Selenoprotein S (SEPS1) gène -105G > Un polymorphisme promoteur influence la susceptibilité au cancer gastrique dans l'population

japonais Selenoprotein S (SEPS1) gène -105G > Un polymorphisme promoteur influence la susceptibilité au cancer gastrique dans la population japonaise
Résumé
Contexte l'inflammation est un facteur clé dans le processus de cancérogenèse de gastrite chronique induite par Helicobacter pylori
. Sélénoprotéine S (SEPS1) est impliqué dans le contrôle de la réponse inflammatoire dans le réticulum endoplasmique (RE). Récemment, le -105G > Un polymorphisme dans le promoteur du SEPS1 a été montré pour augmenter l'expression de cytokines pro-inflammatoires. Nous avons examiné l'association entre ce polymorphisme et le risque de cancer de l'estomac.
Méthodes
Nous avons pris des biopsies de l'estomac pendant endoscopies de 268 patients japonais gastriques de cancer (193 hommes et 75 femmes, en moyenne 65,3 ans), et 306 patients témoins ( 184 hommes et 122 femmes, en moyenne 62,7 ans) et extrait l'ADN des échantillons de biopsie. Tous les sujets ont fourni un consentement éclairé écrit. Pour le génotypage du polymorphisme du promoteur SEPS1 à la position -105G > A, les méthodes PCR-RFLP ont été utilisés et les produits de PCR ont été digérés avec PspGI
analyse de régression logistique a été utilisée pour estimer les rapports de cotes (OR) et 95% de confiance. . les résultats de intervalles (CI), l'ajustement pour l'âge, le sexe, et H. pylori
statut d'infection
Parmi les cas, la distribution des génotypes était comme suit: 88,4% étaient GG, 11,2% étaient GA, et 0,4% étaient des AA. Parmi les contrôles, la répartition est la suivante: 92,5% étaient GG, GA était de 7,2% et 0,3% étaient des AA. Chez les hommes, portant l'allèle a été associé à une probabilité accrue de cancer gastrique, par rapport au génotype GG (OR: 2,0, IC à 95% 1,0 à 4,1, p = 0,07). En comparaison avec le génotype GG, portant l'allèle était significativement associée à un risque accru de cancer gastrique de type intestinal (OR: 2,0, IC à 95% de 1,0 à 3,9, p < 0,05), ainsi que du cancer gastrique situé dans le tiers médian l'estomac (OR: 2,0, IC à 95% de 1,0 à 3,9, p < 0,05).
Conclusion The -105G > Un polymorphisme de promoteur de SEPS1 a été associé au type intestinal du cancer gastrique. Ce polymorphisme peut influencer les états inflammatoires de la muqueuse gastrique. Des études plus importantes sur la population sont nécessaires pour clarifier la relation entre les réponses inflammatoires et SEPS1 polymorphisme.
Contexte
cancer gastrique reste un problème de santé publique considérable dans le monde entier. Bien que les taux de cancer de l'estomac incidence et de mortalité ont diminué progressivement, le cancer gastrique est le deuxième cancer du poumon est la principale cause de décès par cancer dans le monde [1, 2]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) a été désigné comme un agent pathogène pour la carcinogenèse gastrique [3]. L'inflammation peut être un facteur clé dans le processus de cancérogenèse de gastrite chronique induite par H. pylori
[4]. Toutefois, seul un petit nombre de patients infectés par le fait de développer un cancer gastrique. Cela donne à penser que les facteurs génétiques de l'hôte, tels que les gènes associés à des réponses inflammatoires, peuvent également jouer un rôle important dans la carcinogenèse de l'estomac.
Selenoprotein S (SEPS1, également connu sous le nom SELS, SELENOS, VIMP) est un roman sélénoprotéine situé dans le endoplasmique réticulum (ER) et la membrane plasmique. . Il est impliqué dans le contrôle de la réponse inflammatoire dans ER [5]
SEPS1 protège les cellules contre les dommages oxydatifs et de l'apoptose, et est largement exprimée dans une variété de tissus [6-8]
Récemment, le. - 105G > Un polymorphisme du promoteur du SEPS1 a été montrée comme étant fortement associée à des taux plasmatiques de cytokines pro-inflammatoires telles que l'interleukine 1 bêta (IL-1β), interleukine 6 (IL-6) et facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-α) . Le -105G > Un polymorphisme du promoteur du SEPS1 peut influer sur les niveaux d'ARNm SEPS1 [9]. Le remplacement de l'allèle pour l'allèle G en position -105 réduit l'activité du promoteur dans les cellules HepG2 [10]. Le plus après le rapport d'un polymorphisme dans la région promotrice SEPS1, certaines études cliniques ont démontré des associations entre les polymorphismes SEPS1 avec la maladie coronarienne et d'AVC ischémique [11] et la pré-éclampsie [12], tandis que d'autres études ont rapporté aucune association entre cette variante de la maladie inflammatoire de l'intestin [13] ou d'une maladie cérébro-vasculaire [14].
Cependant, l'association entre le -105G > Un polymorphisme du promoteur du SEPS1 et le risque de cancer de l'estomac n'a pas encore été étudié
niveaux d'IL-1ß ont été associés à un cancer gastrique [15], et parce que le polymorphisme SEPS1 affecte les niveaux d'IL-1β, le polymorphisme SEPS1 mai. être un facteur génétique important pour le développement du cancer gastrique.
