Selenoproteína S (SEPS1) gene -105G > Um polimorfismo promotor influencia a susceptibilidade ao câncer gástrico na população japonesa

Selenoproteína S (SEPS1) gene -105G > Um polimorfismo promotor influencia a susceptibilidade ao câncer gástrico na população japonesa da arte abstracta
Fundo
A inflamação é um fator chave no processo de carcinogênese de gastrite crónica induzida por Helicobacter pylori
. Selenoproteína S (SEPS1) está envolvido no controlo da resposta inflamatória no retículo endoplasmático (ER). Recentemente, a -105G > Um polimorfismo no promotor do SEPS1 foi mostrada para aumentar a expressão de citoquinas pró-inflamatórias. Foi examinada a associação entre esse polimorfismo eo risco de câncer gástrico.
Métodos
Nós levou biópsias do estômago durante endoscopias de 268 pacientes japoneses com câncer gástrico (193 machos e 75 fêmeas, com idade média de 65,3) e 306 pacientes do grupo controle ( 184 homens e 122 mulheres, idade média de 62,7) e extraiu-se o ADN das amostras de biópsia. Todos os indivíduos forneceram consentimento informado por escrito. Para a genotipagem do polimorfismo promotor SEPS1 na posição -105G > A, métodos de PCR-RFLP foram utilizados e os produtos de PCR foram digeridos com PspGI
análise de regressão logística foi usada para estimar odds ratio (OR) e 95% de confiança. . intervalos (CI), o ajuste para idade, sexo e H. pylori
estado de infecção
Resultado
Entre os casos, a distribuição dos genótipos foi a seguinte: 88,4% eram GG, 11,2% eram do GA e 0,4% eram AA. Entre os controlos, a distribuição era a seguinte: 92,5% eram GG, GA 7,2% eram, e 0,3% eram AA. Entre os homens, levando o alelo A foi associado a um aumento da probabilidade de câncer gástrico, em comparação com o genótipo GG (OR: 2,0; IC95% 1,0-4,1, p = 0,07). Em comparação com o genótipo GG, que transporta o alelo A foi significativamente relacionado com o aumento dos riscos de cancro gástrico tipo intestinal (OR: 2,0, IC de 95% 1,0-3,9, p < 0,05), bem como de cancro gástrico localizado no terço médio o estômago (OR: 2,0, IC de 95% 1,0-3,9, p < 0,05). Conclusão
of the -105G > Um polimorfismo do promotor de SEPS1 foi associado com o tipo de cancro gástrico intestinal. Este polimorfismo pode influenciar as condições inflamatórias da mucosa gástrica. Maiores estudos de base populacional são necessários para esclarecer a relação entre as respostas inflamatórias e polimorfismo SEPS1.
Fundo
O câncer gástrico continua a ser um problema de saúde pública considerável em todo o mundo. Embora as taxas de incidência e mortalidade por câncer gástrico têm diminuído gradualmente, câncer gástrico é em segundo somente ao câncer de pulmão como a principal causa de morte por câncer em todo o mundo [1, 2]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) foi designado como um agente patogénico causador da carcinogénese gástrica [3]. A inflamação pode ser um factor chave no processo da carcinogénese da gastrite crónica induzida por H. pylori
[4]. No entanto, apenas um pequeno número de pacientes infectados realmente desenvolver cancro gástrico. Isto sugere que factores genéticos do hospedeiro, tais como os genes associados a respostas inflamatórias, podem também desempenhar um papel importante na carcinogénese do estômago.
Selenoproteína S (SEPS1, também conhecido como sels, Selenos, VIMP) é uma selenoproteína novo localizado no endoplasmático retículo (ER) e a membrana plasmática. . Ele está envolvido no controlo da resposta inflamatória no ER [5]
SEPS1 protege as células de dano oxidativo e apoptose, e é amplamente expresso numa variedade de tecidos [6-8]
Recentemente, a. - 105G > a polimorfismo do promotor de SEPS1 mostrou-se fortemente associada com níveis plasmáticos de citocinas pró-inflamatórias, tais como a interleucina 1 beta (IL-1β), interleucina 6 do factor alfa (IL-6) e da necrose tumoral (TNF-α) . O -105G > Um polimorfismo promotor da SEPS1 podem afetar os níveis de mRNA SEPS1 [9]. A substituição do alelo para o alelo G na posição -105 reduziu a actividade do promotor em células HepG2 [10].
Após o relatório de um polimorfismo na região promotora SEPS1, alguns estudos clínicos têm demonstrado a associação entre o polimorfismo SEPS1 com doença coronária e acidente vascular cerebral isquêmico [11] e pré-eclâmpsia [12], enquanto outros estudos não relataram associações entre esta variante com doença inflamatória intestinal [13] ou doença cerebrovascular [14].
no entanto, a associação entre o -105G > Um polimorfismo do promotor de SEPS1 e o risco de cancro gástrico ainda não foi estudado
