Selenoproteinů S (SEPS1) génu -105G > Organizácia, polymorfizmus ovplyvňuje náchylnosť k rakovine žalúdka v japonskom population

selenoproteinů S (SEPS1) génu -105G > Organizácia, polymorfizmus ovplyvňuje náchylnosť k rakovine žalúdka v japonskej populácie
Abstrakt
pozadie
Zápal je kľúčovým faktorom v procese karcinogenézy od chronickej gastritídy vyvolanej Helicobacter pylori
. Selenoproteinů S (SEPS1) sa podieľa na regulácii zápalovej odpovede v endoplasmatickém retikule (ER). V poslednej dobe -105G > polymorfizmus v promótorom SEPS1 bolo preukázané, že zvýšenie expresie pre-zápalový cytokín. Skúmali sme vzťah medzi týmto polymorfizmom a rizikom vzniku rakoviny žalúdka.
Metódy
Vzali sme v priebehu endoscopies 268 japonských pacientov s rakovinou žalúdka (193 mužov a 75 žien, priemerný vek 65,3) a 306 kontrolných pacientov žalúdočné biopsia ( 184 mužov a 122 žien, priemerný vek 62,7) a extrahuje DNA zo vzoriek biopsie. Všetky subjekty uvedené písomný informovaný súhlas. Pre Genotypizácia na SEPS1 promótorom polymorfizmus v polohe -105G > A, boli použité metódy PCR-RFLP a PCR produkty boli štiepené PSPgo
Logistické-regresná analýza bola použitá na odhad miery pravdepodobnosti (OR) a 95% spoľahlivosti. . intervaly (CI), nastavenie na vek, pohlavie a H. pylori
infekčné stav
Výsledky
Medzi prípady, distribúcia genotypov bolo nasledovné: 88,4% bolo GG, 11,2% bolo GA, a 0,4% bol AA. Medzi ovládacími prvkami, rozdelenie bolo nasledovné: 92,5% bolo GG, 7,2% bolo GA a 0,3% bolo AA. U mužov nesúci alely bolo spojené so zvýšeným kurzom rakoviny žalúdka, v porovnaní s genotypom GG (OR: 2,0, 95% CI 1,0-4,1, p = 0,07). V porovnaní s genotypom GG, nesúci alelu A bola významne spojené so zvýšeným rizikom črevnej typu rakoviny žalúdka (OR: 2,0, 95% CI 1.0-3.9, p 0,05), ako aj žalúdočné rakovina sa nachádza v prostrednej tretine žalúdok (OR: 2,0, 95% CI 1,0 - 3,9, p menšie ako 0,05). Záver

-105G > promótor polymorfizmu SEPS1 bola spojená s črevnou typ rakoviny žalúdka. Tento polymorfizmus môže ovplyvniť zápalových stavov žalúdočnej sliznice. Väčšie populačných štúdií sú potrebné pre objasnenie vzťahu medzi zápalových reakcií a SEPS1 polymorfizmus.
Pozadie
rakoviny žalúdka zostáva aj naďalej značný problém verejného zdravia na celom svete. Aj keď výskyt a úmrtnosť na rakovinu žalúdka sa postupne znížil, rakovina žalúdka je na druhom mieste rakoviny pľúc ako najčastejšou príčinou úmrtí na rakovinu na celom svete [1, 2]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) bol označený ako kauzálneho patogénu, pre žalúdočné karcinogenéze [3]. Zápal môže byť kľúčovým faktorom v procese karcinogenézy chronickú gastritídu vyvolanú H. pylori
[4]. Avšak iba malý počet infikovaných pacientov skutočne ochorie na rakovinu žalúdka. To naznačuje, že hostiteľské genetické faktory, ako sú gény spojené s zápalových odpovedí, môže tiež hrať dôležitú úlohu v žalúdku rakoviny.
