PLoS ONE: Влияние Продолжительное ацетилсалициловой кислоты Supplementation-индуцированную Гастрит на нейрохимии симпатической Нейроны снабжающих Prepyloric Регион из свиные Stomach

Абстрактный
<р> Этот эксперимент был разработан, чтобы установить локализацию и нейрохимические Фенотипирование симпатическая нейроны, поставляющие prepyloric область желудка свиньи в физиологическом состоянии и во время ацетилсалициловая кислота (АСК), индуцированного гастрита. Для того, чтобы локализовать симпатическая perikarya желудках обоих контроля и ацетилсалициловой кислоты, обработанной (группа АСК) животным вводили нейронная ретроградной индикаторного Fast Blue (FB). Семь дней после инъекции FB, животные были разделены на группы контроля и добавок группы ASA. Группа АСК получил 100 мг /кг веса тела ASA в устной форме в течение 21 дней. На 28 ^{й день все свиньи были умерщвлены с постепенным передозировки анестетика. Тогда четырнадцать микрометров толщиной секции криостата были обработаны для рутинного двойной маркировки иммунофлуоресценции с использованием первичной антисыворотки, направленную на тирозингидроксилазе (TH), допамин β-гидроксилазы (DβH), нейропептида Y (NPY), Галанин (GAL), нейронная оксида азота синтазы (ННО), Leu 5-энкефалина (ЛЕНК), кокаиновой и amphetamine- регулируемый транскрипт пептид (ВОЗ), кальцитонина пептид, связанного с геном (КГП), вещество Р (SP) и вазоактивный кишечный пептид (VIP). Данные, полученные в этом исследовании, свидетельствуют о том, что постганглионарные симпатические нервные волокна снабжающие prepyloric область желудка свиньи происходят из глютеновой-черепной брыжеечные ганглии комплекса (CCMG). У контрольных животных, ФБ-меченных нейронов выражены TH (94,85 ± 1,01%), DβH (97,10 ± 0,97%), NPY (46,88 ± 2,53%) и Gal (8,40 ± 0,53%). В группе ASA, были снижены th- и DβH- положительные нервные клетки (85.78 ± 2,65% и 88,82 ± 1,63% соответственно). Кроме того, ASA- индуцированный гастрит приводит к увеличению экспрессии NPY (76,59 ± 3,02%) и Gal (26,45 ± 2,75%), а также Ново- синтеза нОАС (6,13 ± 1,11%) и Ленк (4,77 ± 0,42%) в прослежены CCMG нейроны. Кроме того, сеть cart-, CGRP-, SP-, VIP-, LENK-, наблюдались nNOS- иммунореактивная (ИК) нервные волокна, окружая FB-положительных perikarya в интактных и АСК-обработанных животных. Результаты этого исследования указывают на вовлечение этих нейропептидов в развитии или предположительно противодействие воспаления желудка
<р> Образец цитирования:. Palus K, Całka J (2015) Влияние Продолжительные ацетилсалициловой кислоты Supplementation-индуцированную Гастрит на Нейрохимии в симпатических нейронах Поставляя Prepyloric область из свиные желудком. PLoS ONE 10 (11): e0143661. DOI: 10.1371 /journal.pone.0143661
<р> Редактор: Майкл Бейдер, Макс-Дельбрюк Центр молекулярной медицины (MDC), ГЕРМАНИЯ
<р> Поступило: 16 августа 2015 года; Принято: 6 ноября 2015 года; Опубликовано: 25 ноября 2015
<р> Copyright: © 2015 Palus, Całka. Это статья открытого доступа распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются
<р> Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в работе
<р> Финансирование:. Публикация поддерживается Государственным комитетом по польской научной числа научным исследованиям в 1890 /B /P01 /2010/39, университет Вармии и Мазур в Ольштыне (установленное законом исследование) грант № 15.610. 003-300 и НОУ (ведущий национальный научно-исследовательский центр) Научный Консорциум «Здоровое животное - Безопасные продукты питания", решение Министерства науки и высшего образования № 05-1 /KNOW2 /2015}

Конкурирующие интересы: авторы. заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов.

