PLoS ONE: L'influenza della prolungata Acido acetilsalicilico supplementazione-indotta gastrite sulla neurochimica dei neuroni simpatico Fornitura Prepyloric Regione del suino Stomach

Estratto

Questo esperimento è stato progettato per stabilire la localizzazione e la fenotipizzazione neurochimica del simpatico neuroni fornitura zona prepyloric dello stomaco suina in uno stato fisiologico e durante acido acetilsalicilico (ASA) gastrite indotta. Al fine di localizzare il simpatico perikarya stomaco di entrambi controllo e acido acetilsalicilico (ASA) gruppo di animali trattati sono stati iniettati con neuronale tracciante retrogrado Fast Blue (FB). Sette giorni dopo l'iniezione FB, gli animali sono stati divisi in un controllo e un gruppo supplementazione ASA. Il gruppo ASA è stato dato a 100 mg /kg di b.w. ASA per via orale per 21 giorni. Il 28 ^{° giorno tutti i maiali sono stati sacrificati con graduale dose eccessiva di anestetico. Poi sezioni al criostato quattordici micrometri di spessore sono stati trattati per routine di immunofluorescenza a doppia etichettatura, utilizzando antisieri primaria diretta verso la tirosina idrossilasi (TH), dopamina β-idrossilasi (DβH), neuropeptide Y (NPY), galanin (GAL), l'ossido nitrico neuronale sintasi (nNOS), leu 5 encefalina (LENK), cocaina e anfetamine peptide regolamentato trascrizione (CART), calcitonina il peptide correlato al gene (CGRP), sostanza P (SP) e peptide intestinale vasoattivo (VIP). I dati ottenuti in questo studio indicano che postgangliari fibre nervose simpatiche forniscono un'area prepyloric dello stomaco suina provengono dal complesso mesenterico ganglio celiaco-cranica (CCMG). Negli animali di controllo, i neuroni FB-marcati espressi TH (94,85 ± 1,01%), DβH (97.10 ± 0,97%), NPY (46.88 ± 2,53%) e GAL (8,40 ± 0,53%). Nel gruppo ASA, le cellule nervose positive TH- e DβH- sono state ridotte (85.78 ± 2.65% e 88.82 ± 1.63%, rispettivamente). Inoltre, ASA gastrite indotta comportato aumentata espressione di NPY (76,59 ± 3,02%) e GAL (26,45 ± 2,75%), così come il novo sintesi di nNOS (6,13 ± 1,11%) e LENK (4,77 ± 0,42%) in neuroni CCMG tracciate. Inoltre, una rete di cart-, CGRP-, SP-, VIP-, LENK-, sono state osservate fibre nNOS- immunoreattivi (IR) dei nervi che circondano le perikarya FB-positivi sia negli animali intatti e ASA-trattati. I risultati di questo studio indicano il coinvolgimento di questi neuropeptidi in sviluppo o presumibilmente neutralizzazione di infiammazione gastrica}

Visto:. Palus K, Całka J (2015) L'influenza della prolungata Acido acetilsalicilico supplementazione-indotta gastrite sulla neurochimica del i neuroni simpatico Fornitura Prepyloric zona dello stomaco suina. PLoS ONE 10 (11): e0143661. doi: 10.1371 /journal.pone.0143661

Editor: Michael Bader, Max-Delbrück Center for Molecular Medicine (MDC), Germania |

Ricevuto: 16 agosto 2015; Accettato: 6 novembre 2015; Pubblicato: 25 novembre 2015

Copyright: © 2015 Palus, Całka. Questo è un articolo ad accesso libero distribuito sotto i termini della Creative Commons Attribution License, che permette l'uso senza restrizioni, la distribuzione e la riproduzione con qualsiasi mezzo, a condizione che l'autore originale e la fonte sono accreditati

disponibilità dei dati: Tutti i dati rilevanti sono all'interno della carta

Finanziamento:. pubblicazione sostenuta dal Comitato di Stato polacco per la ricerca scientifica numero ricerca 1890 /B /P01 /2010/39, l'Università di Warmia e Masuria in Olsztyn (ricerca statutaria) non rilasciano 15,610. 003-300 e sapere (Leading Centro nazionale delle Ricerche) scientifica Consorzio "animale sano - Safe Food", decisione del Ministero della Scienza e dell'istruzione superiore No. 05-1 /KNOW2 /2015

Competere interessi: gli autori. hanno dichiarato che non esistono interessi in gioco.