Selenoproteinů S (SEPS1, tiež známy ako SELS, SELENOS, Vimpat) je nový selenoproteinů umiestnený v endoplazmatickom retikulum (ER) a plazmatické membrány. , Že sa podieľa na kontrole zápalovej odpovede na ER [5]
SEPS1 chráni bunky pred oxidačným poškodením a apoptóze, a je široko exprimovaný v rôznych tkanivách [6-8]
V poslednej dobe sa. - 105G > promótor polymorfizmu SEPS1 bolo preukázané, že je pevne spojená s hladinami v plazme pre-zápalových cytokínov, ako je interleukín 1 beta (IL-1), interleukín 6 (IL-6) a tumor nekrotizujúceho faktora alfa (TNF-α) , -105G ≫ Organizácia, polymorfizmus SEPS1 môžu mať vplyv na hladiny mRNA SEPS1 [9]. Substitúcia A alely pre G alely v polohe -105 znižuje aktivitu promótorom v bunkách HepG2 [10].
Po správe o polymorfizmu v oblasti SEPS1 promótorom, niektoré klinické štúdie preukázali spojenie medzi polymorfizmom SEPS1 s ischemickou chorobou srdca a ischemickej cievnej mozgovej príhody [11] a preeklampsia [12], zatiaľ čo iné štúdie hlásené žiadne spojenie medzi tejto variante so zápalovým ochorením čriev [13] alebo cerebrovaskulárne ochorenie [14].
však súvislosť medzi -105G > promótor polymorfizmu SEPS1 a rizikom rakoviny žalúdka nebola doteraz študovaná
IL-1 hladiny boli spojené s rakovinou žalúdka [15], a preto, že polymorfizmus SEPS1 ovplyvňuje hladiny IL-1, môže polymorfizmus SEPS1. za dôležitý genetický faktor pre vývoj rakoviny žalúdka.
v tejto štúdii prípadov a kontrol, sme skúmali súvislosti medzi SEPS1 promotorového polymorfizmu a ako v žalúdku rizika rakoviny a zápalových odpovedí v žalúdočnej sliznici, merané biopsiou vzoriek žalúdočnej .
Metódy
pacientmi a kontrolnou skupinou
štúdie boli zaradení pacienti, ktorí dostali endoskopiou hornej časti GIT na Fujita Health fakultnej nemocnice v Japonsku. Následne bol vykonávaný screening zahrnutých jedincov na rakovinu žalúdka od endoskopiou hornej časti GIT nasleduje bária RTG vyšetrenie. Prípadoch išlo o 268 japonských pacientov (193 mužov, 75 žien, priemerný vek 65,3 ± 12,0 rokov), ktorí boli diagnostikovaní s primárnou rakoviny žalúdka a kontroly boli 306 ľudí (184 mužov a 122 žien) bez rakoviny žalúdka, ktorí tiež podstúpili endoskopiou hornej časti GIT. Rakovina žalúdka bol diagnostikovaný histologicky u patológie oddelenie našej nemocnice a rakoviny bola klasifikovaná podľa klasifikácie Lauren 's [16]. boli tiež získané staging rakoviny a anatomický informácie o umiestnení. Pacienti s systémových ochorení a malignít v iných orgánoch, alebo ten, ktorý dostal nesteroidné protizápalové lieky boli vylúčené.
Etickou komisiou School of Medicine na Fujita zdravotníckej univerzite schválila protokol. Písomný informovaný súhlas bol získaný od každého účastníka štúdie.
Histologické štúdie a DNA extrakcie
žalúdočné biopsie boli odobraté z non-rakovinové sliznice v dutine a väčšie zakrivenie žalúdka, s použitím hornej časti gastrointestinálneho traktu rozsah. Niektoré časti každej vzorky boli fixované v 10% pufrovanom formalínu a vložené do parafínu, zatiaľ čo ostatné časti boli okamžite zmrazené a skladované pri -80 ° C až do extrakcie DNA. Všetky histologické diagnózy vznikali v oddelení patológie našej nemocnici. Závažnosť chronickej gastritídy bol klasifikovaný patológom, ktorý nemal prístup k žiadnym klinických informácií, v závislosti na aktuálnom systéme Sydney [17] s každým faktorom je zaznamenal od 0 (normálne) do 3 (označený).
