PLOS ONE: L'influence de l'acide acétylsalicylique prolongée Supplémentation induite Gastrite sur la neurochimie des neurones sympathiques Fourniture prépylorique Région de l'estomac Porcine

Résumé

Cette expérience a été conçue pour établir la localisation et le phénotypage neurochimique des neurones sympathiques alimentant la zone prépylorique de l'estomac de porc dans un état physiologique et pendant l'acide acétylsalicylique (AAS) gastrite induite. Afin de localiser le sympathique péricaryons les estomacs de contrôle et de l'acide acétylsalicylique (AAS) animaux traités ont été injectés avec traceur rétrograde neuronal Fast Blue (FB). Sept jours après l'injection FB, les animaux ont été divisés en un contrôle et un groupe de supplémentation ASA. Le groupe ASA a reçu 100 mg /kg de poids corporel de ASA par voie orale pendant 21 jours. Le 28 ^{e jour tous les porcs ont été euthanasiés avec une surdose d'anesthésique progressive. Ensuite, les sections de cryostat de quatorze micromètres d'épaisseur ont été traitées pour la routine immunofluorescence double marquage, en utilisant des antiserums primaire dirigé vers la tyrosine hydroxylase (TH), la dopamine β-hydroxylase (DßH), le neuropeptide Y (NPY), la galanine (GAL), l'oxyde nitrique neuronal synthase (nNOS), leu 5-enképhaline (LENK), et la cocaïne amphétamine peptide réglementé de transcription (CART), calcitonine gene-related peptide (CGRP), la substance P (SP) et le peptide intestinal vasoactif (VIP). Les données obtenues dans cette étude indiquent que les fibres nerveuses sympathiques postganglionnaires fournissant zone prépylorique de l'estomac de porc proviennent du complexe ganglion mésentérique coeliaque-crânienne (CCGM). Chez les animaux témoins, les neurones marqués par FB exprimés TH (94,85 ± 1,01%), DßH (97,10 ± 0,97%), le NPY (46,88 ± 2,53%) et LAG (8,40 ± 0,53%). Dans le groupe ASA, les cellules nerveuses positives TH- et DβH- ont été réduits (85,78 ± 2,65% et 88,82 ± 1,63% respectivement). Par ailleurs, la gastrite induite par l'AAS a donné lieu à une expression accrue de NPY (76,59 ± 3,02%) et LAG (26,45 ± 2,75%), ainsi que la synthèse de novo de la nNOS-(6,13 ± 1,11%) et LENK (4,77 ± 0,42%) dans neurones CCGM tracées. En outre, un réseau de Cart-, CGRP-, SP-, VIP-, LENK-, fibres nNOS- immunoréactive (IR) nerveuses entourant les péricaryons FB-positifs ont été observés chez les animaux intacts et ASA-traités. Les résultats de cette étude indiquent l'implication de ces neuropeptides dans le développement ou vraisemblablement de la neutralisation inflammation gastrique}

Citation:. Palus K, CALKA J (2015) L'influence de l'acide acétylsalicylique prolongée Supplémentation induite Gastrite sur la neurochimie du les neurones sympathiques Fourniture prépylorique Région de l'estomac porcine. PLoS ONE 10 (11): e0143661. doi: 10.1371 /journal.pone.0143661

Editeur: Michael Bader, Centre Max-Delbrück de médecine moléculaire (MDC), ALLEMAGNE

Reçu le 16 Août 2015; Accepté 6 Novembre 2015; Publié le 25 Novembre, 2015

Droit d'auteur: © 2015 Palus, CALKA. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, pourvu que l'auteur et la source originelle sont crédités

Disponibilité des données: Toutes les données pertinentes sont dans le papier

financement:. publication soutenue par le Comité d'Etat polonais pour le numéro de la recherche scientifique 1890 /B /P01 /2010/39, l'Université de Warmie et Mazurie à Olsztyn (recherche légale) accorder No 15,610. 003-300 et KNOW (Leading Centre national de la recherche) scientifique Consortium "Healthy animal - Safe Food", décision du ministère de la science et de l'Enseignement supérieur n ° 05-1 /KNOW2 /2015

intérêts concurrents: Les auteurs. ont déclaré qu'il n'y a pas des intérêts divergents existent.