Введение

за последние тридцать лет показали все более быстрый прогресс в изучении иннервации желудочно-кишечного тракта. В общем, желудок и кишки иннервируются как нейроны, найденных в пределах интрамуральных ганглиев и, таким образом, относятся к энтеральной нервной системы (ENS) [1, 2], а также внешних клеточных тел, происходящих из симпатической, парасимпатической и сенсорных ганглиев [3- 5]. Недавние исследования показали, что симпатические ганглии являются не только центрами нервной интеграции, но и обладание важными свойствами по их нейронов. Среди прочего, они включают в себя сходимость центральных импульсов, проекции висцеральных импульсов на пред- и пост-синаптических уровней, доступ к /позволяя для центральных волокон висцеральной защиты и кардиостимулятором активности [6, 7]. Тем не менее, симпатические постганглионарные нейроны, которые поставляют желудочно-кишечного тракта напрямую не влияют на его функции, но оказывают свои эффекты через ENS [8, 9], или сужают артерии, которые снабжают пищеварительный орган [10]. Кроме того, функция желудка опосредуется и модулируется большим количеством нервных передатчиков и нейропептидов, которые играют определенную роль в регуляции моторики, секреции кислоты, высвобождение гормонов, местного кровотока и механизмов защита слизистых оболочек [3].
<Р> Существует большой объем опубликованных исследований, описывающих симпатической иннервации желудка, основанный главным образом на мелких лабораторных животных, таких как крысы [10-12], мыши [13, 14], морской свинки [15, 16], кролика [17] или домашние животные, такие как собаки [7] и кошки [18, 19]. Авторы сообщают, что prevertebral ганглиев, например. целиакия ганглий являются основным источником постганглионарных симпатической иннервации органов брюшной полости. В то время как только единичные perikarya были найдены в паравертебральной ганглиев, например. симпатической цепочки ганглиев [16, 20]. До сих пор, относительно мало известно о иннервации желудка у домашней свиньи, которая близко напоминают, что у человека в отношении анатомической и физиологической характеристики [21, 22]. Предыдущие исследования в этой области описывают только внешнюю иннервации тонкой и толстой кишки [4, 20] или сосредоточиться на энтеральной нервной системы [23, 24].
<Р> Автономная нервная система характеризуется высокой пластичностью в ответ к различным патологическим стимулам, а также способность адаптироваться к изменяющимся условиям окружающей среды [25, 26]. Эта адаптация предполагает изменение в химической фенотип нейронов повышенной экспрессии некоторых нейротрансмиттеров и снижение других или активации экспрессии ранее неактивных генов [26, 27]. В последние годы наблюдается все большее количество литературы, описывающей изменение химического кодирования симпатических нейронов, снабжающих желудочно-кишечного тракта в течение илеит [20], пролиферативной энтеропатии [28], колиты [4] и аксотомии [29-31]. Кроме того, некоторые авторы предполагают, что симпатические нейроны изменяют не только их химические характеристики, но и обладают способностью к регенерации [32]. Интересно отметить, что некоторые авторы предполагают, что симпатическая нервная система играет роль в качестве модулятора желудочно-кишечного воспаления, потому что симпатических нейронов поставлять лимфоидной ткани. К тому же, наличие рецепторов для симпатических медиаторов в иммунных клетках были подтверждены [33].
<Р> ацетилсалициловая кислота, хорошо известен как аспирин (ASA), является одним из наиболее часто используемых нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) во всем мире и особенно ценится за свои лечебные свойства. Преимущества широких терапевтических возможностей, таких как профилактика сердечно-сосудистых заболеваний, лечение симптомов разнообразных воспалительных состояний, противоопухолевой активности или облегчения боли были известны в течение многих лет [34]. Аспирин предотвращает синтез простагландинов путем ингибирования фермента циклооксигеназы (ЦОГ) с помощью необратимого ацетилирование гидроксильной группы остатка серина 1 [35, 36]. ЦОГ называется также как простагландин endoperoxidase синтазы представляет собой связанный с мембраной гемо- и гликопротеин фермент, который катализирует превращение клеточной мембраны фосфолипидов, участвует в синтезе простаноидов, содержащих: простагландинов (PG), простациклин (ОПИ) и тромбоксаны (TXA) и существует как 3 изоформы (ЦОГ-1, -2 и -3) [34, 37]. Эйкозаноидов, полученные из реакции, катализируемой СОХ-1, участвуют в агрегации тромбоцитов, защиту слизистой оболочки желудка, а также многих других физиологических процессов, в то время как те, которые образуются при участии ЦОГ-2 участвуют только в развитии воспалительной реакции. ЦОГ-3 является пост-транскрипционной модификации ЦОГ-1, происходящих в центральной нервной системе [38].
<Р> Аспирин является неселективным НПВС и ингибирует ферментативную активность ЦОГ-1 в несколько сотен раз больше эффективно, по сравнению с ЦОГ-2 [38, 39]. Действительно, его результаты действия в обоих полезных (жаропонижающее и противовоспалительное) и токсический (желудочно-кишечные травмы) эффектов [40]. Даже небольшая доза аспирина вызывает поверхностное повреждение в желудочном эпителии и приводит к аномальному ионного потока с увеличением H ^{+ обратной диффузии. Кроме того, ингибирование ЦОГ-1, что приводит к дефициту простагландинов (PGS) в желудке и слизистой оболочке кишечника, принимается в качестве основного механизма повреждения слизистой оболочки, которые включают кровотечение, эрозий и язв [41]. Эти Harms наиболее часто встречаются в человеческом антральном и prepyloric области, хотя они также могут рассматриваться в проксимальной части двенадцатиперстной кишки [34]. Кроме того, снижение уровня простагландина Е2 (ПГЕ2) выставляет слизистая к ущербу, причиненному соляной кислоты и желчи, а также снижает способность регенерации клеток слизистой оболочки за счет уменьшения высвобождения слизи, ингибирование поверхностно-активных веществ и фосфолипидов синтеза, снижение секреции HCO <суб> 3 и нарушения кровотока в микроциркуляции [40, 42]. В настоящее время, влияние аспириновой гастрита на адаптивных процессов и нейрохимических свойств симпатических нейронов, снабжающих желудок довольно фрагментарный
<р> Таким образом, этот эксперимент был разработан, чтобы установить: 1). Локализацию и распределение симпатических нейронов, снабжающих prepyloric область желудка у домашней свиньи; 2) нейрохимические фенотип трассируемых perykarya в физиологическом состоянии; 3) возможные изменения в нейрохимических кодировании отслеживаемых нейронов во время гастрита, вызванных длительным добавок ацетилсалициловой кислоты.}

