Selenoprotein S (SEPS1) genet -105G > En promoter polymorfisme påvirker mottakelighet for magekreft i den japanske befolkningen

Selenoprotein S (SEPS1) genet -105G > En promoter polymorfisme påvirker mottakelighet for magekreft i den japanske befolkningen
Abstract
Bakgrunn
Betennelse er en viktig faktor i prosessen med kreftutvikling av kronisk gastritt forårsaket av Helicobacter pylori
. Selenoprotein S (SEPS1) er involvert i kontrollen av den inflammatoriske respons i det endoplasmatiske retikulum (ER). Nylig -105G > En polymorfisme i formidler av SEPS1 ble vist å øke pro-inflammatoriske cytokin uttrykk. Vi undersøkte sammenhengen mellom denne polymorfisme og risikoen for magekreft.
Metoder
Vi tok mage biopsier under endoscopies av 268 japanske mage kreftpasienter (193 menn og 75 kvinner, gjennomsnittsalder 65,3), og 306 kontrollpasienter ( 184 hanner og 122 kvinner, gjennomsnittsalder 62,7) og ekstrahert DNA fra biopsiprøver. Alle fag som tilbys skriftlig informert samtykke. For genotyping av SEPS1 arrangøren polymorfisme i posisjon -105G > A, ble PCR-RFLP metoder brukt og PCR produktene ble kuttet med PspGI
Logis-regresjonsanalyse ble brukt for å estimere odds ratio (OR) og 95% sikkerhet. . intervaller (CI), justert for alder, kjønn og H. pylori
smittestatus Search Results
Blant tilfeller fordelingen av genotyper var som følger: 88,4% var GG, 11,2% var GA, og 0,4% var AA. Blant kontroller, var fordelingen som følger: 92,5% var GG, 7,2% var GA, og 0,3% var AA. Blant menn, bærer en allel var assosiert med økt odds av magekreft, sammenlignet med GG genotype (OR: 2,0, 95% KI 1,0 til 4,1, p = 0,07). Sammenlignet med GG genotype, som bærer A-allel var signifikant assosiert med økt risiko for tarmtypen magekreft (OR: 2,0, 95% CI 1,0 til 3,9, p 0,05) så vel som av magekreft plassert i den midtre tredjedel av magen (OR: 2,0, 95% KI 1,0 til 3,9, p < 0,05).
Konklusjon
-105G > En promoter polymorfisme av SEPS1 var assosiert med tarm type magekreft. Dette polymorfisme kan påvirke inflammatoriske tilstander i mageslimhinnen. Større populasjonsbaserte studier er nødvendig for å avklare forholdet mellom betennelsesreaksjoner og SEPS1 polymorfisme.
Bakgrunn
Magekreft er fortsatt et betydelig folkehelseproblem over hele verden. Selv om forekomst og dødelighet av magekreft har sunket gradvis, er magekreft andre bare lungekreft som den ledende årsak til kreft dødsfall rundt om i verden [1, 2]. Helicobacter pylori product: (H. pylori
) ble utpekt som en utløsende patogen for magekreftutvikling [3]. Betennelse kan være en viktig faktor i prosessen med kreftutvikling av kronisk gastritt forårsaket av H. pylori product: [4]. Det er imidlertid bare et lite antall av infiserte pasienter faktisk utvikle magekreft. Dette tyder på at verts genetiske faktorer, som gener assosiert med inflammatoriske responser, kan også spille en viktig rolle i magen kreftutvikling.
Selenoprotein S (SEPS1, også kjent som Sels, SELENOS, VIMP) er en roman selenoprotein lokalisert i det endoplasmatiske retikulum (ER) og plasmamembranen. . Det er involvert i kontrollen av den inflammatoriske respons i ER [5]
SEPS1 beskytter cellene mot oksidativ skade og apoptose, og er mye uttrykkes i en rekke forskjellige vev [6-8]
Nylig,. - 105G > A promoter polymorfisme av SEPS1 ble vist å være sterkt assosiert med plasmanivåer av proinflammatoriske cytokiner, slik som interleukin 1 beta (IL-1β), interleukin 6 (IL-6) og tumornekrosefaktor alfa (TNF-α) . Den -105G > En promoter polymorfisme av SEPS1 kan påvirke SEPS1 mRNA nivåer [9]. Substitusjon av A-allel for den G-allelet i posisjon -105 redusert promotoraktiviteten i HepG2 celler [10].
Etter rapport av en polymorfisme i SEPS1 promoter-regionen, har noen kliniske undersøkelser vist assosiasjoner mellom SEPS1 polymorfisme med koronar hjertesykdom og iskemisk hjerneslag [11] og preeklampsi [12], mens andre studier rapporterte ingen sammenheng mellom denne varianten med inflammatorisk tarmsykdom [13] eller cerebrovaskulær sykdom [14].
Men foreningen mellom -105G > En promoter polymorfisme av SEPS1 og magekreft risiko har ennå ikke blitt studert
IL-1B nivåer har vært assosiert med magekreft [15], og fordi SEPS1 polymorfisme påvirker nivåene av IL-1β, kan SEPS1 polymorfisme. være en viktig genetisk faktor for utvikling av magekreft.