níveis de IL-1 têm sido associadas com o cancro gástrico [15], e porque o polimorfismo SEPS1 afecta os níveis de IL-1β, o polimorfismo pode SEPS1. genética ser um factor importante para o desenvolvimento do cancro gástrico.
neste estudo de controlo de caso, que examinaram as associações entre o polimorfismo do promotor SEPS1 e tanto o risco do cancro gástrico e as respostas inflamatórias na mucosa gástrica como medido em amostras de biópsias gástricas .
Métodos
pacientes e controles
o estudo incluiu pacientes que receberam uma endoscopia digestiva alta no Hospital Fujita Universidade de Saúde no Japão. Consecutivamente sujeitos inscritos foram selecionados para o cancro gástrico por endoscopia digestiva alta seguida por um exame de raio-X de bário. Os casos foram 268 pacientes japoneses (193 homens, 75 mulheres, com idade média de 65,3 ± 12,0 anos) que foram diagnosticados com câncer gástrico primário, e os controles foram 306 pessoas (184 homens, 122 mulheres) sem câncer gástrico que também foram submetidos a endoscopia digestiva alta. O câncer gástrico foi diagnosticado histologicamente na Divisão de Patologia do nosso hospital, e os cancros foi classificada de acordo com a classificação de Lauren [16]. Também foram obtidos do estadiamento do câncer e informações de localização anatômica. Os pacientes com doenças sistêmicas e doenças malignas em outros órgãos, ou que tinham recebido não-esteróides anti-inflamatórios foram excluídos.
O Comitê de Ética da Faculdade de Medicina da Universidade de Fujita Saúde aprovou o protocolo. O consentimento informado foi obtido a partir de cada participante no estudo.
estudo histológico e Extracção de DNA
biópsias gástricas foram tomadas a partir da mucosa não-cancerosa no antro e da grande curvatura do estômago, utilizando um âmbito gastrointestinal superior. Algumas partes de cada amostra foram fixados em formalina a 10% tamponada e embebidos em parafina, enquanto as outras partes foram imediatamente congeladas e armazenadas a -80 ° C até à extracção de ADN. Todos os diagnósticos histológicos foram feitas na Divisão de Patologia do nosso hospital. A gravidade da gastrite crônica foi classificada por um patologista que não têm acesso a qualquer informação clínica, de acordo com o sistema atualizado Sydney [17] com cada fator a ser pontuado de 0 (normal) a 3 (marcado).
A genômica o DNA foi extraído a partir de amostras armazenadas a -80 ° C por meio de proteinase K e kits de extracção de DNA (Qiagen, Valencia, CA).
Polimorfismo Análise do Gene SEPS1
o genótipo da região do promotor SEPS1 na posição -105 foi determinada utilizando PCR com base em polimorfismos de comprimento de fragmentos de restrição (PCR-RFLP). Foram utilizados os primers que incluíam área polimorfismo do SEPS1 (-105). Subsequentemente, a identificação foi feita após amplificação por PCR, utilizando os seguintes iniciadores 5'-AAATCCGTGAACGAGGTCCG 3'and-5'-GAGCAACTAATCTGAATCAGG-3 '. A PCR foi realizada com 0,1 ug de ADN genómico num volume de 20 uL. O ADN foi desnaturado a 94 ° C durante 5 minutos, seguido de 35 ciclos a 94 ° C durante 20 segundos, 53 ° C durante 20 segundos, e 72 ° C durante 40 segundos, com uma extensão final a 72 ° C durante 7 minutos, . As reacções de PCR foram realizadas utilizando Mistura de Taq (Toyobo Co., Ltd., Osaka, Japão). Os produtos de PCR amplificados foram digeridos durante a noite com 5 unidades de PspGI (New England Biolabs, Inc., Beverly, MA, EUA) a 75 ° C. Subsequentemente, os produtos digeridos foram analisados ​​em géis de agarose a 3%. Estes géis foram corados com brometo de etídio (0,5 ug /ml), e os genótipos foram determinados por análises de diferentes bandas. A presença de um sítio PspGI foi indicado pela clivagem do produto amplificado 324 pb para produzir fragmentos de 179 e 145 pb. A genotipagem foi confirmada por sequenciação directa em algumas amostras seleccionadas aleatoriamente.
Detecção de H. pylori
H. pylori
positividade foi determinado por exame microscópico, teste de respiração de ureia, ou os títulos de anticorpos anti-soro HP. A infecção foi diagnosticada quando pelo menos um desses testes foi positiva.
Análise Estatística
Hardy-Weinberg do alelo gene SEPS1 nos controles e pacientes com câncer gástrico foram avaliadas por χ 2 estatísticas. As características clínicas entre pacientes com ou sem câncer gástrico, e as diferenças nas pontuações gastrite entre um operadoras e G /L foram examinados pelo teste de Mann-Whitney. análise de regressão logística foi usada para estimar odds ratio (OR) e intervalos de 95% de confiança (IC) para os genótipos, com ajuste para idade, sexo, e H. pylori
estado da infecção. Um valor de p < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.

