Dette forsøk ble utformet for å etablere lokalisering og neurokjemiske fenotyping av sympatiske neuroner som leverer prepyloric område av porcin magesekken i en fysiologisk tilstand og i løpet av acetylsalisylsyre (ASA) indusert gastritt. For å lokalisere sympatiske perikarya magen på både kontroll og acetylsalisylsyre behandlet (ASA) dyr ble injisert med nevronale retrograd tracer Fast Blå (FB). Syv dager etter FB injeksjon, dyrene ble delt inn i en kontroll og ASA tilskudd gruppe. Den ASA gruppen fikk 100 mg /kg kroppsvekt ASA oralt i 21 dager. På 28 th dag alle griser ble avlivet med gradvis overdose bedøvelse. Da fjorten-mikrometer tykk kryostatsnitt ble behandlet for rutinemessig dobbeltmerking immunfluorescens, ved hjelp av primære antisera rettet mot tyrosin hydroksylase (TH), dopamin β-hydroksylase (DβH), nevropeptid Y (NPY), Galanin (GAL), nerve nitrogenoksid syntase (nNOS), leu 5-enkefalin (LENK), kokain og amfetamin regulert transkripsjon peptid (CART), kalsitonin-relatert peptid (CGRP), substans P (SP) og vasoaktive intestinal peptid (VIP). Resultatene oppnådd i denne studien data indikerer at postganglionic sympatiske nervefibre som leverer prepyloric område av svine-mage stammer fra celiac-cranial mesenterisk ganglion kompleks (CCMG). I kontroll dyr, FB-merket nevroner uttrykt TH (94,85 ± 1,01%), DβH (97,10 ± 0,97%), NPY (46,88 ± 2,53%) og GAL (8,40 ± 0,53%). I ASA, ble TH- og DβH- positive nerveceller redusert (85,78 ± 2,65% og 88,82 ± 1,63% henholdsvis). Videre ASA- indusert gastritt resulterte i økt ekspresjon av NPY (76,59 ± 3,02%) og GAL (26,45 ± 2,75%), så vel som de novo-syntesen av nNOS (6,13 ± 1,11%) og LENK (4,77 ± 0,42%) i spores CCMG nevroner. I tillegg et nettverk av Cart-, CGRP-, SP-, VIP-, LENK-, nNOS- immunoreactive (IR) nervefibre omkranser FB-positive perikarya ble observert i både intakte og ASA-behandlede dyr. Resultatene fra denne studien indikerer involvering av disse nevropeptider i utviklingen eller antagelig motvirkning av mage betennelse Citation. Palus K, calka J (2015) The Influence of Langvarig acetylsalicylsyre Tilskudd-Induced gastritt på neurochemistry av den sympatiske nevroner Leverer Prepyloric Region av svinekjøtt magen. PLoS ONE 10 (11): e0143661. doi: 10,1371 /journal.pone.0143661 Redaktør: Michael Bader, Max-Delbrück senter for molekylærmedisin (MDC), GERMANY mottatt: 16 august 2015; Godkjent: 06.11.2015; Publisert: 25.11.2015 Copyright: © 2015 Palus, calka. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres Data Tilgjengelighet: All relevant data er innenfor papir Finansiering:. Publication støttes av den polske staten komité for Scientific Research nummer 1890 /B /P01 /2010/39, Universitetet i ermelandskmasuriske i Olsztyn (lovbestemt forskning) innvilge Ingen 15,610. 003-300 og vite (Leading National Research Centre) Vitenskapelig Consortium "Healthy Animal - Safe Food", avgjørelse av departementet for vitenskap og høyere utdanning No. 05-1 /KNOW2 /2015 Konkurrerende interesser: forfatterne. har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer. Innledning de siste tretti årene har vist stadig raske fremskritt innen studier av innervasjon av mage-tarmkanalen. Generelt er magen og tarmen innervated begge av neuroner innenfor utført ganglier og dermed tilhører enterisk nervesystem (ENS) [1, 2], så vel som ved ytre cellelegemer med opprinnelse i sympatisk, parasympatiske og sensoriske ganglier [3- 5]. Nyere undersøkelser har avdekket at sympatiske ganglier er ikke bare sentre for nervøs integrering, men også i besittelse av viktige egenskaper ved sine nerveceller. Blant annet de inkluderer konvergens av sentrale impulser, projeksjon av visceral impulser på pre- og postsynaptiske nivåer, tilgang /åpner for de sentrale fiber av visceral beskyttelse og pacemaker aktivitet [6, 7]. Men ikke sympatiske postganglionic nevroner som leverer mage-tarmkanalen ikke direkte innflytelse på dens