i dette case-control studie undersøkte vi assosiasjoner mellom SEPS1 arrangøren polymorfisme og både magekreft risiko og inflammatoriske responser i mageslimhinnen målt i mage biopsiprøver .
Metoder
pasienter og kontroller
studien inkluderte pasienter som fikk en øvre gastrointestinal endoskopi ved Fujita Health universitetssykehus i Japan. Fortløpende registrerte personene ble undersøkt for magekreft ved øvre gastrointestinal endoskopi etterfulgt av en barium røntgenundersøkelse. Tilfellene var 268 japanske pasienter (193 menn, 75 kvinner, gjennomsnittsalder 65,3 ± 12,0 år) som ble diagnostisert med primær magekreft, og kontrollene var 306 personer (184 menn, 122 kvinner) uten magekreft som også gjennomgikk øvre gastrointestinal endoskopi. Magekreft ble diagnostisert histologisk ved Patologisk avdeling av sykehuset vårt, og kreft ble klassifisert i henhold til Lauren 's klassifisering [16]. Den stadieinndeling og anatomiske stedsinformasjon ble også oppnådd. Pasienter med systemiske sykdommer og malignitet i andre organer, eller som hadde fått ikke-steroide antiinflammatoriske legemidler ble ekskludert.
Etisk komité i School of Medicine ved Fujita Health Universitetet godkjent protokollen. Skriftlig informert samtykke ble oppnådd fra hver studie deltaker.
Histologisk undersøkelse og DNA-ekstraksjon
Gastriske biopsiprøver ble tatt fra den ikke-kreft slimhinner i antrum, og den større krumning av magesekken, ved hjelp av en øvre gastrointestinal omfang. Deler av hver prøve ble fiksert i 10% bufret formalin og innstøpt i parafin, mens de øvrige deler ble umiddelbart frosset og lagret ved -80 ° C til DNA-ekstraksjon. Alle histologiske diagnoser ble gjort ved Divisjon for patologi av vårt sykehus. Alvorlighetsgraden av kronisk gastritt ble klassifisert av en patolog som ikke har tilgang til noen klinisk informasjon, i henhold til oppdatert Sydney system [17] med hver faktor blir scoret fra 0 (normal) til 3 (markert).
Genomisk DNA ble ekstrahert fra lagrede prøver ved -80 ° C ved hjelp av proteinase K og DNA-ekstraksjon kits (Quiagen, Valencia, California).
Polymorphism Analyse av SEPS1 Gene
genotype for SEPS1 promoter-regionen i posisjon -105 ble bestemt ved hjelp av PCR-basert rflp (PCR-RFLP). Vi brukte primere som inkluderte SEPS1 (-105) polymorfisme området. Deretter identifiseringen ble gjort etter PCR-amplifikasjon ved å bruke de følgende primere 5'-AAATCCGTGAACGAGGTCCG-3'and 5'-GAGCAACTAATCTGAATCAGG-3 '. PCR ble utført med 0,1 pg av genomisk DNA i et volum på 20 ul. DNA ble denaturert ved 94 ° C i 5 minutter, etterfulgt av 35 sykluser ved 94 ° C i 20 sekunder, 53 ° C i 20 sekunder og 72 ° C i 40 sekunder, med en endelig forlengelse ved 72 ° C i 7 minutter . PCR reaksjoner ble gjort ved hjelp av Blend Taq (Toyobo Co., Ltd., Osaka, Japan). De amplifiserte PCR-produktene ble spaltet over natten med 5 enheter PspGI (New England BioLabs, Inc., Beverly, MA, USA) ved 75 ° C. Deretter ble fordøyd produktene analysert på 3% agarosegeler. Disse geler ble farget med etidiumbromid (0,5 mg /ml), og genotypene ble bestemt ved analyser av forskjellige band. Tilstedeværelsen av en PspGI setet ble indikert ved spaltning av 324 bp amplifisert produkt for å gi fragmenter på 179 og 145 bp. Genotyping ble bekreftet ved direkte sekvensering i noen tilfeldig utvalgte prøver.
Påvisning av H. pylori
H. pylori
positivitet ble bestemt ved mikroskopisk undersøkelse, urea pusteprøve, eller serum anti-HP antistofftitre. Infeksjon ble diagnostisert når minst ett av disse testene var positiv.
Statistical Analysis
Hardy-Weinberg likevekt av SEPS1 genet allel i kontrollene og magekreftpasienter ble vurdert ved χ 2 statistikk. Kliniske karakteristika mellom pasienter med og uten magekreft, og forskjeller i gastritt score mellom A transportører og G /G ble undersøkt ved hjelp av Mann-Whitney U test. Logis-regresjonsanalyse ble brukt for å estimere odds ratio (OR) og 95% konfidensintervall (KI) for genotypene, med justering for alder, kjønn, og H. pylori
infeksjonsstatus. En p-verdi < 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.
Resultater
Kjennetegn på fagene
Karakteristikken av tilfellene og kontrollene er oppsummert i tabell 1. H. pylori
infeksjon og alder var høyere i magekreftpasienter enn i kontrollene (p < 0,05) .table 1 Kjennetegn på fagene

