PLOS ONE: La influencia de la gastritis inducida por la suplementación prolongada ácido acetilsalicílico en la neuroquímica de las neuronas simpáticas El suministro de prepilóricas Región del porcino Stomach

Extracto

Este experimento fue diseñado para establecer la localización y el fenotipo neuroquímico del simpático neuronas que suministran área prepilórica del estómago porcino en un estado fisiológico y durante gastritis inducida por ácido acetilsalicílico (ASA). Con el fin de localizar el simpático perikarya los estómagos de tanto el control y el ácido acetilsalicílico tratados (grupo ASA) los animales fueron inyectados con neuronal trazador retrógrado Fast Blue (FB). Siete días después de la inyección FB, los animales se dividieron en un grupo control y los suplementos de ASA. El grupo ASA se le dio 100 mg /kg de peso corporal de ASA por vía oral durante 21 días. En la 28 ^{º día todos los cerdos fueron sacrificados con una sobredosis de anestésico gradual. A continuación, las secciones de criostato de catorce micrómetros de espesor fueron procesados ​​para su rutina de inmunofluorescencia doble etiquetado, utilizando antisuero primario dirigido hacia la tirosina hidroxilasa (TH), dopamina β-hidroxilasa (DβH), neuropéptido Y (NPY), galanina (GAL), el óxido nítrico neuronal sintasa (nNOS), leu-encefalina 5 (Lenk), la cocaína y la anfetamina péptido regulado transcripción (CART), la calcitonina péptido relacionado con el gen (CGRP), la sustancia P (SP) y el péptido intestinal vasoactivo (VIP). Los datos obtenidos en este estudio indican que las fibras nerviosas simpáticas postganglionares que suministran área prepilórica del estómago porcino se originan a partir del complejo mesentérica ganglio celíaco-craneal (CCMG). En los animales de control, las neuronas marcadas-FB expresan TH (94.85 ± 1.01%), DβH (97,10 ± 0,97%), el NPY (46.88 ± 2.53%) y GAL (8,40 ± 0,53%). En el grupo ASA, se redujeron las células nerviosas positivas TH y DβH- (85,78 ± 2,65% y 88,82 ± 1,63%, respectivamente). Por otra parte, gastritis inducida ASA- resultó en el aumento de expresión de NPY (76,59 ± 3,02%) y GAL (26,45 ± 2,75%), así como el novo-síntesis de nNOS (6,13 ± 1,11%) y LENK (4,77 ± 0,42%) en CCMG neuronas trazadas. Además, una red de carrito-, CGRP-, SP-, VIP-, LENK-, se observaron fibras nNOS- inmunorreactiva (IR) de los nervios que rodean los perikarya FB-positivos tanto en los animales intactos y tratados con ASA. Los resultados de este estudio indican la implicación de estos neuropéptidos en el desarrollo o presumiblemente neutralización de la inflamación gástrica}

Visto:. Palus K, Całka J (2015) La influencia de la gastritis inducida por la suplementación prolongada ácido acetilsalicílico en la neuroquímica del el suministro de las neuronas simpáticas prepilóricas región del estómago porcino. PLoS ONE 10 (11): e0143661. doi: 10.1371 /journal.pone.0143661

Editor: Michael Bader, Centro Max Delbrück-de Medicina Molecular (MDC), Alemania |

Recibido: 16 Agosto, 2015; Aceptado: 6 de Noviembre de 2015; Publicado: 25 Noviembre 2015

Derechos de Autor © 2015 Palus, Całka. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del papel

Financiación:. publicación apoyada por el Comité de Estado polaco de investigaciones Científicas número 1890 /B /P01 /2010/39, la Universidad de Warmia y Mazuria de Olsztyn (investigación legal), no otorgan 15.610. 003-300 y saber (Leading Centro Nacional de Investigación) Científico del Consorcio "animal saludable - Alimentos sanos", la decisión del Ministerio de Ciencia y Educación Superior Nº 05-1 /nosotros2 /2015

Conflicto de intereses: los autores. han declarado que no existen intereses en competencia.