les dernières trente années d'introduction ont montré des progrès plus rapides dans les études de l'innervation du tractus gastro-intestinal. En général, l'estomac et de l'intestin sont innervés à la fois par les neurones trouvés dans les ganglions intra-muros et donc appartiennent au système nerveux entérique (ENS) [1, 2], ainsi que par des organismes cellulaires extrinsèques originaires de ganglions sympathiques, parasympathique et sensorielle [3- 5]. Des recherches récentes ont révélé que les ganglions sympathiques ne sont pas seulement des centres d'intégration nerveuse, mais aussi la possession de propriétés importantes par leurs neurones. Parmi d'autres, ils comprennent la convergence des impulsions centrales, projection des impulsions viscérales aux niveaux pré et post-synaptiques, l'accès /permettant les fibres centrales de protection viscérale et activité pacemaker [6, 7]. Cependant, les neurones post-ganglionnaires sympathiques qui alimentent le tractus gastro-intestinal n'influencent pas directement sur ses fonctions, mais exercent leurs effets à travers l'ENS [8, 9], ou la constriction des artères qui alimentent l'organe digestif [10]. En outre, la fonction de l'estomac est médiée et modulée par l'abondance des émetteurs et des neuropeptides neuronales, qui jouent un rôle dans la régulation de la motilité, la sécrétion acide, la libération d'hormones, la circulation sanguine locale et les mécanismes de défense de la muqueuse [3].

Il y a un grand nombre d'études publiées décrivant innervation sympathique de l'estomac, basée principalement sur de petits animaux de laboratoire, tels que le rat [10-12], la souris [13, 14], cochon Guinée [15, 16], le lapin [17] ou des animaux domestiques, tels que les chiens [7] et le chat [18, 19]. Les auteurs rapportent que prévertébral ganglion par exemple. coeliaque ganglion constituent la principale source d'innervation sympathique postganglionnaire des viscères abdominaux. Alors que seulement péricaryons simples ont été trouvés dans paravertébrale ganglion par exemple. ganglion chaîne sympathique [16, 20]. Jusque-là, on sait relativement peu sur les innervation de l'estomac chez le porc domestique, qui ressemble étroitement à celui de l'homme en ce qui concerne la caractéristique anatomique et physiologique [21, 22]. Des études antérieures dans le domaine ne décrivent que l'innervation extrinsèque de petits et gros intestin [4, 20] ou se concentrer sur le système nerveux entérique [23, 24].

Le système nerveux autonome se caractérise par une grande plasticité en réponse à divers stimuli pathologiques, ainsi que la capacité d'adaptation aux changements des conditions environnementales [25, 26]. Cette adaptation implique le changement dans le phénotype chimique des neurones par l'augmentation de l'expression de certains neurotransmetteurs et une réduction des autres ou l'activation de l'expression de gènes précédemment inactives [26, 27]. Au cours des dernières années, il y a eu une quantité croissante de littérature décrivant le changement de codage chimique des neurones sympathiques qui alimentent le tractus gastro-intestinal au cours de l'iléite [20], entéropathie proliférative [28], la colite [4] et axotomie [29-31]. En outre, certains auteurs suggèrent que les neurones sympathiques non seulement changer leur caractéristique chimique, mais présentent également la capacité de régénérer [32]. Fait intéressant, certains auteurs suggèrent que le système nerveux sympathique joue un rôle en tant que modulateur de l'inflammation gastro-intestinale, parce que les neurones sympathiques fournissent les tissus lymphoïdes. En outre, la présence des récepteurs pour les neurotransmetteurs sympathiques dans les cellules immunitaires ont été confirmés [33].

Acide acétylsalicylique, bien connu comme l'aspirine (ASA), est l'un des plus couramment utilisés non-stéroïdiens anti-inflammatoires de la médicaments (AINS) dans le monde et est particulièrement apprécié pour ses propriétés thérapeutiques. Les avantages des larges possibilités thérapeutiques, telles que la prévention des maladies cardio-vasculaires, au traitement des symptômes de la variété d'états inflammatoires, l'activité anti-tumorale ou de soulagement de la douleur ont été connus pendant de nombreuses années [34]. L'aspirine empêche la synthèse des prostaglandines par inhibition de l'enzyme cyclooxygénase (COX) par acétylation irréversible du groupe hydroxyle du résidu sérine-1 [35, 36]. COX appelé également que la Prostaglandine endoperoxydase synthase est une hémoprotéine liée à la membrane et l'enzyme glycoprotéine qui catalyse la conversion des phospholipides de la membrane cellulaire impliquée dans la synthèse des prostanoïdes, comprenant: la prostaglandine (PG), la prostacycline (PGI) et les thromboxanes (TXA) et existe sous la forme 3 isoformes (COX-1, -2 et -3) [34, 37]. Eicosanoïdes, provenant d'une réaction catalysée par la COX-1 sont impliqués dans l'agrégation plaquettaire, la protection de la muqueuse gastrique, et de nombreux autres processus physiologiques, tandis que ceux qui sont formés avec la participation de la COX-2 sont impliqués seulement dans le développement de la réponse inflammatoire. La COX-3 est une modification post-transcriptionnelle de la COX-1, se produisant dans le système nerveux central [38].