Resultados Características dos indivíduos
As características dos casos e controles estão resumidos na Tabela 1. H. pylori
e idade foram maiores nos pacientes com câncer gástrico do que em controles (p < 0,05) .table 1 Características dos indivíduos

GC
Controls
P

número
268
306
homens /mulheres
193/75
184/122
NS
A média de idade (± SD)
65,3 ± 12,0
62,7 ± 13,2 Art < 0.05a
taxa HP positivo (%)
86,2
68,0 Art < 0.05a
GC: câncer gástrico, HP: Helicobacter pylori
AGC vs. Controls, Mann-Whitney U
Os principais achados endoscópicos para o grupo controle foram:. Úlcera gástrica em 68 pacientes ( 22,2%), úlcera duodenal em 35 (11,4%), úlcera gástrica e duodenal em 5 (1,7%), e gastrite em 198 (64,7%).
Distribuição dos genótipos SEPS1
Tabela 2 mostra as frequências dos genótipos de SEPS1 em pacientes com câncer gástrico e do grupo controle. O polimorfismo na posição -105 da SEPS1 foi digitado em todos os 574 indivíduos. Entre os casos, a distribuição de genótipos foi da seguinte forma: 88,4% eram GG, 11,2% eram GA, e 0,4% eram AA. Entre os controlos, a distribuição era a seguinte: 92,5% eram GG, GA 7,2% eram, e 0,3% eram AA (Tabela 2). A frequência de SEPS1 polimorfismo nos controles e pacientes com câncer gástrico não se afastam significativamente daquelas esperadas sob o equilíbrio de Hardy-Weinberg (p = 0,42, 0,96, respectivamente). Entre os homens, em comparação com o genótipo GG, os genótipos AG e AA combinados foi associada a um aumento da probabilidade de câncer gástrico (OR: 1,97, 95% CI 0,95-4,06, p = 0,067; Tabela 3) .table 2 polimorfismo SEPS1 e GC risco
genótipos
pacientes com GC
n (%)
pacientes controle
n (% )
OR (IC 95%)
P
G /G
237 (88,4)
283 (92,5)
referência
G /A
30 (11,2)
22 (7,2)
1,66 (0,91-3,01)
0,097
A /A
1 (0,4)
1 (0,3)
0,77 (0,05-12,44)
0,852
G /A + A /A
31
23
1,61 (0,90-2,89)
0,112
GC: câncer gástrico, CI: confiante intervalo
Tabela 3 Associação entre SEPS1 polimorfismo e gênero


genótipo
G /L vs. G /A + A /A



G /G
G /A
A /A
OR (IC 98%)
P
pacientes
Controle
masculino
171
12
1

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