Introducción

los últimos treinta años han mostrado avances cada vez más rápidos en los estudios de inervación del tracto gastrointestinal. En general, el estómago y el intestino están inervados por las neuronas tanto se encuentran dentro de los ganglios intramural y por lo tanto pertenecen a sistema nervioso entérico (ENS) [1, 2], así como por los cuerpos celulares extrínsecos originarios de los ganglios del simpático, parasimpático y sensorial [3- 5]. Investigaciones recientes han revelado que los ganglios simpáticos no son sólo los centros de integración nervioso pero también la posesión de propiedades importantes por sus neuronas. Entre otros se incluyen la convergencia de los impulsos centrales, la proyección de los impulsos viscerales en los niveles de pre y post-sináptica, el acceso a /lo que permite que las fibras centrales de protección visceral y actividad de marcapasos [6, 7]. Sin embargo, las neuronas postganglionares simpáticas que irrigan el tracto gastrointestinal no influyen directamente en sus funciones, pero ejercen sus efectos a través de la ENS [8, 9], o constreñir las arterias que irrigan el órgano digestivo [10]. Por otra parte, la función del estómago es mediada y modula por un montón de transmisores y neuropéptidos neuronales, las cuales juegan un papel en la regulación de la motilidad, secreción de ácido, la liberación de hormonas, el flujo sanguíneo local y los mecanismos de defensa de la mucosa [3].

Hay un gran volumen de estudios publicados que describen la inervación simpática del estómago, basada principalmente en animales de laboratorio pequeños, tales como la rata [10 a 12], de ratón [13, 14], conejillo de indias [15, 16], conejo [17] o los animales domésticos, como perros [7] y el gato [18, 19]. Los autores informan que los ganglios prevertebral por ejemplo. ganglio celíaco constituyen la principal fuente de inervación simpática posganglionares de las vísceras abdominales. Mientras que sólo se encontraron perikarya individuales en los ganglios paravertebrales por ejemplo. ganglios de la cadena simpática [16, 20]. Hasta ahora, se sabe relativamente poco sobre la inervación del estómago en el cerdo doméstico, que se parecen mucho a que en el ser humano en relación con característica anatómica y fisiológica [21, 22]. Estudios previos en el campo sólo describen la inervación extrínseca del intestino delgado y grueso [4, 20] o se centran en el sistema nervioso entérico [23, 24].

El sistema nervioso autónomo se caracteriza por una alta plasticidad en respuesta a diversos estímulos patológicos, y la capacidad de adaptarse a las condiciones ambientales cambiantes [25, 26]. Esta adaptación implica cambiar en el fenotipo química de las neuronas por el aumento de expresión de algunos neurotransmisores y la reducción de otros o activación de la expresión de genes previamente inactivos [26, 27]. En los últimos años, ha habido una creciente cantidad de literatura que describe el cambio de la codificación química de las neuronas simpáticas que abastecen el tracto gastrointestinal durante ileitis [20], enteropatía proliferativa [28], colitis [4] y axotomía [29-31]. Además, algunos autores sugieren que las neuronas simpáticas no sólo cambian su característica química, pero también presentan la capacidad de regenerar [32]. Curiosamente, algunos autores sugieren que el sistema nervioso simpático juegan un papel como un modulador de la inflamación gastrointestinal, ya que las neuronas simpáticas suministran los tejidos linfoides. Por otra parte, la presencia de los receptores para neurotransmisores simpáticos en las células inmunes se han confirmado [33].

Ácido acetilsalicílico, conocido como la aspirina (ASA), es uno de los más comúnmente utilizados no esteroide anti-inflamatorio fármacos (AINE) en todo el mundo y es especialmente valorada por sus propiedades terapéuticas. Los beneficios de las amplias opciones terapéuticas, como la prevención de las enfermedades cardiovasculares, el tratamiento de los síntomas de la variedad de condiciones inflamatorias, actividad antitumoral, o el alivio del dolor han sido conocidos durante muchos años [34]. La aspirina previene la síntesis de prostaglandinas mediante la inhibición de la enzima ciclooxigenasa (COX) a través de la acetilación irreversible del grupo hidroxilo de 1 residuo de serina [35, 36]. La COX llama también como prostaglandina endoperoxidasa sintasa es una hemoproteína unido a la membrana y la enzima glicoproteína que cataliza la conversión de los fosfolípidos de la membrana celular, que participan en la síntesis de prostanoides, que comprende: prostaglandina (PG), prostaciclina (PGI) y los tromboxanos (TXA) y existe como 3 isoformas (COX-1, -2 y -3) [34, 37]. Los eicosanoides derivados de una reacción catalizada por la COX-1, están implicados en la agregación plaquetaria, la protección de la mucosa gástrica, y muchos otros procesos fisiológicos, mientras que los formados con la participación de la COX-2 están implicados sólo en el desarrollo de la respuesta inflamatoria. COX-3 es una modificación post-transcripcional de la COX-1, que se producen en el sistema nervioso central [38].