L'aspirine est un AINS non sélectifs et inhibe l'activité enzymatique de la COX-1 plusieurs centaines de fois plus efficace, par rapport à la COX-2 [38, 39]. En effet, ses résultats d'action dans les deux (lésions gastro-intestinales) (antipyrétique et anti-inflammatoire) et toxiques effets bénéfiques [40]. petite dose d'aspirine Même induit des blessures superficielles dans l'épithélium gastrique et conduit à un flux d'ions H anormale avec une augmentation ^{+ retour diffusion. En outre, l'inhibition de la COX-1, ce qui conduit à un déficit de prostaglandines (PG) dans la muqueuse gastrique et intestinale, est accepté comme le principal mécanisme de lésions de la muqueuse qui incluent des saignements, des érosions et des ulcérations [41]. Ces méfaits se produisent le plus souvent dans l'antre humaine et la zone prépylorique, mais elles peuvent aussi être vu dans la partie proximale du duodénum [34]. Par ailleurs, le niveau de la prostaglandine E2 (PGE2) expose la membrane muqueuse aux dommages causés par l'acide chlorhydrique et de la bile diminue, et réduit la capacité de régénération des cellules de la muqueuse en réduisant la libération de mucus, une inhibition de surfactants et des phospholipides de synthèse, la réduction de la sécrétion d' HCO _{3 et les troubles de la circulation sanguine de la microcirculation [40, 42]. Actuellement, l'influence de la gastrite induite par l'aspirine sur les processus adaptatifs et propriétés neurochimiques des neurones sympathiques fournissant l'estomac est assez fragmentaire}}

Par conséquent, cette expérience a été conçue pour établir:. 1) la localisation et la distribution des neurones sympathiques fournissant prépylorique région de l'estomac chez le porc domestique; 2) le phénotype neurochimique de perykarya tracées dans l'état physiologique; 3) les modifications possibles dans le codage neurochimique des neurones tracés pendant la gastrite induite par la supplémentation en acide acétylsalicylique prolongée.

Ethique Déclaration
Matériels et méthodes

La procédure expérimentale, y compris l'euthanasie des animaux a été approuvé par la Commission d'éthique local pour les expériences sur les animaux à l'Université de Warmie nad Mazurie à Olsztyn (Numéros de permis 05/2010). Toute chirurgie a été réalisée sous anesthésie sodium thiopental, et tous les efforts possibles ont été faits pour minimiser les souffrances des animaux.

Animaux et interventions chirurgicales

L'étude a été réalisée sur dix porcs juvéniles femelles du Blanc Grand polonais race, environ 8 semaines et pesant ca. 20 kg. Les animaux ont été maintenus dans des conditions d'éclairage normales dans un environnement à température contrôlée. Ils ont été nourris par mélange de grains commerciale et de l'eau du robinet ad libitum
. Tous les animaux ont été preanesthetized avec azaperone (Stresnil, Jansen Pharmaceutica NV, Belgique, 4 mg /kg de poids corporel, im) 15 min avant l'application de l'anesthésique principal, le thiopental de sodium (thiopental, Sandoz, Kundl-Rakúsko, Autriche; 10 mg /kg de poids corporel, administrés par voie intraveineuse). Afin de localiser les corps cellulaires sympathiques, les porcs ont été soumis à une laparotomie médiane et ont reçu des injections de traceur neuronal rétrograde fluorescent bleu rapide (FB, EMS-Chemie, GmbH, Allemagne) dans la partie en forme de losange (environ 4 cm x 4 cm) de la paroi prépylorique antérieure de l'estomac à un volume total de 50 ul d'une solution à 5% (1 ul par une injection). Pour minimiser les fuites du traceur dans les tissus environnants, l'aiguille de la seringue Hamilton a été laissé en place pendant 20 ans après chaque injection, et ensuite la zone d'injection a été ensuite rincée avec une solution saline isotonique et essuyer délicatement avec de la gaze. Après les injections de chirurgie de l'antibiotique (Betamox L.A., ScanVet, Pologne, 15 mg /kg de poids corporel, i.m.) et des médicaments analgésiques (meloxicam-Metacam, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Allemagne, 0,4 mg /kg de poids corporel, i.m.) ont été appliquées. Afin de minimiser la douleur post-chirurgie, le meloxicam (Metacam, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Allemagne, 0,4 mg /kg de poids corporel, i.m.) injections ont été administrées une fois par jour. L'état de santé des animaux a été contrôlée par le vétérinaire au moins 4 fois par jour

