Ploche ONE: Vplyv Dlhšie Kyselina acetylsalicylová Doplnenie indukované gastritídou na Neurochemistry sympatického neurónov Dodávky Prepyloric oblasti prasačieho Stomach

abstraktné

Tento experiment bol navrhnutý tak, aby určiť lokalizáciu a neurochemický fenotypizáciu sympatická neuróny zásobujúce prepyloric oblasť bravčového žalúdka vo fyziologickom stave, tak počas kyselinou acetylsalicylovou (ASA) indukovanej gastritídy. Aby bolo možné lokalizovať sympatický perikarya žalúdkov ako u kontrolných a liečených kyselinou acetylsalicylovou (ASA), zvieratám podali neurónov retrográdna sledovacieho Fast Blue (FB). Sedem dní po injekcii FB, bola zvieratá rozdelená do ovládacieho prvku a ASA suplementácia skupiny. Skupina ASA dostal 100 mg /kg telesnej hmotnosti ASA perorálne počas 21 dní. Na 28 ^{th deň všetky ošípané zabité s postupným predávkovaním anestetika. Potom boli spracované štrnásť mikrometrov hrúbky kryostatové profily pre bežné dvojité označovanie imonufluoreskujúca za použitia primárneho antiséra by smerovali do tyrosinhydroxylázy (TH), dopamín β-hydroxylázy (DpH), neuropeptid Y (NPY), Galanina (GAL), neurónové oxid dusnatý Synthase (nNOS), leu 5-enkefalíny (Lenka), kokaínom a amfetamínov regulovaný transkript peptid (CART), kalcitonín peptid gene-related (CGRP), substancia P (SP) a vazoaktívnych intestinálnu peptid (VIP). Výsledky získané v tejto štúdii ukazujú, že údaje Postganglionic sympatická nervové vlákna dodávajú prepyloric oblasť prasačieho žalúdka pochádzajú z mezenterických ganglion komplexu celiakov lebečnej (CCMG). U kontrolných zvierat sa FB-značené neuróny vyjadrený TH (94,85 ± 1,01%), DpH (97,10 ± 0,97%), NPY (46,88 ± 2,53%) a GAL (8,40 ± 0,53%). V skupine ASA, TH- a DβH- pozitívne nervové bunky boli znížené (85.78 ± 2,65% a 88.82 ± 1,63% v uvedenom poradí). Okrem toho, ASA- indukované gastritída viedlo k zvýšenej expresiu NPY (76,59 ± 3,02%) a Gal (26,45 ± 2,75%), ako aj novo-syntézu nNOS (6,13 ± 1,11%) a Lenk (4,77 ± 0,42%) v vysledovať CCMG neuróny. Navyše sieť CART-, CGRP-, SP, VIP-, LENK-, nNOS- imunoreaktívnych (IR) nervové vlákna obklopujúce FB-pozitívnych perikarya boli pozorované u oboch neporušené a ASA ošetrených zvierat. Výsledky tejto štúdie ukazujú zapojenie týchto neuropeptidov vo vývoji alebo pravdepodobne neutralizácii žalúdočnej zápalu}

Citácia :. Palus K, J Całka (2015) Vplyv predĺženým Kyselina acetylsalicylová Doplnenie indukované gastritídou na Neurochemistry z sympatického Neuróny dodávať Prepyloric oblasti prasačieho žalúdka. PLoS ONE 10 (11): e0143661. doi: 10,1371 /journal.pone.0143661

Strih: Michael Bader, Max-Delbrück Centrum pre molekulárnej medicíny (MDC), Nemecko |

prijatá: 16. augusta 2015; Prijaté: 06.11.2015; Publikované: 25. novembra 2015

Copyright: © 2015 Palus, Całka. Toto je článok o otvorenej distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Data Dostupnosť: Všetky relevantné údaje sú v novinách

Financovanie :. publikácia podporený štátnym výborom poľskom pre vedecký výskum číslo 1890 /B /P01 /2010/39, University of Warmia a Mazury v Olsztyn (štatutárne výskum) udeliť Bez 15.610. 003-300 a know (Leading Centre National Research) Vedecké konzorcium "zdravé zviera - bezpečné potraviny", rozhodnutie ministerstva vedy a vysokého školstva No. 05-1 /KNOW2 /2015

protichodných záujmov: autori. deklarovali, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú.