La aspirina es un AINE no selectivo e inhibe la actividad enzimática de la COX-1 varios cientos de veces más efectivamente, en comparación con la COX-2 [38, 39]. De hecho, sus resultados de la acción de ambos (lesiones gastrointestinales) (antipirético y antiinflamatorio) y tóxicos efectos beneficiosos [40]. Incluso pequeñas dosis de aspirina induce lesión superficial en el epitelio gástrico y conduce al flujo de iones anormal con un aumento de H ^{+ back difusión. Por otra parte, la inhibición de la COX-1, lo que lleva a la deficiencia de las prostaglandinas (PGs) en la mucosa gástrica e intestinal, es aceptada como el principal mecanismo de daño de la mucosa que incluyen hemorragias, erosiones y úlceras [41]. Estos daños se producen con mayor frecuencia en antro humano y el área prepilórica, aunque también se pueden ver en la parte proximal del duodeno [34]. Por otra parte, la disminución de nivel de prostaglandina E2 (PGE2) expone la membrana mucosa a los daños causados ​​por el ácido clorhídrico y la bilis, y reduce la capacidad de regeneración de las células de la mucosa por la disminución de la liberación de mucosidad, una inhibición de la síntesis de agentes tensioactivos y fosfolípidos, la reducción en la secreción de HCO _{3 y trastornos del flujo sanguíneo en la microcirculación [40, 42]. Actualmente, la influencia de la gastritis inducida por aspirina en los procesos de adaptación y las propiedades neuroquímicos de las neuronas simpáticas que suministran estómago es más bien fragmentaria}}

Por lo tanto, este experimento se diseñó para establecer:. 1) la localización y distribución de las neuronas simpáticas que suministran prepilórica el área del estómago de cerdo doméstico; 2) el fenotipo neuroquímico de perykarya trazadas en estado fisiológico; 3) los posibles cambios en la codificación neuroquímico de neuronas trazadas durante la gastritis inducida por la suplementación con ácido acetilsalicílico prolongado.

Materiales y Métodos

Ética Declaración

Se aprobó el procedimiento experimental incluyendo la eutanasia de los animales por la Comisión de ética local de experimentación con animales en la Universidad de Warmia y Mazury en Olsztyn nad (los números de permisos 05/2010). Toda la cirugía se realizó bajo anestesia con tiopental sódico, y se hicieron todos los esfuerzos posibles para minimizar el sufrimiento de los animales.

Animales y procedimientos quirúrgicos

El estudio se realizó en diez cerdos menores femeninos de la Large White polaco raza, aproximadamente 8 semanas de edad y con un peso aprox 20 kg. Los animales se mantuvieron bajo condiciones de iluminación regulares en un entorno de temperatura controlada. Fueron alimentados por mezcla de grano comercial y agua del grifo ad libitum
. Todos los animales fueron preanesthetized con azaperona (Stresnil, Jansen Pharmaceutica NV, Bélgica, 4 mg /kg de peso corporal, im) 15 min antes de la aplicación del anestésico principal, tiopental sódico (tiopental, Sandoz, Kundl-Rakúsko, Austria; 10 mg /kg de peso corporal, administrados por vía intravenosa). Con el fin de localizar los cuerpos celulares simpáticos, los cerdos se sometieron a laparotomía mediana y recibieron inyecciones de trazador neuronal retrógrado fluorescente Fast Blue (FB, EMS-Chemie, GmbH, Alemania) en la parte en forma de diamante (ca. 4 cm x 4 cm) de la pared anterior prepilórica estómago en un volumen total de 50 l de una solución al 5% (1 l por 1 inyección). Para minimizar las fugas del trazador en los tejidos circundantes, la aguja de la jeringa Hamilton se deja en su lugar durante 20 seg después de cada inyección, y después de ello la zona de inyección se lavó posteriormente con solución salina isotónica y suavemente se limpió con una gasa. Después de las inyecciones de cirugía del antibiótico (Betamox L. A., ScanVet, Polonia, 15 mg /kg de peso corporal, i.m.) y analgésicos (meloxicam-Metacam, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Alemania, 0,4 mg /kg de peso corporal, i.m.) se aplicaron. Con el fin de minimizar el dolor después de la cirugía el meloxicam (Metacam, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Alemania, 0,4 mg /kg de peso corporal, i.m.) inyecciones se administraron una vez al día. El estado de salud de los animales se controló mediante veterinario al menos 4 veces al día

