PLoS One: The Influence of Pitkäaikainen Asetyylisalisyylihappo täydentäminen aiheuttama gastriitti on Neurochemistry sympaattisen neuronien Toimittavat Prepyloric alueelta muualle Sian Stomach

tiivistelmä

Tämä koe suunniteltiin luomaan lokalisointi ja neurokemialliset fenotyypitykseen sympaattinen neuronien toimittaa prepyloric alue sian mahan fysiologisessa tilassa ja sen aikana asetyylisalisyylihapon (ASA) aiheuttama gastriitti. Jotta paikallistamiseksi sympaattinen perikarya vatsat sekä valvonnan ja asetyylisalisyylihapon käsitelty (ASA ryhmä) eläimiin injektoitiin hermosolujen retrogradinen merkkiaine Fast Blue (FB). Seitsemän päivän kuluttua FB injektion jälkeen eläimet jaettiin ohjaus- ja ASA täydentämistä ryhmä. ASA ryhmä sai 100 mg /kg ruumiinpainoa ASA suullisesti 21 päivää. On 28 ^{päivänä kaikki siat tapettiin asteittaista yliannostuksen nukutusainetta. Sitten, neljäntoista mikrometrin paksuinen kryostaattileikkeet käsitelty tavanomaisesta double-merkintöjä immunofluoresenssilla käyttäen ensisijaisena antiseerumeita suuntautuu tyrosiinihydroksylaasin (TH), dopamiini β-hydroksylaasin (DpH), neuropeptidi Y (NPY), galaniini- (GAL), hermosolujen typpioksidia syntaasi (nNOS), leu 5-enkefaliinia (LENK), kokaiiniin ja amfetamiinin säännelty transkripti peptidi (CART), kalsitoniinigeeniin liittyvän peptidin (CGRP), P-aine (SP) ja vasoaktiivinen intestinaalinen peptidi (VIP). Saadut tässä tutkimuksessa osoittavat, että postganglionisten sympaattisen hermoston kuituja toimittaa prepyloric alue sian mahan peräisin keliakia-kallon suoliliepeen hermosolu kompleksi (CCMG). Kontrollieläimillä, FB-leimattu neuronien ilmaistaan ​​TH (94,85 ± 1,01%), DpH (97,10 ± 0,97%), NPY (46,88 ± 2,53%) ja GAL (8,40 ± 0,53%). ASA ryhmässä, TH ja DβH- positiiviset hermosolujen vähenivät (85,78 ± 2,65% ja 88,82 ± 1,63% vastaavasti). Lisäksi Asa aiheuttama gastriitti lisännyt ilmentymisen NPY (76,59 ± 3,02%) ja GAL (26.45 ± 2,75%) sekä novo-synteesi nNOS (6,13 ± 1,11%) ja LENK (4,77 ± 0,42%) vuonna jäljittää CCMG neuronien. Lisäksi verkosto Cart-, CGRP-, SP-, VIP-, LENK-, nNOS- immunoreaktiivisia (IR) hermo kuituja ympäröi FB-positiiviset perikarya havaittiin sekä ehjä ja ASA-käsiteltyjen eläinten. Tulokset Tämän tutkimuksen osoittavat edistää näiden neuropeptidipitoisuudessa kehitettäessä tai oletettavasti torjunnassa mahalaukun tulehdus.}

Citation: Palus K, Całka J (2015) The Influence of Pitkäaikainen Asetyylisalisyylihappo täydentäminen aiheuttama gastriitti on Neurochemistry of Sympaattinen neuronien Toimittavat Prepyloric alue sian vatsaan. PLoS ONE 10 (11): e0143661. doi: 10,1371 /journal.pone.0143661

Editor: Michael Bader, Max-Delbrück Center for Molecular Medicine (MDC), SAKSA

vastaanotettu: 16 elokuu 2015; Hyväksytty: 06 marraskuu 2015; Julkaistu 25 marraskuuta 2015

Copyright: © 2015 Palus, Całka. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi.

Rahoittajat: julkaisu tukee Puolan valtion komitean tieteellisen tutkimuksen numero 1890 /B /P01 /2010/39 yliopiston Warmia ja Mazury Olsztyn (lakisääteinen tutkimus) myöntävät Ei 15,610. 003-300 ja tietää (Leading National Research Centre) Tieteelliset Consortium "Terve Animal - Safe Food", päätös tiede- ja Higher Education nro 05-1 /KNOW2 /2015.

Kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

kolmenkymmenen viime vuodet ovat osoittaneet yhä nopea kehitys tutkimuksissa hermotuksen ruoansulatuskanavassa. Yleensä vatsan ja suoliston ovat hermottamia sekä neuronien tavataan sisäiset hermosolmu ja näin ollen kuuluttava enteerisen hermosto (ENS) [1, 2], samoin kuin ulkoisten solukeskuksen peräisin sympaattinen, parasympaattisen ja aistien hermosolun [3- 5]. Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että sympaattinen hermosolun eivät ole ainoastaan ​​keskuksia hermoston integraation lisäksi myös hallussaan tärkeitä ominaisuuksia niiden neuronien. Muun muassa ne sisältävät lähentyminen Keski impulsseja, projektio sisäelinten pulssien esi- ja postsynaptinen tasolle, päästä /mahdollistaa keskeinen kuitujen viskeraalisen suojan ja tahdistajaan [6, 7]. Kuitenkin sympaattinen postganglionic neuronit, jotka toimittavat ruoansulatuskanavassa eivät suoraan vaikuta sen toiminnoista mutta niiden vaikutukset kautta ENS [8, 9], tai kuristaa verisuonia, jotka toimittavat ruoansulatuselimiin [10]. Lisäksi vatsan toimintaa välittävät ja moduloidaan runsaasti hermosolujen lähettimien ja neuropeptidejä, mikä rooli säätelyssä liikkuvuuden, hapon erityksen, hormoni julkaisu, paikallista veren virtausta ja limakalvon suojamekanismit [3].

on suuri määrä julkaistujen tutkimusten kuvaavat sympaattinen hermotuksen mahassa, joka perustuu pääasiassa pieniä koe-eläimillä, kuten rotan [10-12], hiiri [13, 14], marsu [15, 16], kani [17] tai kotieläimiä, kuten koira [7] ja kissa [18, 19]. Kirjoittajat raportoivat, että prevertebral hermosolmusta esim. keliakia ganglio ovat tärkein lähde postganglionic sympaattinen hermotuksen vatsaontelon sisäelimet. Kun taas vain yksi perikarya löytyivät paravertebral hermosolmusta esim. sympaattinen ketju hermosolun [16, 20]. Tähän asti suhteellisen vähän tiedetään hermotuksen vatsaan kesysikoja, joka muistuttavat läheisesti ihmisen osalta anatomisia ja fysiologisia ominaisuus [21, 22]. Aiemmat tutkimukset alalla kuvataan ainoastaan ​​ulkoiset hermotuksen pienten ja paksusuoli [4, 20] tai keskittyä enteerinen hermosto [23, 24].

autonomisen hermoston on ominaista korkea plastisuus vastauksena eri patologinen ärsykkeisiin, ja kyky sopeutua muuttuviin ympäristöolosuhteisiin [25, 26]. Tämä mukauttaminen kuuluu muuttuviin kemiallisessa fenotyypin neuronien lisääntynyt kuvaamaan joitakin välittäjäaineiden ja vähentää toisten tai aktivoitumista ilmentymisen aiemmin toimeton geenien [26, 27]. Viime vuosina on ollut yhä enemmän kirjallisuutta, jossa kuvataan muuttuvat kemiallisia koodauksen sympaattisten hermosolujen toimittaa ruoansulatuskanavan aikana ileiitti [20], proliferatiivisen enteropatian [28], koliitti [4] ja aksotomian [29-31]. Lisäksi, jotkut kirjoittajat ehdottavat, että sympaattinen neuronien ei vain muuttaa niiden kemiallinen ominaisuus, mutta myös niillä on kyky uusiutua [32]. Mielenkiintoista on, että jotkut kirjoittajat ehdottavat, että sympaattisen hermoston rooli kuin modulaattori ruoansulatuskanavan tulehdus, koska sympaattisen neuronit täydentävät imukudoksissa. Lisäksi läsnäolo reseptorit sympaattinen välittäjäaineiden immuunijärjestelmän soluissa on vahvistanut [33].

Asetyylisalisyylihappo, tunnettu aspiriini (ASA), on yksi yleisimmin käytetty ei-steroidiset anti-inflammatoriset (NSAID) maailmanlaajuisesti ja on erityisen arvostettu sen terapeuttisia ominaisuuksia. Edut laaja hoitovaihtoehtoja, kuten sydän- ja verisuonitautien sairauksien, oireiden hoitoon erilaisten tulehdustilojen, kasvaimia torjuvaa aktiivisuutta, tai kivunlievitys on tunnettu monia vuosia [34]. Aspiriini estää prostaglandiinin synteesin estämällä entsyymiä syklo-oksygenaasi (COX) kautta peruuttamattomia asetylointi hydroksyyliryhmän 1 seriinitähde [35, 36]. COX kutsutaan myös prostaglandiini endoperoxidase syntaasi on kalvoon sitoutunut hemoprotein ja glykoproteiinin entsyymi, joka katalysoi solukalvon fosfolipidit, mukana synteesi prostanoidien, joka käsittää: prostaglandiini (PG), prostasykliinin (SMM) ja tromboksaanit (TXA) ja on olemassa 3 isoformia (COX-1, -2 ja -3) [34, 37]. Eikosanoidien johdettu katalysoi COX-1, on mukana verihiutaleiden aggregaatiota, suojaa mahan limakalvoa, ja monia muita fysiologisia prosesseja, kun taas muodostettu osallistumista COX-2 on mukana vain kehityksen tulehdusreaktion. COX-3 on transkription jälkeinen modifikaatio COX-1, esiintyy keskushermostossa [38].