Genómovej DNA bola extrahovaná z uložených vzoriek pri teplote -80 ° C s použitím proteinázy k a DNA extrakčnej súpravy (Quiagen, Valencia, CA).
polymorfizmus Analýza SEPS1 génu
genotyp pre región SEPS1 promótor v pozícii -105 bol stanovený pomocou PCR na báze dĺžky reštrikčných fragmentov polymorfizmy (PCR-RFLP). Použili sme priméry, ktoré zahŕňali polymorfizmus oblasť SEPS1 (-105). Následne identifikácia bola vykonaná po PCR-amplifikáciu, s použitím nasledujúcich primerov 5'-AAATCCGTGAACGAGGTCCG-3'and 5'-GAGCAACTAATCTGAATCAGG-3 '. PCR bola vykonaná s 0,1 ug genómovej DNA v objeme 20 ul. DNA bola denaturovaná pri 94 ° C po dobu 5 minút, nasleduje 35 cyklov pri 94 ° C počas 20 sekúnd, 53 ° C počas 20 sekúnd, a 72 ° C počas 40 sekúnd, s konečným predĺžením pri 72 ° C počas 7 minút , PCR reakcia sa vykonáva pomocou Blend Taq (Toyobo Co., Ltd., Osaka, Japonsko). Amplifikované PCR produkty boli štiepené cez noc s 5 jednotkami PSPgo (New England Biolabs, Inc., Beverly, MA, USA) pri 75 ° C. Následne naštiepené produkty boli analyzované na 3% agarózových géloch. Tieto gély boli farbené etidiumbromidom (0,5 ug /ml), a genotypy boli stanovené pomocou analýzy rôznych pásmach. Prítomnosť miesta PSPgo bola indikovaná štiepením 324 bp amplifikovaný produkt, čím sa získa fragmenty 179 a 145 bp. Genotypizácia bola potvrdená priamym sekvenovania v niekoľkých náhodne vybraných vzorkách.
Detekcia H. pylori
H. pylori
pozitivita bola stanovená mikroskopickým vyšetrením, dychovou skúškou močoviny, alebo titrov protilátok v sére anti-HP. Infekcia bola diagnostikovaná, ak aspoň jeden z týchto testov bol pozitívny.
Štatistická analýza
Hardy-Weinbergovy rovnováhy génu alely SEPS1 u kontroly a u pacientov s karcinómom žalúdka boli vyhodnotené χ 2 štatistiky. Klinické charakteristiky medzi pacientmi s alebo bez rakoviny žalúdka, a rozdiely v gastritídy skóre medzi dopravcami a g /g boli skúmané pomocou testu Mann-Whitney U. Logistická-regresná analýza bola použitá na odhad miery pravdepodobnosti (OR) a 95% intervaly spoľahlivosti (CI) pre genotypov, s úpravou pre vek, pohlavie, a H. pylori
stavu infekcie. Hodnota p < 0,05 bola považovaná za štatisticky významnú.
Výsledky
Charakteristika subjektov
charakteristiky prípadov a kontrol sú zhrnuté v tabuľke 1. H. pylori
infekcie a vek boli vyššie u pacientov s karcinómom žalúdka, než v ovládacie prvky (p menšie ako 0,05) .Table 1 Charakteristika subjektov

GC
Controls
P

počet
268
306
Muži /Ženy
193/75
184/122
NS
Priemerný vek (± SD)
65,3 ± 12,0
62,7 ± 13,2 Hotel < 0.05
HP pozitívna sadzba (%)
86,2
68,0 Hotel < 0.05
GC: rakovina žalúdka, HP: Helicobacter pylori
AGC vs. Controls, Mann-Whitney U test
hlavné endoskopické nálezy u kontrolnej skupiny boli :. Žalúdočný vred v 68 pacientov ( 22,2%), dvanástnikových vredov u 35 (11,4%), žalúdočné a dvanástnikové vredy v 5 (1,7%), a gastritída v 198 (64,7%).