Úvod

v posledných tridsiatich rokoch ukázali stále rýchlejší pokrok v štúdiu inervácie gastrointestinálneho traktu. Všeobecne platí, že žalúdok a črevá sú innervated ako neuróny nájdených v intramurální gangliá a patrí teda do enterickú nervový systém (ENS) [1, 2], ako aj vonkajších bunkových tiel pochádzajúcich z sympatické, parasympatické a senzorické ganglií [3- 5]. Nedávne výskumy ukázali, že ganglií sympatika nie sú len centrami nervovej integráciu, ale aj získaním dôležitých vlastností podľa svojich neurónov. Okrem iného zahŕňajú priblíženie štátnej impulzov, projekcia viscerálnych impulzov na pre- a post-synaptických úrovni, prístup k /s prihliadnutím na centrálnej vlákna viscerálne ochrany a kardiostimulátora aktivity [6, 7]. Avšak, sympatické neuróny, ktoré dodávajú zažívacieho traktu nemajú priamy vplyv na jeho funkciách, ale uplatňujú svoje účinky cez ENS [8, 9], alebo zovrieť tepny, ktoré zásobujú tráviaci orgán [10]. Okrem toho je funkcia žalúdka je sprostredkované a modulovaná množstvom neurónových vysielačov a neuropeptidov, ktoré hrajú úlohu v regulácii pohyblivosti, sekrécie kyseliny, uvoľňovanie hormónov, miestne prietoku krvi a slizničnej obranné mechanizmy [3].

k dispozícii je veľké množstvo publikovaných štúdií, ktoré popisujú sympatickú inervácii v žalúdku, vychádza predovšetkým z malých laboratórnych zvierat, ako sú krysy [10-12], myší [13, 14], morčaťa [15, 16], [17] králika alebo domáce zvieratá, ako je napríklad pes [7] a mačky [18, 19]. Autori uvádzajú, že gangliá prevertebral napr. celiakia gangliových predstavujú hlavný zdroj Postganglionic sympatické inervácie brušných orgánov. Zatiaľ čo iba jednotlivé perikarya boli nájdené v paravertebrálne gangliá napr. ganglií sympatika reťazca [16, 20]. Až doteraz, relatívne málo je známe o inervácie žalúdka v domácich ošípaných, ktoré sa veľmi podobajú, že u ľudí s ohľadom na anatomické a fyziologické charakteristiky [21, 22]. Predchádzajúce štúdie v tejto oblasti popisujú iba vonkajšia inervácie tenkého a hrubého čreva [4, 20] alebo sa zamerať na enterickej nervový systém [23, 24].

autonómny nervový systém sa vyznačuje vysokou plasticitou v reakcii na rôznych patologických podnetov a schopnosť prispôsobiť sa meniacim sa podmienkam životného prostredia [25, 26]. Táto úprava spočíva v zmene v chemickom fenotyp neurónov zvýšenou expresiou niektorých neurotransmiterov a zníženie ďalších alebo aktivácia expresie skôr neaktívnych génov [26, 27]. V posledných rokoch došlo k rastúce množstvo literatúry popisujúci zmenu chemickej kódovanie sympatických neurónov, ktoré dodávajú do gastrointestinálneho traktu počas ileitis [20], proliferatívnej enteropatie [28], kolitída [4] a axotomii [29 až 31]. Navyše, niektorí autori naznačujú, že sympatické neuróny nielen zmeniť svoju chemickú charakteristiku, ale aj vykazujú schopnosť regenerácie [32]. Je zaujímavé, že niektorí autori naznačujú, že sympatický nervový systém hrá úlohu ako modulátor gastrointestinálne zápal, pretože sympatické neuróny dodávať lymfatického tkaniva. Okrem toho, prítomnosť receptorov pre sympatických neurotransmiterov v imunitných bunkách boli potvrdené [33].

acetylsalicylová kyselina, známa ako aspirín (ASA), je jedným z najčastejšie používa nesteroidné protizápalové lieky (NSAID) po celom svete a je zvlášť cenený pre svoje liečebné vlastnosti. Výhody širokých liečebné možnosti, ako je prevencia kardiovaskulárnych chorôb, liečbu symptómov rôznych zápalových stavov, protinádorové aktivity, alebo na liečbu bolesti sú známe už po mnoho rokov [34]. Aspirín zabraňuje syntézu prostaglandínov inhibíciou enzýmu cyklooxygenázy (COX) prostredníctvom ireverzibilné acetyláciou hydroxylovej skupiny 1, zvyšok serínu [35, 36]. COX nazývaný tiež ako prostaglandín endoperoxidase syntázy je viazaný na membránu hemoproteínov a glykoproteín enzým, ktorý katalyzuje premenu bunkových membránových fosfolipidov, ktoré sú zapojené do syntézy prostanoidov zahŕňajúce: prostaglandínu (PG), prostacyklínu (PGI) a tromboxány (TXA) a existuje ako 3 izoformy (COX-1, -2 a -3) [34, 37]. Eikosanoidy odvodené z reakcie katalyzovanej COX-1, sa podieľajú na zhlukovanie krvných doštičiek, ochrana žalúdočnej sliznice, a mnoho ďalších fyziologických procesov, zatiaľ čo tie, ktoré vznikajú za účasti COX-2 sú zapojené iba v rozvoji zápalovej reakcie. COX-3 je post-transkripčný modifikácie COX-1, vyskytujúce sa v centrálnom nervovom systéme [38].