Aspiriini on ei-selektiivinen NSAID ja estää entsymaattisen aktiivisuuden COX-1 useita satoja kertaa enemmän tehokkaasti verrattuna COX-2 [38, 39]. Todellakin, sen toiminta aiheuttaa sekä myönteisiä (kuumetta alentava ja tulehdusta) ja myrkyllisiä (maha vahinko) vaikutukset [40]. Jopa pieni annos aspiriinia aiheuttaa pinnallisia vammoja mahalaukun epiteelin ja johtaa epänormaali ionien virtausta lisääntynyt H ^{+ takaisin diffuusion. Lisäksi COX-1, joka johtaa puute prostaglandiinien (PG) mahalaukun ja suolen limakalvon hyväksytään tärkein mekanismi limakalvovauriot jotka sisältävät verenvuotoa, eroosio ja haavaumat [41]. Nämä haitat esiintyvät useimmiten ihmisen antrum ja prepyloric alueella, vaikka ne voidaan myös nähdä, että proksimaalisessa osassa pohjukaissuolen [34]. Lisäksi vähentynyt taso prostaglandiini E2 (PGE2) altistaa limakalvon aiheuttamiin vahinkoihin suolahappoa ja sapen ja vähentää kykyä elvyttämiseen limakalvoilta vähentämällä vapautumisen limaa, inhibitio pinta-ja fosfolipidien synteesissä, vähennys eritys HCO _{3 ja häiriöt veren virtauksen mikroverenkiertoa [40, 42]. Tällä hetkellä vaikutus aspiriinin aiheuttama gastriitti on mukautuva prosessien ja neurokemialliset ominaisuudet sympaattinen neuronien toimittaa vatsa on melko fragmentaarinen.}}

Näin ollen tämä koe suunniteltiin luomaan: 1) lokalisointi ja jakelu sympaattinen neuronien toimittaa prepyloric alue vatsan kesysikoja; 2) neurokemialliset fenotyyppi jäljittää perykarya fysiologisiin tilassa; 3) mahdolliset muutokset neurokemialliset koodaus jäljittää neuronien aikana gastriitti aiheuttama pitkäaikainen asetyylisalisyylihappoa täydentämistä.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

Koemenettely lukien lopettaminen hyväksyttiin Local eettisen komission eläinkokeiden yliopiston Warmia nad Mazuryn Olsztyn (hyväksyntänumeroineen 05/2010). Kaikki Leikkaus suoritettiin tiopentaalinatrium anestesiassa, ja kaikki mahdolliset pyrittiin minimoimaan eläinten kärsimyksiä.

Eläimet ja kirurgisten

Tutkimus suoritettiin kymmenen nuorten naaraiden Large White Polish rotu, noin 8 viikkoa vanhoja ja painavat noin 20 kg. Eläimiä seurataan säännöllisesti valaistusolosuhteissa lämpötilaltaan kontrolloidussa ympäristössä. Niitä ruokittiin kaupallisten viljan seoksen ja vesijohtovettä halun
. Kaikki eläimet olivat preanesthetized kanssa atsaperoni (Stresnil, Jansen Pharmaceutica NV, Belgia, 4 mg /painokilo, im) 15 min ennen hakemuksen tärkeimmistä anestesia, tiopentaalinatrium (Thiopental, Sandoz, Kundl-Rakusko, Itävalta; 10 mg /kg kehon painoa, laskimoon). Jotta paikallistamiseksi sympaattinen solun elimet, siat altistettiin mediaani laparotomy ja sai injektioita fluoresoivan taaksepäin hermosolujen merkkiaine Fast Blue (FB, EMS-CHEMIE, GmbH, Saksa) kautta timantin muotoinen osa (noin 4 cm x 4 cm) mahalaukun etuosan prepyloric seinän kokonaistilavuudessa 50 ui 5% liuos (1 ui per 1 injektio). Jotta vuotoa merkkiaineen ympäröiviin kudoksiin, neula Hamilton ruiskun jätettiin paikoilleen 20s jokaisen injektion jälkeen, ja sen jälkeen pistosalue myöhemmin huuhdeltiin isotonisella suolaliuoksella ja varovasti pyyhittävä sideharsolla. Leikkauksen jälkeen injektion antibiootin (Betamox L. A., ScanVet, Puola, 15 mg /kg ruumiinpainoa, i.m.) ja kipulääkkeiden (meloksikaami-Metacam, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Saksa, 0,4 mg /kg ruumiinpainoa, i.m.) levitettiin. Jotta minimoidaan postoperatiivisesti kipua meloksikaami (Metacam, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Saksa, 0,4 mg /kg ruumiinpainoa i.m.) injektioita ylläpitäjä kerran päivässä. Terveydentilan eläinten seurattiin eläinlääkäri vähintään 4 kertaa päivässä.

