Селенопротеины S (SEPS1) гена -105G > промотор полиморфизм влияет на восприимчивость к раку желудка в японском population

селенопротеины S (SEPS1) гена -105G > промотор полиморфизм влияет на восприимчивость к раку желудка в японской популяции
Аннотация <бр> фон
Воспаление является ключевым фактором в процессе канцерогенеза от хронического гастрита, вызванного Helicobacter Pylori
. Селенопротеины S (SEPS1) участвует в контроле воспалительной реакции в эндоплазматический ретикулум (ER). В последнее время -105G > полиморфизм в промоторе SEPS1 было показано увеличение провоспалительных экспрессию цитокинов. Мы исследовали связь между этим полиморфизмом и риском развития рака желудка.
Методы
Мы взяли биопсию желудка во время эндоскопии 268 японских рака желудка больных (193 мужчин и 75 женщин, средний возраст 65,3), и 306 пациентов контрольной группы ( 184 мужчин и 122 женщин, средний возраст 62,7) и экстрагируют ДНК из образцов биопсии. Все субъекты дали письменное информированное согласие. Для генотипирования полиморфизма промотора SEPS1 в положении -105G ≫ A, были использованы методы ПЦР-ПДРФ и ПЦР-продукты были переварены PspGI
Логистик-регрессионный анализ был использован для оценки отношения шансов (OR) и 95% доверительный. . интервалами (ДИ), с поправкой на возраст, пол и H. Pylori
статус инфекции
Результаты
Среди случаев, распределение генотипов распределились следующим образом: 88,4% были GG, 11,2% были Г.А., 0,4% были АА. Среди элементов управления, распределение было следующим: 92,5% были Г.Г., 7,2% были Г.А., и 0,3% были АА. Среди мужчин, несущих аллель был связан с увеличенным коэффициентом рака желудка, по сравнению с генотипом GG (ОР: 2,0, 95% ДИ 1.0-4.1, р = 0,07). По сравнению с генотипом GG, несущий аллель был в значительной степени связано с повышенным риском развития рака желудка кишечного типа (ОР: 2,0, 95% ДИ 1.0-3.9, р &л; 0,05), а также от рака желудка, расположенной в средней трети желудок (ОР: 2,0, 95% ДИ 1.0-3.9, р &л; 0,05).
Заключение
The -105G > промотор полиморфизм SEPS1 был связан с кишечным типом рака желудка. Этот полиморфизм может влиять на воспалительные состояния слизистой оболочки желудка. Крупные исследования населения на основе необходимы для выяснения связи между воспалительными реакциями и SEPS1 полиморфизма.
Фон
рака желудка остается серьезной проблемой общественного здравоохранения во всем мире. Хотя заболеваемость и смертность от рака желудка уменьшились постепенно, рак желудка занимает второе место после рака легких в качестве ведущей причиной смерти от рака во всем мире [1, 2]. Helicobacter Pylori
(H. Pylori
) был определен в качестве возбудителя для рака желудка [3]. Воспаление может быть ключевым фактором в процессе канцерогенеза от хронического гастрита, вызванного H. Pylori
[4]. Тем не менее, лишь небольшое число инфицированных пациентов на самом деле развивается рак желудка. Это говорит о том, что генетические факторы, такие как гены, связанные с воспалительными реакциями, также могут играть важную роль в желудке канцерогенеза.
Селенопротеины S (SEPS1, также известный как SELS, Selenos, VIMP) является новым селенопротеины расположен в эндоплазматической ретикулум (ЭР) и плазматическую мембрану. . Он участвует в контроле воспалительной реакции в ER [5]
SEPS1 защищает клетки от окислительного повреждения и апоптоза, и широко экспрессируется в различных тканях [6-8]
В последнее время. - 105G &Гт был показан промотор полиморфизм SEPS1, тесно связано с уровнем в плазме крови провоспалительных цитокинов, таких как интерлейкин 1 бета (IL-1 β), интерлейкин-6 (IL-6) и фактор некроза опухоли альфа (TNF-α) , -105G > промотор полиморфизм SEPS1 может повлиять на уровень мРНК SEPS1 [9]. Замена аллеля по аллелю G в положении -105 снижает активность промотора в клетках HepG2 [10].
После доклада полиморфизма в области промотора SEPS1, некоторые клинические исследования показали ассоциации между полиморфизмом SEPS1 с ишемической болезнью сердца и ишемического инсульта [11] и преэклампсии [12], в то время как другие исследования не сообщили об отсутствии связи между этим вариантом с воспалительным заболеванием кишечника [13] или заболевания сосудов головного мозга [14].
Тем не менее, связь между -105G > промотор полиморфизм SEPS1 желудка и риск развития рака до сих пор не изучены
уровни IL-1, были связаны с раком желудка [15], а также потому, что полиморфизм SEPS1 влияет на уровни IL-1, полиморфизм SEPS1 может. быть важным генетическим фактором для развития рака желудка.