funksjoner, men utøve sine effekter gjennom ENS [8, 9], eller innsnevre arteriene som forsyner fordøyelses organ [10]. Videre er magen funksjon mediert og modulert av masse neuronal sendere og nevropeptider, som spiller en rolle i reguleringen av motilitet, syresekresjon, hormone release, lokal blodstrøm og slimhinneimmunsystem [3]. det er et stort volum av publiserte studier beskriver sympatisk innervasjon av magen, hovedsakelig basert på små forsøksdyr, slik som rotte [10-12], mus [13, 14], marsvin [15, 16], kanin [17] eller husdyr, så som hund [7] og katt [18, 19]. Forfatterne rapporterer at prevertebral ganglia f.eks. cøliaki ganglion utgjør den viktigste kilden til postganglionic sympatisk innervasjon av abdominal viscera. Mens bare én perikarya ble funnet i paravertebral ganglier f.eks. sympatiske kjeden ganglier [16, 20]. Hittil relativt lite er kjent om innervasjon av mage om gris, som ligner det i menneskelig hensyn til anatomiske og fysiologiske kjennetegn [21, 22]. Tidligere studier på feltet beskriver bare den ytre innervasjon av tynn- og tykktarm [4, 20] eller fokusere på det enteriske nervesystemet [23, 24]. Det autonome nervesystemet er preget av høy plastisitet svar til ulike patologiske stimuli, og evnen til å tilpasse seg endrede miljøforhold [25, 26]. Denne tilpasningen innebærer endring i den kjemiske fenotypen av neuroner ved øket ekspresjon av enkelte nevrotransmittere og redusert av andre eller aktivering av ekspresjon av tidligere inaktive gener [26, 27]. De siste årene har det vært en økende mengde litteratur som beskriver endring av kjemisk koding av sympatiske nevroner som leverer mage-tarmkanalen i løpet ileitis [20], proliferativ enteropati [28], kolitt [4] og aksotomi [29-31]. I tillegg har noen forfattere antyder at sympatiske neuroner ikke bare forandre deres kjemiske egenskap, men også oppviser evnen til å regenerere [32]. Interessant nok noen forfattere antyder at sympatiske nervesystemet spiller en rolle som en modulator av gastrointestinal inflammasjon, fordi sympatiske neuroner forsyne lymfoidvev. Videre er nærværet av reseptorer for sympatiske neurotransmittere i immune celler er blitt bekreftet [33]. Acetylsalisylsyre, kjent som aspirin (ASA), er en av de mest brukte ikke-steroide anti-inflammatoriske legemidler (NSAIDs) over hele verden og er spesielt verdsatt for sine terapeutiske egenskaper. Fordelene med den brede terapeutiske alternativer, for eksempel forebyggelse av kardiovaskulære sykdommer, behandling av symptomer på forskjellige inflammatoriske tilstander, anti-tumoraktivitet, eller smertelindring har vært kjent i mange år [34]. Aspirin forhindrer prostaglandinsyntesen ved inhibering av enzymet cyklooksygenase (COX) via irreversibel acetylering av hydroksylgruppen av en serinrest [35, 36]. COX kalles også som prostaglandin endoperoxidase syntase er et membran-bundet hemoprotein og glykoprotein-enzym som katalyserer omdannelsen av celle-membran-fosfolipider, som er involvert i syntesen av prostanoider omfattende: prostaglandin (PG), prostacyklin (PGI) og tromboksaner (TXA) og eksisterer som 3 isoformer (COX-1, -2 og -3) [34, 37]. Eikosanoider, avledet fra en reaksjon som katalyseres av COX-1, er involvert i blodplateaggregasjon, beskyttelse av mageslimhinnen, og mange andre fysiologiske prosesser, mens de som dannes med deltakelse av COX-2 er involvert bare i utviklingen av den inflammatoriske respons. COX-3 er en post-transkripsjonell modifikasjon av COX-1, som forekommer i sentralnervesystemet [38]. Aspirin er et ikke-selektive NSAID og inhiberer den enzymatiske aktiviteten til COX-1 er flere hundre ganger mer effektivt, sammenlignet med COX-2 [38, 39]. Faktisk, dens handling resulterer i både gunstige (febernedsettende og betennelsesdempende) og toksisk (gastrointestinal skade) effekter [40]. Selv liten dose aspirin induserer overfladisk skade i mage epitel og fører til unormal ion flux med økt