Jälkeenpäin siat satunnaistettiin yhteen kahdesta koeryhmän: kontrolli (C ryhmä, n = 5) ja ASA-ryhmään ( n = 5). Eläinten muodostavat ASA-ryhmään, mistä seitsemäntenä päivänä FB injektion annettiin asetyylisalisyylihapon suun kautta (aspiriini, Bayer, 100 mg /kg ruumiinpainoa), 1 h ennen ruokintaa. Gastroskopisten tutkimus suoritettiin jättää vaurioita mahan limakalvon eläimille ASA ryhmän ensimmäisenä päivänä ja vahvistaa gastriitti aiheuttama ASA-hoidon viimeisenä päivänä aspiriinia lisäravinteen (käyttäen video-endoskoopin Olympus GIF 145 kanssa työpituus 1030 mm ja halkaisija 9,8 mm).

Kun 4 viikon elinaika (21 ^{st päivänä ASA hoito), sekä ohjaus ja ASA sikaa syvästi reanaesthetized ja tapettiin yliannos tiopentaalinatrium. Sitten ne sydämen läpi valutettiin 4% puskuroidulla paraformaldehydillä (pH 7,4). Gastriitti eläinten ASA -ryhmässä vahvistettiin histopatologinen tutkimus fragmenttien prepyloric mahalaukun seinämän kerätään perfuusion jälkeen (käyttäen rutiinien histopatologisten menetelmät). Jälkeen perfuusio seuraavat kudokset kerättiin: keliakia-kallon suoliliepeen hermosolu kompleksi (CCMG) (tunnetaan myös keliakian superior suoliliepeen hermosolu kompleksi (CSMG)); rintakehä, lanne ja ristinikaman sympaattinen ketju hermosolun (SChG), kallon ja keski kohdunkaulan hermosolmu, lisämunuaiset hermosolmu pieni hermosolmuun on intermesenteric ja munuaisten punokset, caudal suoliliepeen hermosolmuun (CaMg). Kerätyt kudokset fiksattiin jälkeenpäin upottamalla samaan fiksatiiviin 20 minuuttia, huuhdeltiin fosfaattipuskurilla (pH 7,4) kolmen päivän ajan ja lopuksi on tallennettu 30% puskuroidussa sakkaroosin liuokseen, kunnes ne vajosi astian pohjalle jatkokäsittelyyn .}

immunohistokemia ja tilastojen

Neljätoista-mikrometrin paksuinen kryostaattileikkeiden kudoksen analysoitiin fluoresenssimikroskoopilla (Olympus BX 51, Olympus, Puola), joka on varustettu suodatin asettaa sopiva havainnointi FB, paikallistaa ja laskea sympaattinen neuronien sisältävien merkkiaineen. Määrittää suhteellinen määrä FB-positiivisia perikarya, neuronit laskettiin joka neljäs jakso. Vain neuronien kanssa selvästi näkyvissä ydin pidettiin. Sitten valitut kohdat FB-leimatun perikarya käsiteltiin tavanomaisesta double-merkintöjä immunofluoresenssitekniikkaa, käyttämällä ensisijaista antiseerumia eri lajien ja lajikohtaisia ​​toissijainen vasta-aineita (taulukko 1). Lyhyesti, sen jälkeen, kun ilmakuivauksen huoneenlämpötilassa 45 min. ja kasvaa 0,1 M fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS, pH 7,4, 3 x 10 min.), leikkeet blokattiin seosta, joka sisälsi 10% hevosen seerumia ja 0,1% naudan seerumin albumiinia 0,1 M PBS: ssä, 1% Triton X- 100, 0,05% Thimerosal ja 0,01% natriumatsidia, 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa vähentää epäspesifistä tausta värjäystä. Huuhtelun jälkeen PBS: ssä (3 x 10 min.), Leikkeitä inkuboitiin yli yön huoneen lämpötilassa, jossa ensisijainen antiseerumit tyrosiinihydroksylaasin (TH), dopamiini-β-hydroksylaasin (DpH), neuropeptidi Y (NPY), galaniinin (GAL), hermosolujen typpioksidisyntaasin (nNOS), leu 5-enkefaliinia (LENK), kokaiiniin ja amfetamiinin säännelty transkripti peptidi (CART), kalsitoniinigeeniin liittyvän peptidin (CGRP), P-aine (SP) ja vasoaktiivinen intestinaalinen peptidi (VIP) ( Pöytä 1). Ja jotka sen jälkeen huuhtelu PBS: ssä (3 x 10 min.), Leikkeitä inkuboitiin seoksella sekundäärisiä vasta-aineita (taulukko 1) 1 h ajan huoneenlämpötilassa visualisoida primaaristen vasta-aineiden, joita käytetään tässä tutkimuksessa. Värjäyksen jälkeen leikkeet kiinnitettiin karbonaatti-puskuroidulla glyserolia (pH 8,6) ja kansi-liukastui.