Aspirín je neselektívny NSAID a inhibuje enzymatickú aktivitu COX-1 niekoľko stokrát efektívne, v porovnaní s COX-2 [38, 39]. V skutočnosti výsledkom jeho činnosti v oboch prospešných (antipyretikum a protizápalové) a toxické (gastrointestinálne zranenie) účinkov [40]. Dokonca aj malá dávka aspirínu indukuje povrchné poranenia v žalúdku epitelu a vedie k abnormálnemu iónového toku so zvýšenou H ^{+ zadné difúzne. Okrem toho inhibícia COX-1, čo vedie k nedostatku prostaglandínov (PGS) v žalúdočnej a črevnej sliznice, je prijatý ako hlavný mechanizmus poškodenie sliznice, ktoré zahŕňajú krvácanie, erózie a vredy [41]. Tieto škodí vyskytujú najčastejšie v ľudskej dutine a prepyloric oblasti, hoci oni môžu tiež byť videný v proximálnej časti duodena [34]. Okrem toho, znížená hladina prostaglandínu E2 (PGE2), vystavuje sliznice na škody spôsobené kyselinou chlorovodíkovou a žlče a znižuje schopnosť regenerácie slizničných buniek znížením uvoľňovania hlienu, inhibíciu povrchovo aktívnych látok a fosfolipidov syntézy, zníženie sekrécie HCO _{3 a poruchy krvného obehu v mikrocirkulácie [40, 42]. V súčasnej dobe, vplyv indukovaného aspirínom žalúdka na adaptívne procesy a neurochemické vlastností sympatických neurónov, ktoré dodávajú žalúdok je trochu čiastkový}}

Preto sa tento experiment bol navrhnutý tak, aby stanovenie :. 1), lokalizáciu a distribúciu sympatických neurónov dodávajúcich prepyloric oblasť žalúdka domáce prasa; 2) neurochemický fenotyp dohľadať perykarya vo fyziologickom stave; 3) prípadné zmeny v neurochemický kódovaní dohľadať neurónov počas gastritídy vyvolanej dlhodobým suplementácia kyselinou acetylsalicylovou.

materiáloch a metódach

Ethics Prehlásenie

Experimentálny postup vrátane eutanázii zvieraťa bol schválený miestne etické komisie pre pokusy na zvieratách na University of Mazurského nad Mazury v Olsztyn (povolenie na Numbers 05/2010). Všetky operácie bola vykonaná pod sodného tiopentalom, a boli vykonané všetko úsilie, aby sa minimalizovalo utrpenie zvierat.

Zvieratá a chirurgické zákroky

Štúdia bola vykonaná na desiatich mladistvých prasníc na veľkú bielu poľskom plemeno, asi 8 týždňov a váži ca. 20 kg. Zvieratá boli chované za bežných svetelných podmienok v prostredí s regulovanou teplotou. Oni boli kŕmené komerčné zmesi obilia a vody z vodovodu ad libitum
. Všetky zvieratá boli preanesthetized s azaperónu (Stresnil, Jansen Pharmaceutica NV, Belgicko, 4 mg /kg telesnej hmotnosti, nie) 15 min pred aplikáciou hlavného anestetiká, thiopental sodný (Thiopental, Sandoz, Kundl, Rakúsko, Rakúsko; 10 mg /kg telesnej hmotnosti, intravenózne). Aby bolo možné lokalizovať sympatického bunkovej skupiny, ošípané boli podrobené strednej laparotómia a dostal injekcie fluorescenčného indikátora retrográdna neurónové Fast Blue (FB, EMS-Chemie, GmbH, Nemecko) do tvaru diamantu časti (cca 4 cm x 4 cm) v žalúdku prednej prepyloric múru v celkovom objeme 50 ul 5% roztoku (1 ul na 1 injekcia). Za účelom minimalizácie úniku indikátora do okolitých tkanív, ihla injekčnej striekačky Hamilton bol ponechaný na mieste po dobu 20 sekúnd po každej injekcii, a potom pre injekciu bol následne opláchnutý izotonickým fyziologickým roztokom a jemne utrieť gázou. Po operácii injekciách antibiotiká (Betamox L.A., spoločnosť Scanvet, Poľsku, 15 mg /kg brutto váhy, i.m.) a analgetické lieky (meloxicam-Metacam, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Nemecko, 0,4 mg /kg brutto váhy, i.m.) boli aplikované. S cieľom minimalizovať bolesť po chirurgickom zákroku na meloxikam (Metacam, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Nemecko, 0,4 mg /kg telesnej hmotnosti, i.m.) injekcie boli podávané raz denne. Zdravotný stav zvierat bola monitorovaná veterinárnym lekárom aspoň 4 čas deň