H + tilbake diffusjon. Videre er inhiberingen av COX-1, som fører til mangel av prostaglandiner (PG-er) i gastrisk og intestinal mucosa, blir akseptert som den viktigste mekanisme av mukosal skade som omfatter blødende erosjoner, og sårdannelse [41]. Disse skader opptrer hyppigst i human antrum og prepyloric område, selv om de også kan sees i den proksimale delen av duodenum [34]. Videre har redusert nivået av prostaglandin E2 (PGE2) eksponerer det mykøse membranet for skader forårsaket av saltsyre og galle, og reduserer muligheten for regenerering av slimhinneceller ved å redusere frigivelse av slim, en inhibering av overflateaktive midler og fosfolipider syntese, reduksjon i sekresjon av HCO 3 og forstyrrelser i blodstrømmen i mikrosirkulasjonen [40, 42]. For tiden, påvirkning av aspirin-indusert gastritt på adaptive prosesser og nevrokjemiske egenskaper av sympatiske neuroner forsyne mage er heller fragmentarisk Derfor dette eksperiment ble utformet for å etablere:. 1) lokalisering og fordeling av sympatiske neuroner som leverer prepyloric område av magen i gris; 2) nevrokjemiske fenotype av spores perykarya i fysiologisk tilstand; 3) mulige endringer i nevrokjemiske koding av spores nevroner i løpet gastritt forårsaket av langvarig acetylsalisylsyre tilskudd. Etikk erklæringen Den eksperimentelle prosedyren inkludert dyr dødshjelp ble godkjent av den lokale etiske kommisjon for dyreforsøk ved University of Warmia nad Mazury i Olsztyn (Permit tall 05/2010). Alle operasjoner ble utført under natrium tiopental anestesi, og alle mulige anstrengelser ble gjort for å minimalisere dyrs lidelse. Studien ble utført på ti ungdoms kvinnelige griser av den store hvite Polish rase, ca 8 uker gammel og veier ca. 20 kg. Dyrene ble holdt under vanlige lysforhold i et temperaturkontrollert miljø. De ble lei av kommersielle kornblanding og vann fra springen ad libitum Etterpå grisene ble randomisert til en av to eksperimentgruppe. Kontrollen (C-gruppen, n = 5) og ASA-gruppen ( n = 5). Dyrene som utgjør ASA gruppe, fra den syvende dag etter FB injeksjon ble gitt oralt acetylsalisylsyre (aspirin, BAYER; 100 mg /kg kroppsvekt), 1 time før mating. Gastroscopic undersøkelse ble utført for å utelukke lesjoner i mageslimhinnen hos dyr fra ASA gruppen i den første dagen, og for å bekrefte gastritt forårsaket av ASA-behandling i den siste dagen av aspirin tilskudd (ved hjelp av en video-endoskop Olympus GIF 145 med arbeidslengde 1030 mm og diameter 9,8 mm). etter fire ukers overlevelse (21 st dag av ASA-behandling), både kontroll og ASA griser ble dypt reanaesthetized og avlivet ved en overdose av natrium tiopental. Deretter ble de tran perfusert med 4% bufret paraformaldehyd (pH 7,4). Gastritt i dyr av ASA-gruppen ble bekreftet ved histopatologisk undersøkelse av fragmenter av prepyloric magesekken samlet etter perfusjon (ved hjelp av rutine histopatologiske metoder). Etter perfusjon, ble følgende vev samlet: cøliaki-cranial mesenteric ganglion kompleks (CCMG) (også kjent som cøliaki-overlegen mesenteric ganglion kompleks (CSMG)); thorax, lumbal og sakral sympatiske kjeden ganglier (SChG), kranial og midtre cervical ganglia, suprarenal gangliene, liten ganglia av intermesenteric og nyre plexuses, hale mesenteric ganglia (CaMg). Oppsamlede Vevene ble post-fiksert ved nedsenking i samme fikseringsmiddel i 20 minutter, renset i fosfatbuffer (pH 7,4) i løpet av tre dager, og endelig er blitt lagret i 30% bufret sukrose-oppløsning inntil de sank til bunnen av beholderen for videre bearbeiding . Immunohistochemistry og statistikker Fjorten mikrometer tykke kryostatsnitt av vevsprøver ble analysert under et fluorescerende mikroskop (Olympus BX 51, Olympus, Polen), utstyrt med et filter sett passer for observasjon av FB, for å lokalisere og telle sympatiske nerveceller som inneholder tracer. For å bestemme det relative antall FB-positive perikarya, ble neuronene tellet i hver fjerde avsnitt. Bare nevroner med godt synlig kjernen ble vurdert. Deretter ble et avgrenset område med FB-merkede perikarya behandlet for rutine dobbel-merking immunfluorescens teknikk, ved hjelp av primære antisera dannet i forskjellige arter og arts-spesifikke sekundære antistoffer (Tabell 1). I korthet, etter lufttørking ved romtemperatur i 45 min. og stiger i 0,1 M fosfat-bufret saltløsning (PBS, pH 7,4;. 