Standard valvontaa eli preabsorption että neuropeptidi antiseerumien sopivalla antigeenillä (20 ug antigeeniä /ml laimennettua antiseerumia, kaikki antigeenejä ostettu Peninsula, Sigma tai ABD Serotec) ja laiminlyönti sekä korvaaminen kaikkien ensisijainen antiseerumeita kuin immuuniseerumeilla tehtiin testata immunohistokemiallista merkitsemistä. Ei ollut fluoresenssia havaittiin kaikissa näissä ohjaus värjäykset, mikä vahvistaa menetelmän spesifisyys ja vasta sovelletaan.

Sitten leikkeet tutkitaan Olympus BX51 mikroskoopilla, joka on varustettu sopivilla suodattimilla AlexaFluor 488, AlexaFluor 546, ja Fast Blue, ja kuvat olivat kiinni digitaalikameralla kytketty tietokoneeseen, jossa on Olympus Cell F kuvan analysointi ohjelmisto (Olympus, Tokio, Japani). Jaksot värjättiin sama yhdistelmä antigeenejä määrätty määrällisiä tutkimuksia erotettiin vähintään 100 um, jotta vältetään kaksinkertainen analyysi hermosolujen somata. Numero FB-positiivisia perikarya lasketaan jokaiselle vasta-aineiden yhdistelmä on yli 200 neuronien eläintä kohti. Tiedot molemmista ryhmistä yhdistettiin, tilastollisesti analysoidaan Statistica- 10 ohjelmistoa (StatSoft Inc., Tulsa, OK, USA), ja esitettiin keinona ± keskivirhettä (SEM). Merkittäviä eroja arvioitiin käyttäen Studentin t-testiä itsenäiseen näytteistä (* P < 0,05 ** P < 0,001). Lisäksi semi-kvantitatiivinen arviointi tiheys hermosyiden immunoreaktiivisia jokaiselle aineelle tutkittu, mielivaltainen mittakaavassa käytettiin, jossa (-) - puuttuminen kuituja; (+) - Yksittäisiä kuituja; (++) - Harvinainen hermoston kuituja; (+++) - Kuvaa hyvin tiheä hermo kuituja.

Tulokset

Fast Blue jäljittämistä ja immunohistokemia

Fast Blue- sisältävien hermosolujen elinten havaittiin yksinomaan CCMG monimutkainen, kun taas loput esi- ja paravertebral sympaattinen hermosolmuun puuttui FB- leimattuja soluja. Keskimäärin CCMG monimutkainen sisälsi 1615 ± 20.73 FB + neuronien ohjaus ja 1644 ± 38.03 hermosolujen ASA-ryhmässä, vastaavasti. Valtaosa leimattuja neuronien sijaitsi alueella keliakian napojen CCMG monimutkainen, vain yhden merkitty somata toisessa osassa CCMG on tunnistettu. Solukeskuksen soikea, pyöreä tai moninapaista lyhyillä dendrites ja keskeisellä paikalla tumaan ja mitataan 20-45 um. Joissakin tapauksissa yksi pitkä Axon kaltainen prosessi jäljittää solusta havaittiin.

kontrollieläimiin kaksinkertaisen merkintöjä immunohistokemia paljasti, että suurin osa FB + solut olivat immunoreaktiivisia TH (94,85 ± 1,01%) ja DpH (97,10 ± 0,97%). Lisäksi kaikki TH positiivinen solu elimet olivat immunoreaktiivisia ja DpH mitä vahvistivat voimakkaasti katekolaminergistiset luonteen (kuvio 1A, 1B, 1C ja 1D). Sovellus vasta-aineiden neuropeptidi Y kuvattu, että NPY immunoleimaus havaittiin 46.88 ± 2,53%: n FB- leimatun perikarya (kuvio 1 E, 1F, 1G ja 1H). Lisäksi toinen väestö FB- positiivinen neuronien sisälsi GAL vuonna 8,40 ± 0,53% (kuvio 1I, 1J, 1K ja 1L). Lisäksi GAL-positiivinen hermo kuituja (+) muuten muodostettu muodostumat ympäröivä Gal- IR solun elimet. Toisaalta yksikään FB + neuronien sisälsi nNOS, LENK, CART, SP ja VIP. Kuitenkin kaikki nämä välittäjäaineiden oli läsnä hermosyiden ympäröivä jäljittää perikarya. Suuri määrä suonikohjut OSTOSKORIIN-positiivisten hermo kuituja (+++) tiiviisti ympäröi FB-leimatun neuronien ja muodostivat kori kaltaisia ​​rakenteita ympärille (kuvio 2A, 2B, 2C ja 2D). Mikroskooppinen analyysi kohdat inkuboitiin anti-CGRP vasta paljasti tiheä CGRP-säikeet (+++) usein lokalisoitu lähistöllä FB-positiivisia soluja (kuvio 2E, 2F, 2G ja 2H). Vain yhden suonikohjuja tai tavallinen nNOS-IR (+) (kuvio 1 M, 1 N, 1O ja 1P), LENK-IR (++) (kuvio 1 R, 1 S, 1T ja 1U), SP-IR (+) (kuvio 2I, 2J, 2K ja 2L) ja VIP-IR (+) (kuvio 2M, 2N, 2O ja 2P) hermosyiden, muodostaen joskus pieni niput olivat hajallaan ganglion välillä jäljittää solun elinten (taulukko 2).