Potom, ošípané boli náhodne zaradení do jednej z dvoch experimentálnych skupín :. Ovládačmi (C, n = 5) a ASA ( n = 5). Zvieratá tvoria skupinu ASA, od siedmeho dňa po injekcii FB, dostali Kyselina acetylsalicylová perorálne (aspirín, BAYER; 100 mg /kg brutto váhy), 1 hodinu pred kŕmením. Gastroskopicky vyšetrenie bolo vykonané na vylúčenie lézií v žalúdočnej sliznici u zvierat zo skupiny ASA v prvý deň a potvrdiť gastritídu spôsobenú ASA zaobchádzanie v posledný deň aspirínu suplementácia (pomocou video-endoskop Olympus GIF 145 s pracovnou dĺžkou 1030 mm a priemer 9,8 mm).

Po 4-týždňovej doby prežitia (21 ^{st deň liečby ASA), a to ako kontrola a ASA ošípané boli hlboko reanaesthetized a usmrtí predávkovaním tiopentalom sodným. Potom boli transkardiálně perfundovaná 4% paraformaldehydom pufrovaným (pH 7,4). Gastritída u zvierat zo skupiny ASA bola potvrdená histopatologické vyšetrenie fragmentov prepyloric žalúdočnej steny zhromažďujú po perfúziu (za použitia rutinných metód histopatologické). Po perfúzii, boli odobraté tieto tkanivá: mesenterickým gangliových komplex celiakov lebečnej (CCMG) (tiež známy ako celiakia-superior mezenterických gangliá komplexu (CSMG)); hrudnej, driekovej a sakrálne súcitný reťaz ganglií (SChG), lebečnej a stredné cervikálny gangliá, nadobličiek gangliá, malé ganglia z intermesenteric a obličiek plexuses, chvostové mezenterických ganglií (CaMg). Odobraté tkaniva boli po fixované ponorením v rovnakom fixačnom po dobu 20 minút, opláchnutá vo fosfátovom pufri (pH 7,4) počas troch dní a nakoniec boli skladované v 30% pufrovanom roztoku sacharózy, až sa klesla na dno nádoby pre ďalšie spracovanie .}

Imunohistochémia a štatistiky

Štrnásť mikrometrov hrubé kryostatové úseky tkanivových vzoriek boli analyzované pod fluorescenčným mikroskopom (Olympus BX 51, Olympus, Poľsko), ktorý je vybavený filtrom set vhodný pre pozorovanie FB, lokalizovať a počítať sympatické neuróny, ktoré obsahujú sledovacie ústrojenstva. Na určenie relatívny počet FB-pozitívnych perikarya, neuróny sa počítali v každej štvrtej časti. boli považované len neuróny sa na dobre viditeľnom jadra. Potom bolo spracované vybraných sekcií FB-značenými perikarya pre rutinné dvojité označovanie imunofluorescenčné technikou, za použitia primárneho antiséra v rôznych druhov a druhovo špecifické sekundárnej protilátky (tabuľka 1). Stručne povedané, po vysušení na vzduchu pri teplote miestnosti po dobu 45 minút. a rastúce v 0,1 M fyziologického roztoku pufrovaného fosfátom (PBS, pH 7,4;. 3 x 10 min), boli rezy blokované zmesou obsahujúcou 10% konského séra a 0,1% hovädzieho sérového albumínu v 0,1 M PBS, 1% Triton X- 100, 0,05% Thimerosal a 0,01% azidu sodného po dobu 1 hodiny pri teplote miestnosti a k ​​zníženiu nešpecifické farbenia pozadia. Po opláchnutí v PBS (3 x 10 min.), Boli rezy inkubované cez noc pri teplote miestnosti s primárnym antiséra proti tyrosinhydroxylázy (TH), dopamín p-hydroxylázy (DpH), neuropeptid Y (NPY), galanínu (adries), neurónové syntázy oxidu dusnatého (nNOS), Leu 5-enkefalíny (Lenka), kokaínom a amfetamínov regulovaný transkript peptid (CART), kalcitonín peptid gene-related (CGRP), substancia P (SP) a vazoaktívnych intestinálnu peptid (VIP) ( tabuľka 1). Po následnej opláchnutí v PBS (3 x 10 min.), Boli rezy inkubované so zmesou sekundárnych protilátok (tabuľka 1) po dobu 1 hodiny pri teplote miestnosti, na vizualizáciu primárnej protilátky použité v tejto štúdii. Po farbení boli rezy osadené uhličitanu pufra s glycerolom (pH 8,6) a krycie prolapsom.