Материалы и методы

Этика Заявление
<р> была утверждена Методика эксперимента в том числе эвтаназии животных Местной Ethical комиссии для проведения экспериментов на животных в университете Вармии над Мазур в Ольштыне (разрешение Numbers 05/2010). Все операции проводили под наркозом тиопентал натрия, и все возможные усилия были предприняты, чтобы минимизировать страдания животных.

Животные и хирургические процедуры
<р> Исследование проводилось на десяти несовершеннолетних самок свиней крупной белой польский порода, приблизительно 8 недель и весом около 20 кг. Животные содержались в обычных условиях освещения в среде с контролируемой температурой. Кормили коммерческой смеси зерна и водопроводной воды вволю
. Все животные были preanesthetized с azaperone (Stresnil, Jansen Pharmaceutica NV, Бельгия, 4 мг /кг массы тела, им) 15 мин перед нанесением основного анестетика, тиопентал натрия (тиопентал, Sandoz, Кундль-Rakusko, Австрия; 10 мг /кг массы тела при внутривенном введении). Для того, чтобы локализовать симпатические тела клетки, свиньи были подвергнуты срединной лапаротомии и получали инъекции флуоресцентного ретроградной нейронного трассирующими Fast Blue (FB, EMS-Chemie, GmbH, Германия) в ромбовидной часть (около 4 см х 4 см) желудка передней стенки prepyloric при общем объеме 50 мкл 5% раствора (1 мкл на 1 инъекции). Для того, чтобы свести к минимуму утечку радиоактивной метки в окружающие ткани, игла шприца Гамильтона была оставлена ​​на месте в течение 20-х годов, после каждой инъекции, а затем область инъекции затем промыты изотоническим солевым раствором и осторожно протирают марлей. После операции инъекции антибиотика (Betamox Л.А., ScanVet, Польша, 15 мг /кг веса тела, внутримышечно) и анальгетики (мелоксикам-Metacam, Берингер Ингельхайм VETMEDICA GmbH, Германия, 0,4 мг /кг веса тела, внутримышечно) применялись. Для того, чтобы свести к минимуму послеоперационная боль мелоксикам (Metacam, Boehringer Ingelheim VETMEDICA GmbH, Германия, 0,4 мг /кг веса тела, внутримышечно) инъекции вводили один раз в день. Состояние здоровья животных контролировали с помощью ветеринара по крайней мере 4 раза в день
<р> Затем свиньи были случайным образом распределены в одну из двух экспериментальных групп:. Контроль (группа C, N = 5) и группы (ASA N = 5). Животных, составляющие группу ASA, от седьмой день после инъекции FB, получали ацетилсалициловую кислоту перорально (аспирин, BAYER; 100 мг /кг веса тела), за 1 ч до кормления. Гастроскопической исследование было выполнено, чтобы исключить повреждения в слизистой оболочке желудка у животных из группы АСК в первый день и подтвердить гастрита, вызванного ASA-лечения в последний день аспирин добавок (с использованием видео-эндоскоп Olympus GIF 145 с рабочей длиной 1030 мм и диаметром 9,8 мм)
. <р> После 4-недельного времени выживания (21 й день лечения ASA), как контроль и ASA свиней были глубоко reanaesthetized и умерщвляли путем передозировки тиопентала натрия. Затем они были транскардиальную перфузию 4% забуференном параформальдегида (рН 7,4). Гастрит у животных группы ASA была подтверждена гистологической экспертизы фрагментов prepyloric стенки желудка, собранной после перфузии (с использованием обычных гистопатологические методов). После перфузии, были собраны следующие ткани: чревного-краниальной брыжеечной ганглиев комплекс (CCMG) (известный также как целиакия-верхняя брыжеечная ганглии комплекса (CSMG)); грудного отдела, поясничного и крестцового симпатической цепочки ганглиев (SChG), черепных и средний шейный ганглий, надпочечниковой ганглии, небольшой ганглиях intermesenteric и почечных сплетений, каудальной брыжеечной ганглиев (CaMg). Собранные ткани фиксировали погружением в воду в том же фиксаторе в течение 20 минут, промывали в фосфатном буфере (рН 7,4) в течение трех дней, и, наконец, были сохранены в 30% буферном растворе сахарозы, пока они не оседают на дно емкости для дальнейшей обработки .