Introduzione

Gli ultimi trent'anni hanno dimostrato sempre più rapidi progressi negli studi di innervazione del tratto gastrointestinale. In generale, lo stomaco e l'intestino sono innervati sia dai neuroni trovati all'interno gangli intramurale e appartengono quindi al sistema nervoso enterico (ENS) [1, 2], nonché da corpi cellulari estrinseci originari gangli simpatici, parasimpatico e sensoriale [3- 5]. Recenti indagini hanno rivelato che gangli simpatici, non sono solo centri di integrazione nervoso, ma anche il possesso di importanti proprietà dai loro neuroni. Tra gli altri includono convergenza di impulsi centrali, proiezione di impulsi viscerali a livello pre e post-sinaptici, accedendo /consentendo le fibre centrali di protezione viscerale e pacemaker attività [6, 7]. Tuttavia, simpatico neuroni postgangliari che forniscono il tratto gastrointestinale non influiscono direttamente sulle sue funzioni, ma esercitano i loro effetti attraverso l'ENS [8, 9], o costringere le arterie che forniscono l'organo digestivo [10]. Inoltre, la funzione dello stomaco è mediata e modulata da un sacco di trasmettitori neuronali e neuropeptidi, che svolgono un ruolo nella regolazione della motilità, secrezione acida, il rilascio di ormoni, il flusso di sangue locale e meccanismi di difesa della mucosa [3].

Vi è un grande volume di studi pubblicati che descrivono innervazione simpatica dello stomaco, basato principalmente di piccoli animali da laboratorio, come ratto [10-12], mouse [13, 14], cavia [15, 16], coniglio [17] o gli animali domestici, come cani [7] e il gatto [18, 19]. Gli autori riferiscono che prevertebrale gangli ad es. celiaca gangli costituiscono la principale fonte di postgangliari innervazione simpatica dei visceri addominali. Mentre solo perikarya singoli sono stati trovati in paravertebrale gangli ad es. catena di gangli simpatici [16, 20]. Fino ad ora, relativamente poco si sa circa innervazione dello stomaco nel maiale domestico, che da vicino assomiglia a quella in umana in materia di caratteristiche anatomiche e fisiologiche [21, 22]. Precedenti studi nel campo descrivono solo l'innervazione estrinseca di intestino tenue e crasso [4, 20] o si concentrano sul sistema nervoso enterico [23, 24].

Il sistema nervoso autonomo è caratterizzato da elevata plasticità in risposta a vari stimoli patologici, e la capacità di adattarsi alle mutevoli condizioni ambientali [25, 26]. Questo adattamento comporta la modifica nel fenotipo chimica dei neuroni da una maggiore espressione di alcuni neurotrasmettitori e ridotto di altri o di attivazione di espressione dei geni precedentemente inattive [26, 27]. Negli ultimi anni, vi è stata una crescente quantità di letteratura che descrivono cambio della codifica chimica dei neuroni simpatici forniscono tratto gastrointestinale durante ileite [20], enteropatia proliferativa [28], la colite [4] e assotomia [29-31]. Inoltre, alcuni autori suggeriscono che i neuroni simpatici non solo cambiano la loro caratteristica chimica, ma mostrano anche la capacità di rigenerare [32]. È interessante notare che alcuni autori suggeriscono che il sistema nervoso simpatico gioca un ruolo come modulatore di infiammazione gastrointestinale, perché neuroni simpatici forniscono tessuti linfoidi. Inoltre, la presenza dei recettori per neurotrasmettitori simpatici in cellule immunitarie sono stati confermati [33].

Acido acetilsalicilico, noto come aspirina (ASA), è uno dei più comunemente usato non steroidei anti-infiammatori farmaci (FANS) in tutto il mondo ed è particolarmente apprezzato per le sue proprietà terapeutiche. I vantaggi delle soluzioni terapeutiche ampie, come la prevenzione delle malattie cardiovascolari, trattamento dei sintomi della varietà di condizioni infiammatorie, attività antitumorale, o dolore sono noti da molti anni [34]. L'aspirina impedisce la sintesi delle prostaglandine inibendo l'enzima cicloossigenasi (COX) mediante acetilazione irreversibile del gruppo ossidrile di 1 serina residui [35, 36]. COX anche chiamato come prostaglandina endoperoxidase sintasi è un emoproteina di membrana e l'enzima glicoproteico che catalizza la conversione di fosfolipidi di membrana cellulare, coinvolto nella sintesi dei prostanoidi comprendente: prostaglandine (PG), prostaciclina (PGI) e le trombossani (TXA) ed esiste come 3 isoforme (COX-1, -2 e -3) [34, 37]. Eicosanoidi, derivate da una reazione catalizzata da COX-1, sono coinvolti in aggregazione piastrinica, la protezione della mucosa gastrica, e molti altri processi fisiologici, mentre quelle formate con la partecipazione di COX-2 sono coinvolti solo nello sviluppo della risposta infiammatoria. COX-3 è una modificazione post-trascrizionale di COX-1, che si verificano nel sistema nervoso centrale [38].

