PLoS ONE: Den indflydelse Langvarig acetylsalicylsyre Supplering-induceret Gastritis på Neurochemistry af de sympatiske neuroner Forsyninger Prepyloric Region porcin Stomach

Abstrakt

Dette eksperiment var at fastlægge lokaliseringen og neurokemiske fænotypebestemmelse af sympatisk neuroner leverer prepyloric område af porcin mave i en fysiologisk tilstand og under acetylsalicylsyre (ASA) induceret gastritis. For at lokalisere det sympatiske perikarya maver både kontrol- og acetylsalicylsyre behandlet (ASA-gruppen) dyr blev injiceret med neuronal retrograd tracer Fast Blue (FB). Syv dage efter FB injektion blev dyrene opdelt i en kontrolgruppe og ASA tilskud gruppe. ASA-gruppen blev givet 100 mg /kg af legemsvægt ASA oralt i 21 dage. På den 28 ^{th dag alle grise blev aflivet med gradvis overdosis bedøvelse. Derefter fjorten mikrometer tykke cryostatsnit blev forarbejdet til rutinemæssig dobbelt-mærkning immunofluorescens, ved anvendelse af primære antisera rettet mod tyrosin hydroxylase (TH), dopamin β-hydroxylase (DβH), neuropeptid Y (NPY), galanin (GAL), neuronal nitrogenoxid syntase (nNOS), leu 5-enkephalin (Lenk), kokain- og amphetamine- reguleret transkript peptid (CART) calcitonin gen-relateret peptid (CGRP), substans P (SP) og vasoaktivt intestinalt peptid (VIP). De opnåede ved denne undersøgelse data indikerer, at postganglie sympatiske nervefibre, der forsyner prepyloric område af porcin mave stammer fra celiac-craniale mesenterisk ganglion kompleks (CCMG). I kontroldyr, de FB-mærkede neuroner udtrykte TH (94.85 ± 1,01%), DβH (97,10 ± 0,97%), NPY (46.88 ± 2,53%) og GAL (8,40 ± 0,53%). I ASA-gruppen, blev TH- og DβH- positive nerveceller reduceret (85,78 ± 2,65% og 88,82 ± 1,63% henholdsvis). Desuden ASA- induceret gastritis resulterede i forøget ekspression af NPY (76,59 ± 3,02%) og GAL (26,45 ± 2,75%) samt novo-syntese af nNOS (6,13 ± 1,11%) og Lenk (4,77 ± 0,42%) i spores CCMG neuroner. Derudover et netværk af indkøbsvogn-, CGRP-, SP-, VIP, LENK-, nNOS- immunoreaktiv (IR) nervefibre omkranser FB-positive perikarya blev observeret i både intakte og ASA-behandlede dyr. Resultaterne af denne undersøgelse viser inddragelse af disse neuropeptider i udvikling eller formentlig opvejning af gastrisk betændelse}

Henvisning:. Palus K, Całka J (2015) Den indflydelse Langvarig acetylsalicylsyre Supplering-induceret Gastritis på Neurochemistry af de sympatiske neuroner Forsyninger Prepyloric Region porcin mave. PLoS ONE 10 (11): e0143661. doi: 10,1371 /journal.pone.0143661

Redaktør: Michael Bader, Max-Delbrück Center for Molekylær Medicin (MDC), TYSKLAND

Modtaget: August 16, 2015; Accepteret: November 6, 2015; Udgivet: November 25, 2015

Copyright: © 2015 Palus, Całka. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden papiret

Finansiering:. Offentliggørelse støttet af den polske stat udvalget for videnskabelig forskning nummer 1890 /B /P01 /2010/39, University of Warmia og Mazury i Olsztyn (lovpligtige forskning) give Ingen 15,610. 003-300 og KNOW (førende nationale Forskningscenter) Videnskabelig Consortium "Sund Animal - Safe Food", beslutning af Ministeriet for videnskab og videregående uddannelse No. 05-1 /KNOW2 /2015

Konkurrerende interesser: forfatterne. har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser.