Ensuite, les porcs ont été assignés au hasard à l'un des deux groupes expérimentaux:. Contrôle (groupe C, n = 5) et le groupe ASA ( n = 5). Les animaux constituant le groupe ASA, à partir du septième jour après l'injection FB, ont reçu de l'acide acétylsalicylique par voie orale (aspirine, BAYER; 100 mg /kg de poids corporel), 1 h avant le repas. Examen gastroscopique a été réalisée pour exclure des lésions de la muqueuse gastrique chez les animaux du groupe ASA dans le premier jour et de confirmer la gastrite provoquée par ASA-traitement dans le dernier jour de l'aspirine supplémentation (en utilisant une vidéo-endoscope Olympus GIF 145 avec une longueur de travail 1030 mm et d'un diamètre de 9,8 mm)
.

Après 4 semaines de temps de survie (21 ^{er jour du traitement ASA), à la fois le contrôle et les porcs ASA ont été profondément reanaesthetized et sacrifiés par une surdose de thiopental de sodium. Ensuite, ils ont été perfusées par voie transcardiaque avec 4% de paraformaldehyde tamponné (pH 7,4). Gastrites chez les animaux du groupe ASA a été confirmée par l'examen histopathologique des fragments de la paroi de l'estomac prépylorique recueillie après la perfusion (en utilisant des méthodes histopathologiques de routine). Après la perfusion, les tissus suivants ont été recueillis: le complexe coeliaque-crânienne ganglion mésentérique (CCGM) (connu aussi comme le complexe ganglion mésentérique coeliaque supérieur (CSMG)); thoracique, lombaire et sacral ganglions de la chaîne sympathique (SCHG), ganglions crâniens et au milieu du col utérin, les ganglions surrénale, petits ganglions des plexus intermesenteric et rénales, ganglion mésentérique caudale (CAMG). tissus collectés ont été post-fixées par immersion dans le même fixatif pendant 20 minutes, rincées dans un tampon phosphate (pH 7,4) pendant trois jours et finalement ont été stockés dans 30% d'une solution de saccharose tamponnée jusqu'à ce qu'ils ont coulé au fond du récipient pour un traitement supplémentaire .}

immunohistochimie et des statistiques

sections de cryostat Quatorze-micromètre d'épaisseur des échantillons de tissus ont été analysés au microscope à fluorescence (Olympus BX 51, Olympus, Pologne), équipés d'un filtre approprié pour définir observation de FB, de localiser et de compter les neurones sympathiques contenant le traceur. Pour déterminer le nombre relatif de péricaryons FB-positif, les neurones ont été comptés dans chaque quatrième section. Seuls les neurones avec le noyau clairement visible ont été considérés. Ensuite, les sections sélectionnées avec péricaryons FB-marquées ont été traitées pour la technique d'immunofluorescence double marquage de routine, en utilisant des antiserums primaires soulevées dans différentes espèces et spécifiques à l'espèce des anticorps secondaires (tableau 1). En bref, après séchage à l'air à la température ambiante pendant 45 min. et l'augmentation de 0,1 M tampon phosphate salin (PBS, pH 7,4;. 3 x 10 min), les sections ont été bloquées avec un mélange contenant 10% de sérum de cheval et 0,1% d'albumine de sérum bovin dans du PBS 0,1 M, 1% de Triton X- 100, de l'azoture de sodium à 0,05% de thimérosal et 0,01% pendant 1 h à température ambiante pour réduire la coloration de fond non spécifique. Après un rinçage dans du PBS (3 x 10 min.), Les coupes ont été incubées pendant une nuit à température ambiante avec des antiserums primaires dirigés contre la tyrosine hydroxylase (TH), la dopamine β-hydroxylase (DßH), le neuropeptide Y (NPY), la galanine (LAG), synthase neuronale de l'oxyde nitrique (nNOS), leu 5-enképhaline (LENK), la cocaïne et l'amphétamine peptide transcription régulée (CART), calcitonine gene-related peptide (CGRP), la substance P (SP) et le peptide intestinal vasoactif (VIP) ( Tableau 1). Suite à un rinçage subséquent dans du PBS (3 x 10 min.), Les coupes ont été incubées avec un mélange d'anticorps secondaires (tableau 1) pendant 1 h à température ambiante pour visualiser des anticorps primaires utilisés dans cette étude. Après coloration, les coupes ont été montées avec du glycérol de carbonate tamponnée (pH 8,6) et le couvercle-glissé.