в этом случае Контролируемое исследование, мы рассмотрели ассоциации между SEPS1 полиморфизм промотора и как риск рака желудка и воспалительные реакции в слизистой оболочке желудка, как измерено в образцах биопсии желудка .
Методы
Пациенты и контроль
в исследование были включены пациенты, которые получили верхний желудочно-кишечного тракта эндоскопии в больнице Фуджита университета здоровья в Японии. Последовательная испытуемых, были обследованы на наличие рака желудка с помощью эндоскопии верхних отделов желудочно с последующим барий рентгенологического обследования. Случаи были 268 японских пациентов (193 мужчин, 75 женщин, средний возраст 65,3 ± 12,0 лет), которые были диагностированы с первичным раком желудка и контроля были 306 человек (184 мужчин, 122 женщин) без рака желудка, которые также подверглись верхних отделов желудочно-эндоскопия. Рак желудка был поставлен диагноз гистологически в патологии отделения нашей больницы и раковых заболеваний, была классифицирована в соответствии с классификацией Lauren 's [16]. Были также получены стадии рака и анатомическое информацию о местоположении. У больных с системными заболеваниями и злокачественными опухолями в других органах, или которые получили нестероидные противовоспалительные препараты были исключены.
Комитетом по этике Школы медицины при Университете здравоохранения Фудзита одобрил протокол. Письменное информированное согласие было получено от каждого участника исследования.
Гистологическое исследование и ДНК экстракции
Желудочный Образцы биопсии были взяты из нераковая слизистой оболочки в антральном и большой кривизны желудка, с использованием верхних отделов желудочно-сферы. Некоторые части каждого образца фиксировали в 10% забуференном формалине и заливали в парафин, в то время как другие части были немедленно замораживали и хранили при -80 ° С до экстракции ДНК. Все гистологические диагнозы были сделаны в Отделе Патологии нашей больницы. Тяжесть хронического гастрита был классифицирован патологоанатомом, который не имел доступа к какой-либо клинической информации, в соответствии с обновленной системой Сиднея [17] с каждым фактором будучи по шкале от 0 (нормальный) до 3 (маркированный).
Геномного ДНК экстрагировали из образцов, хранящихся при температуре -80 ° C с использованием протеиназы к и комплекты экстракции ДНК (Quiagen, Valencia, CA).
Полиморфизм Анализ SEPS1 Gene
генотипа для региона SEPS1 промотора в положении -105 определяли используя полиморфизм длины рестрикционных фрагментов на основе ПЦР (ПЦР-ПДРФ). Мы использовали праймеры, которые включали площадь полиморфизма SEPS1 (-105). Впоследствии, идентификация было сделано после того, как ПЦР-амплификации с использованием следующих праймеров 5'-AAATCCGTGAACGAGGTCCG-3'and 5'-GAGCAACTAATCTGAATCAGG-3 '. ПЦР проводили с помощью 0,1 мкг геномной ДНК в объеме 20 мкл. ДНК денатурировали при 94 ° С в течение 5 минут, а затем 35 циклов при 94 ° С в течение 20 секунд, 53 ° С в течение 20 секунд и 72 ° С в течение 40 секунд, с конечным удлинением при 72 ° С в течение 7 минут , Реакции ПЦР проводили с использованием Смешать Taq (Тоёбо Co., Ltd., Осака, Япония). Амплифицированный продукт ПЦР расщепляли в течение ночи с 5 единицами PspGI (New England Biolabs, Inc., Beverly, MA, USA) при температуре 75 ° C. Впоследствии, расщепленные продукты анализировали на 3% -ном агарозном геле. Эти гели окрашивали бромистым этидием (0,5 мкг /мл), и генотипы были определены путем анализа различных диапазонов. Наличие PspGI сайта констатировалось по расщеплению 324 п.н. амплифицированного продукта с получением фрагментов 179 и 145 пар оснований. Генотипирование была подтверждена путем прямого секвенирования в нескольких произвольно выбранных образцов.
Обнаружение H. Pylori
H. Pylori
положительность определяли с помощью микроскопического исследования, испытания дыхания мочевины или сыворотки титры анти-HP антител. Инфекция был поставлен диагноз, когда по крайней мере один из этих тестов был положительным.
Статистический анализ
Харди-Вайнберга гена аллеля SEPS1 в контроле и у больных раком желудка оценивали по χ 2 статистики. Клинические характеристики между пациентами с или без рака желудка, а также различия в оценках между гастритом А носителями и G /G были исследованы с помощью теста Манна-Уитни U. Логистик-регрессионный анализ был использован для оценки отношения шансов (OR) и 95% доверительный интервал (ДИ) для генотипов, с поправкой на возраст, пол, и хеликобактерной
статус инфекции. Р-значение &л; 0,05 рассматривалось как статистически значимое.

