expressão HER2 e características clínico-patológicas relevantes na gástrica e gastroesofágico adenocarcinoma de junção em uma expressão chinesa population

HER2 e características clínico-patológicas relevantes na gástrica e gastroesofágico adenocarcinoma de junção em uma população chinesa
Abstract
Com critérios de pontuação imunohistoquímica variados e paciente coortes, as taxas de positividade HER2 no câncer gástrico (GC) ea junção gastroesofágico adenocarcinoma (JGE) foram relatados com uma vasta gama. Recentemente padronizados critérios de pontuação para o GC e câncer JGE foi estabelecido e recomendado. Neste estudo, a freqüência de expressão HER2 e da relação entre a expressão de HER2 e as características clinicopatológicas foram examinados em uma grande coorte de GC chinês e pacientes com câncer Gej.
Métodos
Um total de 1463 pacientes, incluindo 929 GCs primário e 534 adenocarcinomas JGE primário, foi retrospectivamente analisadas para HER2 sobre-expressão por imuno-histoquímica (IHQ). Fluorescência na análise de hibridação (FISH) situ
foi usada em 308 GCs e Gej casos de adenocarcinoma de avaliar HER2
amplificação do gene.
Resultados
HER2 sobre-expressão (3+) foi detectada em 9,8% dos carcinomas e mais frequente em casos de câncer Gej, no tipo intestinal, e para o bem ou moderadamente diferenciados tipo (P
= 0,003, 0,000 e 0,000, respectivamente). HER2 (2+) equívoca foi detectada em 14,4% dos casos. Como para os 308 casos analisados ​​por FISH, 39 (de 40, 97,5%) IHC 3+ casos, 11 (de 38, 28,9%) IHC 2+ casos e 3 (de 230, 1,3%) IHC /1 + 0 casos HER2 mostrou
amplificação do gene. A elevada taxa de concordância (98,5%) entre IHC e FISH foi demonstrada.
Conclusões
Aproximadamente 10% dos pacientes chineses com GC primário e JGE adenocarcinoma foram HER2-positivo no IHC. HER2 sobre-expressão foi associada com o site JGE, subtipo de câncer intestinal, e carcinomas bem ou moderadamente diferenciados
lâminas virtuais
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Palavras-chave
HER2 gástrica gastroesofágico câncer junção adenocarcinoma Chineses clinico-patológica caracteriza o fundo
câncer gástrico (CG) é o quarto câncer mais comumente diagnosticado ea segunda causa mais comum de mortes relacionadas ao câncer em todo o mundo [1]. Sugeriu-se que a taxa de incidência de junção gastroesofágico (JGE) adenocarcinoma foi aumentado nos últimos anos [2, 3]. Apesar de alguns avanços na prevenção e tratamento do cancro gástrico, sobrevida em 5 anos permanece em torno de 20% na maioria das partes do mundo. HER2 está agora bem reconhecido como um factor-chave para o desenvolvimento de certos tumores sólidos humanos, mais notavelmente em cancro da mama. HER2
amplificação do gene e proteína sobre-expressão, que ocorrem em 20% a 25% dos pacientes com câncer de mama, têm sido reconhecidos como marcadores prognósticos e preditivos para o tratamento [4]. Vários métodos de detecção foram estabelecidos para examinar HER2
estado do gene e expressão da proteína [5-8]. Trastuzumab, um anticorpo monoclonal recombinante alvo a proteína HER2, está agora a ser aplicada não só nos casos de câncer de mama metastático, mas também para casos localizados como terapia adjuvante [9, 10]. Um recente estudo de fase III randomizado (ToGA) revelou que o tratamento combinado com a sobrevivência trastuzumab e quimioterapia melhorou significativamente em pacientes com GC avançada ou câncer JGE com HER2 sobre-expressão [11]. Assim, trastuzumab foi recentemente aprovado para o tratamento de adenocarcinomas metastáticos do estômago e JGE em muitos países [12-17].