Introduktion

de seneste tredive år har vist stigende hurtige fremskridt i studier af innervation af mave-tarmkanalen. Generelt er maven og tarmen innerverede både neuroner findes inden intramuralt ganglier og dermed hører til enteriske nervesystem (ENS) [1, 2], samt ved ydre celle organer oprindelse i sympatisk, parasympatisk og sensoriske ganglier [3- 5]. Nylige undersøgelser har vist, at sympatiske ganglier er ikke kun centre for nervøs integration, men også besiddelse af vigtige egenskaber ved deres neuroner. Blandt andet de omfatter konvergens af centrale impulser, projektion af viscerale impulser på præ- og postsynaptiske niveauer, adgang /giver mulighed for de centrale fibre af visceral beskyttelse og pacemaker aktivitet [6, 7]. Men sympatiske postganglieneuronerne der leverer mavetarmkanalen ikke direkte indflydelse på dets funktioner, men udøver deres effekt gennem ENS [8, 9], eller snøre arterierne, der forsyner fordøjelsessystemet orgel [10]. Endvidere er maven funktion medieret og moduleret af masser af neuronale sendere og neuropeptider, som spiller en rolle i reguleringen af ​​motilitet, syresekretion, hormonfrigivelse, lokal blodgennemstrømning og mucosale forsvarsmekanismer [3].

der er et stort volumen af ​​offentliggjorte undersøgelser beskriver sympatisk innervation af maven, hovedsagelig baseret på små laboratoriedyr, såsom rotter [10-12], mus [13, 14], marsvin [15, 16], kanin [17] eller husdyr, såsom hunde [7] og kat [18, 19]. Forfatterne rapporterer, at prevertebral ganglier f.eks. cøliaki ganglion udgør den vigtigste kilde til postganglioniske sympatisk innervation af den abdominale indvolde. Ud fra følgende betragtninger kun enkelte perikarya blev fundet i paravertebral ganglier f.eks. sympatiske kæde ganglia [16, 20]. Hidtil relativt lidt om innervation af maven hos tamsvin, der ligner det i menneskelig for anatomiske og fysiologiske kendetegn [21, 22]. Tidligere undersøgelser på området beskriver kun den ydre innervation af tynd- og tyktarm [4, 20] eller fokusere på det enteriske nervesystem [23, 24].

Det autonome nervesystem er kendetegnet ved høj plasticitet som reaktion til forskellige patologiske stimuli, og evnen til at tilpasse sig de skiftende miljøforhold [25, 26]. Denne tilpasning indebærer skiftende i den kemiske fænotype af neuroner ved forøget ekspression af nogle neurotransmittere og reduceret af andre eller aktivering af ekspression af tidligere inaktive gener [26, 27]. I de senere år har der været en stigende mængde af litteratur, der beskriver ændring af kemisk kodning af sympatiske neuroner forsyner mavetarmkanalen under ileitis [20], proliferativ enteropati [28], colitis [4] og axotomi [29-31]. Derudover nogle forfattere foreslår, at sympatiske neuroner ikke kun ændre deres kemiske egenskab, men udviser også evnen til at regenerere [32]. Interessant nogle forfattere foreslår, at sympatiske nervesystem spiller en rolle som en modulator af gastrointestinal inflammation, fordi sympatiske neuroner levere lymfoide væv. Desuden har tilstedeværelsen af ​​receptorerne for sympatiske neurotransmittere i immunceller blevet bekræftet [33].

Acetylsalicylsyre, kendt som aspirin (ASA), er en af ​​de mest almindeligt anvendte ikke-steroide anti-inflammatoriske lægemidler (NSAID) i hele verden og især værdsat for sine terapeutiske egenskaber. Fordelene ved de brede terapeutiske muligheder, såsom forebyggelse af kardiovaskulære sygdomme, har behandling af symptomer på række inflammatoriske tilstande, antitumoraktivitet, eller smertelindring været kendt i mange år [34]. Aspirin forhindrer prostaglandinsyntesen ved inhibering af enzymet cyclooxygenase (COX) via irreversibel acetylering af hydroxylgruppen i 1 serinrest [35, 36]. COX kaldes også som prostaglandin endoperoxidase syntase er et membranbundet hæmoprotein og glycoprotein enzym, som katalyserer omdannelsen af ​​cellemembran-phospholipider, der er involveret i syntesen af ​​prostanoider omfattende: prostaglandin (PG), prostacyclin (PGI) og thromboxaner (TXA) og eksisterer som 3 isoformer (COX-1, -2 og -3) [34, 37]. Eicosanoider, der stammer fra en reaktion katalyseret af COX-1, er involveret i blodpladeaggregering, beskyttelse af maveslimhinden, og mange andre fysiologiske processer, hvorimod de, der dannes med deltagelse af COX-2 kun beskæftiger sig med udviklingen af ​​den inflammatoriske respons. COX-3 er en post-transkriptionel modifikation af COX-1, forekommer i centralnervesystemet [38].