Después, los cerdos se asignaron al azar a uno de dos grupos experimental:. Control (grupo C, n = 5) y el grupo ASA ( n = 5). Los animales que constituyen el grupo ASA, desde el séptimo día después de la inyección FB, se les dio ácido acetilsalicílico por vía oral (aspirina, BAYER; 100 mg /kg de peso corporal), 1 h antes de la alimentación. gastroscopia se realizó para excluir lesiones en la mucosa gástrica en los animales del grupo de AAS en el primer día y para confirmar la gastritis causada por ASA-tratamiento en el último día de la administración de suplementos de ácido acetilsalicílico (utilizando un video-endoscopio Olympus GIF 145 con longitud de trabajo 1030 mm y diámetro de 9,8 mm)
.

Después de 4 semanas de tiempo de supervivencia (21 ^{er día de tratamiento ASA), tanto de control como cerdos ASA estaban profundamente reanaesthetized y se sacrificaron por una sobredosis de tiopental sódico. Luego, fueron perfundidos transcardialmente con paraformaldehído al 4% tamponada (pH 7,4). Gastritis en animales del grupo ASA se confirmó por examen histopatológico de fragmentos de la pared del estómago prepilórica recogido después de la perfusión (utilizando métodos histopatológicos de rutina). Con posterioridad a la perfusión, se recogieron los siguientes tejidos: el complejo celíaca-craneal mesentérica ganglio (CCMG) (también conocido como el complejo mesentérica superior ganglio celíaco (GAM)); torácica, lumbar y sacra ganglios de la cadena simpática (SCHG), ganglios craneal y cervical media, ganglios suprarrenal, pequeños ganglios de los plexos intermesenteric y renales, ganglios mesentéricos caudal (leva g). tejidos recogidos se post-fijaron por inmersión en el mismo fijador durante 20 minutos, se enjuagó en tampón de fosfato (pH 7,4) durante tres días y, finalmente, se han almacenado en una solución de sacarosa tamponada 30% hasta que se hundió hasta el fondo del recipiente para su posterior procesamiento .}

la inmunohistoquímica y estadísticas

secciones de criostato de catorce micrómetros de espesor de las muestras de tejido fueron analizadas en un microscopio de fluorescencia (Olympus BX 51, Olympus, Polonia), equipado con un conjunto de filtros adecuados para observación de CF, para localizar y contar las neuronas simpáticas que contienen el trazador. Para determinar el número relativo de perikarya FB-positivo, las neuronas se contaron en cada cuarto sección. Sólo se consideraron las neuronas con el núcleo claramente visible. A continuación, las secciones seleccionadas con perikarya etiquetados-FB se procesaron para la técnica de inmunofluorescencia doble etiquetado de rutina, utilizando antisueros primario elevado en diferentes especies y especies específicas de anticuerpos secundarios (Tabla 1). En resumen, después de secado al aire a temperatura ambiente durante 45 min. y el aumento en solución salina 0,1 M tamponada con fosfato (PBS, pH 7,4;. 3 x 10 min), las secciones se bloquearon con una mezcla que contiene 10% de suero de caballo y 0,1% de albúmina de suero bovino en 0,1 M PBS, 1% de Triton X- 100, 0,05% de timerosal y 0,01% de azida de sodio durante 1 h a temperatura ambiente para reducir la tinción de fondo no específica. Después de lavado en PBS (3 x 10 min.), Las secciones se incubaron durante la noche a temperatura ambiente con antisuero primario elevado contra la tirosina hidroxilasa (TH), dopamina β-hidroxilasa (DβH), neuropéptido Y (NPY), galanina (GAL), neuronal de óxido nítrico sintasa (nNOS), leu-encefalina 5 (Lenk), la cocaína y la anfetamina péptido transcripción regulada (CART), la calcitonina péptido relacionado con el gen (CGRP), la sustancia P (SP) y el péptido intestinal vasoactivo (VIP) ( Tabla 1). Tras el aclarado posterior en PBS (3 x 10 min.), Las secciones se incubaron con la mezcla de anticuerpos secundarios (Tabla 1) durante 1 h a temperatura ambiente para visualizar anticuerpos primarios utilizados en este estudio. Después de la tinción, las secciones se montaron con glicerol carbonato de búfer (pH 8,6) y la cubierta con engobe.