Embora muitos estudos tenham previamente avaliadas status de HER2 em GC, os grupos de pacientes e critérios de pontuação têm variado, resultando em discrepâncias nas taxas de positividade HER2 variando desde cerca de 4% a 53%, com uma taxa média de 18% [18]. O estudo ToGA desenvolveu um novo conjunto de critérios de pontuação IHC com base no estudo de Hofmann et al. [19] e constatou-HER2 positivo (definido como IHC ou IHC 3+ 2 + /+ FISH) tumores em 16% dos casos de GC metastáticas. A eficácia do trastuzumab para o tratamento de GC metastático com superexpressão de HER2 demonstrado no estudo ToGA também é promissor para câncer gástrico HER2-positivo operável. No entanto, poucos estudos têm sido conduzidos para examinar a frequência de tumores HER2-positivo determinado pelos novos critérios no cancro gástrico resectable [20, 21], especialmente em um grande grupo chinês. Neste estudo, a análise IHC de acordo com critérios de pontuação padronizados foram usados ​​para avaliar a incidência de positividade HER2 no GC primária ressecado e amostras de cancro Gej em um C9pt >? O relacionamento entre a sobreexpressão de Her2 e a amplificação do gene foi também examinada em GC e JGE . adenocarcinoma
Métodos
amostras
Um total de 1.463 pacientes com GC primária ou JGE adenocarcinoma, que recebeu cirurgia curativa (sem história de quimioterapia neoadjuvante) no Instituto &Câncer; Hospital, Academia Chinesa de Ciências Médicas (CICAMS), Beijing, China, entre agosto de 2009 e fevereiro de 2012, foi incluído neste estudo retrospectivo. Todas as amostras de tumores foram fixadas em formalina a 10% tamponada neutra, durante 24-48 h e embebidos em parafina, e rotineiramente diagnosticadas no Departamento de Patologia, CICAMS, Pequim. O protocolo do estudo foi aprovado pelo Institutional Review Board (IRB). Os pacientes 'registros médicos foram revisados ​​para obtenção dos pacientes os parâmetros clínico, incluindo a idade no momento do diagnóstico, sexo, localização do tumor, classificação histológica, e estágio TNM patológico. A classificação histológica foi determinada de acordo com a classificação da Organização Mundial da Saúde (OMS) e classificação de Lauren.
Imunohistoquímica
Automated IHC foi realizada em secções de 4 mm de espessura utilizando um corante de fotos automática, o benchmark XT Ventana (Ventana Medical Systems , Tucson, AZ, EUA), de acordo com as instruções do fabricante, para o Ventana CONFIRM ™ HER2 /neu (4B5) Coelho Anticorpo monoclonal primário. HER2 IHC foi marcado usando o esquema de pontuação proposto por Hofmann et al. [19] na coorte ToGA de câncer gástrico (pontuação ToGA) e Ruschoff et al. [22], como segue: 0, sem coloração ou reactividade membranosa em < 10% das células tumorais; 1+, /reactividade membranoso quase imperceptível fraco em ≥10% de células tumorais (células são reativas apenas em parte da sua membrana); 2 +, fraco a moderado completa, basolateral, ou lateral reactividade membranosa em ≥10% de células tumorais; e 3+, completa, basolateral, ou lateral reactividade membranoso de forte intensidade em ≥10% das células tumorais. As amostras
marcar IHC 0 ou 1+ IHC foram considerados negativos para a sobreexpressão de Her2, ao passo que as amostras a marcar IHC 3+ foram considerados positivos por sobreexpressão de Her2. Amostras de pontuação IHC 2+ foram consideradas equívocos HER2 sobre-expressão.