štandardných ovládacích prvkov, tj preabsorpci pre neuropeptid antiséra s príslušným antigénom (20 ug /ml antigénu zriedeného antiséra, všetky antigény zakúpené od Peninsula, Sigma alebo ABD Serotec) a opomenutia, ako aj nahradenie všetkého primárneho antiséra non-imunitného séra bola vykonávaná pre testovanie imunohistochemické značenie. Nebolo fluorescencie pozorovalo pri všetkých týchto kontrolných fluorescencie, čo potvrdzuje špecifickosť metodiky a protilátky.

Rezy potom boli skúmané pod mikroskopom Olympus BX51, vybavená filtrami vhodnými pre AlexaFluor 488, AlexaFluor 546, a fast blue, a obrazy boli zachytené pomocou digitálneho fotoaparátu pripojeného k počítaču, ktorý je vybavený Olympus Cell F obraz softvéru pre analýzu (Olympus, Tokyo, Japonsko). Rezy zafarbené za rovnaké kombinácie antigénov priradené kvantitatívny, boli oddelené aspoň 100 um, aby sa zamedzilo dvojitému analýzu neuronálne Somat. Počet KP-pozitívnych perikarya počítané pre každú kombináciu protilátok bola nad 200 neurónov na jedno zviera. Dáta z oboch skupín boli spojené, štatisticky analyzované za použitia programu Statistica (StatSoft 10 softvér Inc., Tulsa, OK, USA), a boli prezentované ako priemer ± štandardná chyba priemeru (SEM). Významné rozdiely boli hodnotené za použitia t-testu Studentov pre nezávislé vzorky (* P < 0,05 a ** P < 0,001). Okrem toho, pre semi-kvantitatívne vyhodnotenie hustoty nervových vlákien, ktoré sú imunoreaktívnych s každú látku študoval, bol použitý ľubovoľný stupnice, kde (-) - neprítomnosť vlákien; (+) - Jednotlivé vlákna; (++) - Zriedkavé nervové vlákna; (+++) - Líči veľmi husté nervových vlákien

Výsledky

Fast Blue sledovanie a imunohistochémia

Rýchle Blue-bunková tela obsahujúce nervová boli nájdené výhradne v CCMG. komplex, zatiaľ čo zvyšok pre- a paravertebrálne sympatických ganglií boli zbavené FB značených buniek. V priemere komplex CCMG obsahoval 1615 ± 20,73 FB + neurónov v kontrole a 1644 ± 38,03 neurónov v skupine ASA, resp. Väčšina značených neurónov sa nachádza v oblasti celiakov pólov komplexu CCMG, iba jedno označené Somat v inej časti CCMG boli identifikované. Bunková tela sú oválne, okrúhle alebo multipolárnom s krátkymi dendritov a centrálne umiestnený jadro a meria 20-45 um v priemere. V niektorých prípadoch boli pozorované jedinou dlhú axon podobný proces sledovať od bunky.

v kontrolných zvierat double-značenie imunohistochémia bolo zistené, že veľká väčšina + buniek FB boli imunoreaktívnych k TH (94,85 ± 1,01%) a DpH (97,10 ± 0,97%). Navyše, všetky TH- pozitívne bunková tela boli imunoreaktívnych s DpH, čo potvrdili silno katecholaminergných charakter (obr 1A, 1B, 1C a 1D). Aplikácia protilátok proti neuropeptid Y je znázornené, že NPY immunolabeling bol nájdený v 46,88 ± 2,53% z FB označenej perikarya (obr 1E, 1F, 1G a 1H). Okrem toho ďalšie populácie FB pozitívnych neurónov uzavretého GAL na 8,40 ± 0,53% (obr 1I, 1J, 1K a 1L). Okrem toho GAL-pozitívne nervové vlákna (+) mimochodom tvoril formácie obkľučovať bunkovej skupiny Gal- IR. Na druhú stranu, nikto z FB + neuróny obsahovali nNOS, Lenk, vozík, SP a VIP. Avšak, všetky tieto neurotransmitery boli prítomné v nervových vlákien obklopujúcich dohľadať perikarya. Veľký počet kŕčových CART pozitívnych nervových vlákien (+++) tesne obklopovala FB-značené neuróny a tvoril koši štruktúry podobné okolo nich (obr 2A, 2B, 2C a 2D). Mikroskopická analýza úsekov inkubovaných s anti-CGRP protilátok odhalil hustú sieť s CGRP pozitívnych vlákien (+++) často lokalizovaných v blízkosti FB-pozitívnych buniek (obr 2E, 2F, 2G a 2H). Iba jediný kŕčové alebo obyčajný nNOS-IR (+) (obr 1M, 1N, 1O a 1P), Lenka-IR (++) (obr 1 R, 1 S, 1T a 1U), SP-IR (+) (obr 2I, 2J, 2K a 2L) a VIP-IR (+) (obr 2M, 2N, 2P 2O a) nervové vlákna, niekedy tvoriť malé zväzky, boli dispergované v ganglion medzi vysledovať bunkových tiel (tabuľka 2).