Aspirin er en ikke-selektiv NSAID og inhiberer den enzymatiske aktivitet af COX-1 flere hundrede gange mere effektivt, sammenlignet med den COX-2 [38, 39]. Faktisk dens handling resulterer i både gavnlige (antipyretisk og anti-inflammatorisk) og toksiske (mave skade) virkninger [40]. Selv lille dosis af aspirin inducerer overfladisk skade i gastrisk epitel og fører til unormal ion flux med øget H ^{+ tilbage diffusion. Endvidere inhiberingen af ​​COX-1, hvilket fører til mangel på prostaglandiner (PG'er) i gastrisk og intestinal mucosa, accepteres som den vigtigste mekanisme af mucosal skade som omfatter blødning, erosioner og ulceration [41]. Disse skader forekommer hyppigst i human antrum og prepyloric område, selv om de også kan ses i den proximale del af duodenum [34]. Desuden faldt niveauet af prostaglandin E2 (PGE2) udsætter slimhinden skader forvoldt af saltsyre og galde, og reducerer evnen af ​​regenerering af slimhindeceller ved at nedsætte frigivelsen af ​​mucus, en hæmning af overfladeaktive stoffer og phospholipider syntese, reduktion i sekretion af HCO _{3 og lidelser af blodstrømning i mikrocirkulationen [40, 42]. I øjeblikket indflydelse af aspirin-induceret gastritis på adaptive processer og neurokemiske egenskaber af sympatiske neuroner leverer mave er temmelig fragmentarisk}}

Derfor blev dette forsøg designet til at fastslå:. 1) lokalisering og distribution af sympatiske neuroner leverer prepyloric område af maven i tamsvin; 2) den neurokemiske fænotype af spores perykarya i fysiologisk tilstand; 3) eventuelle ændringer i neurokemiske kodning af spores neuroner under gastritis induceret af langvarig acetylsalicylsyre tilskud.

Materialer og metoder

Etik Statement

Den eksperimentelle procedure, herunder dyr dødshjælp blev godkendt af den lokale etiske Kommissionen for Forsøg med dyr ved University of Warmia nad Mazury i Olsztyn (tilladelse Numbers 05/2010). Alle operation blev udført under natrium thiopental anæstesi, og blev gjort alle mulige bestræbelser for at minimere dyrenes lidelser.

Dyr og kirurgiske procedurer

Undersøgelsen blev udført på ti unge kvindelige svin af Large White Polish race, ca. 8 uger gammel og vejer ca. 20 kg. Dyrene blev holdt under regelmæssige lysforhold i et temperatur-kontrolleret miljø. De blev fodret med kommercielt korn blandingen og postevand ad libitum
. Alle dyrene blev preanesthetized med azaperone (Stresnil, Jansen Pharmaceutica NV, Belgien, 4 mg /kg legemsvægt, im) 15 min før anvendelsen af ​​de vigtigste bedøvelsesmiddel, natrium thiopental (thiopental, Sandoz, Kundl-Rakúsko, Østrig 10 mg /kg legemsvægt, givet intravenøst). For at lokalisere de sympatiske cellelegemer blev grisene udsat for median laparotomi og modtog injektioner af det fluorescerende tilbagegående neuronal tracer Fast Blue (FB, EMS-Chemie, GmbH, Tyskland) i diamant-formede del (ca. 4 cm x 4 cm) af maven forreste prepyloric væg ved et totalt volumen på 50 pi af en 5% opløsning (1 pi pr 1 injektion). For at minimere udsivning af sporstoffet i omgivende væv, blev nålen af ​​Hamilton sprøjte siddende i 20'erne efter hver injektion, og derefter injektionsstedet blev efterfølgende skyllet med isotonisk saltvand og forsigtigt aftørres med gaze. Efter operationen injektioner af antibiotikummet (Betamox L.A., ScanVet, Polen, 15 mg /kg legemsvægt, i.m.) og analgetiske lægemidler (meloxicam-Metacam, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Tyskland, 0,4 mg /kg legemsvægt, i.m.) blev anvendt. For at minimere post-kirurgi smerte meloxicam (Metacam, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Tyskland, 0,4 mg /kg legemsvægt, i.m.) injektioner blev administreret en gang om dagen. Sundhedstilstanden af ​​dyrene blev overvåget af dyrlæge mindst 4 gang om dagen