3 x 10 min), ble seksjonene blokkert med en blanding inneholdende 10% hesteserum og 0,1% bovint serumalbumin i 0,1 M PBS, 1% Triton X- 100, 0,05% timerosal og 0,01% natriumazid i 1 time ved romtemperatur for å redusere ikke-spesifikk bakgrunnsfarging. Etter skylling i PBS (3 x 10 min.), Ble seksjonene inkubert over natten ved værelsetemperatur med primærantisera dannet mot tyrosin hydroksylase (TH), dopamin β-hydroksylase (DβH), nevropeptid Y (NPY), galanin (GAL), nevronale nitrogenoksid syntase (nNOS), leu 5-enkefalin (LENK), kokain og amfetamin regulert transkripsjon peptid (CART), kalsitonin-relatert peptid (CGRP), substans P (SP) og vasoaktive intestinal peptid (VIP) ( tabell 1). Etter etterfølgende skylling i PBS (3 x 10 min.), Ble seksjonene inkubert med blanding av sekundære antistoffer (tabell 1) i 1 time ved romtemperatur for å visualisere primære antistoffer brukt i denne studien. Etter farging ble seksjoner montert med karbonat-bufret glyserol (pH 8,6) og dekk sklei. Standard kontroller, dvs. preabsorption for neuropeptide sera med passende antigen (20 ug antigen /ml fortynnet antiserum, alle antigener anskaffet fra Peninsula, Sigma eller ABD Serotec) og utelatelse samt utskifting av alle primære antisera ved ikke-immunsera ble utført for å teste immunhistokjemisk merking. Det var ingen fluorescens observert i alle disse kontroll stainings, hvilken bekrefter spesifisiteten av metodikken og antistoffet anvendt. Snittene ble deretter undersøkt under et Olympus BX51 mikroskop, som er utstyrt med filtre som er egnet for AlexaFluor 488, AlexaFluor 546, og rask Blå, og bildene ble tatt til fange av et digitalt kamera koblet til en PC, utstyrt med Olympus Cell F bildeanalyseprogram (Olympus, Tokyo, Japan). Seksjonene farget for den samme kombinasjonen av antigener som er tilordnet kvantitative undersøkelser ble separert ved minst 100 um, for å unngå dobbel-analyse av neuronal somata. Tallet på FB-positive perikarya telles for hver kombinasjon av antistoffer var over 200 nerveceller per dyr. Dataene fra begge gruppene ble samlet, statistisk analysert ved hjelp Statistica 10 software (Statsoft Inc., Tulsa, OK, USA), og ble presentert som et middel ± standard feil av gjennomsnittet (SEM). Signifikante forskjeller ble evaluert ved hjelp av Students t-test for uavhengige utvalg (* P < 0,05 og ** P < 0,001). Videre, for semikvantitativ evaluering av tettheten av nervefibre immunreaktive for hvert stoff studeres, en vilkårlig skala ble benyttet, hvor (-) - fravær av fibre; (+) - Enkeltfibre; (++) - Sjeldne nervefibrene; (+++) - Viser en svært tette nervefibrene Resultater Fast Blå sporing og immunhistokjemi Raske Blå- inneholder nervecellelegemer ble funnet utelukkende i CCMG. komplekse, mens resten av pre- og paravertebral sympatiske ganglier var blottet for FB- merkede celler. I gjennomsnitt CCMG kompleks inneholdt 1615 ± 20.73 FB + nevroner i kontroll og 1644 ± 38,03 nevroner i ASA gruppen, henholdsvis. Flertallet av merkede neuroner ble plassert i området ved cøliaki poler av CCMG kompleks, bare enkelt- merket somata i en annen del av CCMG har blitt identifisert. Celle organer var oval, rund eller multipolar med korte dendritter og sentralt beliggende kjerne og målt 20-45 mikrometer i diameter. I noen tilfeller ble det observert en eneste lang axon-lignende prosess spores fra cellen. I kontrolldyrene dobbeltmerking immunhistokjemi avslørt at det store flertallet av FB + celler var immunoreactive til TH (94,85 ± 1,01%) og DβH (97,10 ± 