Los controles estándar, es decir, preabsorption de los antisueros neuropéptido con antígeno apropiado (20 g de antígeno /ml antisuero diluido, todos los antígenos adquirieron de Peninsula, Sigma o AbD Serotec) y la omisión, así como la sustitución de todos los antisueros primario por suero no inmune se llevaron a cabo para poner a prueba el marcaje inmunohistoquímico. No hubo fluorescencia observada en todas estas tinciones de control, lo que confirma la especificidad de la metodología y anticuerpo aplicado.

Las secciones se examinan con un microscopio Olympus BX51, equipada con filtros adecuados para AlexaFluor 488, AlexaFluor 546, y Fast Blue, y las imágenes fueron capturadas por una cámara digital conectada a un PC, equipado con Olympus célula F analizando imagen de software (Olympus, Tokio, Japón). Las secciones teñidas para la misma combinación de antígenos asignados a las investigaciones cuantitativas fueron separados por al menos 100 m, para evitar la doble análisis de somata neuronal. El número de los perikarya FB-positivo contados para cada combinación de anticuerpos estaba por encima de 200 neuronas por animal. Los datos de ambos grupos se reunieron, se analizaron estadísticamente utilizando Statistica software 10 (StatSoft Inc., Tulsa, OK, EE.UU.), y se presentaron como medias ± error estándar de la media (SEM). Se evaluaron las diferencias significativas mediante la prueba t de Student para muestras independientes (* P < 0,05 y ** P < 0,001). Además, para la evaluación semi-cuantitativa de la densidad de las fibras nerviosas inmunorreactivas a cada sustancia estudiada, se utilizó una escala arbitraria, donde (-) - ausencia de fibras; (+) - Fibras individuales; (++) - Fibras nerviosas raras; (+++) - Muestra una muy densas fibras nerviosas

Resultados

trazado Fast Blue e inmunohistoquímica

cuerpos de las células nerviosas que contiene Fast Blue- se encuentra exclusivamente en el CCMG. complejo, mientras que el resto de los ganglios del simpático paravertebral pre y carecían de FB células marcadas. En promedio, el complejo CCMG contenía 1.615 ± 20,73 FB + neuronas en el control y 1.644 ± 38.03 neuronas en el grupo de AAS, respectivamente. La mayoría de las neuronas marcadas se encuentra en la región de polos celíacos del complejo CCMG, solamente un solo somas marcados en otra parte del CCMG han sido identificados. Los cuerpos celulares eran ovaladas, redondas o multipolar con dendritas cortas y el núcleo céntrico y miden 20-45 micras de diámetro. En algunos casos se observó un proceso único axón largo semejante trazado de la célula.

En los animales de control doble etiquetado inmunohistoquímica reveló que la gran mayoría de las células FB + fueron inmunorreactivas para TH (94.85 ± 1.01%) y DβH (97,10 ± 0,97%). Además, todos los cuerpos de las células TH positivas fueron inmunorreactivas a DβH lo que confirmó su carácter fuertemente catecolaminérgica (Fig 1A, 1B, 1C y 1D). La aplicación de anticuerpos contra el neuropéptido Y representa, que immunolabeling NPY se encontró en 46,88 ± 2,53% de la FB- etiquetados perikarya (Fig 1E, 1F, 1G y 1H). Además, otra población de neuronas positivas FB GAL contenida en 8,40 ± 0,53% (Fig 1I, 1J, 1K y 1L). Por otra parte, las fibras nerviosas GAL-positivos (+) de paso formados formaciones que rodean cuerpos celulares Gal- IR. Por otra parte, ninguna de las neuronas FB + contenida nNOS, Lenk, CART, SP y VIP. Sin embargo, todos estos neurotransmisores estaban presentes en las fibras nerviosas que rodean los perikarya trazadas. Un gran número de fibras nerviosas de CART-positivo varicosas (+++) rodeado de cerca las neuronas marcadas-FB y formó una cesta-como las estructuras que los rodean (Figura 2A, 2B, 2C y 2D). El análisis microscópico de las secciones incubadas con anticuerpos anti-CGRP reveló la red densa de las fibras de CGRP-positiva (+++) con frecuencia localizadas cerca de las células FB-positivos (Fig 2E, 2F, 2G y 2H). Sólo sola varicosa o simplemente nNOS-IR (+) (Figura 1 M, 1 N, 1O y 1P), Lenk-IR (++) (Fig 1R, 1S, 1T y 1U), SP-IR (+) (figura 2I, 2J, 2K y 2L) y VIP-IR (+) (Fig 2 M, 2 N, 2O y 2P) de las fibras nerviosas, a veces formando pequeños manojos, fueron dispersados ​​en todo el ganglio entre cuerpos celulares trazadas (Tabla 2).