Результаты характеристики предметов
характеристик и контрольной приведены в таблице 1. Г. пилори
инфекция и возраст были выше у больных раком желудка, чем в управления (р &л; 0,05) .table 1 Характеристики субъектов
<й>
GC

Controls

P


номер
268
306
/самцов самки
193/75
184/122
NS
Средний возраст (± SD) <бр> 65,3 ± 12,0
62,7 ± 13,2
&л; 0.05a
HP позитивности (%)
86,2
68,0
&ЛТ; 0.05a
GC: рак желудка, HP: хеликобактер пилори

AGc vs. Controls, Манна-Уитни U тест
Основные эндоскопические результаты для контрольной группы были:. Язву желудка у 68 больных ( 22,2%), язва двенадцатиперстной кишки у 35 (11,4%), желудка и двенадцатиперстной кишки у 5 (1,7%), а гастрит в 198 (64,7%).
Распределение SEPS1 генотипов
в таблице 2 показаны частоты генотипов из SEPS1 у пациентов с раком желудка, и контрольной группой. Полиморфизм в положении -105 из SEPS1 было напечатано во всех 574 субъектов. Среди случаев, распределение генотипов было следующим: 88,4% были Г.Г., 11,2% были Г.А., и 0,4% были АА. Среди элементов управления, распределение было следующим: 92,5% были Г.Г., 7,2% были Г.А., и 0,3% были АА (Таблица 2). Частота SEPS1 полиморфизма в контроле и у больных раком желудка существенно не отклоняются от ожидаемых при равновесии Харди-Вайнберга (р = 0,42, 0,96 соответственно). Среди мужчин, по сравнению с генотипом GG, генотипы GA и AA в сочетании было связано с повышенным коэффициентом рака желудка (ОР: 1,97, 95% ДИ 0.95-4.06, р = 0,067; таблица 3) .table 2 SEPS1 полиморфизм и GC риск
генотипы

пациентов с GC
п (%) завод
пациентов контрольной группы
п (% )

OR (95% ДИ)

P


G /G
237 (88,4)
283 (92,5) онлайн справочнике
G /A
30 (11.2) 22
(7.2)
1,66 (0.91-3.01)
0,097
A /A
1 (0.4)
1 (0.3)
0.77 (0.05-12.44)
0,852
G /A + A /A
31
23
1.61 (0.90-2.89)
0,112
GC: рак желудка, CI: уверенный интервал
Таблица 3 Связь между SEPS1 полиморфизма и пола
<й>
<й>
генотипа

G /G по сравнению с G /A + /A

<й>
<й>
<й>
G /G

G /A

A /A

OR (98% ДИ)