0,97%). I tillegg alle TH- positive cellelegemer var immunoreactive å DβH hva bekreftet sin sterk catecholaminergic karakter (fig 1A, 1B, 1C og 1D). Anvendelsen av antistoffer mot neuropeptid Y avbildet, ble det NPY immunolabeling funnet i 46,88 ± 2,53% av den merkede FB- perikarya (figur 1E, 1F, 1G og 1H). I tillegg er en annen befolkning på FB- positive nevroner inneholdt GAL i 8,40 ± 0,53% (Fig 1I, 1J, 1K og 1L). Videre GAL-positive nervefibre (+) forresten dannet formasjoner omkranser Gal- IR celle organer. På den annen side, ingen av FB + nevroner inneholdt nNOS, Lenk, CART, SP og VIP. Imidlertid var alle disse nevrotransmittere stede i nervefibrene som omgir spores perikarya. Et stort antall av åreknuter Cart-positive nervefibre (+++) tett omgitt av FB-merkede nevroner og dannet en kurv-lignende strukturer rundt dem (figur 2A, 2B, 2C og 2D). Mikroskopisk analyse av snitt inkubert med anti-CGRP-antistoffer avslørte tett nettverk av CGRP-positive fibere (+++) ofte lokalisert i nærheten av de FB-positive celler (figur 2E, 2F, 2G og 2H). Bare én åreknuter eller ren nNOS-IR (+) (fig 1 M, 1N, 1o og 1P), Lenk-IR (++) (Fig 1R, 1S, 1T og 1U), SP-IR (+) (Fig 2I, 2J 2K og 2L) og VIP-IR (+) (figur 2 M, 2 N, 2o og 2p) nervefibre, og til dannelse av små bunter, ble dispergert i ganglion mellom sporet cellelegemer (tabell 2). Gastritt indusert av langvarig acetylsalisylsyre tilskudd endret kodemønstre mange FB + celler. Populasjonen av TH-positive og DβH-positive celler ble redusert (tabell 3). Mikroskopisk undersøkelse av seksjonene viste at 85,78 ± 2,65% var TH-positive, mens 88,82 ± 1,63% av FB- spores nevroner uttrykt DβH immunoreaktivitets (figur 3A, 3B, 3C og 3D). Videre oppregulering av NPY-IR neuroner til 76,59 ± 3,02% var også statistisk signifikant (figur 3E, 3F, 3G og 3H). Det mest bemerkelsesverdige forskjellen i kjemisk koding av spores sympatiske nevroner mellom kontroll og ASA-behandlede griser tatt med en meget økt antall GAL (opp til 26,45 ± 2,75%) (fig 3I, 3J, 3K og 3L). De FB- positive celler som inneholder GAL ble også levert av mange, hovedsakelig åreknuter GAL-IR nervefibre. Videre ble cellene som inneholder nNOS i 6,13 ± 1,11% (Fig 3M, 3N, 3o og 3P) og Lenk i 4,77 ± 0,42% (Fig 3R, 3S, 3T og 3U) kun observert i ASA- behandlede dyr. I likhet med kontrolldyr, spores perikarya var ikke immunoreactive å CART, CGRP, SP og VIP men nervefibre som inneholder disse signalstoffene ble observert i nærheten av FB- merket somata og lignet de som ble observert i kontrollgruppen. Gastroscopic undersøkelse utført på den første dagen av forsøket ekskludert lesjoner i mageslimhinnen hos dyr fra både kontroll og ASA. Men det samme undersøkelse utført på den siste dagen bekreftet gastritt forårsaket av acetylsalisylsyre tilskudd. Makroskopiske forandringer som: remi, petekkier, overflatiske erosjoner og små sår ble observert ikke bare i mage, men også tolvfingertarmen slimhinner. Histopatologisk evaluering av fragmenter av veggen av mage prepyloric region beskrevne mikroskopiske forandringer som:. Hyperemi i slimhinnene, dype erosjoner, foliculosis, spredning av neutrofiler og eosinofil infiltrasjon som strekker seg inn submucosa (figur 4A, 4B, 4C og 4D) Diskusjoner Dette er den første rapporten som viser eksakt lokalisering, morfologi og kjemisk koding av sympatiske nevroner projisere til prepyloric område av svin magen. Den viktigste kilden til postganglionic nervefibre som leverer denne regionen stammer fra CCMG komplekse, mens pre- og paravertebral sympatiske ganglier var blottet for FB- merkede celler. Disse resultatene er i samsvar med dataene oppnådd fra rotte [3, 12], marsvin [15, 16], og hund [7], og gir ytterligere bevis for opprettelse av den dominerende betydning CCMG neuroner i mage innervasjon. Tross, mindre input i sympatisk innervasjon av magen i rotte og marsvin kom fra thorax kjeden ganglier. Nevroner som leverer mageveggen i rotte ble