gastritída vyvolaná dlhodobým suplementácia kyselinou acetylsalicylovou zmenil vzory kódovanie mnohých FB + buniek. Populácia TH-pozitívnych a DpH-pozitívnych buniek bol znížený (tabuľka 3). Mikroskopické vyšetrenie úsekov ukázala, že 85,78 ± 2,65% bolo TH-pozitívne, zatiaľ čo 88,82 ± 1,63% z FB dohľadať neurónov vyjadrený DpH imunoreaktivitu (obr 3A, 3B, 3C a 3D). Okrem toho up-reguláciu NPY-IR neurónov 76.59 ± 3,02% štatisticky významné tiež (obr 3E, 3F, 3G a 3 H). Najpozoruhodnejšie rozdiel v chemickej kódovaní dohľadať sympatických neurónov medzi kontrolou a ASA liečených ošípaných súčasťou veľmi zvýšený počet GAL (až 26,45 ± 2,75%) (obr 3I, 3J, 3K a 3L). Tieto FB pozitívne bunky obsahujúce GAL boli dodávané radom, najmä kŕčových GAL-IR nervových vlákien. Okrem toho, bunky obsahujúce nNOS v 6.13 ± 1,11% (obr 3M, 3N, 3O a 3P) a Lenk na 4,77 ± 0,42% (obr 3R, 3S, 3T a 3U), sa pozorovali iba v ASA- liečených zvierat. Podobne ako s kontrolnými zvieratami, vysledovať perikarya nebolo imunoreaktívnych s CART, CGRP, SP a VIP, ale nervových vlákien, ktoré obsahujú tieto neurotransmitery boli pozorované v tesnej blízkosti FB označené Somat a podobali pozorovaným v kontrolnej skupine.

gastroskopicky a histopatologické vyšetrenie

gastroskopicky skúška vykonaná v prvý deň pokusu vylúčené lézií v žalúdočnej sliznici u zvierat, ako kontrolnej skupiny a skupiny ASA. Avšak, ten istý test v posledný deň potvrdila gastritídy spôsobenej suplementácia kyselinou acetylsalicylovou. Makroskopické zmeny, ako sú: hyperémia, petechie, povrchové erózie a vredy boli pozorované malé nielen v žalúdku, ale aj dvanástnika sliznice. Histopatologické vyhodnotenie fragmentov steny žalúdka prepyloric oblasti popísané mikroskopické zmeny, ako sú :. Prekrvenie sliznice, hlboké erózie, foliculosis, proliferáciu neutrofilov a eozinofilná infiltráciu zasahujúcich do submukóze (obr 4A, 4B, 4C a 4D)

Diskusia

Toto je prvá správa dokazujúca, presné lokalizácia, morfológia a chemického kódovanie sympatických neurónov vyčnievajúcich do prepyloric oblasti prasačieho žalúdka. Hlavným zdrojom postgangliových nervových vlákien, ktoré dodávajú táto oblasť pochádza z komplexu CCMG, pričom pred a paravertebrálne sympatická gangliá boli zbavené z FB značených buniek. Tieto výsledky sú v súlade s údajmi získanými z krysích [3, 12], morča [15, 16] a psie [7] a poskytol ďalšie dôkazy o založení prevažujúci význam CCMG neurónov v žalúdku inervácie. Nehľadiac na drobné vstup do sympatickej inervácie žalúdka u potkanov a morčiat prišiel z hrudnej ganglia reťazca. Neuróny zásobujúce steny žalúdka u potkanov boli umiestnené od T _{1 až L 3 v pravom reťazci a od T 2 na L 3 v ľavej respektíve [10], zatiaľ čo bunkových tiel innervating krysy žalúdočnej sliznice boli nájdené od T 6 až T 9 súcitný reťaz ganglií [3]. V morča neuróny nachádzajú vo všetkých hrudnej ganglia reťazca boli vyčnievajúce do žalúdka [16]. Na rozdiel od toho tento výskum ukazuje, že tieto gangliá nie sú zapojené do inervácie prepyloric oblasti prasacieho žalúdka, s najväčšou pravdepodobnosťou inervujú inej časti žalúdka, čo vyžaduje ďalší výskum. Navyše tieto zistenia dobre korelujú s tými štúdie postulovať charakteristické topografické usporiadanie neurónov, s ohľadom na ich cieľové tkanivá, v prasacej CCMG komplexe [43].}