dans cette étude cas-témoins, nous avons examiné les associations entre le polymorphisme du promoteur SEPS1 et à la fois le risque de cancer de l'estomac et les réponses inflammatoires dans la muqueuse gastrique mesurée dans les échantillons de biopsie gastrique .
Méthodes
patients et contrôles
l'étude a porté sur des patients qui ont reçu une endoscopie digestive haute à l'hôpital universitaire de santé Fujita au Japon. Consécutivement sujets inscrits ont été sélectionnés pour le cancer gastrique par endoscopie digestive haute suivie d'un baryum examen aux rayons X. Les cas étaient 268 patients japonais (193 hommes, 75 femmes, âge moyen 65,3 ± 12,0 ans) qui ont été diagnostiqués avec un cancer gastrique primaire, et les contrôles ont été 306 personnes (184 hommes, 122 femmes) sans cancer gastrique qui a également subi une endoscopie digestive haute. Le cancer gastrique a été diagnostiqué histologiquement à la Division de Pathologie de l'hôpital, et les cancers a été classé selon la classification de Lauren [16]. La mise en scène du cancer et de l'information de localisation anatomique ont également été obtenus. Les patients atteints de maladies systémiques et les tumeurs malignes dans d'autres organes, ou qui avaient reçu des médicaments anti-inflammatoires non stéroïdiens ont été exclus.
Le comité d'éthique de l'École de médecine de l'Université Health Fujita approuvé le protocole. Le consentement éclairé écrit a été obtenu de chaque participant à l'étude.
étude histologique et des biopsies gastriques de extraction d'ADN ont été prélevés sur la muqueuse non-cancéreuse dans l'antre et la grande courbure de l'estomac, en utilisant un champ gastro-intestinal supérieur. Certaines parties de chaque échantillon ont été fixées dans du formol tamponné à 10% et inclus dans la paraffine, tandis que les autres parties ont été immédiatement congelées et conservées à -80 ° C jusqu'à l'extraction de l'ADN. Tous les diagnostics histologiques ont été faites à la Division de pathologie de l'hôpital. La sévérité de la gastrite chronique a été classé par un pathologiste qui n'a pas eu accès à toute information clinique, selon le système mis à jour Sydney [17] à chaque facteur étant marqué de 0 (normal) à 3 (marqué).
La génomique l'ADN a été extrait à partir des échantillons stockés à -80 ° C en utilisant la proteinase K et les kits d'extraction d'ADN (Quiagen, Valencia, CA) Analyse du polymorphisme de. SEPS1 du gène
le génotype de la région de promoteur à la position -105 SEPS1 a été déterminée en utilisant des polymorphismes de longueur des fragments de restriction basés sur la PCR (PCR-RFLP). Nous avons utilisé des amorces qui inclus la SEPS1 (-105) zone de polymorphisme. Par la suite, l'identification a été réalisée après amplification par PCR, en utilisant les amorces suivantes 5'-3 'et 5'-AAATCCGTGAACGAGGTCCG-GAGCAACTAATCTGAATCAGG-3'. La PCR a été effectuée avec 0,1 pg d'ADN génomique dans un volume de 20 ul. L'ADN a été dénaturé à 94 ° C pendant 5 minutes, suivie de 35 cycles à 94 ° C pendant 20 secondes, 53 ° C pendant 20 secondes et 72 ° C pendant 40 secondes, avec une extension finale à 72 ° C pendant 7 minutes . Les réactions PCR ont été effectuées en utilisant la Taq Blend (Toyobo Co., Ltd., Osaka, Japon). Les produits de PCR amplifiés ont été digérés pendant une nuit avec 5 unités de PspGI (New England BioLabs, Inc., Beverly, MA, USA) à 75 ° C. Ensuite, les produits de digestion ont été analysés sur des gels à 3% d'agarose. Ces gels ont été colorés avec du bromure d'éthidium (0,5 pg /ml) et les génotypes ont été déterminés par des analyses des différentes bandes. La présence d'un site PspGI a été indiqué par le clivage du produit amplifié de 324 paires de bases pour donner des fragments de 179 et 145 pb. Le génotypage a été confirmé par séquençage direct dans quelques échantillons choisis au hasard.
Détection de H. pylori
la positivité de H. pylori a été déterminée par un examen microscopique, le test respiratoire à l'urée, ou des titres sériques d'anticorps anti-HP. L'infection a été diagnostiquée quand au moins un de ces tests a été positive Analyse statistique de.
Hardy-Weinberg de l'allèle du gène SEPS1 dans les contrôles et les patients atteints de cancer gastrique ont été évalués par χ 2 statistiques. Les caractéristiques cliniques entre les patients avec ou sans cancer de l'estomac, et les différences dans les scores de gastrite entre A et G transporteurs /G ont été examinés par le test de Mann-Whitney U. l'analyse de régression logistique a été utilisée pour estimer les odds ratios (OR) et les intervalles de 95% de confiance (IC) pour les génotypes, avec ajustement pour l'âge, le sexe, et H. pylori
statut d'infection. Une valeur de p < 0,05 a été considérée comme statistiquement significative
. Résultats de Caractéristiques des sujets
Les caractéristiques des cas et des témoins sont résumées dans le tableau 1. H. pylori infection
et l'âge étaient plus élevés chez les patients atteints de cancer gastrique que dans contrôles (p < 0,05) .Table 1 Caractéristiques des sujets:
GC
Controls
P

