzialmente spiegato con l'espressione di HER2 eterogenei [33]. Un'altra possibilità, che è stato rivelato da uno studio allo scopo di validare la linea guida per la valutazione HER2-espressione in GC, è stato diverse interpretazioni di colorazione di TMA tra gli osservatori, anche se una linea guida valutazione uniforme è stato seguito [22]. Pertanto, la separazione affidabile di IHC 1 + /0 e IHC 2+ può essere difficile in campioni di biopsia, e l'analisi FISH deve essere usato per la classificazione definitiva.
In conclusione, un'analisi approfondita di 1463 casi di cancro cinese GC /GEJ utilizzando FDA reagenti -approvato mostravano iperespressione di HER2 nel 9,8% dei carcinomi, con una forte preferenza per GEJ posizione, intestinale sottotipo di cancro, e carcinomi ben differenziati o moderatamente. Circa il 29% dei casi IHC 2+ ha mostrato HER2
amplificazione genica, e c'era un alto tasso di concordanza (98,5%) tra il IHC e FISH in GC e GEJ adenocarcinoma.
Dichiarazioni
Ringraziamenti
Questo studio stata sostenuta da sovvenzioni dalla speranza Fondo Pechino Run speciale (LC2012A08) e la National Science Foundation naturale della Cina (30.801.344).
autori fascicoli presentati originali per
di seguito sono riportati i link ai file originali degli autori presentati per le immagini. 'file originale per la figura 1 13000_2013_758_MOESM2_ESM.pdf Autori 13000_2013_758_MOESM1_ESM.tiff autori file originale per la figura 2 13000_2013_758_MOESM3_ESM.pdf Autori file originale per la figura 3 13000_2013_758_MOESM4_ESM.pdf Autori file originale per la figura 4 file originale 13000_2013_758_MOESM5_ESM.pdf degli autori per la figura 5 'file originale per la figura 6 13000_2013_758_MOESM7_ESM.pdf autori 13000_2013_758_MOESM6_ESM.pdf autori file originale per la figura 7 Competere interessi
Nessuno degli autori ha un'affiliazione o conflitto di interesse.
autori contributi
concetto di Studio e progettazione : JY, NL. Analisi e interpretazione dei dati: LS, JY. Redazione del manoscritto: LS, JY. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

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