Bagefter blev grisene randomiseret til en af ​​to forsøgsgruppe:. Kontrol (C-gruppen, n = 5) og ASA-gruppen ( n = 5). Dyrene, der udgør ASA-gruppen, fra den syvende dag efter FB injektion, fik acetylsalicylsyre oralt (aspirin, BAYER, 100 mg /kg legemsvægt), 1 time før fodring. Gastroskopisk undersøgelse blev udført for at udelukke læsioner i maveslimhinden hos dyr fra ASA-gruppen i den første dag og bekræfte gastritis forårsaget af ASA-behandling i den sidste dag i aspirin tilskud (ved hjælp af en video-endoskop Olympus GIF 145 med arbejdslængde 1030 mm og en diameter på 9,8 mm).

efter fire ugers overlevelsestid (21 ^{st dag i ASA-behandling), blev både kontrol og ASA grise dybt reanaesthetized og aflivet ved en overdosis af natrium thiopental. Derefter blev de transcardialt perfunderet med 4% bufret paraformaldehyd (pH 7,4). Gastritis hos dyr af ASA-gruppen blev bekræftet ved histopatologisk undersøgelse af fragmenter af det prepyloric mavevæggen opsamlet efter perfusion (ved anvendelse af rutinemæssige histopatologiske metoder). Efter perfusion blev følgende væv indsamlet: cøliaki-craniale mesenterisk ganglion kompleks (CCMG) (også kendt som cøliaki-øvre mesenteriske ganglion kompleks (CSMG)); thorax, lænde og sakrale sympatiske kæde ganglier (SChG), kranie og midterste cervikal ganglier, suprarenal ganglier, lille ganglier af de intermesenteric og renale plexus, caudale mesenterisk ganglier (CaMg). Samlede væv blev post-fikseret ved nedsænkning i det samme fiksativ i 20 minutter, skyllet i phosphatbuffer (pH 7,4) i løbet af tre dage, og endelig er blevet opbevaret i 30% pufret sucrose-opløsning, indtil de sank til bunden af ​​beholderen til videre forarbejdning .}

Immunhistokemi og statistik

Fjorten-mikrometer tykke cryostatsektioner af vævsprøver blev analyseret under et fluorescerende mikroskop (Olympus BX 51, Olympus, Polen), der er udstyret med et filter sæt egnet til observation af FB, at lokalisere og tælle sympatiske neuroner indeholdende sporstof. For at bestemme det relative antal af FB-positive perikarya blev neuroner talt i hver fjerde afsnit. Kun neuroner med klart synlig kerne blev overvejet. Derefter blev udvalgte sektioner med FB-mærkede perikarya forarbejdet til rutinemæssig dobbelt-mærkning immunfluorescens teknik under anvendelse af primær antisera rejst i forskellige arter og artsspecifikke sekundære antistoffer (tabel 1). Kort fortalt, efter lufttørring ved stuetemperatur i 45 min. og stigende i 0,1 M phosphatbufret saltvand (PBS, pH 7,4;. 3 x 10 min), blev sektionerne blokeret med en blanding indeholdende 10% hesteserum og 0,1% bovint serumalbumin i 0,1 M PBS, 1% Triton X- 100, 0,05% Thimerosal og 0,01% natriumazid i 1 time ved stuetemperatur for at reducere uspecifik baggrundsfarvning. Efter skylning i PBS (3 x 10 min.), Blev sektionerne inkuberet natten over ved stuetemperatur med primær antisera dannet mod tyrosin hydroxylase (TH), dopamin β-hydroxylase (DβH), neuropeptid Y (NPY), galanin (GAL), neuronal nitrogenoxidsynthase (nNOS), leu 5-enkephalin (Lenk), kokain- og amphetamine- reguleret transkript peptid (CART) calcitonin gen-relateret peptid (CGRP), substans P (SP) og vasoaktivt intestinalt peptid (VIP) ( tabel 1). Efter efterfølgende skylning i PBS (3 x 10 min.), Blev sektionerne inkuberet med blanding af sekundære antistoffer (tabel 1) i 1 time ved stuetemperatur for at visualisere primære antistoffer anvendt i denne undersøgelse. Efter farvning blev snit monteret med carbonat-buffer glycerol (pH 8,6) og cover-gled.