GC
Controls
P

antall
268
306
menn /kvinner
193/75
184/122
NS
Gjennomsnittsalder (± SD)
65,3 ± 12,0
62,7 ± 13,2
< 0.05a
HP positiv rate (%)
86,2
68,0
< 0.05a
GC: magekreft, HP: Helicobacter pylori
AGC vs. Controls, Mann-Whitney U test
Hoved endoskopiske funn for kontrollgruppen var:. Magesår i 68 pasienter ( 22,2%), duodenal sår i 35 (11,4%), mage og duodenal sår i fem (1,7%), og gastritt i 198 (64,7%).
Fordeling av SEPS1 genotyper
Tabell 2 viser genotypefrekvensene av SEPS1 hos pasienter med magekreft og kontrollgruppen. Den polymorfisme i posisjon -105 av SEPS1 ble skrevet i alle 574 fag. Blant tilfeller fordelingen av genotyper var som følger: 88,4% var GG, 11,2% var GA, og 0,4% var AA. Blant kontroller, var fordelingen som følger: 92,5% var GG, 7,2% var GA, og 0,3% var AA (tabell 2). Hyppigheten av SEPS1 polymorfisme i kontrollene og mage kreftpasienter ikke avviker vesentlig fra det som er forventet under Hardy-Weinberg likevekt (p = 0,42, 0,96 henholdsvis). Blant menn, sammenlignet med GG genotype ble genotypene GA og AA kombinert forbundet med en økt odds for magekreft (OR: 1,97, 95% KI 0,95 til 4,06, p = 0,067, Tabell 3) .table 2 SEPS1 polymorfisme og GC risikoen
genotyper Book pasienter med GC
n (%)
kontrollpasienter
n (% )
OR (95% CI)
P
G /G
237 (88,4)
283 (92,5)
referanse
G /A
30 (11,2)
22 (7,2)
1,66 (0,91 til 3,01)
0,097
A /A
1 (0,4)
1 (0,3)
0,77 (0,05 til 12,44)
0,852
G /A + A /A
31
23
1,61 (0,90 til 2,89)
0,112
GC: magekreft, CI: trygg intervall
Tabell 3 Sammenhengen mellom SEPS1 polymorfisme og kjønn


genotype
G /G vs. G /A + A /A



G /G
G /A
A /A
OR (98% CI)
P

kontrollpasienter
male 171
12
1 referansen
kvinnelige
112
10
0
GC pasienter
male 169
23
1 1,97 (0,95 til 4,06)
0,067
kvinnelige
68
7
0
1,17 (0,42 til 3,23)
0,764
GC: magekreft, CI: trygg intervall
i ytterligere analyser, assosiasjoner mellom SEPS1 polymorfisme og clinicopathologic funksjoner i magekreft, som svulsten plassering, scene, og Lauren histologisk klassifisering, ble evaluert. Bærer en -105 Et allel var signifikant assosiert med økt risiko for Lauren intestinal type magekreft (OR: 1,99, 95% KI 1,01 til 3,93, p < 0,05) og av magekreft ligger i midtre tredjedel del av magen (OR : 2,01, 95% KI 1,03 til 3,92, p < 0,05) (tabell 4) .table 4 Sammenhengen mellom SEPS1 polymorfisme og tumor beliggenhet, iscenesettelse og Lauren klassifisering
variabler (n)
genotype
G /G vs. G /A + A /A