Fluorescência in situ
hibridação
fluorescência in situ
hibridação análise (FISH) foi realizada com o kit de sonda PathVysion HER2 DNA e procedimentos (Vysis /Abbott, Abbott Park, IL, EUA). O kit contém duas sondas de DNA marcado com fluorocromo, LSI HER2 (marcado com SpectrumOrange) e CEP17 (sonda enumeração cromossomo 17, marcado com SpectrumGreen). O pré-tratamento foi efectuada com o pré-tratamento de parafina Kit (VysisAbbott). Os sinais de HER2 e CEP17 sinais de 20 núcleos de células tumorais invasivas em duas áreas diferentes foram contadas utilizando um microscópio de epifluorescência Zeiss AxioImager M2 (Carl Zeiss, Oberkochen, Alemanha) equipado com uma objectiva de imersão de óleo × 100 e 4 ', 6'-diamidino -2-phenylindole (DAPI) /Spectrum verdes /filtros laranja simples e triplo de banda. O HER2 /cromossoma 17 rácios foram interpretados como se segue: uma proporção de HER2 /CEP17 superior a 2,2 foi definida como a amplificação do gene HER2
, enquanto que uma relação de < 1,8 foi definida como nenhuma amplificação do gene HER2
. Quando a proporção foi de entre 1,8 e 2,2, em mais 20 sinais núcleos foram contadas e foi determinada a razão de HER2 /CEP17 em um total de 40 núcleos. Quando a proporção foi de ≥2.0, definiu-se como a amplificação do gene HER2
; Caso contrário, foi definida como ausência de amplificação do gene HER2
.
análise estatística
análise estatística foi realizada utilizando o teste do qui-quadrado para analisar associações entre o estado HER2 e os parâmetros clínico. Um valor P inferior a
0,05 foi considerado significativo. Os dados foram analisados ​​usando o programa de software estatístico SPSS para Microsoft Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA).
Resultados
HER2 sobre-expressão e as características clinicopatológicas
Um total de 1.463 pacientes foi avaliada por análise IHC. características clinicopatológicas dos pacientes estão listadas na Tabela 1. A idade média foi de 58 anos (variação de 20 a 82 anos), com predomínio do sexo masculino (75,5%). De todos os pacientes, houve 650 casos (44,4%) do tipo intestinal por classificação de Lauren, 564 casos (38,6%) do tipo difuso, e 249 casos (17%) de tipo misto. Em termos de localização do tumor, aproximadamente dois terços dos tumores foram cancros gástricos primários (63,5%), e um terço foi adenocarcinomas JGE primário (36,5%). Os tumores foram pouco diferenciados em 73,1%, moderadamente diferenciado em 25,2%, e bem diferenciado em 1,7%. Em geral, a maioria dos pacientes estavam na fase T3 patológica (73,4%), com 14,1%, 10%, e 2,5% em T1 fase, T2 e T4, respectivamente. No que respeita à fase patológica N, houve uma distribuição aproximadamente igual de pacientes em N0, N1, N2, N3 ou fases (28,1%, 16,1%, 20,9%, 34,9%, respectivamente). A maioria dos pacientes (97,7%) não tinha metastases.Table distante 1 A correlação entre o estado de expressão de HER2 e os parâmetros clínico

geral
HER2
HER2

HER2

superexpressão
Equivocal
Negative valor
P
característica patológica
n = 1.463
n = 143 (%)
n = 211 (%)
n = 1109 (%)
idade de diagnóstico
0,102
≥60 anos
683
80 (11,7)
108 (15,8)
495 (72,5) Art < 60 anos
780
63 (8.1)
103 (13,2)
614 (78,7) Sexo seguro
0,344
Masculino
1104
109 (9.9)
171 (15,5)
824 (74,6)
Feminino
359
34 (9,5)
40 (11,1)
285 (79,4)
localização do tumor