nombre
268
306
mâles /femelles
193/75
184/122
NS
L'âge moyen (± écart-type)
65,3 ± 12,0 62,7 ± 13,2

< 0.05A
taux HP positif (%) 86,2

68,0
< 0.05A
GC: cancer de l'estomac, HP: Helicobacter pylori
Agc vs. Controls, Mann-Whitney U test de
Les principaux résultats endoscopiques pour le groupe de contrôle ont été:. Ulcère gastrique chez 68 patients ( 22,2%), un ulcère duodénal chez 35 (11,4%), l'ulcère gastrique et duodénal en 5 (1,7%) et des gastrites chez 198 (64,7%).
distribution des génotypes de SEPS1
le tableau 2 montre les fréquences de génotype de SEPS1 chez les patients atteints d'un cancer gastrique et le groupe témoin. Le polymorphisme en position -105 du SEPS1 a été tapé dans tous les 574 sujets. Parmi les cas, la distribution des génotypes était la suivante: 88,4% étaient GG 11,2% étaient GA et 0,4% étaient des AA. Parmi les contrôles, la répartition est la suivante: 92,5% étaient GG, GA était de 7,2% et 0,3% étaient AA (tableau 2). La fréquence des SEPS1 polymorphisme dans les contrôles et les patients atteints de cancer gastrique n'a pas dévié significativement de ceux attendus dans l'équilibre de Hardy-Weinberg (p = 0,42, 0,96, respectivement). Chez les hommes, par rapport au génotype GG, les génotypes GA et AA combinés était associée à une probabilité accrue de cancer gastrique (OR: 1,97, IC à 95% 0,95 à 4,06, p = 0,067; tableau 3) .Table 2 SEPS1 polymorphisme et GC risque
génotypes
patients avec GC
n (%)
patients
n contrôle (% )
OR (IC à 95%)
P
G /G
237 (88,4)
283 (92,5)
référence
G /A
30 (11.2)
22 (7.2)
1,66 (0,91 à 3,01)
0,097
A /A
1 (0,4)
1 (0,3)
0,77 (0,05 à 12,44)
0,852
G /A + A /A
31
23
1,61 (0,90 à 2,89)
0,112
GC: cancer de l'estomac, CI: confiant
intervalle Tableau 3 Association entre SEPS1 polymorphisme et le sexe


génotype
G /G vs. G /A + A /A



G /G
G /A
A /A
OU (98% CI)
P
patients
contrôle 171
12 1
référence
mâle
femelle mâle
112
10
0
GC patients 169
23 1
1,97 (0,95 à 4,06)
0,067
femme 68
7
0
1,17 (0,42 à 3,23)
0,764
GC: cancer gastrique, CI: confiant
intervalle Dans les analyses supplémentaires, les associations entre le polymorphisme SEPS1 et les caractéristiques clinicopathologiques de cancer de l'estomac, tels que l'emplacement de la tumeur, le stade et la classification histologique de Lauren, ont été évalués. Le transport d'un allèle -105 était significativement associée à un risque accru de type intestinal de Lauren du cancer gastrique (OR: 1,99, IC à 95% 1,01 à 3,93, p < 0,05) et de cancer gastrique situé dans la troisième partie du milieu de l'estomac (OR : 2,01, IC à 95% 1,03 à 3,92, p < 0,05) (tableau 4) .Table 4 Association entre SEPS1 polymorphisme et localisation de la tumeur, la mise en scène et la classification de Lauren
Variables (n)
génotype
G /G vs. G /A + A /A