plassert fra T 1 til L 3 i riktig kjeden, og fra T 2 L 3 i henholdsvis venstre [10], mens cellelegemer innervating rotter mageslimhinnen ble funnet fra T 6 til T 9 sympatiske kjeden ganglier [3]. I marsvinet nevroner lokalisert i alt thorax kjede ganglia ble prosjektering til magen [16]. I motsetning til dette, viser denne forskningen at disse ganglia ikke er involvert i innervasjon av prepyloric region av svine-mage, mest sannsynlig de innerverer andre deler av magesekken, noe som krever ytterligere undersøkelser. Dessuten, denne funnene korrelerer godt med disse studiene postulere karakteristisk topografisk arrangement av nevroner, i forhold til sine mål vev, i svin CCMG komplekse [43]. Denne studien har avslørt at det store flertallet av FB- positive nevroner i kontrollgruppen hadde sterkt catecholaminergic karakter, som avslørt av samtidig TH- og DβH- immunoreaktivitets. Disse resultatene korrelerer godt med studier som beskriver adrenerge natur fleste CCMG nevroner i rotte, marsvin, hund og gris [10, 16, 44, 45]. Bare lite antall spores CCMG nevroner var blottet for disse enzymene, noe som kan tyde på at de er befolkningen av ikke-adrenerge, muligens kolinerge nevroner, som er i overensstemmelse med tidligere funn på histokjemi av CCMG i både guinea og innenlandske griser [45, 46]. Videre disse dataene indikerer at betydelige mengder FB- merket perikarya uttrykt NPY immunoreaktivitets. Litteratur data tyder på at NPY er ansett å være den viktigste peptidergic senderen i begge: de sympatiske og parasympatiske nervesystem [47]. Nemlig NPY som neuronal og hormonell regulator spille viktig rolle i pattedyr fysiologi av fordøyelseskanalen, inkludert hemming av tarmmotilitet, ventrikkeltømming, magesyre og bukspyttkjertelen eksokrin sekresjon. Dessuten påvirker dette peptid blodårer og deltar i regulering av tarmblodstrøm [48, 49]. På den annen side ble NPY også observert hos svin CCMG neuroner som rager til ileum [50]. Videre denne studien viste at Gal- IR nevroner representerer del av retrograd merkede celler. Det godt samsvarer med det faktum at galanin er biologisk aktivt neuropeptid som har en bred utbredelse i det sentrale og perifere nervesystemer, så vel som perifere vev hos mange arter [51-53]. På gastrointestinal nivå, hemmer Galanin syresekresjonen, utgivelsen av mange pankreas peptider, regulerer mucosal epitelcelledifferensiering absorpsjon og modulerer motilitet av mage-tarmkanalen [54]. Galanin utøver sin fysiologiske rolle ved å virke på en av de tre forskjellige undertyper av G-protein-koblede reseptorer (GAL-R1, GAL-R2 og GAL-R3) utbredt i mange vev og organer [52]. Selv ingen av FB- positive nevroner inneholdt nNOS, Lenk, CART, CGRP, SP og VIP, var alle disse nevrotransmittere stede i nervefibrene som omgir spores perikarya. De mange åreknuter CART-positive nervefibre tett omringet de FB-positive nevroner og dannet en basketball- lignende strukturer rundt dem. Kokain og amfetamin-regulert transkripsjon (KJØP) peptid oppdaget i 1981 i ovin hypotalamus er blitt beskrevet i forskjellige deler av mage-tarmkanalen av mange pattedyrarter, inkludert mennesker [2, 55, 56]. Til tross for det faktum at rollen til dette peptid i tarmfunksjon ikke er fullt etablert, noen forfattere antyder at kurven er involvert i reguleringen av intestinal motilitet, hemming av mating, reduksjon av mavesyre-sekresjon, forverring av tykktarmsmotilitet [57]. Hittil endringer i antall CART-positive nervøse strukturer i ENS under ulike patologiske faktorer ble beskrevet, hva kan foreslå involvering av CART i overlevelse og nevro [58, 59]. CGRP og SP regnes som pronociceptive sensoriske neuropeptider [60]. Antallet og fordelingen av SP-IR og CGRP-IR-fibre er ganske lik de som allerede er beskrevet av Lakomy et al. [45] for fibrene som omgir TH-positive neuroner i den porcine CCMG. De representerer en av kildene til den viscerofugal anslagene fra tarmveggen