gastriitti aiheuttama pitkäaikainen asetyylisalisyylihappoa täydentämistä muuttanut koodaus malleja monien FB + soluja. Väestöstä TH-positiivisten ja DpH-positiivisten solujen väheni (taulukko 3). Mikroskooppinen tarkastelu kohdat osoittivat, että 85,78 ± 2,65% oli TH-positiivisia, kun taas 88,82 ± 1,63% of FB- jäljittää neuronien ilmaista DpH immunoreaktiivisuus (kuvio 3A, 3B, 3C ja 3D). Lisäksi säätely ylöspäin NPY-IR neuronien 76,59 ± 3,02% oli myös tilastollisesti merkitsevä (kuvio 3E, 3F, 3G ja 3H). Merkittävin ero kemiallisessa koodaus jäljittää sympaattinen neuronien välillä ohjaus ja ASA-käsiteltyjen sikojen mukana hyvin lisääntynyt määrä GAL (enintään 26.45 ± 2,75%) (kuvio 3I, 3J, 3K ja 3L). FB- positiiviset solut, jotka sisältävät GAL luovutettu myös lukuisat, lähinnä varicose GAL-IR hermo kuituja. Lisäksi solut, jotka sisältävät nNOS vuonna 6,13 ± 1,11% (kuvio 3M, 3N, 3 O ja 3P) ja LENK in 4,77 ± 0,42% (kuvio 3R, 3S, 3T ja 3U) havaittiin vain Asa hoidetuilla eläimillä. Samanlaisia ​​kontrollieläimiin, jäljittää perikarya eivät olleet immunoreaktiivisia koriin, CGRP, SP ja VIP mutta hermosyiden sisältäviä välittäjäaineet havaittiin lähietäisyydellä FB- leimatun somata ja muistuttivat havaittiin kontrolliryhmässä.

gastroskopisten ja histopatologisia tutkimuksia

gastroskopisten tutkimus suoritetaan ensimmäisenä koepäivänä ulkopuolelle vaurioista mahan limakalvon eläimille sekä ohjaus ja ASA-ryhmään. Kuitenkin sama tutkimus suoritetaan viimeisenä päivänä vahvisti gastriitti aiheuttamaa asetyylisalisyylihappo täydentämistä. Makroskooppisia muutoksia kuten: hyperemia, petekia, pinnallinen eroosiot ja pieniä haavoja havaittiin paitsi mahalaukun, mutta myös pohjukaissuolen limakalvoa. Histopatologisissa fragmenttien seinän mahalaukun prepyloric alueen paljastaa mikroskooppisia muutoksia, kuten: hyperemia limakalvon, syvä eroosiot, foliculosis, leviämisen neutrofiilit ja eosinofiilinen infiltraatio ulottuu submukoosassa (kuvio 4A, 4B, 4C ja 4D).

keskustelu

Tämä on ensimmäinen raportti osoittaa, tarkka lokalisointi, morfologia ja kemiallinen koodaus sympaattinen neuronien Projektinamme prepyloric alue sian mahan. Päälähde postganglionisten hermosyiden toimittaa tämän alueen peräisin CCMG monimutkainen, kun taas esi- ja paravertebral sympaattinen hermosolmuun olivat vailla FB- leimattujen solujen. Nämä tulokset ovat yhdenmukaisia ​​saatuja tietoja rotan [3, 12], marsu [15, 16], ja koira [7] ja antaa lisää näyttöä siitä hallitseva merkitys CCMG neuronien vatsassa hermotuksen. Tästä huolimatta pieniä panos sympaattinen hermotuksen mahan rotan ja marsun tuli rinta ketjun hermosolmusta. Neuronien toimittaa mahalaukun seinämän rotan paikannettiin T _{1 L 3 oikeassa ketjussa, ja T 2 L 3 vasemmassa vastaavasti [10], kun taas solu elimet hermoissa rotille mahalaukun limakalvo löydettiin T 6 T 9 sympaattinen ketju hermosolun [3]. Vuonna marsu neuronien sijaitsevat kaikissa rintakehä ketjussa hermosolun olivat ulkonevat vatsa [16]. Sen sijaan tämä tutkimus osoittaa, että nämä ganglioissa ei ole mukana hermotuksen prepyloric alueen sian mahan, todennäköisesti ne hermottavat muiden osien vatsaan, joka vaatii lisätutkimuksia. Lisäksi tämä havainnot korreloivat hyvin mainittujen tutkimusten postulating ominaisuus topografinen järjestely neuronien, suhteessa niiden kohdekudoksissa, sian CCMG monimutkainen [43].}

