Selenoprotein S (SEPS1) gen -105G > Predlagatelj polimorfizem vpliva na dovzetnost za raka želodca v japonskem population

Selenoprotein S (SEPS1) gen -105G > Predlagatelj polimorfizem vpliva na dovzetnost za raka želodca v japonski populaciji
Povzetek
Ozadje
vnetje je ključni dejavnik v procesu rakotvornosti iz kroničnega gastritisa s Helicobacter pylori
inducirane. Selenoprotein S (SEPS1) sodeluje pri nadzoru vnetnega odziva v endoplazemski retikulum (ER). V zadnjem času -105G > je pokazal polimorfizem v promotorja SEPS1 za povečanje pro-vnetnih citokinov izraz. Proučili smo povezavo med tem polimorfizma in tveganje za raka želodca.
Metode
posneli smo želodčne biopsije v endoscopies 268 japonskih bolnikih želodca z rakom (193 moških in 75 žensk, povprečna starost 65,3), in 306 bolnikov iz kontrolne skupine ( 184 samcev in 122 samic, povprečna starost 62,7) in ekstrahiramo DNK iz vzorcev, dobljenih z biopsijo. Vse osebe, predvideni pisno privolitev. Za genotipizacije SEPS1 promotorja polimorfizma je na položaju -105G > A, so bile uporabljene metode PCR-RFLP in pridelke smo razgradili z PspGI
Logistic-regresijska analiza je bila uporabljena za oceno razmerij obetov (OR) in 95% zaupanje. . intervalih (CI), prilagoditev za, spol, in H. pylori
statusa starosti okužbe
Rezultati
Med primeri, porazdelitev genotipov je bila naslednja: 88,4% je bilo GG, 11,2% je bilo GA, in 0,4% je bilo AA. Med kontrolami, je porazdelitev kot sledi: 92,5% je bilo GG, 7,2% je bilo GA in 0,3% pa ​​AA. Med moškimi, ki imajo A alel je bila povezana z večjo kvoto raka želodca, v primerjavi z GG genotipom (OR: 2,0, 95% CI 1,0-4,1, p = 0,07). V primerjavi z GG genotipa, ki nosi A alel je značilno povezana s povečanim tveganjem za raka na debelem črevesu tipa želodca (ALI: 2.0, 95% CI 1.0-3.9, p < 0,05), kot tudi raka želodca, ki se nahajajo v srednji tretjini želodec (OR: 2,0, 95% CI 1,0-3,9, p 0.05).
Zaključek
The -105G > Nosilec polimorfizma za SEPS1 bila povezana s črevesno vrsto raka želodca. Ta polimorfizem lahko vplivajo na vnetja želodčne sluznice. Večje raziskave temeljijo na prebivalstvu so potrebne za razjasnitev razmerja med vnetnih odzivov in SEPS1 polimorfizma.
Ozadje
raka želodca ostaja velik javnozdravstveni problem po vsem svetu. Čeprav se je stopnja pojavnosti in umrljivosti za rakom želodca postopoma zmanjšal, želodčni rak je samo pljučnega raka kot vodilni vzrok smrti zaradi raka v svetu drugi [1, 2]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) je bila imenovana kot povzročitelja patogena za rakotvornost želodca [3]. Vnetje je lahko ključni dejavnik pri procesu rakotvornosti zaradi kroničnega gastritisa s H. pylori inducirane
[4]. Vendar pa je le majhno število okuženih bolnikov dejansko razvije rak želodca. To kaže, da gostijo genetski dejavniki, kot so geni, povezane z vnetnimi odzivi, lahko prav tako igrajo pomembno vlogo v želodcu rakotvornost.
Selenoprotein S (SEPS1, znan tudi kot SELS, SELENOS, VIMP) je roman selenoprotein nahaja v endoplazmatskem retikulum (ER) in plazemske membrane. . Da gre pri nadzoru vnetnega odziva pri ER [5]
SEPS1 ščiti celice pred oksidativnim poškodbami in apoptozo, ki je zelo izražena v različnih tkivih [6-8]
Nedavno je. - 105g > Nosilec polimorfizma za SEPS1 bilo dokazano, da je treba močno povezane s plazemskimi pro-vnetnih citokinov, kot je interlevkin 1 beta (IL-1β), interlevkin 6 (IL-6) in dejavnik tumorske nekroze alfa (TNF-α) . -105G ≫ Predlagatelj polimorfizem od SEPS1 lahko vplivajo na raven SEPS1 mRNA [9]. Nadomestitev A alel za alel G na položaju -105 zmanjšano aktivnost promotor v HepG2 celicah [10].