G /G
G /A
A /A
OR (95% CI)
P

Pasienter uten GC (306)
283
22
1 Reference
Tumor plassering
Cardia (5)
5
0
0
1,93 (0,40 til 9,22)
0,411
Non-Cardia (263)
232
30
1 2,81 (0,69 til 11,48)
0,15
Øvre tredjedel ( 16)
14
2
0
ND
Midtre tredjedel (134)
115
19
0
2,01 (1,03 til 3,92)
0.041
Nedre tredje (113)
103
9
1 1,18 (0,52 til 2,64)
0,696
Staging
Tidlig (138)
121
17
0
1,74 (0,88 til 3,47)
0,112
Advanced (130)
117
12
1 1,52 (0,74 til 3,12)
0.253
Lauren klassifisering
Intestinal type (151)
132
19
0
1,99 (1,01 til 3,93)
0,047
Diffuse type (110)
100
9
1 1,19 (0,54 til 2,63)
0,659
Blandet (7)
5
2
0
6,82 (1,07 til 43,65 )
0,043
MERK: Alle data er justert for kjønn, alder og H. pylori
infeksjonsstatus. ND: ikke bestemt, GC: magekreft, CI: trygg intervall
Blant 301 H. pylori
-positive fag, den nøytrofile infiltrasjon, mononukleær celle infiltrasjon, de atrofi og metaplasi scorene i antrum slimhinnen viste ingen signifikante forskjeller mellom -105 A allel bærere og fag homozygote for G-allelet (data ikke vist). Blant kontroller, var det ingen signifikant genotype forskjeller mellom pasienter med magesår, duodenalsår, og gastritt (data ikke vist).
Diskusjon
I denne studien av en japansk befolkning, har vi vist for første gang som den -105G > En polymorfisme av SEPS1 genet var assosiert med økt risiko for intestinal type magekreft og magekreft ligger i midtre tredjedel del av magen. Selv om lav selen status er forbundet med risiko for human magekreft [18, 19], og høy selen diett hemme vekst av H. pylori
i marsvin [20], har kliniske studiene viste en fordel for selen kosttilskudd i forebygging av forstadier mage lesjoner [21]. Den -105G > A promoter polymorfisme, som ligger i en ER stress responselement av den seps1 gen som koder for SEPS1, var sterkt assosiert med sirkulerende nivåer av proinflammatoriske cytokiner, slik som IL-1 b, IL-6 og TNF- en, og med SEPS1 genuttrykk nivåer hos mennesker [9]. De fenotypiske konsekvensene av dette -105G > En polymorfisme har blitt undersøkt i noen sykdommer relatert til kronisk betennelse [11-14]. Resultatene har vært inkonsekvent. En studie på finsk kohorten viste forholdet mellom andre SEPS1 SNPs og koronar hjertesykdom eller iskemisk hjerneslag aktivitet [11], og en rapport i et stort norsk case-control kohorten viste Et allel av SEPS1-105G > En polymorfisme er en signifikant risikofaktor for svangerskapsforgiftning [12]. På den annen side, en rapport i Tyskland viste SELS-105G > A-polymorfismen var ikke assosiert med IBD følsomhet og bidro ikke til en bestemt sykdom fenotype eller økt TNF-a-nivåer i pasienter med IBD [13]. Også en rapport viste ikke signifikante forskjeller i SEPS1 allelfrekvenser mellom unge slagpasienter og friske kontroller fra Italia og Tyskland [14]
I vår studie var det ingen sammenheng samlet mellom -105G >. En variant og magekreft. Men i detaljert clinicopathological analyse, fant vi signifikante sammenhenger mellom bærer A-allelet og oddsen for bestemte typer magekreft, med justering for alder, kjønn, og H. pylori
infeksjonsstatus. Vi har 74 friske frivillige DNA (alle er H. pylori
negative). Vi undersøkte disse DNA om SEPS1 polymorfisme -105G > A. Som et resultat, antall GG var 70, antallet GA var 4, og ingen av dem var AA. Fra disse resultatene, vi trodde vår sammenligning mellom magekreftpasienter og ikke-mage kreftpasienter var riktig sammenligning for å analysere sammenhengen risikoen for magekreft og SEPS1 polymorfisme annet enn foreningen av H. pylori
.
Kreftfremkallende vei for intestinal type magekreft innebærer hovedsakelig H. pylori