contrôles standard, à savoir préabsorption pour les antiserums neuropeptide avec l'antigène approprié (20 ug d'antigène /ml antisérum dilué, tous les antigènes acheté auprès de Peninsula, Sigma ou AbD Serotec) et l'omission ainsi que le remplacement de tous les antiserums primaires par des sérums non immun ont été réalisées pour tester le marquage immunohistochimique. Il n'y avait aucune fluorescence observée dans toutes ces colorations de contrôle, ce qui confirme la spécificité de la méthodologie et de l'anticorps appliquée.

Les articles ont ensuite été examinées au microscope Olympus BX51, équipé de filtres appropriés pour AlexaFluor 488, AlexaFluor 546, et fast Blue, et les images ont été capturées par un appareil photo numérique connecté à un PC, équipé d'un logiciel Olympus cellule F d'analyse d'image (Olympus, Tokyo, Japon). Les sections colorées pour la même combinaison d'antigènes affectés aux enquêtes quantitatives ont été séparés par au moins 100 um, pour éviter la double-analyse de soma neuronal. Le nombre des péricaryons FB positifs comptés pour chaque combinaison d'anticorps était au-dessus de 200 neurones par animal. Les données des deux groupes ont été rassemblées, analysées statistiquement en utilisant Statistica logiciel 10 (StatSoft Inc., Tulsa, OK, USA), et ont été présentées comme un moyen ± erreur type de la moyenne (SEM). Des différences significatives ont été évaluées à l'aide du test t de Student pour échantillons indépendants (* P < 0,05 et ** P < 0,001). En outre, une évaluation semi-quantitative de la densité des fibres nerveuses immunoréactives pour chaque substance étudiée, une échelle arbitraire a été utilisé, où (-) - absence de fibres; (+) - Fibres individuelles; (++) - Fibres nerveuses rares; (+++) - Représente une des fibres nerveuses très denses

Résultats

Blue traçage rapide et immunohistochimie

organes rapides de cellules nerveuses contenant BluetoothMD ont été trouvés exclusivement dans le CCGM. complexe, tandis que le reste des ganglions sympathiques pré- et paravertébrale étaient dépourvues de FB- cellules marquées. En moyenne, le complexe CCGM contenait 1,615 ± 20,73 FB + neurones dans le contrôle et 1,644 ± 38.03 neurones dans le groupe ASA, respectivement. La majorité des neurones marqués ont été situé dans la région des pôles coeliaques du complexe CCGM, seulement simple somata marqué dans une autre partie du CCGM ont été identifiés. Les corps cellulaires étaient ovales, rondes ou multipolaires avec dendrites courts et le noyau situé au centre et mesurés 20-45 um de diamètre. Dans certains cas, un processus de axone comme longue unique tracé de la cellule ont été observées.

Dans les animaux témoins double marquage immunohistochimique a révélé que la grande majorité des FB + cellules étaient immunoréactifs à TH (94,85 ± 1,01%) et DßH (97,10 ± 0,97%). En outre, tous TH- corps cellulaires immunoréactifs positifs ont été à ce DßH ont confirmé leur caractère fortement catécholaminergiques (figure 1A, 1B, 1C et 1D). L'application d'anticorps contre neuropeptide Y représenté, que le NPY immunomarquage a été trouvé dans 46,88 ± 2,53% de la FB- péricaryons (Fig 1E, 1F, 1G et 1H) étiquetés. En outre, une autre population de FB- neurones positifs GAL autonome à 8,40 ± 0,53% (figure 1I, 1J, 1K et 1L). De plus, les fibres nerveuses GAL positif (+) forment d'ailleurs des formations entourant les corps cellulaires IR GAL-. D'autre part, aucun des FB + neurones contenait nNOS, LENK, CART, SP et VIP. Cependant, tous ces neurotransmetteurs étaient présents dans les fibres nerveuses entourant les corps cellulaires tracées. Un grand nombre de fibres nerveuses PANIER positive variqueuses (+++) entouré de près les neurones FB-étiquetés et formé un panier-like structures autour d'eux (figure 2A, 2B, 2C et 2D). L'analyse microscopique de coupes mises en incubation avec des anticorps anti-CGRP a révélé le réseau dense de fibres CGRP-positives (+++) souvent localisées à proximité des cellules FB-positives (figure 2E, 2F, 2G et 2H). Seulement variqueux seule ou de plaine nNOS-IR (+) (figure 1M, 1N, 1O et 1P), LENK-IR (++) (Fig 1R, 1S, 1T et 1U), SP-IR (+) (figure 2I, 2J, 2K et 2L) et VIP-IR (+) (Fig 2M, 2N, 2O et 2P) des fibres nerveuses, formant parfois de petits faisceaux, ont été dispersés à travers le ganglion entre les corps cellulaires tracés (tableau 2).