G /G
G /A
A /A
OR (IC à 95%)
P

Les patients sans GC (306)
283
22 1
référence
localisation de la tumeur
Cardia (5)
5
0
0
1,93 (0,40 à 9,22)
0,411
non-cardia (263)
232
30 1
2,81 (0,69 à 11,48)
0,15
tiers supérieur ( 16)
14 2
0
tiers (134)
115
19
0
2,01 (1,03 à 3,92)
Moyen de ND 0,041
Basse-tiers (113)
103
9 1
1,18 (0,52 à 2,64)
0,696
Staging Early (138)
121
17
0
1,74 (0,88 à 3,47)
0,112
avancée (130)
117
12 1
1,52 (0,74 à 3,12)
0,253
classification de Lauren
Type Intestinal (151)
132
19
0
1,99 (1,01 à 3,93)
0,047
Type diffuse (110)
100
9 1
1,19 (0,54 à 2,63)
0,659
mixte (7)
5 2
0
6,82 (1,07 à 43,65 )
0,043
REMARQUE: Toutes les données sont ajustées pour le sexe, l'âge, et H. pylori
statut d'infection. ND: non déterminé, GC: cancer de l'estomac, CI:
intervalle confiant Parmi 301 H. pylori
sujets -positif, l'infiltration de neutrophiles, infiltration de cellules mononucléaires, l'atrophie et métaplasie scores de la muqueuse antrale a montré aucune différence significative entre les transporteurs A -105 et les sujets homozygotes pour l'allèle G allèle (données non présentées). Discussion de
chez les témoins, il n'y avait pas de différences significatives entre le génotype des patients présentant un ulcère gastrique, un ulcère duodénal, gastrite (données non présentées). Dans cette étude, une population japonaise, nous avons démontré pour la première fois que le -105G > Un polymorphisme du gène SEPS1 a été associé à un risque accru de type intestinal du cancer gastrique et le cancer gastrique situé dans la troisième partie du milieu de l'estomac. Bien que l'état bas de sélénium a été associée à un risque de cancer gastrique humain [18, 19], et régime alimentaire riche en sélénium inhiber la croissance de H. pylori
chez les porcs Guinée [20], les essais cliniques humains ont échoué à démontrer un avantage pour des suppléments de sélénium dans la prévention des lésions précancéreuses gastriques [21]. Le -105G > Un polymorphisme de promoteur, qui est situé dans un élément de réponse au stress du RE du gène codant seps1 pour SEPS1, était fortement associé à des taux circulants de cytokines pro-inflammatoires, comme l'IL-1b, IL-6 et TNF-a a, et avec SEPS1 niveaux d'expression génique chez l'homme [9]. Les conséquences phénotypiques de ce -105G > Un polymorphisme ont été étudiés dans certaines maladies liées à une inflammation chronique [11-14]. Les résultats ont été contradictoires. Une étude dans la cohorte finlandaise a montré la relation de SEPS1 autres SNP et la maladie coronarienne ou l'AVC ischémique [11], et un rapport dans un grand norvégien cohorte cas-témoins a montré l'allèle de l'SEPS1-105G > Un polymorphisme est une importante facteur de risque de prééclampsie [12]. D'autre part, un rapport en Allemagne a montré le SELS-105G > Un polymorphisme n'a pas été associée aux MII la susceptibilité et n'a pas contribué à un certain phénotype de la maladie ou l'augmentation des niveaux de TNF-alpha chez les patients MICI [13]. Aussi un rapport a montré des différences non significatives de SEPS1 fréquences des allèles entre les jeunes patients atteints d'un accident vasculaire cérébral et des contrôles sains de l'Italie et de l'Allemagne [14]
Dans notre étude, il n'y avait pas d'association globale entre le -105G >. Une variante et le cancer gastrique. Cependant, dans l'analyse clinicopathologique détaillée, nous avons trouvé des associations significatives entre porteurs de l'allèle A et les chances de types spécifiques de cancer de l'estomac, avec ajustement pour l'âge, le sexe, et H. pylori
statut d'infection. Nous avons 74 l'ADN des volontaires sains (tous sont H. pylori
négatif). Nous avons examiné ces ADN d'environ SEPS1 polymorphisme -105G > A. En conséquence, le nombre de GG était 70, le nombre de GA était de 4 et aucun d'entre eux était AA. A partir de ces résultats, nous avons pensé que notre comparaison entre les patients atteints de cancer gastrique et les patients cancéreux non gastriques était comparaison appropriée pour analyser le risque d'association de cancer gastrique et SEPS1 polymorphisme autre que l'association de H. pylori
.