P

пациентов
Контрольные
самца
171
12
1
справочнике
женского
112
10
0
GC больных
мужчина
169
23
1
1.97 (0.95-4.06)
0,067
женский
68
7
0
1.17 (0.42-3.23)
0,764
GC: рак желудка, CI: уверенный интервал
В дополнительных анализов, ассоциации между полиморфизмом SEPS1 и клиникопатологическими признаков рака желудка, таких, как местоположение опухоли, стадии и гистологической классификации Лорена, были оценены. Неся -105 аллель был в значительной степени связано с повышенным риском кишечного типа Лорена рака желудка (ОР: 1,99, 95% ДИ 1.01-3.93, р &л; 0,05) и рака желудка, расположенной в средней трети части желудка (OR : 2,01, 95% ДИ 1.03-3.92, р &л; 0,05) (таблица 4) .table ассоциация 4 между SEPS1 полиморфизма и локализации опухоли, стадирования и классификации Лорен
Переменные (п)

генотип

G /G по сравнению с G /A + A /A

<й>
<й>
G /G

G /A

A /A

OR (95% ДИ)

P

<бр> Пациенты без GC (306) 283

22
1
справочнике
опухолевого местоположение
Кардии (5) страница 5 0 0

1.93 (0.40-9.22)
0,411
Non-кардии (263) 232

30
1
2.81 (0.69-11.48)
0,15
верхней трети ( 16)
14 страница 2 0
ND
средней трети (134) 115

19
0
2.01 (1.03-3.92)
0,041
Нижняя треть (113) 103

9
1
1.18 (0.52-2.64)
0,696
Балетмейстер
Ранний (138)
121
17
0
1.74 (0.88-3.47)
0,112
Расширенный (130) 117