aspirina è un FANS non selettivo e inibisce l'attività enzimatica di COX-1 diverse centinaia di volte più efficace, rispetto alla COX-2 [38, 39]. Infatti, i risultati di azione di entrambi i benefici effetti (antipiretico e antinfiammatorio) e tossiche (lesione gastrointestinale) [40]. Anche piccola dose di aspirina induce lesioni superficiali nell'epitelio gastrico e porta a flusso di ioni anormale con un aumento H ^{+ back diffusione. Inoltre, l'inibizione della COX-1, portando a deficit di prostaglandine (PG) in mucosa gastrica e intestinale, è accettato come il principale meccanismo di danno della mucosa che comprendono sanguinamento, erosioni e ulcere [41]. Questi danni si verificano più frequentemente in antro umana e la zona prepyloric, anche se può essere visto anche nella parte prossimale del duodeno [34]. Inoltre, diminuzione del livello di prostaglandina E2 (PGE2) espone la mucosa ai danni causati da acido cloridrico e bile, e riduce la capacità di rigenerazione delle cellule della mucosa diminuendo rilascio di muco, un'inibizione di tensioattivi e fosfolipidi sintesi, riduzione della secrezione di HCO _{3 e disturbi del flusso di sangue nel microcircolo [40, 42]. Attualmente, l'influenza di gastrite aspirina-indotta sui processi di adattamento e le proprietà neurochimiche di neuroni simpatici fornitura stomaco è piuttosto frammentaria}}

Pertanto, questo esperimento è stato progettato per stabilire:. 1) la localizzazione e la distribuzione dei neuroni simpatici fornitura prepyloric zona dello stomaco in maiale domestico; 2) il fenotipo neurochimico di perykarya tracciate in stato fisiologico; 3) eventuali modifiche di codifica neurochimico dei neuroni tracciate durante la gastrite indotte dalla supplementazione di acido acetilsalicilico prolungato.

Materiali e Metodi

Etica Dichiarazione

La procedura sperimentale tra cui l'eutanasia animale è stato approvato dalla locale Etico Commissione per gli esperimenti sugli animali presso l'Università di Warmia Masuria nad a Olsztyn (permesso Numbers 05/2010). Tutto l'intervento è stato eseguito in anestesia sodio tiopentale, e tutti gli sforzi possibili sono stati fatti per ridurre al minimo la sofferenza degli animali.

Animali e procedure chirurgiche

Lo studio è stato effettuato su dieci maiali giovanile femminile del Large White polacco razza, circa 8 settimane di vita e un peso di ca. 20 kg. Gli animali sono stati mantenuti in condizioni di illuminazione regolari in un ambiente a temperatura controllata. Essi sono stati alimentati dalla miscela di grano commerciale e l'acqua del rubinetto ad libitum
. Tutti gli animali sono stati preanesthetized con azaperone (Stresnil, Jansen Pharmaceutica NV, Belgio, 4 mg /kg di peso corporeo, im) 15 minuti prima l'applicazione dell'anestetico principale, tiopentale sodico (Thiopental, Sandoz, Kundl-Rakúsko, Austria; 10 mg /kg di peso corporeo, somministrato per via endovenosa). Al fine di localizzare i corpi cellulari simpatici, i maiali sono stati sottoposti a laparotomia mediana e iniezioni di fluorescenza tracciante neuronale retrogrado Fast Blue (FB, EMS-Chemie, GmbH, Germania) ha ricevuto nella parte a forma di diamante (circa 4 cm x 4 cm) della parete dello stomaco prepyloric anterior ad un volume totale di 50 ml di una soluzione al 5% (1 ml per 1 iniezione). Per ridurre al minimo la fuoriuscita del tracciante nei tessuti circostanti, l'ago della siringa Hamilton è stato lasciato in sede per 20s dopo ogni iniezione, e, successivamente, la zona di iniezione è stato successivamente lavato con soluzione salina isotonica e delicatamente pulito con garza. Dopo le iniezioni di chirurgia del antibiotico (Betamox L.A., ScanVet, Polonia, 15 mg /kg b.w., i.m.) e analgesici (Meloxicam-Metacam, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Germania, 0,4 mg /kg b.w., i.m.) sono stati applicati. Al fine di ridurre al minimo il dolore post-operatorio il meloxicam (Metacam, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Germania, 0,4 mg /kg b.w., i.m.) iniezioni sono state somministrati una volta al giorno. Lo stato di salute degli animali è stata monitorata dal veterinario almeno 4 volte al giorno