Distribúcia genotypov SEPS1
Tabuľka 2 ukazuje genotyp frekvencie z SEPS1 u pacientov s rakovinou žalúdka a kontrolnou skupinou. Polymorfizmus v pozícii -105 časti SEPS1 bolo napísané vo všetkých 574 subjektov. Medzi prípady, distribúcia genotypov bolo nasledovné: 88,4% bolo GG, 11,2% bolo GA a 0,4% bolo AA. Medzi ovládacími prvkami, rozdelenie bolo nasledovné: 92,5% bolo GG, 7,2% bolo GA a 0,3% bolo AA (tabuľka 2). Frekvencia SEPS1 polymorfizmu u kontroly a u pacientov s karcinómom žalúdka sa významne líšia od tých, ktoré očakáva, že v rámci Hardy-Weinbergovy rovnováhy (p = 0,42, 0,96 v tomto poradí). U mužov, v porovnaní s genotypom GG, genotypy GA a AA kombinované bola spojená so zvýšeným kurzom rakovinou žalúdka (OR: 1,97, 95% CI 0,95-4,06, p = 0,067; tabuľka 3) .Table 2 SEPS1 polymorfizmus a GC riziko
genotypy
pacientov s GC
n (%)
kontrolných pacientov
n (% )
OR (95% CI)
P
G /G
237 (88,4)
283 (92,5) referencie
G /A
30 (11,2)
22 (7.2)
1,66 (0.91-3.01)
0,097
/A
1 (0,4)
1 (0.3)
0,77 (0,05 - 12,44)
0,852
G /A + A /A
31
23
1.61 (0.90-2.89)
0,112
GC: rakovina žalúdka, CI: presvedčený, interval
Tabuľka 3 Súvislosť medzi SEPS1 polymorfizmus a pohlavia


genotypu
G /G vs. G /A + A /A



G /G
G /A
A /A
OR (98% CI)
P
kontrolných pacientov
male
171
12
1 referencie
ženskej
112
10
0
GC pacientov
male
169
23
1
1,97 (0,95-4,06)
0,067
žena
68
7
0
1,17 (0,42-3,23)
0,764
GC: karcinómu žalúdka, CI: veria interval
V ďalších analýzach, asociácia medzi polymorfizmom SEPS1 a patologickým vlastností rakoviny žalúdka, napríklad miesta nádoru, fáza a histologické klasifikácie Lauren, boli hodnotené. Nosenie -105 alely boli významne spojené so zvýšeným rizikom črevného typu Lauren rakoviny žalúdka (OR: 1,99, 95% CI 1,01 až 3,93, p menšie ako 0,05) a žalúdočné rakoviny sa nachádza v strednej tretej časti žalúdka (OR : 2,01, 95% CI 1,03-3,92, p < 0,05) (tabuľka 4) .Table 4 pridružení medzi SEPS1 polymorfizmus a umiestnenia nádoru, staging a Lauren klasifikácii
Premenné (n)
genotyp
G /G vs. G /A + A /A


G /G
G /A
A /A
OR (95% CI)
P

Pacienti bez GC (306)
283
22
1 referencie
lokalizácia nádoru
Cardia (5)
5
0
0
1,93 (0,40-9,22)
0,411
Non-Cardia (263)
232
30
1
2.81 (0.69-11.48)
0,15
horná tretina ( 16)
14
2
0
ND
strednej tretine (134)
115
19
0
2.01 (1.03-3.92)
0,041
Dolné tretí (113)
103
9
1
1,18 (0,52-2,64)
0,696
Staging
Early (138)
121
17
0
1,74 (0,88-3,47)
0,112
Advanced (130)
117
12
1
1.52 (0.74-3.12)
0,253
Lauren klasifikácie
črevnej typu (151)
132
19
0
1.99 (1.01-3.93)
0,047
typu difúznej (110)
100
9
1
1,19 (0,54-2,63)
0,659
zmiešané (7)
5
2. NETHRY.cz 0
6,82 (1.07-43.65 )
0,043
Poznámka: Všetky údaje sú očistené o pohlaví, veku a H. pylori
stavu infekcie. ND: nestanovené, GC: rakovina žalúdka, CI: presvedčený, interval
Medzi 301 H. pylori
-pozitívny predmetov, neutrofilné infiltrácie, mononukleárny infiltrácia, atrofiou a metaplázia skóre antrálnej sliznice nepreukázali žiadne významné rozdiely medzi -105 alely nosičov a predmetov homozygotná pre alelu G (dáta nie sú uvedené). Medzi kontrolami neboli žiadne významné rozdiely medzi genotypy u pacientov so žalúdočnými vredmi, dvanástnikové vredy, gastritída a (dáta nie sú uvedené).