Po poročilu polimorfizma v SEPS1 promotorski regiji, so nekatere klinične študije so pokazale asociacije med SEPS1 polimorfizma s koronarno boleznijo srca in ishemične možganske kapi [11] in preeklampsije [12], medtem ko druge študije poročajo, da niso zveze med to varianto z vnetne črevesne bolezni [13] ali cerebrovaskularno boleznijo [14].
pa povezavo med -105G > predlagatelj polimorfizem za SEPS1 in tveganje za nastanek raka želodca še ni bila raziskana
so IL-1β koncentracije povezane z rakom želodca [15], in ker SEPS1 polimorfizem vpliva na raven IL-1β, lahko SEPS1 polimorfizem. pomemben genetski dejavnik za razvoj raka želodca.
v tej študiji primerov in kontrol, smo pregledali asociacije med SEPS1 promotorja polimorfizma in tako tveganje za nastanek raka želodca in vnetnih odzivov v želodčne sluznice, merjeno v želodčnih biopsijo vzorcih .
Metode
Bolniki in kontrole
študijo so bili vključeni bolniki, ki so dobivali zgornja prebavila endoskopijo na klinike za zdravje Fujita na Japonskem. Posledično je bilo vključenih oseb presejalne teste za raka želodca z endoskopijo zgornjih prebavil sledi barijevega rentgenski pregled. Primeri so bili 268 japonskih bolnikov (193 moških, 75 ženskih, povprečna starost 65,3 ± 12,0 let), ki so bili z diagnozo primarnim rakom želodca in kontrole je bilo 306 ljudi (184 moških in 122 žensk) brez rakom želodca, ki so imeli tudi zgornji gastrointestinalne endoskopije. Rak želodca je bil diagnosticiran histološko na patološkem oddelku naše bolnišnice in raka, je bil razvrščen po klasifikaciji Lauren 's [16]. Uprizoritev rak in anatomsko informacije o lokaciji so bili pridobljeni tudi. Bolniki s sistemskimi boleznimi in malignih obolenj v drugih organih, ali ki so prejeli nesteroidnih protivnetnih zdravil so izključene.
Etični odbor na Medicinski fakulteti Univerze Fujita zdravstvene odobril protokol. Pisna privolitev je bila pridobljena iz vsakega udeleženca študije.
Histološko študijo in DNK ekstrakcijo
želodcu biopsije so bili osebki odvzeti iz ne-rakasto sluznice v antruma in večje ukrivljenosti želodca, z uporabo zgornjega dela prebavil področje. Nekateri deli vsakega vzorca so bile določene v 10% formalinu zapufrani in vdelali v parafin, medtem ko so ostali deli takoj zamrznemo in shranimo pri -80 ° C, dokler ekstrakcijo DNA. Vse histološke diagnoze so bile narejene na oddelku za patologijo naši bolnišnici. Resnost kroničnega gastritisa so razvrščeni po patologa, ki niso imeli dostopa do vseh kliničnih podatkov, v skladu z dopolnitvijo sistema Sydney [17] z vsakega dejavnika, ki Zadel od 0 (normalno) do 3 (označeno).
Genomsko DNA je bila vzeta iz shranjenih vzorcev pri -80 ° C z uporabo proteinsko K in ekstrakcijo kompleti DNA (Quiagen, Valencia, CA).
polimorfizma Analiza SEPS1 Gene
genotip za SEPS1 promotorski regiji na mestu -105 je bila določena uporabljajo na osnovi PCR dolžine restrikcijskih fragmentov polimorfizmi (PCR-RFLP). Uporabili smo oligonukleotidov, ki so vključene v SEPS1 (-105) polimorfizma območje. Pozneje je bil identifikacija narejeno po PCR-pomnoževanje z uporabo naslednjih primerjev 5'-AAATCCGTGAACGAGGTCCG-3'and 5'-GAGCAACTAATCTGAATCAGG-3 '. PCR smo izvedli z 0,1 ug genomske DNA v volumnu 20 ul. DNA smo denaturirali pri 94 ° C za 5 minut, čemur sledi 35 ciklov pri 94 ° C 20 sekund, 53 ° C 20 sekund in 72 ° C za 40 sekund, s končno razširitvijo pri 72 ° C 7 minut . Reakcije PCR so bile narejene s pomočjo Blend Taq (Toyobo Co, Ltd, Osaka, Japonska). Pomnoženih produktov PCR so razgradili noči s 5 enot PspGI (New England BioLabs, Inc., Beverly, MA, ZDA) pri 75 ° C. Pozneje so bile razgrajene produkti se analizirajo na 3% agaroznem gelu. Ti geli smo barvali z etidijevim bromidom (0,5 mg /ml), in genotipov smo določili z analizami različnih pasovih. Prisotnost območja PspGI je označeno s cepitvijo 324 bp pomnoženega produkta, da dobimo fragmente 179 in 145 bp. Genotipizacijo smo potrdili z neposrednim sekvenciranja v nekaj naključno izbranih vzorcev.