In seguito, i maiali sono stati assegnati in modo casuale a uno dei due gruppi sperimentali:. Di controllo (gruppo C, n = 5) e del gruppo ASA ( n = 5). Gli animali che costituiscono gruppo ASA, dal settimo giorno dopo l'iniezione FB, sono stati dati acido acetilsalicilico per via orale (aspirina, BAYER, 100 mg /kg b.w.), 1 ora prima della somministrazione. esame gastroscopic stato eseguito per escludere lesioni della mucosa gastrica negli animali del gruppo ASA nel primo giorno e per confermare la gastrite causata da ASA-trattamento nel ultimo giorno di supplementazione aspirina (utilizzando un video-endoscopio Olympus GIF 145 con lunghezza di lavoro 1030 mm e diametro 9,8 millimetri)
.

Dopo 4 settimane di tempo di sopravvivenza (21 ^{st giorno di trattamento ASA), sia il controllo e maiali ASA erano profondamente reanaesthetized e si sono sacrificati per una dose eccessiva di sodio tiopentale. Poi, sono stati transcardially perfusi con 4% paraformaldeide tamponata (pH 7,4). Gastrite negli animali del gruppo ASA è stato confermato da esame istopatologico di frammenti di parete dello stomaco prepyloric raccolte dopo perfusione (con metodi istopatologici di routine). Successivamente alla perfusione, sono stati raccolti i seguenti tessuti: il complesso celiaca-cranica mesenterica ganglio (CCMG) (noto anche come il complesso mesenterica ganglio celiaco-superiore (CSMG)); toracico, lombare e sacrale gangli catena simpatica (SCHG), cranica e mezzo gangli cervicale, gangli surrenale, piccolo gangli dei plessi intermesenteric e renali, caudale mesenterica gangli (CaMg). tessuti raccolti sono stati post-fissate per immersione nello stesso fissativo per 20 minuti, sciacquati in tampone fosfato (pH 7,4) per tre giorni e infine sono stati memorizzati in soluzione al 30% di saccarosio tamponata fino andati a fondo del contenitore per ulteriori elaborazioni .}

immunoistochimica e statistiche

quattordici micrometri di spessore sezioni al criostato dei campioni di tessuto sono stati analizzati al microscopio a fluorescenza (Olympus BX 51, Olympus, Polonia), dotate di un set di filtri adatti per l'osservazione di FB, di localizzare e contare neuroni simpatici contenenti il ​​tracciante. Per determinare il numero relativo di perikarya FB-positivi, i neuroni sono stati contati in ogni quarta sezione. sono stati considerati Solo neuroni con nucleo chiaramente visibile. Poi, sezioni selezionate con perikarya FB-marcati sono stati trattati per la tecnica di immunofluorescenza doppia etichettatura di routine, utilizzando antisieri principale sollevato in specie e specie-specifici anticorpi secondari (Tabella 1) differenti. Brevemente, dopo essiccazione all'aria a temperatura ambiente per 45 min. e l'aumento in 0,1 M tampone fosfato salino (PBS, pH 7,4;. 3 x 10 min), le sezioni sono state bloccate con una miscela contenente 10% siero di cavallo e 0,1% di albumina di siero bovino in 0,1 M PBS, 1% Triton X- 100, 0,05% timerosal e 0,01% sodio azide per 1 ha temperatura ambiente per ridurre colorazione di fondo aspecifica. Dopo il risciacquo in PBS (3 x 10 min.), Le sezioni sono state incubate per una notte a temperatura ambiente con antisieri principale sollevato contro la tirosina idrossilasi (TH), dopamina β-idrossilasi (DβH), neuropeptide Y (NPY), galanin (GAL), neuronale ossido nitrico sintasi (nNOS), leu 5 encefalina (LENK), cocaina e anfetamine peptide trascrizione regolamentato (CART), calcitonina il peptide correlato al gene (CGRP), sostanza P (SP) e peptide intestinale vasoattivo (VIP) ( Tabella 1). Seguendo successivo risciacquo in PBS (3 x 10 min.), Le sezioni sono state incubate con la miscela di anticorpi secondari (Tabella 1) per 1 ora a temperatura ambiente per visualizzare anticorpi primari utilizzati in questo studio. Dopo la colorazione, le sezioni sono state montate con glicerolo carbonato-tamponata (pH 8,6) e la copertura-scivolato.