12
1
1.52 (0.74-3.12) <бр> 0,253
классификации Лорен
Кишечные типа (151)
132
19
0
1.99 (1.01-3.93)
0,047
типа Diffuse (110) <бр> 100
9
1
1.19 (0.54-2.63)
0,659
Смешанная (7) страница 5 из 2
0
6,82 (1.07-43.65 )
0,043
ПРИМЕЧАНИЕ: Все данные корректируются с учетом пола, возраста, и хеликобактерной
статус инфекции. ND: не определено, ГХ: рак желудка, CI: уверенный интервал
Среди 301 H. Pylori
-позитивных предметов, нейтрофильной инфильтрации, мононуклеарных клеток инфильтрации, атрофии и метаплазии десятки антральном слизистой оболочки не показали никаких существенных различий между -105 аллеля носителей и субъектов, гомозиготных по аллелю G (данные не показаны). Среди элементов управления, не было никаких существенных различий генотипов среди пациентов с язвенной болезни желудка, язва двенадцатиперстной кишки, гастритов и (данные не показаны).
Обсуждение
В этом исследовании японского населения, мы показали впервые, что -105G > полиморфизм гена SEPS1 был связан с повышенным риском развития кишечного типа рака желудка и рака желудка, расположенной в средней трети части желудка. Хотя статус низким содержанием селена был связан с риском развития рака желудка человека [18, 19], а также высокой селена диеты подавляют рост H. Pylori
в морских свинок [20], клинические испытания человека не смогли продемонстрировать выгоду для селен добавки в профилактике предраковых поражений желудка [21]. -105G > промотор полиморфизм, который расположен в ответе элемента ER стрессового гена seps1 кодирующего SEPS1, был тесно связан с циркулирующими уровнями провоспалительных цитокинов, таких как IL-1b, IL-6, и ФНО- а, и с уровней экспрессии генов SEPS1 в организме человека [9]. Фенотипические последствия этого -105G &GТ; полиморфизм были исследованы при некоторых заболеваниях, связанных с хроническим воспалением [11-14]. Результаты оказались противоречивыми. Одно из исследований в финской когорте показал отношение другого SEPS1 ОНП и ишемической болезни сердца или ишемическим инсультом [11], и один отчет в большой норвежской когорте случай-контроль показал A аллель SEPS1-105G &GТ; полиморфизм является существенным фактор риска преэклампсии [12]. С другой стороны, один доклад в Германии показал SELS-105G > полиморфизм не был связан с IBD восприимчивости и не способствуют определенному фенотипа заболевания или повышенные уровни ФНО-альфа у пациентов с воспалительной болезнью кишечника [13]. Кроме того, один отчет показал незначащие различия SEPS1 частот аллелей между молодыми пациентов, перенесших инсульт и здоровых людей из Италии и Германии [14]
В нашем исследовании, не было никакой связи в целом между -105G >. Разновидность и рак желудка. Тем не менее, в детальном анализе клинико-патологическими, мы обнаружили значительные ассоциации между переноске аллель А и шансы конкретных видов рака желудка, с поправкой на возраст, пол, и хеликобактерной
статус инфекции. У нас есть 74 здоровых добровольцев ДНК (все являются H. Pylori
отрицательный). Мы исследовали эти ДНК о SEPS1 полиморфизма -105G > A. В результате число GG было 70, число GA было 4 и ни один из них не был АА. Исходя из этих результатов, мы думали, что наше сравнение больных раком желудка и не больных раком желудка было правильное сравнение для анализа риска ассоциации рака желудка и SEPS1 полиморфизма, кроме ассоциации H. Pylori
.
Канцерогенного путь для кишечный тип рака желудка, главным образом, включает в себя H. Pylori
инфекции. Инфекция вызывает воспаление и регенерации тканей, и эти процессы вызывают отклонение от нормального пути дифференцировки желудка до предраковых состояний [4, 22]. Было высказано предположение, что полиморфизм SEPS1 могут быть вовлечены в пути от хронического воспаления желудка канцерогенеза. Однако генотип АА очень редко встречается в японской популяции, и, таким образом, определенные выводы о генотип-фенотип корреляции гомозиготных носителей этого SEPS1 промотора полиморфизма можно извлечь только из крупных исследований с участием нескольких центров больницы.
Среди мужчин, аллели носители SEPS1 -105A увеличились шансы рака желудка по сравнению с теми, с генотипом GG. Существует один отчет, показывающий гендерную специфику ассоциации полиморфизма SEPS1 с ишемической болезнью сердца [11]. Авторы исследования обнаружили, отношения между полиморфизмом в другой области гена SEPS1 и коронарный риск сердечно-сосудистых заболеваний у женщин. Они подозревали, что гендерные ассоциации с SEPS1 SNP были обусловлены различиями в этиологии заболевания или в гормональной среды для мужчин и женщин [11]. В эпидемиологических исследованиях, пол был также связан с раком желудка [23, 24]. Эти эпидемиологические данные согласуются с гендерной специфической ассоциации между -105G > полиморфизм и рак желудка
На основании отчетов о последствиях нарушения экспрессии генов SEPS1 и в SEPS1 -105G >. Полиморфизм быть функционально вовлечен в воспалительный ответы [9], мы дополнительно оценивали гастрит оценки в незлокачественных областях антральном в хеликобактерной позитивных пациентов. Тем не менее, мы не обнаружили существенных различий между SEPS1 -105GG гомозигот и -105A аллеля носителей (данные не показаны). Вполне возможно, что число случаев для этого анализа были относительно низкими. Кроме того, это исследование не было непосредственное сравнение воспалительных уровней цитокинов генотипов этого полиморфизма, как сообщалось в литературе [9]. Таким образом, точная роль селенопротеинов в желудочном канцерогенезе и воспаление еще не определена. Предыдущие отчеты обнаружили связь между цитокинами и раком желудка [15, 25]. В будущих исследованиях, анализ этих воспалительных цитокинов в раке желудка будет полезно для понимания механизмов канцерогенеза в желудке
Заключение
В заключение, неся аллель в SEPS1 -105G >. Полиморфизм является фактор риска для кишечного типа рака желудка и рака желудка, расположенной в средней трети желудка в японской популяции. Аллель может способствовать раку желудка, оказывая влияние на воспалительную реакцию на хеликобактерной
инфекции в желудке. Дальнейшие исследования в больших когорт рака желудка может потребоваться, чтобы исследовать фактическую роль SEPS1 и важных последствий генетических изменений этих селенопротеинов при хронических воспалительных реакций и канцерогенеза в желудке.
Declarations
Выражение признательности
Мы поблагодарить всех медицинского персонала в отделении эндоскопии в Фуджита здравоохранения университетской больницы для взятия проб, и мы благодарим г-жу Ю. Кимура за ее научный вклад.
Эта работа была поддержана, в частности, грантом-в-помощь для 21-го века центра передового опыта программы Фуджита университета здравоохранения от Министерства образования, культуры, спорта, науки и техники Японии.
конкурирующие интересы
авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

• Применение Вейбулла модели для выживания больных раком желудка
• Сосуществование желудочно-кишечного тракта опухоли стромы и воспалительных миофибробластической опухоли ж…