eller stamme fra DRG afferente nevroner, fordi disse er spesielt kodede nevronene ble beskrevet i enterisk ganglier [55, 61] og er vidt fordelt i sensoriske nevroner [5]. Videre ble enkelt åreknuter VIP-IR nervefibrene spredt over hele ganglion mellom spores cellelegemer observert. VIP er trolig involvert i en tarm-tarm hemmende refleks bue og forekommer i tarm afferente innervating den CCMG [45]. Til slutt, kilden til nNOS-IR og Lenk-IR fibre visualisert i denne studien kan være preganglionic nevroner lokalisert i intermediolateral kjernen i ryggmargen eller fra DRG nevroner. Nærheten av fibre som er beskrevet i denne studie i forhold til retrograd merket CCMG neuroner kan indikere de indirekte virkninger av dette peptid i sympatisk innervasjon av magen. Imidlertid gjenstår spørsmålet om virkningen av disse fibrene på sympatiske nevroner som leverer prepyloric område av magen for å bli belyst. Til tross for at betennelse i mageslimhinnen, forårsaket av langsiktig acetylsalisylsyre tilskudd, har ingen innflytelse på antall neuroner innervating det studerte område i mage, retrograd merket sympatiske celler utviser en stor del av plastisitet i deres nevropeptider fenotype. ASA-indusert gastritt førte til betydelige endringer i den kjemiske koding av spores neuroner, ved å redusere produksjonen av katekolamin-synteseveiene enzymer og oppregulering av syntese av nevropeptider som er involvert i nerveforsvarsmekanismer (NPY, GAL, nNOS, Lenk). Disse dataene er i overensstemmelse med det faktum at regenererende sympatiske nevroner midlertidig ned-regulere uttrykk for noen nevrotransmittere spesielt TH [32] og begynne å produsere signalstoffer involvert i forsvar og overlevelse [31]. NPY dukker som regulator av inflammasjon, som er involvert i autoimmunitet, astma, kreft og mange gastrointestinale forstyrrelser, så som melabsorption, kort tarm, inflammatorisk tarmsykdom og pankreatitt. NPY, som et anti-inflammatorisk peptid, deltar i den inflammatoriske respons ved rekruttering av umodne dendrittiske celler og ved å fremme en Th2 polarisasjon [49]. NPY kan også være involvert i betennelsesreaksjon gjennom differensiering av T-hjelpeceller, monocytter mekler utgivelse, natural killer [NK] celleaktivering, og immunceller omfordeling hva bekreftet tidligere rapporter om toveis crosstalk mellom nervesystemet og immunsystemet i mage-tarmkanalen [62, 63 ]. Disse resultatene er lik de som tidligere studier, hvor antallet av NPY-positive sympatiske neuroner ble hevet i løpet av forskjellige patologiske tilstander, inkludert proliferativ enteropati og porcint kolitt [4, 28]. Videre eksperiment i menneskelig avbildet en økning i NPY- IR nerveender i slimhinnene ved kronisk gastritt forårsaket av Helicobacter pylori product: [62]. Dette tyder på at NPY er viktig neurobeskyttende faktor, som spiller rollen som i overlevelse og regenerering av skadede neuroner i løpet av betennelse. Interessant, kan NPY også bli utskilt av noen immunocyttene, noe som kan tyde på at NPY er direkte involvert i nevrogen inflammasjon [64]. Men den nøyaktige funksjonen til NPY i nerveaktivitet i løpet av ASA-indusert gastritt hos gris er uforklart og krever videre undersøkelser. Det mest bemerkelsesverdige forskjellen i immuhistochemical fenotype av spores nevroner ble en svært økt antall Gal- immunreaktive celler organer i ASA- gruppe dyr. Galanin er utvilsomt engasjert i reguleringen av betennelsesprosesser. Faktisk er galanin betraktes som en regulator av pro-inflammatoriske cytokiner, fordi administrering av galanin har økt produksjon av TNF-α, IL-1α og IL-8 i humane keratinocytter i fysiologisk tilstand [65]. Til dags dato, de øker i Galanin uttrykk i nevrale strukturer, både autonome og enteriske nervesystem, ble observert under kjemisk indusert kolitt [4, 51] og proliferativ enteropati [28] i griser, kronisk divertikulitt i menneskelig [66] og ente Salmonella-smitte hos mus [67].