I controlli standard, vale a dire preassorbimento per la antisieri neuropeptide con l'antigene appropriato (20 mcg di antigene /ml antisiero diluito, tutti gli antigeni acquistati da Peninsula, Sigma o AbD Serotec) e l'omissione nonché la sostituzione di tutti antisieri primario sieri non immune state eseguite per testare l'etichettatura immunoistochimica. Non c'era nessuna fluorescenza osservato in tutte queste colorazioni controllo, ciò conferma la specificità della metodologia e dell'anticorpo.

Le sezioni sono state esaminate con un microscopio Olympus BX51, dotato di filtri idonei AlexaFluor 488, AlexaFluor 546, e fast Blue, e le immagini sono state catturate da una fotocamera digitale collegata ad un PC, dotato di software Olympus cellulare F immagine di analisi (Olympus, Tokyo, Giappone). Le sezioni colorate per la stessa combinazione di antigeni assegnati alle indagini quantitative sono stati separati da almeno 100 micron, per evitare la doppia-analisi di somata neuronale. Il numero dei perikarya FB-positive contati per ogni combinazione di anticorpi era superiore a 200 neuroni per animale. I dati di entrambi i gruppi sono stati riuniti, statisticamente analizzati utilizzando Statistica 10 software (StatSoft Inc., Tulsa, OK, USA), e sono stati presentati come mezzo ± errore standard della media (SEM). Differenze significative sono state valutate utilizzando il test t di Student per campioni indipendenti (* p < 0,05 e ** P < 0,001). Inoltre, per la valutazione semi-quantitativa della densità delle fibre nervose immunoreattivi per ciascuna sostanza studiata, una scala arbitraria è stato usato, dove (-) - assenza di fibre; (+) - Singole fibre; (++) - Rari fibre nervose; (+++) - Raffigura un fibre nervose molto densi

Risultati

blu analisi rapida ed immunoistochimica

corpi cellulari contenente nervose veloci Blu- sono stati trovati esclusivamente nel CCMG. complesso, mentre il resto del pre e paravertebrale gangli simpatici erano privi di FB- cellule marcate. In media, il complesso CCMG conteneva 1.615 ± 20.73 FB + neuroni nel controllo e il 1644 ± 38.03 neuroni nel gruppo ASA, rispettivamente. La maggior parte dei neuroni marcati erano situati nella regione di poli celiaci del complesso CCMG, solo singolo somata etichettati in un'altra parte del CCMG sono stati identificati. corpi cellulari erano ovale, rotondo o multipolare con brevi dendriti e il nucleo situato in posizione centrale e misurati 20-45 micron di diametro. In alcuni casi è stato osservato un singolo processo lungo assone come tracciato dalla cella.

Negli animali di controllo a doppia etichettatura immunoistochimica hanno rivelato che la grande maggioranza delle cellule FB + erano immunoreattivi per TH (94,85 ± 1,01%) e DβH (97.10 ± 0,97%). Inoltre, tutti i TH corpi cellulari positive erano immunoreattivi per DβH ciò che hanno confermato il loro carattere fortemente catecolaminergica (Fig 1A, 1B, 1C e 1D). L'applicazione di anticorpi contro il neuropeptide Y raffigurato, che immunomarcatura NPY è stato trovato in 46.88 ± 2,53% del FB- etichettati perikarya (Fig 1E, 1F, 1G e 1H). Inoltre, un'altra frazione di FB- neuroni positivi GAL contenute in 8,40 ± 0,53% (Fig 1I, 1J, 1K e 1L). Inoltre, le fibre nervose GAL-positivo (+) tra l'altro formano le formazioni che circondano corpi cellulari zincata IR. D'altra parte, nessuno dei FB + neuroni contenuta nNOS, Lenk, CART, SP e VIP. Tuttavia, tutti questi neurotrasmettitori erano presenti nelle fibre nervose che circondano i perikarya tracciate. Un gran numero di fibre nervose CART-positivo varicose (+++) strettamente circondato i neuroni FB-etichettati e formò un cesto-come le strutture che li circondano (fig 2A, 2B, 2C e 2D). analisi microscopica delle sezioni incubate con anticorpi anti-CGRP rivelato la fitta rete di fibre CGRP-positive (+++) frequentemente localizzate nelle cellule FB-positive (Fig 2E, 2F, 2G e 2H). Solo singolo varicose o semplice nNOS-IR (+) (Fig 1M, 1N, 1O e 1P), Lenk-IR (++) (Fig 1R, 1S, 1T e 1U), SP-IR (+) (Fig 2I, 2J, 2K e 2L) e VIP-IR (+) (Fig 2M, 2N, 2O e 2P) le fibre nervose, talvolta formando piccoli fasci, sono stati dispersi in tutto il ganglio tra corpi cellulari marcati (Tabella 2).