Gastrite induite par la supplémentation en acide acétylsalicylique prolongée a changé les modes de codage de plusieurs FB + cellules. La population de cellules TH-positives et positives DßH a été réduite (tableau 3). Un examen microscopique a montré que les sections de 85,78 ± 2,65% étaient TH-positifs, alors que 88,82 ± 1,63% des neurones FB- tracés exprimé DßH immunoréactivité (figure 3A, 3B, 3C et 3D). En outre, la régulation des neurones NPY-IR à 76,59 ± 3,02% a également été statistiquement significative (figure 3E, 3F, 3G et 3H). La différence la plus remarquable dans le codage chimique des neurones sympathiques tracés entre le contrôle et les porcs ASA traités inclus un nombre très accru de GAL (jusqu'à 26,45 ± 2,75%) (figure 3I, 3J, 3K et 3L). Les cellules positives FB- contenant LAG ont également été fournies par de nombreuses fibres nerveuses, principalement variqueuses LAG-IR. En outre, les cellules contenant nNOS en 6.13 ± 1.11% (Fig 3M, 3N, 3O et 3P) et Lenk 4,77 ± 0,42% (figure 3R, 3S, 3T et 3U) ont été observés que chez ASA- animaux traités. Semblable aux animaux témoins, péricaryons tracés ne sont pas immunoréactifs à CART, CGRP, SP et VIP, mais les fibres nerveuses contenant ces neurotransmetteurs ont été observées à proximité du FB- de somata marqué et ressemblaient à ceux observés dans le groupe témoin.

gastroscopique et examen histopathologique

Examen gastroscopique effectué le premier jour des lésions expérimentales exclues dans la muqueuse gastrique chez les animaux à la fois témoin et le groupe ASA. Cependant, le même examen effectué le dernier jour a confirmé la gastrite causée par une supplémentation en acide acétylsalicylique. changements macroscopiques tels que: hyperémie, pétéchies, érosions superficielles et de petits ulcères ont été observés non seulement dans l'estomac, mais aussi duodénum muqueuse. L'évaluation histopathologique des fragments de la paroi de l'estomac région prépylorique révélé des changements microscopiques tels que:. hyperémie de la muqueuse, des érosions profondes, foliculosis, prolifération des neutrophiles et de l'infiltration éosinophile se prolongeant dans la sous-muqueuse (Fig 4A, 4B, 4C et 4D)

Discussion

Ceci est le premier rapport démontrant la localisation exacte, la morphologie et le codage chimique des neurones sympathiques en saillie à la zone prépylorique de l'estomac de porc. La principale source de fibres nerveuses postganglionnaires alimentant cette région proviennent du complexe CCGM, alors que les ganglions sympathiques pré- et paravertébrale étaient dépourvues des cellules marquées FB-. Ces résultats sont cohérents avec les données obtenues à partir de rat [3, 12], cochon Guinée [15, 16], et le chien [7] et fournir des éléments de preuve établissant l'importance prédominante des neurones CCGM dans innervation de l'estomac. Nonobstant, entrée mineure en innervation sympathique de l'estomac chez le rat et cochon Guinée provenaient thoracique ganglions de la chaîne. Neurones fournissant paroi gastrique chez le rat ont été localisés de T _{1 à L 3 dans la bonne chaîne, et de T 2 à L 3 dans les [10], alors que les corps, respectivement à gauche de la cellule rats innervant la muqueuse gastrique ont été trouvés de T 6 à T 9 sympathique chaîne ganglionnaire [3]. Dans les neurones cobayes situés dans tous les ganglions de la chaîne thoracique projetaient à l'estomac [16]. En revanche, cette recherche montre que ces ganglions ne sont pas impliqués dans l'innervation de la région prépylorique de l'estomac de porc, le plus probable qu'ils innervent d'autres parties de l'estomac, ce qui nécessite une enquête plus approfondie. En outre, cette corrélation avec les résultats de ces études postulant arrangement topographique caractéristique des neurones, par rapport à leurs tissus cibles, dans le complexe porcin CCGM [43].}