Materialer og metoder
Dyr og kirurgiske prosedyrer
. Alle dyrene ble preanesthetized med azaperon (Stresnil, Jansen Pharmaceutica NV, Belgia, 4 mg /kg kroppsvekt, im) 15 minutter før påføringen av hoved bedøvelse, natriumtiopental (Thiopental, Sandoz, Kundl-Rakusko, Østerrike; 10 mg /kg kroppsvekt, gitt intravenøst). For å lokalisere de sympatiske cellelegemene, ble grisene kastet median laparotomi og mottok injeksjoner av det fluorescerende retrograd neuronale tracer Fast Blå (FB, EMS-Chemie GmbH, Tyskland) inn i diamantformede del (ca. 4 cm x 4 cm) av magesekken fremre prepyloric veggen i et totalvolum på 50 ul av en 5% løsning (1 mL per en injeksjon). For å minimalisere lekkasje av sporstoffet inn i omkringliggende vev, ble nålen på Hamilton-sprøyte på plass i 20-årene etter hver injeksjon, og deretter injeksjonsområdet ble deretter skylt med isotont saltvann og forsiktig tørket med gasbind. Etter operasjonen injeksjoner av antibiotika (Betamox L.A., ScanVet, Polen, 15 mg /kg kroppsvekt, i.m.) og smertestillende legemidler (meloksikam-Metacam, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Tyskland, 0,4 mg /kg kroppsvekt, i.m.) ble brukt. For å minimalisere smerte etter kirurgi den meloksikam (Metacam, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Tyskland, 0,4 mg /kg kroppsvekt, i.m.) injeksjoner ble administrert en gang om dagen. Helsetilstanden til dyrene ble overvåket av veterinær minst 4 gang om dagen
Gastroscopic og histopatologiske eksamen
Studie antyder en sammenheng mellom bruk av probiotika og "tåkete hjernen"
Proteinbud fra menneskelig mikrobiom kaster lys over menneskers helse
Ulcerøs kolitt
Penis mikrobiom er reservoar for bakteriell vaginose-assosierte bakterier
Matematisk modell avslører risikoen for SARS-CoV-2-infeksjon etter fekal mikrobiotatransplantasjon
Rengjøringsprodukter kan øke risikoen for astma hos barn, finner studier
Husholdningsdesinfeksjonsmidler kan bidra til fedme hos barn
Kanadiske forskere har vist at vanlige husholdningsrengjøringsprodukter kan gjøre barn overvektige ved å forårsake endringer i tarmmikrofloraen. Sergey Mironov | Shutterstock Forskerne s
Ulcerøs kolitt og en manglende mikrobe i tarmen
Ulcerøs kolitt er en alvorlig svekkende inflammatorisk sykdom i tarmen som fører til lammende symptomer som kan påvirke livskvaliteten alvorlig. Forskere fra Stanford University School of Medicine har
Tarmbakteriell profil kan forutsi tarmskader etter strålebehandling
Snarere som et fysisk fingeravtrykk, tarmmikrobielt mønster kan brukes til å identifisere visse sårbarheter hos pasienter som gjennomgår strålebehandling for prostata eller gynekologisk kreft, å forut