Diskusia
V tejto štúdii japonskej populácie sme preukázali, prvýkrát, že -105G >, a polymorfizmus génu SEPS1 bolo spojené so zvýšeným rizikom črevnej typu karcinómu žalúdka a karcinómu žalúdka sa nachádza v strednej tretej časti žalúdka. Aj keď stav nízkej selénu bolo spojené s rizikom rakoviny žalúdka u ľudí [18, 19], a vysokú selénu stravy inhibíciu rastu H. pylori
u morčiat [20], ľudské klinické štúdie nepreukázali prínos pre selénu doplnky v prevencii prekanceróznych žalúdočných lézií [21]. -105G ≫ Promótor polymorfizmus, ktorý sa nachádza v reakčnom elementom ER stres z kódujúceho seps1 génu SEPS1, bol silne spojený s cirkulujúcej hladiny prozápalových cytokínov, ako sú IL-1b, IL-6 a TNF-a a, a s SEPS1 hladiny génovej expresie u ľudí [9]. Fenotypové dôsledky tejto -105G > polymorfizmus boli skúmané u niektorých chorôb súvisiacich s chronickým zápalom [11-14]. Výsledky boli v rozpore. Jedna štúdia vo fínskom kohorty ukázala vzťah druhú SEPS1 SNP a ischemickou chorobou srdca alebo ischemickou príhodou mŕtvica [11], a jednu správu vo veľkom nórskeho case-control kohorty ukázala A alely SEPS1-105G > polymorfizmus je významný rizikovým faktorom pre preeklampsia [12]. Na druhej strane, jedna správa v Nemecku ukázala SELS-105G > polymorfizmus nebolo spojené s IBD citlivosťou a neprispelo k určitého fenotypu ochorenia alebo zvýšené hladiny TNF-alfa u pacientov s IBD [13]. Tiež jedna správa ukázala non-významné rozdiely SEPS1 allele frekvenciami medzi mladými pacientmi po mŕtvici a zdravých kontrol z Talianska a Nemecka [14]
V našej štúdii bolo celkovo medzi -105G >žiadny vzťah;. Variant a rakovinu žalúdka. Avšak, v podrobnom klinickopatologické analýze sme zistili významné spojenie medzi nesúci alely A a šanca na konkrétnych typov rakoviny žalúdka, s úpravou pre vek, pohlavie, a H. pylori
stavu infekcie. Máme 74 zdravých dobrovoľníkov DNA (všetky sú H. pylori
negatívne). Skúmali sme tieto DNA o SEPS1 polymorfizmus -105G >, A. V dôsledku toho sa počet GG boli 70, počty GA boli 4 a žiadny z nich bol AA. Z týchto výsledkov sme sa domnievali, náš porovnanie medzi pacientmi s rakovinou žalúdka a pacientov s rakovinou žalúdka non bolo riadne porovnanie pre analýzu rizika Asociácie rakovinou žalúdka a SEPS1 polymorfizmus ako združeniu H. pylori
.