Táto štúdia odhalila, že veľká väčšina FB pozitívnych neurónov v kontrolnej skupine mali silne katecholaminergných charakter, ako sa zistilo súčasným TH- a DβH- imunoreaktivity. Tieto výsledky korelujú so štúdiami opisujúcimi adrenergné povahe väčšiny CCMG neurónov u potkana, morča, psa a domáce prasa [10, 16, 44, 45]. Iba malý počet vysledovať CCMG neurónov postráda týchto enzýmov, čo môže znamenať, že sa zásoby non-adrenergným, prípadne cholinergných neurónov, čo je v súlade s predchádzajúcimi poznatkami o histochemie z CCMG v oboch Guiney a domácich ošípaných [45, 46]. Navyše, tieto údaje naznačujú, že značná časť FB značené perikarya vyjadril NPY imunoreaktivitu. Literárne údaje naznačujú, že NPY je považovaný za hlavnú peptidergic vysielač v oboch: sympatického a parasympatickej nervovej sústavy [47]. A to, ako je NPY neurónov a hormonálne regulátor hrajú dôležitú úlohu v cicavčím fyziológie zažívacieho traktu, vrátane inhibícia črevnej motility, žalúdočného vyprázdňovania, sekrécie kyseliny a pankreatické exokrinné sekrécie. Okrem toho, tento peptid ovplyvňuje krvné cievy a podieľa sa na regulácii črevnej prietoku krvi [48, 49]. Na druhej strane, NPY sa pozoroval aj u ošípaných CCMG neurónov vyčnievajúcich do ilea [50]. Ďalej, táto štúdia ukázala, že Gal- IR neuróny predstavujú časť z retrográdne označených buniek. Je dobre koreluje s tým, že Galanina je biologicky aktívny neuropeptid, ktorý má širokú distribúciu v centrálneho a periférneho nervového systému, ako aj periférnych tkanivách mnohých druhov [51-53]. Na úrovni gastrointestinálneho traktu, Galanina inhibuje sekréciu žalúdočnej kyseliny, uvoľňovanie početných pankreatických peptidov, reguluje slizničnej epiteliálne bunkovú absorpciu a moduluje motility gastrointestinálneho traktu [54]. Galanina uplatňuje svoj fyziologickú úlohu tým, že pôsobí na jeden z troch rôznych podtypov receptorov spriahnutých s G proteínom (GAL-R1, GAL-R2 a R3-GAL), rozšírených v mnohých tkanivách a orgánoch [52].

Aj keď nikto z FB pozitívnych neurónov obsahovala nNOS, Lenky, vozík, CGRP, SP a VIP, všetky tieto neurotransmitery boli prítomné vo nervových vlákien obklopujúcich dohľadať perikarya. Početné kŕčové CART-pozitívnych nervových vlákien tesne obklopovala FB-pozitívnych neurónov a tvoril basket- ako štruktúr okolo nich. Kokaínom a amfetamínom regulovaný transkript (CART) peptid objavený v roku 1981 v hypotalame oviec bola popísaná v rôznych oblastiach gastrointestinálneho traktu mnohých druhov cicavcov, vrátane človeka [2, 55, 56]. Napriek tomu, že úloha tohto peptidu vo funkcii čreva nie je celkom usadený, niektorí autori naznačujú, že vozík je zapojený do regulácie črevnej motility, inhibícia kŕmenie, zníženie sekrécie žalúdočnej kyseliny, exacerbácia motility hrubého čreva [57]. Až doteraz, zmeny v počte CART-pozitívnych nervových štruktúr v ENS za rôznych patologických činiteľov boli popísané, čo by sa mohlo zdať zapojenie CART v prežitie a neuroprotekce [58, 59]. CGRP a SP sú považované za pronociceptive zmyslové neuropeptidy [60]. Počet a distribúcia SP-IR a CGRP-IR vlákien sú veľmi podobné tým, ktoré už boli popísané lakomý et al. [45] pre vlákna okolité TH-pozitívne neuróny v prasacím CCMG. Predstavujú jeden z prameňov viscerofugal výstupkov z črevnej steny, alebo pochádzajú z DRG aferentných neurónov, pretože tieto špecificky kódované neuróny boli popísané v gastrorezistentnými ganglií [55, 61], rovnako ako sú široko distribuované v senzorických neurónov [5]. Navyše boli pozorované jednotlivé kŕčové VIP-IR nervových vlákien rozptýlených v ganglion medzi vysledovať bunkových tiel. VIP sa pravdepodobne podieľa na inhibičným reflexné oblúk črevnú ústrojenstva a vyskytuje sa v gastrorezistentnými aferentné innervating CCMG [45]. A konečne, zdroj z nNOS-IR a IR-Lenkou vlákien znázornené v tejto štúdii by mohli byť preganglionic neuróny umiestnené v jadre intermediolateral bedrovej miechy alebo z DRG neurónov. Tesná blízkosť vlákien, opísaných v tejto štúdii vo vzťahu k retrográdne značené CCMG neuróny môžu uvádzať nepriamych účinkov tohto peptidu v sympatickej inervácie žalúdku. Avšak, je potrebné ešte objasniť otázka vplyvu týchto vlákien na sympatických neurónov, ktoré dodávajú prepyloric oblasť brucha.