Tämä tutkimus on paljastaa, että valtaosa FB- positiivinen neuronien kontrolliryhmässä oli voimakkaasti katekolaminergistiset luonnetta, joka käy ilmi samanaikaisesti TH ja DβH- immunoreaktiivisuus. Nämä tulokset korreloivat hyvin tutkimukset kuvaavat adrenergisten useimmiten luonteeltaan CCMG neuronien rotan, marsun, koiran ja kesysikoja [10, 16, 44, 45]. Vain pieni määrä jäljittää CCMG neuronien puuttui näitä entsyymejä, mikä voi osoittaa, että ne ovat väestö ei-adrenergistä, mahdollisesti kolinergisiin neuroneihin, mikä on yhtäpitävä aikaisempien päätelmien histokemia of CCMG sekä marsun ja kotimaisten sikojen [45, 46]. Lisäksi tämä data osoittaa, että merkittävä määrä FB- leimatun perikarya ilmaisi NPY immunoreaktiivisuus. Kirjallisuudessa olevat tiedot viittaavat siihen, että NPY pidetään suurten peptidergiset lähetin molemmissa: sympaattisen ja parasympaattisen hermoston [47]. Nimittäin, NPY kuten hermosolujen ja hormonaaliset säädin olla tärkeä rooli nisäkkään fysiologiaan ruoansulatuskanavassa, kuten estämällä suolen liikkuvuuden, mahalaukun tyhjenemistä, erityksen ja haiman exocrine eritystä. Lisäksi tämä peptidi vaikuttaa verisuonia ja osallistuu sääntely suoliston verenkiertoa [48, 49]. Toisaalta, NPY havaittiin myös sian CCMG neuronien Projektinamme sykkyräsuolen [50]. Lisäksi tämä tutkimus osoitti, että Gal- IR neuronien edustavat osaa retrogradisesti leimattujen solujen. Se hyvin korreloi siihen, että galaniini- on biologisesti aktiivinen neuropeptidi, jossa on laaja levinneisyys keskus- ja ääreishermoston sekä perifeerisissä kudoksissa monien lajien [51-53]. Tällä ruoansulatuskanavan tasolla, galaniini- estää mahahapon eritystä, vapauttaa lukuisia haiman peptidejä, säätelee limakalvon epiteelisolujen imeytymistä ja moduloi motiliteettia ruoansulatuskanavassa [54]. Galaniini kykenee sen fysiologinen rooli vaikuttamalla yksi kolmesta eri alatyyppiä G-proteiinikytkettyjen reseptorien (GAL-R1, GAL-R2 ja GAL-R3) laajalti monissa kudoksissa ja elimissä [52].

Vaikka mikään FB- positiivinen neuronien sisälsi nNOS, LENK, cART, CGRP, SP ja VIP, kaikki nämä välittäjäaineiden oli läsnä hermosyiden ympäröivä jäljittää perikarya. Lukuisat suonikohjut OSTOSKORIIN-positiivisten hermo kuituja tiiviisti ympäröi FB-positiivisten neuronien ja muodostivat kori- rakenteita ympärille. Kokaiiniin ja amfetamiini säädelty transkripti (CART) peptidi löydettiin vuonna 1981 lampaiden hypotalamuksen on kuvattu eri osa GI-kanavan useiden nisäkäslajien, ihminen mukaan lukien [2, 55, 56]. Huolimatta siitä, että rooli Tämän peptidin suolen toiminto ei ole täysin vakiintunut, jotkut kirjoittajat ehdottavat, että OSTOSKORIIN osallistuu säätelyyn suoliston liikkuvuutta, esto ruokinta vähentäminen mahahapon eritystä, paheneminen koolonin liikkuvuutta [57]. Tähän mennessä, muutokset määrä OSTOSKORIIN-positiivisten hermostunut rakenteiden ENS erilaisissa patologisia tekijöitä kuvattiin, mikä voisi viitata siihen osallistuminen OSTOSKORIIN eloonjäämisessä ja neuroprotection [58, 59]. CGRP ja SP pidetään pronociceptive aistinvarainen neuropeptides [60]. Lukumäärä ja jakauma SP-IR ja CGRP-IR kuidut ovat hyvin samanlaisia ​​kuin joita on jo kuvattu Lakomy et al. [45], että kuitujen ympäröivän TH-positiivisten neuronien sian CCMG. Ne ovat yksi lähteistä viscerofugal ennusteiden suolen seinämän tai peräisin DRG afferenttien neuronien, koska nämä nimenomaan koodattu neuronit kuvattiin enteerinen hermosolmu [55, 61] sekä ovat levinneet laajalti aistineuroneihin [5]. Lisäksi yhden varicose VIP-IR hermo kuituja hajallaan hermosolu välillä jäljittää solurungoissa havaittiin. VIP on todennäköisesti osallisena suolistossa suoliston estävä refleksirata ja esiintyy enteerisen afferentit hermottavat CCMG [45]. Lopuksi, lähde nNOS-IR ja LENK-IR kuituja visualisoida tässä tutkimuksessa voisi olla preganglionic neuronien sijaitsevat intermediolateral ytimen lannerangan selkäytimen tai DRG neuronien. Lähellä kuitujen esiin tässä tutkimuksessa suhteessa leimattiin retrogradisesti CCMG neuronien voi ilmoittaa välilliset vaikutukset Tämän peptidin sympaattinen hermotuksen vatsaan. Kuitenkin kysymys vaikutuksista näiden kuitujen sympaattinen neuronien toimittaa prepyloric alueen mahan vielä selvittämättä.