Gastrite indotta da supplementazione di acido acetilsalicilico prolungata cambiato gli schemi di codifica di molti FB + cellule. La popolazione di cellule TH-positive e DβH-positivi è stato ridotto (Tabella 3). Esame microscopico di sezioni dimostrato che 85,78 ± 2,65% era TH-positive, considerando 88.82 ± 1,63% di FB- neuroni tracciate espresso DβH immunoreattività (Fig 3A, 3B, 3C e 3D). Inoltre, up-regolazione dei neuroni NPY-IR a 76.59 ± 3,02% è stato anche statisticamente significativo (Fig 3E, 3F, 3G e 3H). Il più notevole differenza nella codifica chimica dei neuroni simpatici tracciate tra il controllo e suini ASA-trattati comprendeva un aumento del numero di GAL (fino a 26,45 ± 2,75%) (Fig 3I, 3J, 3K e 3L). I FB- cellule positive contenenti GAL sono stati forniti anche da numerose, soprattutto varicose fibre nervose GAL-IR. Inoltre, le cellule che contengono nNOS a 6,13 ± 1,11% (Fig 3M, 3N, 3O e 3P) e Lenk 4,77 ± 0,42% (Fig 3R, 3S, 3T e 3U) sono stati osservati solo in ASA- trattamento degli animali. Simile agli animali di controllo, perikarya tracciati non erano immunoreattivi alla CART, CGRP, SP e VIP ma le fibre nervose contenenti questi neurotrasmettitori sono stati osservati in prossimità della FB- etichettato somata e somigliavano a quelli osservati nel gruppo di controllo.

gastroscopic e istopatologici esame

esame gastroscopic effettuato il primo giorno delle lesioni esperimento escluso nella mucosa gastrica in animali sia il controllo e il gruppo ASA. Tuttavia, lo stesso esame effettuato l'ultimo giorno confermato gastrite causata dalla integrazione di acido acetilsalicilico. sono stati osservati iperemia, petecchie, erosioni superficiali e piccole ulcere non solo in gastrica, ma anche duodeno mucosa: alterazioni macroscopiche quali. La valutazione istopatologica di frammenti di parete della regione prepyloric gastrica divulgate variazioni microscopiche come:. iperemia della mucosa, erosioni profonde, foliculosis, proliferazione di neutrofili e infiltrazione eosinofila estendono nella sottomucosa (Fig 4A, 4B, 4C e 4D)

Discussione

Questo è il primo rapporto che dimostra esatta localizzazione, la morfologia e la codifica chimica dei neuroni simpatici sporgenti verso l'area prepyloric dello stomaco suina. La principale fonte di fibre nervose postgangliari che forniscono questa regione proviene dal complesso CCMG, mentre gangli simpatici pre e paravertebrale erano privi delle FB- cellule marcate. Questi risultati sono coerenti con i dati ottenuti da ratti [3, 12], cavia [15, 16], e il cane [7] e di fornire un'ulteriore prova che stabilisce l'importanza predominante dei neuroni CCMG in innervazione stomaco. Nonostante, minore ingresso in innervazione simpatica di stomaco nel ratto e cavia è venuto da toracica gangli della catena. I neuroni che forniscono parete gastrica nel ratto si trovavano da T _{1 a L 3 nella catena a destra, e da T 2 a L 3 nelle [10], mentre corpi cellulari, rispettivamente a sinistra ratti che innervano mucosa gastrica sono stati trovati da T 6 a T 9 simpatico catena gangli [3]. Nei neuroni cavia situati in tutti i gangli della catena toracica sono stati proiettando allo stomaco [16]. Al contrario, questa ricerca dimostra che questi gangli non sono coinvolti nella innervazione della regione di prepyloric dello stomaco suina, molto probabilmente innervano altre parti dello stomaco, che richiede ulteriori indagini. Inoltre, questo risultati correlano bene con questi studi postulando caratteristica disposizione topografica dei neuroni, per quanto riguarda i loro tessuti bersaglio, nel complesso suina CCMG [43].}