Dokaz H. pylori
H. pylori
pozitivnost je bila določena z mikroskopskim pregledom, dihalni test uree ali seruma anti-HP titrov protiteles. Okužba je bila diagnosticirana, ko je bil vsaj eden od teh testov pozitiven.
Statistična analiza
Hardy-Weinberg ravnovesje genski alel SEPS1 v kontrolah in bolnikov z rakom želodca ocenil χ 2 statistike. Klinične značilnosti med bolniki z ali brez raka želodca, in razlike v gastritis točk med prevozniki in G /G so bile pregledane s testom Mann-Whitney U. Logistično-regresijska analiza je bila uporabljena za oceno razmerij obetov (OR) in intervale 95% zaupanja (CI) za genotipov, s prilagoditvijo za, spol, in pylori
statusa okužbe starosti H.. A p-vrednost < 0.05 smo imeli za statistično značilne.
Rezultati
Značilnosti predmetov
značilnosti primerov in kontrol so povzeti v tabeli 1. H. bili pylori
okužbe in starost višja pri bolnikih želodca z rakom kot pri kontrole (p < 0,05) .table 1 Značilnosti predmetov

GC
kontrole
p

število
268
306
samci /samice
193/75
184/122
NS
Povprečna starost (± SD)
65,3 ± 12,0
62,7 ± 13,2
< 0.05a
HP pozitivne stopnje (%)
86,2
68,0
< 0.05a
GC: rak želodca, HP: Helicobacter pylori
AGC vs. Controls, Mann-Whitney U test
Glavne endoskopski ugotovitve v kontrolni skupini so bili:. Želodčne razjede pri 68 bolnikih ( 22,2%), razjeda na dvanajstniku pri 35 (11,4%), rak želodca in dvanajstnika, razjeda v 5 (1,7%), in gastritis v 198 (64,7%).
Porazdelitev SEPS1 genotipov
Tabela 2 prikazuje genotipov od SEPS1 pri bolnikih z rakom želodca in kontrolno skupino. Polimorfizem na mestu -105 od SEPS1 so vnesli v vseh 574 predmetov. Med primeri je bila porazdelitev genotipov kot sledi: 88,4% je bilo GG, 11,2% je bilo GA in 0,4% pa AA. Med kontrolami, je porazdelitev kot sledi: 92,5% je bilo GG, 7,2% je bilo GA in 0,3% pa ​​AA (tabela 2). Pogostost SEPS1 polimorfizma v kontrolah in bolnikov z rakom želodca ne odstopa bistveno od tistih, ki bi v skladu s Hardy-Weinberg ravnotežju (p = 0,42, 0,96 oziroma). Med moškimi v primerjavi z GG genotipa, se genotipi GA in AA v kombinaciji je bila povezana z večjo kvoto raka želodca (OR: 1,97, 95% IZ 0,95-4,06, p = 0,067; tabela 3) .table 2 SEPS1 polimorfizem in GC tveganje
genotipi
bolnikov z GC
n (%)
nadzor bolnikov
n (% )
OR (95% CI)
P
G /G
237 (88,4)
283 (92,5)
reference
G /A
30 (11,2)
22 (7.2)
1.66 (0.91-3.01)
0,097
A /A
1 (0,4)
1 (0.3)
0,77 (0,05-12,44)
0,852
G /A + A /A
31
23
1.61 (0.90-2.89)
0,112
GC: rak želodca, CI: prepričani interval
Tabela 3 zveza med SEPS1 polimorfizem in spol


genotipa
G /G vs. G /A + A /A



G /G
G /A
A /A
OR (98% CI)
P
bolnikov
Control
moški
171
12
1
referenčna
ženskega
112
10
0
GC bolnikov
moški
169
23
1
1,97 (0,95-4,06)
0,067
ženska
68
7
0
1,17 (0,42-3,23)
0,764
GC: želodčni rak, CI: prepričani interval
v dodatnih analiz, združenja med polimorfizmom SEPS1 in clinicopathologic značilnosti raka želodca, kot so lokacija tumorja, stopnjo, in histološka razvrstitev Lauren, so bile ocenjene. Nosi na -105 A smo alel močno povezana s povečanim tveganjem črevesne tipa Lauren raka želodca (OR: 1,99, 95% IZ 1,01-3,93, p 0.05) in raka želodca, ki se nahajajo v osrednjem tretjem delu trebuha (OR : 2,01, 95% IZ 1,03-3,92, p < 0,05) (tabela 4) .table 4 zveza med SEPS1 polimorfizem in lokacijo tumorja, uprizarjanja in razvrščanje Lauren
spremenljivke (n)
genotipa
G /G vs. G /A + A /A


G /G
G /A
A /A
OR (95% CI)
P

Bolniki brez GC (306)
283
22
1
Reference