Standard kontroller, dvs. præadsorption for neuropeptid antisera med passende antigen (20 ug antigen /ml fortyndet antiserum, alle antigener indkøbt fra Peninsula, Sigma eller ABD Serotec) og udeladelsen samt udskiftning af alle primære antisera fra ikke-immune sera blev udført for at teste den immunhistokemiske mærkning. Der var ingen fluorescens observeret i alle disse kontrol farvninger, hvad bekræfter specificitet af den metode og antistof.

Sektioner blev derefter undersøgt under et Olympus BX51 mikroskop, er udstyret med filtre, der er egnede til AlexaFluor 488, AlexaFluor 546, og Fast Blue, og billeder blev taget til fange af et digitalt kamera tilsluttet en pc, der er udstyret med Olympus Cell F billede analysere software (Olympus, Tokyo, Japan). Afsnittene farvet for den samme kombination af antigener tildelt kvantitative undersøgelser blev adskilt med mindst 100 um, for at undgå dobbelt-analyse af neuronal somata. Antallet af FB-positive perikarya tælles for hver kombination af antistoffer var over 200 neuroner per dyr. Dataene fra begge grupper blev samlet, analyseret statistisk ved anvendelse af Statistica 10 software (StatSoft Inc., Tulsa, OK, USA), og blev præsenteret som et middel ± standardfejl på middelværdien (SEM). Signifikante forskelle blev evalueret ved hjælp af Students t-test for uafhængige stikprøver (* P < 0,05 og ** P < 0,001). Desuden er der for semi-kvantitativ vurdering af tætheden af ​​nervefibre immunoreaktive til hvert stof studeret, en arbitrær skala blev anvendt, hvor (-) - fravær af fibre; (+) - Enkelte fibre; (++) - Sjældne nervøse fibre; (+++) - Viser en meget tæt nervefibre

Resultater

Fast Blue opsporing og immunhistokemi

Hurtig Blue- indeholder nerve celle organer blev udelukkende fundet i CCMG. kompleks, mens resten af ​​præ- og paravertebral sympatisk ganglie var blottet for FB- mærkede celler. I gennemsnit CCMG komplekset indeholdt 1615 ± 20.73 FB + neuroner i kontrol og 1644 ± 38,03 neuroner i ASA-gruppen hhv. Størstedelen af ​​mærkede neuroner blev placeret i området af cøliaki poler på CCMG komplekset, kun enkelt- mærket somata i en anden del af CCMG er blevet identificeret. Cell organer var ovale, runde eller multipolær med korte dendritter og centralt beliggende kerne og målte 20-45 um i diameter. I nogle tilfælde blev der observeret en enkelt lang Axon-lignende proces spores fra cellen.

I kontroldyr dobbelt-mærkning immunohistokemi afslørede, at det store flertal af de FB + cellerne var immunoreaktive til TH (94,85 ± 1,01%) og DβH (97,10 ± 0,97%). Derudover har alle TH- positive cellelegemer var immunoreaktive at DβH hvad bekræftede deres stærkt catecholaminerge karakter (Fig 1A, 1B, 1C og 1D). Anvendelsen af ​​antistoffer mod neuropeptid Y afbildet blev denne NPY immunolabeling fundet i 46.88 ± 2,53% af FB- mærkede perikarya (figur 1E, 1F, 1G og 1H). Desuden en anden befolkning på FB- positive neuroner indeholdt GAL i 8,40 ± 0,53% (Fig 1I, 1J, 1K og 1L). Endvidere GAL-positive nervefibre (+) i øvrigt dannede formationer omkranser Gal- IR cellelegemer. På den anden side, ingen af ​​FB + neuroner indeholdt nNOS, Lenk, CART, SP og VIP. Men alle disse neurotransmittere var til stede i nervefibrene omgiver spores perikarya. Et stort antal varicose CART-positive nervefibre (+++) tæt omgivet af FB-mærkede neuroner og dannede en kurv-lignende strukturer omkring dem (fig 2A, 2B, 2C og 2D). Mikroskopisk analyse af sektioner inkuberet med anti-CGRP-antistoffer afslørede tæt net af CGRP-positive fibre (+++) ofte lokaliseret nærheden af ​​FB-positive celler (Fig 2E, 2F, 2G og 2H). Kun enkelt åreknuder eller almindelig nNOS-IR (+) (fig 1M, 1 N, 1O og 1P), Lenk-IR (++) (fig 1R, 1S, 1T og 1U), SP-IR (+) (Fig 2I, 2J, 2K og 2L) og VIP-IR (+) (fig 2M, 2 N, 2O og 2P) nervefibre, undertiden danner små bundter, blev dispergeret i hele ganglion mellem spores cellelegemer (tabel 2).