Il presente studio ha rivelato che la grande maggioranza dei FB- neuroni positivi nel gruppo di controllo hanno avuto carattere fortemente catecolaminergica, come rivelato da TH- simultanea e DβH- immunoreattività. Questi risultati correlano bene con gli studi che descrivono la natura adrenergici della maggior parte dei neuroni CCMG nel ratto, cavia, cane e maiale domestico [10, 16, 44, 45]. Solo un piccolo numero di neuroni CCMG tracciati era privo di questi enzimi, che possono indicare, che sono la popolazione di non-adrenergici, possibilmente neuroni colinergici, che è in accordo con i precedenti risultati su istochimica di CCMG sia in Guinea e suini domestici [45, 46]. Inoltre, questi dati indicano che la quantità significativa di FB- etichettato perikarya espresso immunoreattività NPY. Dati di letteratura indicano che NPY è considerato il principale trasmettitore peptidergico sia: sistema nervoso simpatico e parasimpatico [47]. Vale a dire, NPY come regolatore neuronale e ormonale giocano ruolo importante nella fisiologia dei mammiferi del tratto gastrointestinale, tra cui l'inibizione della motilità intestinale, lo svuotamento gastrico, la secrezione acida e secrezione pancreatica esocrina. Inoltre, questo peptide colpisce i vasi sanguigni e partecipa nella regolazione del flusso ematico intestinale [48, 49]. D'altra parte, NPY è stata anche osservata in neuroni suina CCMG sporgenti all'ileo [50]. Inoltre, questo studio ha rivelato che i neuroni Gal- IR rappresentano parte delle cellule retrogrado etichettati. È ben correlata con fatto che galanin è biologicamente neuropeptide attiva, avente una distribuzione capillare nel sistema nervoso centrale e periferico nonché tessuti periferici di molte specie [51-53]. A livello gastrointestinale, galanin inibisce la secrezione di acido gastrico, il rilascio di numerosi peptidi pancreatici, regola mucosale assorbimento delle cellule epiteliali e modula motilità del tratto gastrointestinale [54]. Galanin esercita il suo ruolo fisiologico agendo su uno dei tre diversi sottotipi di recettori accoppiati alla proteina G (GAL-R1, R2 e GAL-GAL-R3) diffuse in molti tessuti e organi [52].

Sebbene nessuno di FB- neuroni positivi contenuta nNOS, Lenk, CART, CGRP, SP e VIP, tutti questi neurotrasmettitori erano presenti nelle fibre nervose che circondano le perikarya tracciate. Le numerose fibre nervose CART-positivo varicose strettamente circondati i neuroni FB-positivi e hanno formato un basket-come le strutture che li circonda. Cocaina e anfetamine regolato trascrizione (CART) peptide scoperto nel 1981 a nell'ipotalamo ovino è stata descritta in vari segmenti del tratto gastrointestinale di numerose specie di mammiferi, compreso l'uomo [2, 55, 56]. Nonostante il fatto che il ruolo di questo peptide in funzione intestinale non è completamente stabilito, alcuni autori suggeriscono che CART è coinvolto nella regolazione della motilità intestinale, l'inibizione di alimentazione, riduzione della secrezione acida gastrica, esacerbazione della motilità del colon [57]. Fino ad ora, sono stati descritti i cambiamenti nel numero di strutture nervose CART-positivo nei ENS sotto vari fattori patologici, quello che potrebbe suggerire il coinvolgimento della CART nella sopravvivenza e neuroprotezione [58, 59]. CGRP e SP sono considerate neuropeptidi sensoriali pronociceptive [60]. Il numero e la distribuzione delle fibre SP-IR e CGRP-IR sono molto simili a quelle che sono state già descritte da Lakomy et al. [45] per le fibre circostanti neuroni TH-positivi nel CCMG suina. Essi rappresentano una delle fonti delle proiezioni viscerofugal dalla parete intestinale o provengono da neuroni afferenti DRG, in quanto questi neuroni specificamente codificate sono stati descritti nei gangli enterici [55, 61] e sono ampiamente distribuiti in neuroni sensoriali [5]. Inoltre, sono stati osservati singoli varicose fibre nervose VIP-IR sparsi per il ganglio tra corpi cellulari tracciate. VIP è probabilmente coinvolto in un arco riflesso inibitorio intestino-intestinale e si verifica in afferenze enteriche che innervano il CCMG [45]. Infine, fonte delle nNOS-IR e fibre Lenk-IR visualizzati in questo studio potrebbero essere i neuroni pregangliari situati nel nucleo intermedio-del midollo spinale lombare o dai neuroni DRG. La vicinanza delle fibre divulgate in questo studio in relazione alla retrogrado etichettati neuroni CCMG possono indicare gli effetti indiretti di questo peptide nel innervazione simpatica dello stomaco. Tuttavia, la questione dell'impatto di queste fibre di neuroni simpatici forniscono un'area prepyloric dello stomaco ancora da chiarire.