0,003
GC
929
65 (7,0)
121 (13,0)
743 (80,0)
JGE
534
78 (14,6)
90 (16,9)
366 (68,5)
Tumor subtipo
(classificação Lauren )
0.000
intestinal
650
109 (16,8)
111 (17,1)
430 (66,2)
difusa
564
13 (2.3)
63 (11,2)
488 (86,5)
Mixed
249
21 (8,4)
37 (14,9)
191 (76,7)
Tumor diferenciação
0.000
Bem
25 página 4 (16)
9 (36)
12 (48)
Moderadamente 369
74 (20,1)
70 ( 19,0)
225 (61,0)
mal
1069
65 (6.1)
132 (12,3)
872 (81,6)
pT estatuto
0,053
pT1
206
16 (7,8)
33 (16,0)
157 (76,2)
pT2
147
23 (15,6)
28 (19,0)
96 (65,3)
pT3
1074
102 (9.5)
145 (13,5)
827 (77,0)
pT4
36 Página 2 (5.6)
5 (13,9)
29 (80,6)
estatuto pN
0,074
pN0
411
39 (9,5)
66 (16,1)
306 (74,5 )
pN1
235
27 (11,5)
42 (17,9)
166 (70,6)
pN2
306
20 (6,5)
42 ( 13.7)
244 (79,7)
PN3
511
57 (11,2)
61 (11,9)
393 (76,9)
pM estatuto
0,571
pM0
1429
140 (9,8)
119 (8.3)
1080 (75,6)
pM1
34 Sims 3 (8,8) Página 2 (5,9)
29 (85,3)
estágios pTNM
0,327
IA
162
14 (8,6)
29 (17,9)
119 (73,5)
IB
93
8 (8,6)
17 (18,3)
68 (73,1)
IIA
201
25 (12,4)
33 (16,4)
143 (71,1 )
IIB
230
25 (10,9)
34 (14,8)
171 (74,3)
IIIA
264
15 (5,7)
37 ( 14,8)
212 (80,3)
IIIB
455
51 (11,2)
56 (12,3)
348 (76,5)
IIIC
24 Página 2 (8.3) Sims 3 (12,5)
19 (79,2)
IV
34 Sims 3 (8,8) Página 2 (5,9)
29 (85,3)
Of as 1463 pacientes, 143 (9,8%) doentes foram classificados como a sobreexpressão de HER2 (3+), enquanto que 211 (14,4%) e 1109 (1,463, 75,8%) foram ambíguos e negativo, respectivamente. A tabela 1 resume status de expressão HER2 por subgrupo. HER2 foi superexpresso (escore 3+) em 7,0% (65/929) dos casos de GC e 14,6% (78/534) dos casos de adenocarcinoma Gej (Figura 1A). expressão Equivocal (2+) de proteína HER2 foi observada em 13,0% (121/929) dos casos de GC e 16,9% (90/534) dos casos de adenocarcinoma GEJ (Figura 1B). HER2 foi negativo (1 + /0) em 80,0% (743/929) dos casos de GC e 68,5% (366/534) das amostras de adenocarcinoma GEJ (Figura 1C e D). Foi encontrada uma diferença significativa na HER2 sobre-expressão entre GCs e Gej adenocarcinomas (7,0% vs 14,6%, P
< 0,05). HER2 sobre-expressão foi associada com os carcinomas do tipo intestinal por classificação Lauren (P Art < 0,001): 16,8% vs. intestinal 2,3 /8,4% nos cânceres de tipo misto diffuse- /. HER2 sobre-expressão também foi correlacionada com carcinomas bem ou moderadamente diferenciados de acordo com a classificação da OMS. Nenhuma correlação foi observada entre HER2 superexpresso e não overexpressed casos em termos de idade, sexo, pT, N, factores M, ou estágio TNM patológica. Figura 1 casos representativos de coloração IHC e análise FISH em GC e JGE adenocarcinoma. A. HER2 coloração IHC apresenta a reactividade membranosa completa, basolateral, ou lateral de forte intensidade (3+) em células tumorais (ampliação original, x 40). B. HER2 coloração IHC mostra fraca a moderada reactividade completa, basolateral, ou lateral membranosa (2+) em células tumorais (ampliação original, 100x). C. reactividade ligeira /quase imperceptível membranoso (1+) em células tumorais (ampliação original, × 200). D. nenhuma coloração (0) em células tumorais (ampliação original, 200x). E. um caso de GC com amplificação de HER2 usando análise de FISH. Sinais verdes referem-se a sonda de referência da Chr. 17 centrômero, enquanto os sinais vermelhos são a sonda alvo para HER2
. caso F. A GC sem amplificação HER2 usando análise de FISH.