La voie cancérogène pour le type intestinal du cancer gastrique implique principalement l'infection de H. pylori. L'infection provoque une inflammation et la régénération des tissus, et ces processus provoquent la déviation de la voie normale de la différenciation gastrique états précancéreux [4, 22]. Il a été suggéré que le polymorphisme SEPS1 peut être impliqué dans la voie de l'inflammation chronique de l'estomac à la cancérogenèse. Toutefois, le génotype AA est très rare dans la population japonaise, et donc, des conclusions définitives sur les corrélations génotype-phénotype des porteurs homozygotes de ce promoteur SEPS1 polymorphisme ne peuvent être tirées des études plus importantes impliquant les centres hospitaliers multiples.
Chez les hommes, les porteurs de l'allèle -105A SEPS1 avaient augmenté chances de cancer gastrique par rapport à ceux avec le génotype GG. Il y a un rapport montrant les associations spécifiques au genre du polymorphisme SEPS1 avec maladie coronarienne [11]. Les auteurs de l'étude ont trouvé des relations entre un polymorphisme dans une autre région du gène SEPS1 et le risque de maladie coronarienne chez les femmes. Ils soupçonnaient que les associations spécifiques au genre avec SEPS1 SNP étaient dues à des différences dans l'étiologie de la maladie ou dans le milieu hormonal pour les hommes et les femmes [11]. Dans les études épidémiologiques, le sexe a également été liée au cancer gastrique [23, 24]. Ces résultats épidémiologiques sont en accord avec l'association spécifique de genre entre le -105G > Un polymorphisme et le cancer gastrique
Sur la base des rapports des conséquences de l'expression du gène SEPS1 altérée et de la SEPS1 -105G >. Un polymorphisme étant fonctionnellement impliqué dans inflammatoire réponses [9], nous avons encore évalué les scores de gastrite dans les zones non-cancéreuses de l'antre de H. pylori patients positifs. Cependant, on n'a pas trouvé de différences significatives entre les homozygotes SEPS1 -105GG et porteurs de l'allèle -105A (données non présentées). Il est possible que le nombre de cas pour cette analyse était relativement faible. En outre, cette enquête n'a pas une comparaison directe des taux de cytokines inflammatoires par les génotypes de ce polymorphisme comme cela a été rapporté dans la littérature [9]. Par conséquent, le rôle exact de sélénoprotéines dans la carcinogenèse gastrique et l'inflammation n'a pas encore été déterminée. Les rapports précédents ont montré des associations entre les cytokines et le cancer gastrique [15, 25]. Dans les études futures, l'analyse de ces cytokines inflammatoires dans le cancer gastrique sera utile pour comprendre les mécanismes de la cancérogenèse dans l'estomac
Conclusion
En conclusion, portant un allèle au SEPS1 -105G >. Un polymorphisme est un facteur de risque pour le type intestinal du cancer gastrique et cancer de l'estomac située dans le tiers du milieu de l'estomac dans une population japonaise. L'allèle peut contribuer au cancer de l'estomac en influençant la réponse inflammatoire à H. pylori
infection dans l'estomac. D'autres études dans les grandes cohortes de cancer de l'estomac peuvent être nécessaires pour enquêter sur le rôle réel de SEPS1 et les implications importantes de modifications génétiques des sélénoprotéines dans les réponses inflammatoires chroniques et la cancérogenèse dans l'estomac.
Déclarations
Remerciements
Nous merci tout le personnel médical à l'unité d'endoscopie à l'hôpital universitaire de santé Fujita pour prélever des échantillons, et nous remercions Mme Y. Kimura pour sa contribution scientifique.
Ce travail a été soutenu en partie par une subvention-in-Aid pour le Centre du 21e siècle Programme d'excellence de l'Université de la santé Fujita du ministère de l'Education, Culture, sports, science et technologie du Japon.
intérêts concurrents
les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts.

• Application du modèle de Weibull pour la survie des patients atteints d'un cancer gastrique
• Coexistence de tumeurs stromales gastro et la tumeur myofibroblastique inflammatoire de l'estomac présentant comme une tumeur de collision: premier rapport de cas et revue de la littérature