Gastritis induceret af langvarig acetylsalicylsyre tilskud ændret de kodende mønstre af mange FB + celler. Populationen af ​​TH-positive og DβH-positive celler blev reduceret (tabel 3). Mikroskopisk undersøgelse af sektioner viste, at 85,78 ± 2,65% var TH-positive, mens 88,82 ± 1,63% af FB- spores neuroner udtrykte DβH immunoreaktivitet (Fig 3A, 3B, 3C og 3D). Endvidere opregulering af NPY-IR neuroner til 76,59 ± 3,02% var også statistisk signifikant (fig 3E, 3F, 3G og 3H). Den mest bemærkelsesværdige forskel i den kemiske kodning af spores sympatiske neuroner mellem kontrol- og ASA-behandlede grise medtaget en meget forøget antal GAL (op til 26,45 ± 2,75%) (fig 3I, 3J, 3K og 3L). De FB- positive celler indeholdende GAL blev også leveret af talrige, hovedsagelig varicose GAL-IR nervefibre. Desuden blev celler indeholdende nNOS i 6,13 ± 1,11% (Fig 3M, 3N, 3O og 3P) og Lenk i 4,77 ± 0,42% (Fig 3R, 3S, 3T og 3U) kun observeret i ASA- behandlede dyr. Svarende til at styre dyr, spores perikarya var ikke immunreaktive til CART, CGRP, SP og VIP men nervefibre indeholder disse neurotransmittere blev observeret i umiddelbar nærhed af FB- mærkede somata og lignede dem observeret i kontrolgruppen.

gastroskopisk og histopatologisk undersøgelse

gastroskopisk undersøgelse udført på den første dag af eksperimentet udelukket læsioner i maveslimhinden hos dyr fra både kontrol og ASA-gruppen. Men den samme undersøgelse udført på den sidste dag bekræftet gastritis forårsaget af acetylsalicylsyre tilskud. Makroskopiske forandringer som: hyperæmi, petekkier, overfladiske erosioner og små sår blev observeret ikke kun i gastrisk, men også duodenum slimhinde. Histopatologisk evaluering af fragmenter af væggen af ​​gastrisk prepyloric region beskrevet mikroskopiske ændringer såsom:. Hyperæmi af slimhinden, dybe erosioner, foliculosis, proliferation af neutrofiler og eosinofil infiltration strækker sig ind i submucosa (Fig 4A, 4B, 4C og 4D)

diskussion

Dette er den første rapport viser nøjagtig lokalisering, morfologi og kemisk kodning af sympatiske neuroner rager til prepyloric område af svin mave. Den største kilde til postganglie nervefibre, der forsyner denne region stammer fra CCMG komplekset, mens den præ- og paravertebrale sympatiske ganglier var fri for de FB- mærkede celler. Disse resultater er i overensstemmelse med oplysningerne fra rotte [3, 12], marsvin [15, 16], og hund [7], og give yderligere beviser for den dominerende betydning CCMG neuroner i maven innervation. Uanset, mindre input sympatisk innervation af maven i rotter og marsvin kom fra thorax kæde ganglier. Neuroner leverer gastrisk væg i rotten var placeret fra T _{1 til L 3 i den rigtige kæde, og fra T 2 til L 3 i venstre henholdsvis [10], mens celle organer innerverer rotter gastrisk mucosa blev fundet fra T 6 til T 9 sympatiske kæde ganglier [3]. I marsvinet neuroner beliggende i alle thorax kæde ganglier blev projektering til mave [16]. I modsætning hertil denne forskning viser, at disse ganglier ikke er involveret i innervation af prepyloric region af det porcine mave, mest sandsynligt, de innerverer andre dele af mave, som kræver yderligere undersøgelse. Desuden denne fund korrelerer godt med disse studier postulere karakteristisk topografiske arrangement af neuroner, med hensyn til deres målvæv, i svin CCMG kompleks [43].}