tumor lokacijo
Kardije (5)
5
0
0
1,93 (0,40-9,22)
0.411
Non-Cardia (263)
232
30
1
2.81 (0.69-11.48)
0,15
Zgornja tretjina ( 16)
14
2
0
ND
Bližnjem tretji (134)
115
19
0
2.01 (1.03-3.92)
0,041
Spodnja tretjina (113)
103
9
1
1,18 (0,52-2,64)
0,696
Uprizoritev
Early (138)
121
17
0
1,74 (0,88-3,47)
0,112
Dodatno (130)
117
12
1
1.52 (0.74-3.12)
0,253
uvrstitev Lauren
črevesne vrste (151)
132
19
0
1.99 (1.01-3.93)
0,047
vrste Diffuse (110)
100
9
1
1,19 (0,54-2,63)
0.659
mešana (7)
5
2
0
6.82 (1.07-43.65 )
0,043
OPOMBA: Vsi podatki, ki so prilagojeni glede na spol, starost in pylori
stanje okužbe H.. ND: ni določeno, GC: rak želodca, CI: Prepričani interval
Med 301 H. pylori
-positive predmetov, nevtrofilcev infiltracije, infiltracijo mononuklearnih celic, atrofija in metaplazijo rezultati za antralnih sluznice, je pokazala nobenih pomembnih razlik med -105 A alelov nosilci in predmetov homozigotna za alel G (podatki niso prikazani). Med kontrolami, ni bilo pomembne razlike med genotip bolnikov z želodčno razjedo, dvanajstnika in gastritisa (podatki niso prikazani).
Razprava
V tej študiji japonske populacije smo dokazali prvič, da -105G-eritromicin A polimorfizem od SEPS1 gena je bila povezana s povečanim tveganjem črevesne vrste raka želodca in raka želodca, ki se nahajajo v osrednjem tretjem delu želodca. Čeprav je bilo stanje nizke selen povezana s tveganjem za raka človeške želodčne [18, 19], in veliko selena prehrana zavira rast H. pylori
v morskih prašičkih [20], so človekove kliničnih preskušanj ni opazne koristi za selen dopolnila pri preprečevanju predrakavih želodca poškodb [21]. -105G ≫ Nosilec polimorfizem, ki se nahaja v odzivnem elementom ER stres na seps1 gena za SEPS1 je močno povezana s krožijo ravni pro-vnetnih citokinov, kot so IL-1b, IL-6 in TNF- A in SEPS1 vrednosti genske ekspresije v človeku [9]. Fenotipske posledice tega -105G > polimorfizma so raziskovali pri nekaterih boleznih, povezanih s kronično vnetje [11-14]. Rezultati so bili v neskladju. Ena od študij v finskem kohorti je pokazala, da je razmerje med drugo SEPS1 SNP in koronarne bolezni srca ali ishemično možgansko kap primeru [11], in eno poročilo v veliki norveški primera kontrolno skupino je pokazala A alel SEPS1-105G > polimorfizma je pomemben dejavnik tveganja za preeklampsije [12]. Po drugi strani pa je eden poročilo v Nemčiji pokazala SELS-105g > polimorfizma ni bila povezana s IBD občutljivostjo in ni prispevalo k določeni fenotipa bolezni ali povišanimi TNF-alfa pri bolnikih IBD [13]. Tudi eden poročilo je pokazalo, niso pomembne razlike v SEPS1 alelov frekvenc med mladimi bolnikov po možganski kapi in zdravih kontrolah iz Italije in Nemčije [14]
V naši raziskavi se je na splošno med -105G >nobene povezave;. A varianto in raka želodca. Vendar pa je v podrobni clinicopathological analizi smo ugotovili pomembne povezave med alelom A in verjetnost za določene vrste raka želodca, s prilagoditvijo za, spol, in pylori
statusa okužbe starosti H.. Imamo 74 zdravih prostovoljcev DNK (vsi so H. pylori
negativen). Pregledali smo te DNK o SEPS1 polimorfizem -105G > a. Kot rezultat, so številke GG 70, število GA so bili 4 in nobeden od njih je bil AA. Iz teh rezultatov, smo mislili, da je naša primerjava med bolniki želodca z rakom in pri bolnikih brez želodca z rakom je bila pravilna primerjava za analizo združenje tveganje za nastanek raka želodca in SEPS1 polimorfizma razen združenje H. pylori
.