la gastritis inducida por la suplementación con ácido acetilsalicílico prolongada cambió los patrones de codificación de muchos FB + células. La población de células TH-positivas y DβH-positivas se redujo (Tabla 3). El examen microscópico de secciones mostró que 85,78 ± 2,65% eran TH-positivo, mientras que 88,82 ± 1,63% de FB neuronas trazadas expresó DβH inmunoreactividad (Fig 3A, 3B, 3C y 3D). Por otra parte, sobre regulación de las neuronas NPY-IR a 76,59 ± 3,02% también fue estadísticamente significativa (Figura 3E, 3F, 3G y 3H). La diferencia más notable en la codificación química de las neuronas simpáticas trazadas entre el control y los cerdos tratados-ASA incluyó una muy aumento del número de GAL (hasta 26,45 ± 2,75%) (Fig 3I, 3J, 3K y 3L). Los FB-células positivas que contienen GAL también fueron suministrados por numerosas fibras nerviosas, principalmente varicosas GAL-IR. Además, se observaron células que contienen nNOS en 6,13 ± 1,11% (Fig 3M, 3N, 3O y 3P) y LENK en 4,77 ± 0,42% (Fig 3R, 3S, 3T y 3U) sólo en ASA- animales tratados. Al igual que en los animales control, perikarya trazadas no fueron inmunorreactivas a la cesta, CGRP, SP y VIP pero las fibras nerviosas que contienen estos neurotransmisores se observaron en las proximidades de la FB- somata etiquetados y se parecían a los observados en el grupo de control.

gastroscopia y examen histopatológico

gastroscopia examen realizado en el primer día de las lesiones experimento excluidos en la mucosa gástrica en animales tanto de control y el grupo ASA. Sin embargo, el mismo examen realizado en el último día confirmó la gastritis causada por la suplementación con ácido acetilsalicílico. Se observaron hiperemia, petequias, erosiones superficiales y pequeñas úlceras no sólo en gástrico, pero también la mucosa del duodeno: cambios macroscópicos tales como. Evaluación histopatológica de fragmentos de la pared de la región de prepilórica gástrico reveló cambios microscópicos tales como:. hiperemia de la mucosa, erosiones profundas, foliculosis, la proliferación de los neutrófilos e infiltración eosinofílica se extienden dentro de la submucosa (Fig 4A, 4B, 4C y 4D)

Discusión

Este es el primer informe que demuestra la localización exacta, la morfología y la codificación química de las neuronas simpáticas que se proyectan hacia el área prepilóricas del estómago porcino. La principal fuente de fibras nerviosas postganglionares que suministran esta región se originan a partir del complejo CCMG, mientras que los ganglios simpáticos pre y paravertebral carecían de los FB células marcadas. Estos resultados son consistentes con los datos obtenidos de rata [3, 12], conejillo de indias [15, 16], y el perro [7] y proporcionar más evidencia que establece la importancia predominante de las neuronas CCMG en la inervación del estómago. No obstante, la entrada de menor importancia en la inervación simpática del estómago, en la rata y cobaya vino de los ganglios de la cadena torácica. Las neuronas que suministran pared gástrica en la rata se localizaron a partir de T _{1 a L 3 en la cadena de derecha y de T 2 a L 3 en los [10] cuerpos celulares izquierdo respectivamente, mientras ratas que inervan la mucosa gástrica se encontraron a partir de T 6 a T 9 ganglios simpáticos de la cadena [3]. En las neuronas de cobaya situados en todos los ganglios de la cadena torácica se proyectan hacia el estómago [16]. Por el contrario, esta investigación muestra que estos ganglios no están involucrados en la inervación de la región de prepilórica del estómago porcino, más probable es que inervan otras partes del estómago, lo que requiere más investigación. Por otra parte, estos hallazgos se correlacionan bien con los estudios postular disposición topográfica característico de las neuronas, con respecto a sus tejidos diana, en el complejo porcino CCMG [43].}