Den foreliggende undersøgelse har afsløret, at det store flertal af FB- positive neuroner i kontrolgruppen havde stærkt catecholaminerge karakter, som afsløret ved samtidig TH- og DβH- immunoreaktivitet. Disse resultater korrelerer godt med studier, der beskriver adrenerge karakter af de fleste CCMG neuroner i rotter, marsvin, hund og tamsvin [10, 16, 44, 45]. Kun lille antal spores CCMG neuroner var blottet for disse enzymer, hvilket kan indikere, at de er population af ikke-adrenerge, eventuelt cholinerge neuroner, hvilket er i overensstemmelse med tidligere resultater om histokemi af CCMG i både guinea og tamsvin [45, 46]. Desuden disse data viser, at en betydelig mængde af FB- mærket perikarya udtrykte NPY immunoreaktivitet. Litteraturdata tyder på, at NPY betragtes som den største peptiderge senderen i begge: det sympatiske og parasympatiske nervesystemer [47]. Nemlig NPY som neuronal og hormonal regulator spiller vigtig rolle i mammal fysiologi mavetarmkanalen, herunder inhibering af tarmmotilitet, gastrisk tømning, syresekretionen og pancreatisk exokrin sekretion. Desuden dette peptid påvirker blodkarrene og deltager i reguleringen af ​​intestinal blodgennemstrømning [48, 49]. På den anden side blev NPY også observeret i porcine CCMG neuroner rager til ileum [50]. Endvidere denne undersøgelse viste, at Gal- IR neuroner repræsenterer del af retrograd mærkede celler. Det godt korrelerer med, at galanin er biologisk aktivt neuropeptid, der har en udbredt fordeling i det centrale og perifere nervesystem samt perifere væv af mange arter [51-53]. På mave niveau, galanin hæmmer mavesyresekretionen, frigivelse af talrige pancreas peptider, regulerer slimhinde epitelcelle absorption og modulerer motilitet af mave-tarmkanalen [54]. Galanin udøver sin fysiologiske rolle ved at virke på en af ​​de tre forskellige undertyper af G proteinkoblede receptorer (GAL-R1, GAL-R2 og GAL-R3) udbredt i mange væv og organer [52].

Selvom ingen af ​​FB- positive neuroner indeholdt nNOS, Lenk, CART, CGRP, SP og VIP, alle disse neurotransmittere var til stede i de nervefibre omkring de spores perikarya. De mange åreknuder CART-positive nervefibre tæt omringede FB-positive neuroner og dannede en basket- lignende strukturer omkring dem. Kokain- og amfetamin-reguleret transkript (CART) peptid opdaget i 1981 hos får hypothalamus er blevet beskrevet i forskellige segmenter af mavetarmkanalen af ​​talrige pattedyrarter, herunder mennesker [2, 55, 56]. Trods det faktum, at rollen af ​​dette peptid i tarmfunktion ikke er fuldt etableret, nogle forfattere foreslår, at CART er involveret i reguleringen af ​​intestinal motilitet, hæmning af fodring, reduktion af mavesyresekretion, forværring af colon motilitet [57]. Hidtil var ændringer i antallet af CART-positive nervøse strukturer i ENS under forskellige patologiske faktorer beskrevet, hvad der kan foreslå inddragelse af CART i overlevelse og neurobeskyttelse [58, 59]. CGRP og SP betragtes som pronociceptive sensoriske neuropeptider [60]. Antallet og fordelingen af ​​SP-IR og CGRP-IR fibre er meget lig dem, der allerede er blevet beskrevet af Lakomy et al. [45] for de fibre, der omgiver TH-positive neuroner i svine CCMG. De repræsenterer en af ​​kilderne til de viscerofugal fremskrivninger fra tarmvæggen eller stammer fra DRG-afferente neuroner, fordi disse specifikt kodede neuroner blev beskrevet i enterisk ganglier [55, 61] samt er vidt udbredt i sensoriske neuroner [5]. Desuden blev single åreknuder VIP-IR nervefibre spredt over hele ganglion mellem spores celle organer overholdes. VIP er sandsynligvis involveret i en tarm-tarm inhiberende refleksbuen og forekommer i enteriske afferenter innerverer CCMG [45]. Endelig kunne kilden til nNOS-IR og Lenk-IR fibre visualiseret i denne undersøgelse er de præganglioniske neuroner beliggende i intermediolaterale kerne lumbale rygmarv eller fra DRG-neuroner. Den tætte nærhed af fibre er beskrevet i denne undersøgelse i forhold til retrograd mærkede neuroner CCMG kan indikere de indirekte virkninger af dette peptid i det sympatiske innervation af maven. Imidlertid stadig spørgsmålet om virkningen af ​​disse fibre på sympatiske neuroner leverer prepyloric område i maven til at blive belyst.