Napriek tomu, že zápal žalúdočnej sliznice, spôsobené dlhodobým suplementácia kyselinu acetylsalicylovú, nemá žiadny vplyv na počet neurónov innervating skúmanej oblasti žalúdka, retrográdne označenú sympatické bunky vykazujú značnú plasticitu v ich neuropeptidy fenotypu. ASA indukované gastritídu viedla k významným zmenám v chemickom kódovaní vysledovať neurónov tým, že znižuje produkciu enzýmov v katecholamín syntézy trakte a up-reguláciu syntézy neuropeptidov zapojených do nervových obranné mechanizmy (NPY, dievča, MVO, Lenk). Tieto údaje sú v súlade s tým, že regeneračné sympatické neuróny dočasne down-regulujú expresiu niektorých neurotransmiterov, najmä TH [32] a začať produkciu neurotransmiterov zapojených do obrany a prežitie [31].

NPY sa objavuje ako regulátor zápalu, zapojený do autoimunity, astma, rakoviny a mnohých gastrointestinálne poruchy, ako je napríklad melabsorption, krátke čriev, zápalové ochorenie čriev a pankreatitída. NPY, ako protizápalová peptidu, sa podieľa na zápalovej odozve u prijímanie nezrelých dendritických buniek, a tým, že podporuje Th2 polarizácii [49]. NPY môže byť tiež zapojené do zápalovej reakcie prostredníctvom diferenciácie pomocných T buniek, monocytov mediátorov vydanie, NK bunkovej aktivácii [NK], a imunitných buniek prerozdeľovanie to potvrdzuje predchádzajúce správy o obojsmerné presluchu medzi nervového a imunitného systému v gastrointestinálnom trakte [62, 63, ]. Tieto zistenia sú podobné ako u predchádzajúcich štúdií, kde boli zvýšené počet NPY-pozitívnych sympatických neurónov v rôznych patologických stavov, vrátane proliferatívnej enteropatie a bravčovým kolitídy [4, 28]. Okrem toho, experiment u človeka je znázornené zvýšenie NPY- IR nervových zakončení v sliznici počas chronickej gastritídy spôsobenej Helicobacter pylori
[62]. To naznačuje, že NPY je dôležité neuroprotektívne faktor, ktorý hrá úlohu v prežitie a regenerácie poškodených neurónov v zápalu. Je zaujímavé, že NPY môže byť tiež vylučovaný niektorými imunocytov, čo môže naznačovať, že NPY je priamo zapojený do neurogénneho zápalu [64]. Avšak, presné funkcie NPY neurónov za dobu ASA-indukovanej gastritídy u ošípaných zostáva nevysvetlené a vyžaduje ďalší výskum.

Najnápadnejšie rozdiel v immuhistochemical fenotypu dohľadať neurónov bol veľmi zvýšený počet Gal- imunoreaktívnych buniek telesa v ASA- skupiny zvierat. Galanina je nesporne zaoberá reguláciu zápalových procesov. V skutočnosti, Galanina je považovaný ako regulátor pre-zápalových cytokínov, pretože podávanie galanínu zvýšil produkciu TNF-a, IL-1α a IL-8 v ľudských keratinocytov vo fyziologickom stave [65]. K dnešnému dňu sa zvyšuje v galaninového expresie v nervových štruktúr, obe funkcie autonómnej a enterickej nervový systém boli pozorované v priebehu chemicky indukovanej kolitídy [4, 51] a proliferatívnej enteropatie [28] u ošípaných, chronickej divertikulitídy u človeka [66] a enterickú Salmonella infekcie u myší [67]. Je zaujímavé, že Täler et al.

• Ploche ONE: klinicko Charakteristika a prežitie Výstupy z primárneho pečatný prsteň karcinómu v žalúdku: Retrospektívna analýza jedného centra Database
• Ploche ONE: konjugovaná kyselina linolová Doplnenie pod vysokým obsahom tukov moduluje Žalúdok Protein Expression a črevnej mikroflóry u dospelých myší