La présente étude a révélé que la grande majorité des FB- neurones positifs dans le groupe témoin avaient caractère fortement catecholaminergic, révélée par TH- simultanée et DβH- immunoréactivité. Ces résultats sont bien corrélés avec les études décrivant la nature adrénergique de la plupart des neurones CCGM chez le rat, cochon de Guinée, chien et le cochon domestique [10, 16, 44, 45]. Seul petit nombre de neurones CCGM tracées était dépourvue de ces enzymes, ce qui peut indiquer, que ce sont la population de non-adrénergiques, peut-être les neurones cholinergiques, qui est en accord avec les résultats antérieurs sur histochimie de CCGM en Guinée et en porcs domestiques [45, 46]. De plus, ces données indiquent que quantité importante de FB- marqué péricaryons exprimé immunoréactivité NPY. données de la littérature suggèrent que le NPY est considéré comme le principal transmetteur de peptidergique à la fois: les systèmes nerveux sympathique et parasympathique [47]. A savoir, le NPY en tant que régulateur neuronal et hormonal jouera un rôle important dans la physiologie des mammifères du tractus gastro-intestinal, y compris l'inhibition de la motilité intestinale, la vidange gastrique, la sécrétion d'acide et du pancréas exocrine. En outre, ce peptide affecte les vaisseaux sanguins et participe à la régulation du flux sanguin intestinal [48, 49]. D'un autre côté, le NPY a également été observée dans les neurones porcins CCGM faisant saillie vers l'iléon [50]. En outre, cette étude a montré que les neurones IR représentent GAL-partie des cellules marquées de façon rétrograde. Il se corrèle bien avec fait que la galanine est un neuropeptide biologiquement actif, ayant une large distribution dans les systèmes nerveux central et périphérique, ainsi que les tissus périphériques de nombreuses espèces [51-53]. Au niveau gastro-intestinal, la galanine inhibe la sécrétion d'acide gastrique, la libération de nombreux peptides du pancréas, régule l'absorption des cellules épithéliales de la muqueuse et qui module la motilité des voies gastro-intestinales [54]. Galanin exerce son rôle physiologique en agissant sur l'un des trois sous-types différents de G récepteurs couplés aux protéines (GAL-R1, GAL-R2 et R3) GAL-répandues dans de nombreux tissus et organes [52].

Bien que aucun des FB- neurones positifs contenus nNOS, LENK, CART, CGRP, SP et VIP, tous ces neurotransmetteurs étaient présents dans les fibres nerveuses entourant les péricaryons tracées. Les nombreuses fibres nerveuses PANIER positifs variqueuses entourés de près les neurones FB-positifs et ont formé un basket- comme des structures autour d'eux. (CART) peptide cocaïne et d'amphétamine réglementés de transcription découvert en 1981 dans l'hypothalamus ovine a été décrite dans les différents segments du tube digestif de nombreuses espèces de mammifères, y compris les humains [2, 55, 56]. En dépit du fait que le rôle de ce peptide dans la fonction intestinale n'a pas été entièrement établie, certains auteurs suggèrent que CART est impliquée dans la régulation de la motilité intestinale, l'inhibition de l'alimentation, la réduction de la sécrétion d'acide gastrique, l'exacerbation de la motilité du côlon [57]. Jusque-là, les changements dans le nombre de structures nerveuses PANIER positifs dans les ENS sous divers facteurs pathologiques ont été décrits, ce qui pourrait suggérer l'implication de CART dans la survie et la neuroprotection [58, 59]. CGRP et SP sont considérés comme des neuropeptides sensoriels pronociceptive [60]. Le nombre et la répartition des fibres de SP-IR et le CGRP-IR sont assez semblables à celles qui ont déjà été décrites par Lakomy et al. [45] pour les fibres qui entourent les neurones TH-positifs dans la CCGM porcine. Ils représentent l'une des sources des projections viscerofugal de la paroi intestinale ou proviennent de neurones afférents DRG, parce que ces neurones spécifiquement codés ont été décrits dans les ganglions entériques [55, 61], ainsi que sont largement distribués dans les neurones sensoriels [5]. En outre, VIP-IR fibres nerveuses variqueuses simples dispersés à travers le ganglion entre les corps cellulaires tracés ont été observés. VIP est probablement impliqué dans un arc réflexe inhibiteur intestin-intestinal et se produit dans les afférences gastro innervant le CCMG [45]. Enfin, la source des nNOS-IR et de fibres LENK-IR visualisées dans cette étude pourrait être les neurones préganglionnaires situés dans le noyau intermédiolatérale de la moelle épinière lombaire ou des neurones DRG. La proximité des fibres décrites dans cette étude par rapport à rétrogressivement marqué les neurones CCGM peuvent indiquer les effets indirects de ce peptide dans le innervation sympathique de l'estomac. Cependant, la question de l'impact de ces fibres sur les neurones sympathiques alimentant la zone prépylorique de l'estomac reste à élucider.