Concordância de HER2 IHC e análise FISH
FISH foi realizada em 308 casos GC e JGE adenocarcinoma selecionados aleatoriamente, incluindo 40 casos com HER2 sobre-expressão (IHC 3+), 38 casos de equívoco (IHC 2+), e 230 casos com negativo (IHC 1 + /0) expressão HER2. HER2
amplificação foi observada em 97,5% (39/40) de HER2 IHC 3+ casos, 28,9% (11/38) de HER2 IHC 2+ casos, e 1,3% (3/230) de HER2-negativo (1 + /0) casos, mostrando uma taxa de concordância de 98,5% entre IHC e FISH (Tabela 2) (Figura 1E e F) .table 2 Correlação entre HER2 superexpressão e amplificação do gene em GC e JGE adenocarcinoma
FISH

IHC
total
3+
2+
1 + /0

amplificação
39 (97,5%)
11 (28,9%) Sims 3 (1,3%)
53
Sem amplificação
1 (2,5%)
27 (71,1% )
227 (98,7%)
255
total
40
38
230
308
Discussão
neste estudo, 143 de 1463 (9,8% ) de GC e os casos de adenocarcinoma Gej eram HER2-positivo (3+) por IHC em um dos maiores estudos chineses até à data. No ensaio de toga, o percentual de GC ou pacientes com câncer Gej HER2-positivo (positivo 2 + /FISH IHC 3+ ou IHC) foi de 22,1% no total e cerca de 10,4% do IHC 3+ em amostras ressecados [23], semelhante ao resultado presente. Estudos recentes também relataram uma gama de 8,5% a 10,3% para a sobreexpressão de Her2 em GC [20, 21, 24]. Recentemente, três estudos em casos GC chineses aplicados os mesmos reagentes aprovados pela FDA e critérios de pontuação e relatou HER2 IHC 3+ taxas de 9,0% (77/860) [25], 6,9% (10/145) [26], e 5,8 % (4/69) [27], respectivamente, todos ligeiramente menor do que o presente resultado. Esta variação pode ser explicada em parte por diferentes conjuntos de amostras. Além disso, a positividade HER2 variou local do tumor, com taxas mais altas de positividade HER2 em JGE adenocarcinoma do que no cancro do estômago neste estudo (14,6% vs. 7,0%, respectivamente; P Art < 0,01), o que é consistente com os resultados de outros estudos [11, 20]. No ensaio de toga, os países com a maior proporção de JGE: cancro de estômago foram encontrados para ter taxas de positividade HER2 acima da média, independentemente do tamanho da amostra [23]. Outra explicação é a diferente proporção de intestinal: cancer mista difusa /entre os estudos. A associação positiva entre a positividade HER2 e do tipo intestinal cânceres foi identificado neste e em outros estudos [28-33]. No ensaio ToGA, por exemplo, os países com percentagens mais elevadas de intestinal:. Difusa cancer /misto tinha aumentado as taxas de positividade HER2 [23]
Nenhuma correlação foi encontrada entre HER2 sobre-expressão e PT, N, ou factores M, ou TNM etapas, no presente estudo. estudos anteriores, incluindo todas as fases patológicas também relataram nenhuma correlação entre estágio patológico e superexpressão [20, 21, 24]. A correlação da positividade HER2 com carcinomas bem ou moderadamente diferenciados foi encontrado no presente estudo (P Art < 0,01). No entanto, outros estudos demonstraram tanto uma associação e nenhuma associação entre HER2 sobre-expressão e diferenciação do tumor [25, 32, 34, 35]. Esses dados conflitantes pode ser devido a diferentes tamanhos de amostra e a baixa prevalência de HER2 no GC e JGE adenocarcinoma. Além disso, diferentes métodos de esquemas de avaliação e pontuação com diferentes pontos de corte foram utilizados antes do estabelecimento de uma diretriz padrão para avaliar a expressão do HER2. Talvez com as diretrizes consistentes atuais para avaliação de HER2 nesta doença, estudos futuros irá fornecer mais clareza sobre esta questão.