På trods af at betændelse i maveslimhinden, forårsaget af langvarig acetylsalicylsyre tilskud, ikke har indflydelse på antallet af neuroner innerverer den undersøgte område af maven, retrogradt mærket sympatiske celler udviser stor plasticitet i deres neuropeptider fænotype. ASA-induceret gastritis førte til betydelige ændringer i den kemiske kodning af spores neuroner, ved at reducere produktionen af ​​tarmkanalen enzymer de catecholamin-syntese og opregulering af syntese af neuropeptider er involveret i neuronale forsvarsmekanismer (NPY, GAL, nNOS, Lenk). Disse data er i overensstemmelse med det faktum, at regenerere sympatiske neuroner midlertidigt nedregulere ekspressionen af ​​visse neurotransmittere, især TH [32], og begynde at producere neurotransmittere involveret i forsvaret og overlevelse [31].

NPY er ved at opstå som regulator af inflammation, der er involveret i autoimmunitet, astma, cancer og mange gastrointestinale lidelser, såsom melabsorption, korte gut, inflammatorisk tarmsygdom og pancreatitis. NPY, som et anti-inflammatorisk peptid, deltager i den inflammatoriske reaktion ved ansættelse af umodne dendritiske celler og ved at fremme et Th2 polarisation [49]. NPY kan også være involveret i inflammatorisk respons gennem differentiering af T hjælper celler, monocyt mediator release, naturlige dræberceller [NK] celle aktivering og immun celle omfordeling hvad bekræftede tidligere rapporter om tovejs krydstale mellem nervesystemet og immunsystemet i mave-tarmkanalen [62, 63 ]. Disse resultater svarer til dem af tidligere undersøgelser, hvor antallet af NPY-positive sympatiske neuroner blev forhøjede under forskellige patologiske tilstande, herunder proliferativ enteropati og porcin colitis [4, 28]. Endvidere eksperiment i menneskelig afbildet en stigning i NPY- IR nerveender i slimhinden under kronisk gastritis forårsaget af Helicobacter pylori
[62]. Dette tyder på, at NPY er vigtig nervebeskyttende faktor, der spiller rollen i overlevelse og regeneration af beskadigede neuroner inden for inflammation. Interessant, kan NPY også udskilles af nogle immunocytter, hvilket kan tyde på, at NPY er direkte involveret i neurogen inflammation [64]. Men den nøjagtige funktion af NPY i neuronal respons under ASA-induceret gastritis hos svin er stadig uforklarlige og kræver yderligere undersøgelse.

Den mest bemærkelsesværdige forskel i immuhistochemical fænotype af spores neuroner var en meget forøget antal gal- immunoreaktive celler organer i ASA- gruppe dyr. Galanin er uden tvivl engageret i reguleringen af ​​inflammatoriske processer. Faktisk er galanin betragtes som en regulator af pro-inflammatoriske cytokiner, fordi administration af galanin har øget produktion af TNF-α, IL-1α og IL-8 i humane keratinocytter i fysiologisk tilstand [65]. Til dato, stigningerne i galanin udtryk i neurale strukturer, både autonome og enteriske nervesystem, blev observeret under kemisk induceret colitis [4, 51] og proliferativ enteropati [28] hos grise, kronisk diverticulitis i human [66] og enterisk Salmonella infektion i mus [67]. Interessant Talero et al.

• PLoS ONE: klinisk-patologisk Karakteristika og Survival Resultater af Primary Signet Ring celle karcinom i maven: retrospektiv analyse af enkelt center Database
• PLoS ONE: konjugeret linolsyre Supplering under en fedtrig kost modulerer Mave Protein Expression og Intestinal mikrobiota i voksne mus