Nonostante il fatto che l'infiammazione della mucosa gastrica, causata da supplementazione di acido acetilsalicilico a lungo termine, ha influenza sul numero di neuroni che innervano zona studiata dello stomaco, retrogradely etichettati cellule simpatiche presentano una grande quantità di plasticità loro neuropeptidi fenotipo. gastrite ASA-indotto ha portato a cambiamenti significativi nella codifica chimica dei neuroni tracciate, riducendo la produzione degli enzimi del tratto catecolamine-sintesi e up-regolazione della sintesi di neuropeptidi coinvolti nei meccanismi neuronali di difesa (NPY, GAL, nNOS, Lenk). Questi dati sono in accordo con il fatto che rigenerare neuroni simpatici temporaneamente down-regolare l'espressione di alcuni neurotrasmettitori soprattutto TH [32] e iniziare a produrre neurotrasmettitori coinvolti nella difesa e la sopravvivenza [31].

NPY sta emergendo come regolatore di infiammazione, coinvolti in autoimmunità, asma, cancro e molti disturbi gastrointestinali, come melabsorption, breve intestino, malattie infiammatorie intestinali e pancreatite. NPY, come un peptide anti-infiammatori, partecipa nella risposta infiammatoria dal reclutamento di cellule dendritiche immature e promuovendo una polarizzazione Th2 [49]. NPY può anche essere coinvolto nella risposta infiammatoria attraverso la differenziazione delle cellule T helper, monociti rilascio di mediatori, natural killer [NK] l'attivazione delle cellule, e la ridistribuzione delle cellule immunitarie che cosa ha confermato precedenti segnalazioni di diafonia bidirezionale tra sistema nervoso e immunitario nel tratto gastrointestinale [62, 63 ]. Questi risultati sono simili a quelli degli studi precedenti, in cui il numero di neuroni simpatici NPY-positive erano elevati durante le varie condizioni patologiche, tra enteropatia proliferativa e colite suina [4, 28]. Inoltre, esperimento umano raffigurato un aumento di terminazioni nervose NPY- IR all'interno della mucosa durante gastrite cronica causata da Helicobacter pylori
[62]. Questo suggerisce che NPY è importante fattore neuroprotettivo, che svolge il ruolo nella sopravvivenza e la rigenerazione dei neuroni danneggiati all'interno di infiammazione. È interessante notare che, NPY può anche essere secreta da alcuni immunociti, che possono suggerire che NPY è direttamente coinvolta nella infiammazione neurogena [64]. Tuttavia, l'esatta funzione di NPY in risposta neuronale durante gastrite ASA-indotta nei suini rimane inspiegabile e richiede ulteriori indagini
.

Il più notevole differenza nel fenotipo immuhistochemical dei neuroni tracciato è stato un aumento del numero di cellule immunoreattive gal- corpi degli animali del gruppo ASA-. Galanin è indiscutibilmente impegnata nella regolazione dei processi infiammatori. Infatti, galanin è considerato come un regolatore di citochine pro-infiammatorie, perché la somministrazione di galanin ha aumentato la produzione di TNF-α, IL-1α e IL-8 nei cheratinociti umani in stato fisiologico [65]. Fino ad oggi, gli aumenti di espressione galanin nelle strutture neurali, entrambi i sistemi nervoso autonomo e enterici, sono stati osservati durante la colite indotta chimicamente [4, 51] e enteropatia proliferativa [28] nei suini, diverticolite cronica umana [66] e infezione da Salmonella enterica nei topi [67].

• PLoS ONE: caratteristiche clinico-patologiche e la sopravvivenza Risultati del Sigillo anello primaria carcinoma a cellule nello stomaco: analisi retrospettiva di Centro unico database
• PLoS ONE: Acido linoleico coniugato supplementazione sotto una dieta ricca di grassi Modula stomaco espressione della proteina e intestinale Microbiota in topi adulti