O presente estudo revelou uma alta taxa de concordância, 98,5%, entre IHC e peixe, que é semelhante a outro estudo do ressecções cirúrgicas de 145 casos GC chinesas, com uma taxa de concordância de 94,5% [26]. Em contraste, no estudo toga, a taxa de concordância de IHC e FISH foi de 87,2%, tal como 7,5% de IHC 1 + /0 amostras e 54,6% de IHC 2+ casos foram encontrados para ser peixe-positivos [23]. Uma das possíveis explicações para esta discrepância pode ser diferentes tipos de amostras e reagentes. No estudo ToGA, ambas as biópsias e espécimes cirurgicamente ressecados foram incluídos; a taxa de positividade HER2 foi maior em biópsias do que em espécimes cirurgicamente ressecados (23,1% vs 19,9%, P = 0,03), e as amostras de biópsia também foram mais propensos a ser de amostras cirúrgicas amplificado-HER2 quando analisados ​​por FISH (P = 0,01) do que por IHC [23]. A maioria dos estudos actuais utilizando uma diretriz padrão para avaliação da expressão HER2 biópsias utilizados e microarrays de tecido (TMAs), que foram testados análogo ao biópsias, para interrogar seu status no GC. A taxa de concordância de IHC e FISH nestes estudos variou de 88,6% para 97,7% [20, 32, 36]. Um estudo específico avaliar a expressão da proteína HER2 em secções de tecido inteiro e TMA foi realizado, indicando uma discrepância na expressão HER2 em secções de tecido inteiro de TMAs. Por exemplo, a proporção de IHC 2+ foi de 4,7% em seções de tecido inteiro, ao passo que era de 8,6% no TMA, que pode ser parcialmente explicado pela expressão HER2 heterogênea [33]. Outra possibilidade, que foi revelado por um estudo com o objetivo de validar a orientação para a avaliação de HER2-expressão em GC, foi diferentes interpretações da coloração de TMAs entre os observadores, embora uma diretriz avaliação uniforme foi seguido [22]. Portanto, a separação segura entre IHC 1 + /0 e IHC 2+ pode ser difícil em amostras de biópsia e análise FISH deve ser usado para classificação definitiva.
Em conclusão, uma análise aprofundada de 1463 casos de cancro chinesa GC /Gej usando FDA reagentes -aprovado mostrou HER2 sobre-expressão em 9,8% dos carcinomas, com uma forte preferência por JGE localização, subtipo de câncer intestinal, e carcinomas bem ou moderadamente diferenciados. Cerca de 29% dos casos IHC 2+ mostrou HER2
amplificação do gene, e não havia uma elevada taxa de concordância (98,5%) entre IHC e peixes em GC e JGE adenocarcinoma.
Declarações
Agradecimentos
Este estudo foi apoiada por doações do Fundo Beijing esperança Run especial (LC2012A08) ea National Science Foundation Natural da China (30.801.344).
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Nenhum dos autores tem uma afiliação ou conflito de interesses. contribuições
dos autores
conceito e desenho do estudo : JY, NL. Análise e interpretação dos dados: LS, JY. Elaboração do manuscrito: LS, JY. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.

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