Malgré le fait que l'inflammation de la muqueuse gastrique, causée par une supplémentation en acide acétylsalicylique à long terme, n'a pas influence sur le nombre de neurones innervant la zone étudiée de l'estomac, rétrogressivement cellules marquées sympathiques présentent une grande plasticité dans leur neuropeptides phénotype. gastrite ASA-induite a conduit à des changements significatifs dans le codage chimique des neurones tracés, en réduisant la production des enzymes des voies catécholamines-synthèse et la régulation de la synthèse des neuropeptides impliqués dans les mécanismes neuronaux de défense (NPY, GAL, nNOS, LENK). Ces données sont en accord avec le fait que la régénération des neurones sympathiques temporairement-réguler l'expression de certains neurotransmetteurs en particulier TH [32] et commencer à produire des neurotransmetteurs impliqués dans la défense et la survie [31].

NPY est en train de en tant que régulateur de l'inflammation, impliqués dans l'auto-immunité, l'asthme, le cancer et de nombreuses maladies gastro-intestinales, telles que melabsorption, l'intestin court, la maladie intestinale inflammatoire et la pancréatite. NPY, comme un peptide anti-inflammatoire, participe à la réponse inflammatoire par le recrutement de cellules dendritiques immatures et en favorisant une polarisation Th2 [49]. NPY peut également être impliqué dans la réponse inflammatoire par la différenciation des cellules T auxiliaires, monocytes libération de médiateurs, natural killer [NK] l'activation des cellules, et la redistribution des cellules immunitaires ce qui confirme les rapports précédents de diaphonie bidirectionnelle entre les systèmes nerveux et immunitaire dans le tractus gastro-intestinal [62, 63 ]. Ces résultats sont semblables à ceux des études précédentes, où le nombre de neurones sympathiques NPY-positifs ont été élevée au cours de divers états pathologiques, y compris entéropathie proliférative et la colite porcine [4, 28]. En outre, l'expérience chez l'homme représenté une augmentation de NPY- IR terminaisons nerveuses dans la muqueuse au cours de la gastrite chronique causée par Helicobacter pylori
[62]. Ces résultats suggèrent que le NPY est un facteur neuroprotecteur important qui joue un rôle dans la survie et la régénération des neurones endommagés à l'intérieur de l'inflammation. Fait intéressant, NPY peut également être sécrétée par certains immunocytes, ce qui peut suggérer que le NPY est directement impliqué dans l'inflammation neurogène [64]. Cependant, la fonction exacte de NPY en réponse neuronale au cours de la gastrite ASA induite chez le porc reste inexpliquée et nécessite une enquête plus approfondie.

La différence la plus remarquable dans le phénotype immuhistochemical des neurones tracés a été très augmenté le nombre de cellules immunoréactives Gal- organes chez les animaux du groupe ASA-. Galanin est incontestablement engagée dans la régulation des processus inflammatoires. En effet, la galanine est considéré comme un régulateur de cytokines pro-inflammatoires, parce que l'administration de la galanine a augmenté la production de TNF-α, IL-1α et l'IL-8 dans les kératinocytes humains dans un état physiologique [65]. À ce jour, les augmentations de l'expression de la galanine dans les structures neurales, les deux systèmes nerveux autonome et entériques, ont été observés au cours de la colite induite chimiquement [4, 51] et entéropathie proliférative [28] chez les porcs, la diverticulite chronique chez l'homme [66] et de l'infection à Salmonella entérique chez la souris [67]. Fait intéressant, Talero et al.

• PLOS ONE: Caractéristiques clinicopathologiques et résultats de survie des primaires Chevalière Cell Carcinoma dans l'estomac: Analyse rétrospective de Single Centre Database
• PLOS ONE: Acide linoléique conjugué Supplementation sous une Haute-Fat Diet Modulation Estomac Protein Expression et microbiote intestinal dans Adult Mice