El presente estudio ha revelado que la gran mayoría de FB neuronas positivas en el grupo control tenían carácter fuertemente catecolaminérgica, según lo revelado por TH simultánea e inmunorreactividad DβH-. Estos resultados se correlacionan bien con los estudios que describen la naturaleza de la mayoría de las neuronas adrenérgicos CCMG en la rata, cobaya, perro y cerdo doméstico [10, 16, 44, 45]. Sólo un pequeño número de neuronas CCMG trazadas estaba desprovisto de estas enzimas, que pueden indicar, que son población de no adrenérgica, posiblemente neuronas colinérgicas, que está de acuerdo con los resultados anteriores en histoquímica de CCMG tanto guinea y cerdos domésticos [45, 46]. Por otra parte, estos datos indican que la cantidad significativa de FB- etiquetado perikarya expresan inmunorreactividad NPY. datos de la literatura sugieren que el NPY se considera que es el transmisor peptidergic importante tanto: los sistemas nerviosos simpático y parasimpático [47]. A saber, el NPY como regulador neuronal y hormonal jugar papel importante en la fisiología de los mamíferos del tracto gastrointestinal, incluyendo la inhibición de la motilidad intestinal, el vaciado gástrico, la secreción de ácido y la secreción pancreática exocrina. Por otra parte, este péptido afecta a los vasos sanguíneos y participa en la regulación del flujo sanguíneo intestinal [48, 49]. Por otra parte, el NPY también se observó en las neuronas que se proyectan hacia CCMG porcina íleon [50]. Además, este estudio reveló que las neuronas Gal- IR representan parte de las células marcadas de forma retrógrada. Es bien se correlaciona con hecho de que la galanina es biológicamente neuropéptido activo, que tiene una amplia distribución en los sistemas nerviosos central y periférico, así como los tejidos periféricos de muchas especies [51-53]. A nivel gastrointestinal, la galanina inhibe la secreción de ácido gástrico, la liberación de numerosos péptidos pancreáticos, regula la absorción de las células epiteliales de la mucosa y modula la motilidad del tracto gastrointestinal [54]. La galanina ejerce su papel fisiológico al actuar sobre uno de los tres diferentes subtipos de receptores acoplados a proteínas G (GAL-R1, R2 y GAL-GAL-R3) extendido en muchos tejidos y órganos [52].

Aunque ninguno de FB neuronas positivas contenidas nNOS, Lenk, CART, CGRP, SP y VIP, todos estos neurotransmisores estaban presentes en las fibras nerviosas que rodean los perikarya trazadas. Las numerosas fibras nerviosas CART-positivo varicosas rodeados de cerca las neuronas FB-positivas y formaron canastillas, como las estructuras que los rodean. (CART) péptido cocaína y la anfetamina regulado transcripción descubierto en 1981 en el hipotálamo ovino se ha descrito en diversos segmentos del tracto GI de numerosas especies de mamíferos, incluyendo seres humanos [2, 55, 56]. A pesar de que el papel de este péptido en la función intestinal no se ha establecido completamente, algunos autores sugieren que la compra está implicada en la regulación de la motilidad intestinal, la inhibición de la alimentación, la reducción de la secreción de ácido gástrico, exacerbación de la motilidad del colon [57]. Hasta ahora, se han descrito cambios en el número de estructuras nerviosas CART-positivas en los ENS bajo varios factores patológicos, lo que podría sugerir la participación de la terapia antirretroviral en la supervivencia y la neuroprotección [58, 59]. CGRP y SP son considerados como neuropéptidos sensoriales pronociceptive [60]. El número y la distribución de las fibras SP-IR y CGRP-IR son bastante similares a las que han sido ya descrito por Lakomy et al. [45] para las fibras que rodean las neuronas TH-positivas en la CCMG porcino. Representan una de las fuentes de las proyecciones viscerofugal de la pared del intestino o se originan en las neuronas aferentes DRG, porque estas neuronas específicamente codificados se describen en ganglios entéricos [55, 61], así como se distribuyen ampliamente en las neuronas sensoriales [5]. Por otra parte, se observaron varicosas fibras nerviosas VIP-IR individuales dispersos por todo el ganglio entre cuerpos celulares trazadas. VIP es probablemente involucrados en un arco reflejo inhibitorio intestino-intestinal y se produce en las fibras aferentes que inervan el entéricos CCMG [45]. Finalmente, la fuente de los nNOS-IR y fibras Lenk-IR visualizados en este estudio podría ser que las neuronas preganglionares situados en el núcleo intermediolateral de la médula espinal lumbar o de las neuronas DRG. La proximidad de las fibras descritas en este estudio en relación a las neuronas marcadas de forma retrógrada CCMG pueden indicar los efectos indirectos de este péptido en la inervación simpática del estómago. Sin embargo, la cuestión del impacto de estas fibras en las neuronas simpáticas que abastecen el área prepilóricas de estómago que queda por esclarecer.