Rakotvoren pot za črevesno vrsta raka želodca v glavnem vključuje H. pylori
okužbo. Okužba povzroča vnetje in tkiv regeneracijo, in ti procesi povzročajo odstopanje od običajne poti želodca diferenciacije do predrakavih stanj [4, 22]. Predlagano je bilo, da je lahko SEPS1 polimorfizem vključena v pot iz kroničnega želodčnega vnetja na rakotvornost. Vendar pa je genotip AA je zelo redka v japonski populaciji, in s tem, dokončnih zaključkov o genotip, fenotip korelacije z dne homozigotno nosilci te SEPS1 promotorja polimorfizma mogoče izpeljati le iz večjih študij, ki vključujejo več bolnišničnih centrov.
Med moškimi, se SEPS1 -105A alelov prevozniki povečal verjetnost za raka želodca, v primerjavi s tistimi, ki GG genotip. Obstaja eno poročilo, ki prikazuje spolu združenja za SEPS1 polimorfizma s koronarno srčno boleznijo [11]. Avtorji študije ugotovila, odnose med polimorfizma v drugi regiji SEPS1 gena in tveganje koronarnih bolezni srca pri ženskah. Sum, da so bili po spolu združenja s SEPS1 SNP zaradi razlik v etiologiji bolezni ali na hormonski okolju za moške in ženske [11]. V epidemioloških študijah, spol je bila prav tako povezana z rakom želodca [23, 24]. Te epidemiološke ugotovitve so skladne z združenjem posebnega spolov med -105G > polimorfizma rak in rak želodca
Na podlagi poročil o posledicah oslabitve SEPS1 izražanju genov in v SEPS1 -105G >. Polimorfizma pri čemer funkcionalno vključijo v vnetno odzivi [9], smo nadalje ocenil gastritis note v ne-rakavih območjih antruma v H. pylori pozitivnih bolnikov. Vendar pa nismo ugotovili pomembnih razlik med SEPS1 -105GG homozigoti in alelov -105A prevoznikov (podatki niso prikazani). Možno je, da je bilo število primerov za te analize relativno nizka. Tudi ta preiskava ni bila direktna primerjava vnetnih citokinov, ki jih genotipov tega polimorfizma kot so poročali v literaturi [9]. Zato še ni bila določena natančna vloga selenoproteins v želodcu kancerogenosti in vnetja. Prejšnja poročila so pokazale povezavo med citokinov in rakom želodca [15, 25]. V prihodnje študije, bo analiza teh vnetnih citokinov pri bolnikih z rakom želodca koristna za razumevanje mehanizmov rakotvornosti v želodcu
Zaključek
Skratka, ki nosi A alel na SEPS1 -105G >. Polimorfizma je dejavnik tveganja za črevesno vrsto raka želodca in raka želodca, ki se nahaja v srednji tretjini želodca v japonski populaciji. Alel A lahko prispevajo k raka želodca z vplivanjem na vnetni odziv na H. pylori
okužbe v želodcu. Nadaljnje raziskave v večjih skupin po rakom želodca, bo morda potrebno raziskati dejansko vlogo SEPS1 in pomembne posledice genskih sprememb iz selenoproteins v kroničnih vnetnih odzivov in rakotvornosti v želodcu.
Izjave
Zahvale
smo hvala vsem medicinskega osebja na endoskopijo enote University Health Hospital Fujita za jemanje vzorcev, in se zahvaljujemo gospe Y. Kimura za njen znanstveni prispevek.
to delo je bilo podprto, v delu, ki ga Grant-in-pomoč za 21. stoletje, Center odličnosti programa Fujita Univerze zdravja od Ministrstva za izobraževanje, kulturo, šport, znanost in tehnologijo Japonske.
nasprotujočimi si interesi
avtorji izjavljajo, da nimajo konkurenčnih interesov.

• Uporaba Weibullovega modela za preživetje bolnikov z rakom želodca
• Soobstoj gastrointestinalni stromalni tumor in vnetne myofibroblastic tumorja želodca kaže kot trčenju tumor: prvo poročilo primera in pregled literature