infeksjon. Infeksjonen forårsaker betennelse og vev gjenfødelse, og disse prosessene føre til avvik fra normal sti av mage differensiering til forstadier stater [4, 22]. Det har vært antydet at SEPS1 polymorfisme kan være involvert i veien fra kronisk mage betennelse til kreftutvikling. Men det er svært sjelden i den japanske befolkningen AA genotype, og dermed sikre konklusjoner om genotype-fenotype korrelasjoner av homozygot bærere av dette SEPS1 promoter polymorfisme kan bare trekkes fra større studier med flere sykehus sentre.
Blant menn, de SEPS1 -105A allel bærere hadde økt oddsen for magekreft sammenlignet med de med GG genotype. Det er en rapport som viser kjønnsspesifikke sammenslutninger av den SEPS1 polymorfisme med koronar hjertesykdom [11]. Forfatterne av studien fant forholdet mellom en polymorfisme i en annen region av SEPS1 genet og koronar hjertesykdom risiko hos kvinner. De mistenkte at de kjønnsspesifikke assosiasjoner med SEPS1 SNP var på grunn av forskjeller i sykdoms etiologi eller i hormonelle miljøet for menn og kvinner [11]. I epidemiologiske studier har kjønn også vært knyttet til magekreft [23, 24]. Disse epidemiologiske funnene samsvarer med kjønnsspesifikk sammenheng mellom -105G > En polymorfisme og magekreft
Basert på rapporter om konsekvensene av svekket SEPS1 genekspresjon og i SEPS1 -105G >. En polymorfisme være funksjonelt involvert i betennelses responser [9], vi ytterligere vurderes score gastritt i den ikke-kreft områder av antrum i H. pylori positive pasienter. Men vi fant ikke signifikante forskjeller mellom SEPS1 -105GG homozygote og -105A allel bærere (data ikke vist). Det er mulig at antallet tilfeller for denne analysen var forholdsvis lav. Også denne undersøkelsen var ikke en direkte sammenligning av inflammatoriske cytokin-nivåer ved genotyper av denne polymorfisme som er blitt rapportert i litteraturen [9]. Derfor eksakte rolle selenoproteins i magekreftutvikling og betennelse er ennå ikke bestemt. Tidligere rapporter har funnet assosiasjoner mellom cytokiner og magekreft [15, 25]. I fremtidige studier, vil analysen av disse inflammatoriske cytokiner i magekreft, være nyttig for å forstå mekanismene for karsinogenese i magen
Konklusjon
Som konklusjon, som bærer en A-allel på SEPS1 -105G >. A-polymorfismen er en risikofaktor for tarmtypen av magekreft og magekreft plassert i den midtre tredjedel av magen i en japansk populasjon. A-allel kan bidra til magekreft ved å påvirke den inflammatoriske respons på H. pylori
infeksjon i magen. Videre studier i større kohorter av magekreft kan være nødvendig å undersøke den faktiske rollen SEPS1 og de viktige implikasjoner av genetiske endringer av selenoproteins i kroniske betennelsesreaksjoner og kreftutvikling i magen.
Erklæringer
Takk
Vi takke alle medisinsk personell ved endoskopi enhet i Fujita Health universitetssykehus for å ta prøver, og vi takker Ms. Y. Kimura for henne vitenskapelig skriving.
Dette arbeidet ble støttet delvis av en Grant-in-Aid for det 21. århundre Center of Excellence Program for Fujita Health University fra departementet for utdanning, kultur, sport, vitenskap og teknologi i Japan.
konkurrerende interesser
forfatterne hevder at de ikke har noen konkurrerende interesser.

• Bruk av Weibull modell for overlevelsen av pasienter med magekreft
• Sameksistens av gastrointestinal stromal tumor og inflammatorisk myofibroblastic svulst i magen presentere som en kollisjon svulst: første tilfellet rapporten og litteratur review