A pesar de que la inflamación de la mucosa gástrica, causada por la suplementación con ácido acetilsalicílico a largo plazo, no tiene influencia en el número de neuronas que inervan el área de estudio de estómago, retrogradely etiquetados células simpáticas exhiben una gran cantidad de plasticidad en su neuropéptidos fenotipo. gastritis inducida por ASA llevó a los cambios significativos en la codificación química de las neuronas trazadas, mediante la reducción de la producción de las enzimas del tracto catecolamina-síntesis y regulación de la síntesis de neuropéptidos involucrados en los mecanismos neuronales de defensa (NPY, GAL, nNOS, Lenk). Estos datos están de acuerdo con el hecho de que la regeneración de las neuronas simpáticas temporalmente disminuye la expresión de algunos neurotransmisores, especialmente TH [32] y empezar a producir neurotransmisores implicados en la defensa y la supervivencia [31].

NPY está emergiendo como regulador de la inflamación, que participan en la autoinmunidad, asma, cáncer y muchos trastornos gastrointestinales, tales como melabsorption, intestino corto, enfermedad inflamatoria intestinal y pancreatitis. NPY, como un péptido anti-inflamatoria, participa en la respuesta inflamatoria por el reclutamiento de células dendríticas inmaduras y mediante la promoción de una polarización Th2 [49]. NPY también pueden estar involucrados en la respuesta inflamatoria a través de la diferenciación de las células T helper, la liberación de monocitos mediador, natural killer activación de las células [NK], y la redistribución de las células inmunes lo que confirmó los informes anteriores de la diafonía bidireccional entre los sistemas nervioso e inmunológico en el tracto gastrointestinal [62, 63 ]. Estos hallazgos son similares a los de estudios anteriores, donde se eleva el número de neuronas simpáticas de NPY-positivo durante diversas condiciones patológicas, incluyendo la enteropatía proliferativa porcina y colitis [4, 28]. Por otra parte, el experimento en humanos representa un incremento en las terminaciones nerviosas NPY- IR dentro de la mucosa durante la gastritis crónica causada por Helicobacter pylori
[62]. Esto sugiere que el NPY es el factor neuroprotector importante, que desempeña el papel en la supervivencia y regeneración de las neuronas dañadas dentro de la inflamación. Curiosamente, el NPY también puede ser secretada por algunos inmunocitos, lo que puede sugerir que el NPY está directamente implicado en la inflamación neurogénica [64]. Sin embargo, la función exacta de NPY en respuesta neuronal durante la gastritis inducida por ASA en cerdos permanece sin explicación y requiere más investigación.

La diferencia más notable en el fenotipo de las neuronas trazadas immuhistochemical fue un aumento del número de células inmunorreactivas Gal- cuerpos en animales del grupo ASA-. La galanina es, sin duda, participa en la regulación de procesos inflamatorios. De hecho, la galanina se considera como un regulador de las citoquinas pro-inflamatorias, debido a que la administración de galanina ha incrementado la producción de TNF-α, IL-1α e IL-8 en queratinocitos humanos en estado fisiológico [65]. Hasta la fecha, los aumentos en la expresión de galanina en las estructuras neuronales, ambos sistemas nerviosos autónomo y entéricos, se observaron durante la colitis inducida químicamente [4, 51] y la enteropatía proliferativa [28] en los cerdos, diverticulitis crónica en humanos [66] y la infección por Salmonella entérica en ratones [67]. Curiosamente, Talero et al.

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