Huolimatta siitä, että tulehdus mahalaukun limakalvon aiheuttama pitkäaikainen asetyylisalisyylihapon lisäravinteiden ei vaikutus neuronien lukumäärä hermoissa tutkituissa alueella vatsan, leimattiin retrogradisesti sympaattinen soluilla paljon plastisuus niiden neuropeptidien fenotyyppiin. ASA aiheuttama gastriitti johti merkittäviin muutoksiin kemiallinen koodaus jäljittää neuronien, vähentämällä tuotantoa katekoliamiinivarastoja synteesi suolikanavan entsyymien ja ylös-säätely synteesin neuropeptidipitoisuudessa osallistuu hermosolujen suojamekanismit (NPY, GAL, nNOS, LENK). Nämä tiedot ovat yhtä mieltä siitä, että uudistava sympaattinen neuronien väliaikaisesti alas-säätelemään joidenkin välittäjäaineiden erityisesti TH [32] ja alkaa tuottaa välittäjäaineiden mukana puolustuksen selviytymisen [31].

NPY on syntymässä säätelijänä tulehduksen, mukana autoimmuniteetin, astman, syövän ja monien ruoansulatuskanavan häiriöt, kuten melabsorption, lyhyen suolen, tulehduksellinen suolistosairaus ja haimatulehdus. NPY, kuten tulehduksia peptidi, osallistuu tulehdusreaktio rekrytoimalla epäkypsiä dendriittisoluja ja edistämällä Th2 polarisaatio [49]. NPY voi myös olla mukana tulehdusreaktio kautta eriyttäminen T-auttajasolujen, monosyyttien välittäjänä julkaisu, luonnollinen tappaja [NK] soluaktivaation ja immuunijärjestelmän solujen uudelleenjako mikä vahvisti aikaisemmat raportit kaksisuuntaisen ylikuulumisen hermoston ja immuunijärjestelmän ruoansulatuskanavassa [62, 63 ]. Nämä havainnot ovat samanlaisia ​​kuin aiempien tutkimusten, joissa määrä NPY-positiivisten sympaattisten hermosolujen olivat koholla aikana eri patologisiin tiloihin, mukaan lukien proliferatiivisen enteropatian ja sian koliittia [4, 28]. Lisäksi kokeilu ihmisen kuvattu lisääntymiseen NPY- IR hermopäätteitä limakalvolla aikana krooninen gastriitti aiheuttama Helicobacter pylori
[62]. Tämä viittaa siihen, että NPY on tärkeä hermosoluja suojaava tekijä, joka näyttelee roolia selviytymisen ja uudistumista vaurioituneiden hermosolujen sisällä tulehdusta. Kiinnostavaa kyllä, NPY voidaan myös erittää jotkut Immunosyyttien, mikä saattaa viitata siihen, että NPY on suoraan mukana neurogeeninen tulehdus [64]. Kuitenkin tarkka toiminta NPY hermosolujen vastauksena aikana ASA aiheuttama gastriitti sioilla yhä selittämättä ja vaatii lisätutkimuksia.

Merkittävin ero immuhistochemical fenotyypin jäljittää neuronien oli hyvin lisääntynyt määrä Gal- immunoreaktiivisten solujen elinten Asa ryhmässä eläimillä. Galaniini on kiistatta harjoittaa sääntelyä tulehduksellisten prosessien. Todellakin, galaniinin pidetään säätelijänä pro-inflammatoristen sytokiinien, koska anto galaniinin on kasvanut TNF-α, IL-1α: n ja IL-8: n ihmisen keratinosyyttien fysiologinen [65]. Tähän mennessä korotukset galaniinin ilmaisun hermo rakenteita sekä autonomisen ja enteerisen hermoston, havaittiin aikana kemiallisesti indusoidun paksusuolentulehduksen [4, 51] ja proliferatiivisen enteropatian [28] sioissa, krooninen divertikuliitti ihmisen [66] ja enteerisen salmonellatartunnan hiirillä [67]. Mielenkiintoista on, Talero et ai.

• PLoS ONE: kliinis ominaisuudet ja Survival Outcomes of Primary sinettisormus cell carcinoma vatsassa: retrospektiivinen analyysi Yhden Centerin tietokantaa
• PLoS ONE: Konjugoitu linolihappo täydentäminen alle runsasrasvainen ruokavalio moduloi Vatsa Protein Expression and suolistomikrobistoon aikuisen hiiren