Karcinogénneho chodník črevnej typ rakoviny žalúdka sa zameriava predovšetkým na H. pylori
infekciu. Infekcia spôsobuje zápal a regeneráciu tkanív, a tieto procesy spôsobujú odchýlku od normálneho dráhy žalúdka rozlišovanie vzniku prekanceróznych štátoch [4, 22]. To bolo navrhol, že polymorfizmus SEPS1 môže byť zapojený do dráhy z chronického zápalu žalúdka do rakoviny. Avšak, AA genotyp je veľmi vzácny v japonskej populácie, a tak jednoznačné závery o genotyp-fenotyp korelácia homozygotnou nosiča tohto SEPS1 promotorového polymorfizmu možno čerpať iba z väčších štúdií zahŕňajúcich viac nemocničných centier.
U mužov, alely nosiče SEPS1 -105 sa zvýšila šanca na rakovinu žalúdka v porovnaní s tými, s genotypom GG. Existuje jedna správa, uvádzajúca združenia rodovo špecifické pre polymorfizmus SEPS1 s ischemickou chorobou srdca [11]. Autori štúdie zistila vzťahy medzi polymorfizmus v inej oblasti SEPS1 génu a rizikom ischemickej choroby srdca u žien. Majú podozrenie, že asociácia medzi pohlaviami špecifické s SEPS1 SNP boli vzhľadom na rozdiely v etiológii ochorenia alebo v hormonálneho prostredia pre mužov a ženy [11]. V epidemiologických štúdiách, pohlavie bolo tiež spojené s rakovinou žalúdka [23, 24]. Tieto epidemiologické nálezy sú v súlade s konkrétny vzťah rodovej rovnosti medzi -105G > polymorfizmus a rakovina žalúdka
na správach o dôsledkoch narušenej expresie SEPS1 génov a na SEPS1 -105G >základe;. Polymorfizmus je funkčne zapája do zápalových odpovede [9], budeme ďalej stanovený gastritída výsledky v non-rakovinové oblastiach dutine v H. pylori pozitívnych pacientov. Avšak sme nenašli významné rozdiely medzi SEPS1 -105GG homozygotov a -105 alel nosiče (dáta nie sú uvedené). Je možné, že počet prípadov pre túto analýzu boli relatívne nízke. Tiež toto šetrenie nebola priame porovnanie zápalových hladiny cytokínov genotypy tohto polymorfizmu, ako bola popísaná v literatúre [9]. Preto je presná úloha selenoproteinů v žalúdočnej karcinogenéze a zápalu nebola stanovená. Predchádzajúce správy našli spojenie medzi cytokínov a rakoviny žalúdka [15, 25]. V ďalších štúdiách sa analýza týchto zápalových cytokínov v karcinómu žalúdka bude užitočné pre pochopenie mechanizmov karcinogenézy v žalúdku
Záver
Záverom možno konštatovať, nesúci alely A na SEPS1 -105G >. Polymorfizmus je rizikovým faktorom pre črevnú typ karcinómu žalúdka a karcinómu žalúdka sa nachádza v prostrednej tretine žalúdku v japonskej populácie. A alela môže prispievať k vzniku rakoviny žalúdka tým, že ovplyvňuje zápalové reakcie na H. pylori
infekcie v žalúdku. Ďalšie štúdie vo väčších kohorty rakoviny žalúdka môže byť potrebné skúmať skutočnú úlohu SEPS1 a dôležitých dôsledkov genetických zmien týchto selenoproteinů u chronických zápalových reakcií a karcinogenézy v žalúdku.
Vyhlásenie
Poďakovanie
sme ďakujeme všetkým zdravotníckeho personálu pri endoskopii jednotky v Fujita zdravia FN pre odber vzoriek, a ďakujeme pani Y. Kimura pre jej vedecké informácie.
Táto práca bola podporená čiastočne grantom-in-Aid pre 21. storočie Center of Excellence Program Fujita zdravotníctva univerzity od Ministerstva školstva, kultúry, športu, vedy a technológie v Japonsku.
protichodnými záujmami
autori vyhlasujú, že nemajú žiadne protichodné záujmy.

• Aplikácia Weibullovho modelu pre prežitie pacientov s rakovinou žalúdka
• Koexistencia gastrointestinálneho stromálneho nádoru a zápalových myofibroblastický nádoru žalúdka prezentuje ako kolízny nádor: prvým prípadu a prehľad literatúry