Immunohistochemistry и статистика
<р> Четырнадцать-микрометра толщиной криостата срезы образцов тканей были проанализированы под флуоресцентным микроскопом (Olympus BX 51, Olympus, Польша), оснащенный фильтром установлен подходит для наблюдение FB, чтобы локализовать и считать симпатические нейроны, содержащие изотоп. Для определения относительного числа FB-положительных perikarya, нейроны подсчитывали в каждом четвертом разделе. Были рассмотрены только нейроны с четко видны ядра. Затем отдельные разделы с FB-меченых perikarya были обработаны для рутинного двойной маркировки методом иммунофлуоресценции с использованием первичного антисыворотку у разных видов и видов-специфических вторичных антител (таблица 1). Если коротко, то после того, как воздушной сушки при комнатной температуре в течение 45 мин. и рост в 0,1 М фосфатно-солевом буфере (PBS, рН 7,4;. 3 х 10 мин), срезы блокировали смесью, содержащей 10% лошадиной сыворотки и 0,1% бычьего сывороточного альбумина в 0,1 М PBS, 1% Тритон Х- 100, 0,05% тимеросала и 0,01% азида натрия в течение 1 ч при комнатной температуре, чтобы уменьшить неспецифическое фоновое окрашивание. После промывки в PBS (3 х 10 мин.), Срезы инкубировали в течение ночи при комнатной температуре и при первичной антисыворотки тирозингидроксилазе (TH), допамина бета-гидроксилазы (DβH), нейропептид Y (NPY), Галанина (GAL), нейрональной синтазы окиси азота (нОАС), Leu 5-энкефалина (ЛЕНК), кокаиновой и amphetamine- транскрипт пептид (ВОЗ), кальцитонин, связанного с геном пептид (CGRP), вещество Р (SP) и вазоактивный кишечный пептид (VIP) ( Таблица 1). После последующей промывкой в ​​PBS (3 х 10 мин.), Срезы инкубировали с смеси вторичных антител (Таблица 1) в течение 1 ч при комнатной температуре для визуализации первичных антител, используемых в данном исследовании. После окрашивания срезы смонтированы с карбонатом буфером глицерина (рН 8,6) и крышкой-поскользнулся.

Стандартные элементы управления, то есть для предварительной абсорбции нейропептида антисыворотки с соответствующим антигеном (20 мкг антигена /мл разведенной сывороткой, все антигены приобретены у полуострова, Sigma или ABD Serotec) и упущение, а также замена всех первичных антисыворотки неиммунного сывороток были проведены для проверки иммуногистохимическое маркировки. Там не было флуоресценции наблюдается во всех этих контрольных окрашиванием, то, что подтверждает специфичность методологии и антитела прикладной.
<Р> Затем срезы исследовали под микроскопом Olympus BX51, оснащены фильтрами, подходящих для AlexaFluor 488, AlexaFluor 546, и Быстрый синий, и фотографии были захвачены цифровой камерой, подключенной к ПК, оснащенный Olympus Cell F программного обеспечения анализа изображения (Olympus, Токио, Япония). Срезы окрашивали для той же комбинации антигенов, присвоенных количественных исследований были разделены по крайней мере, 100 мкм, чтобы избежать двойного анализа нейронного somata. Число FB-положительным perikarya подсчитанных для каждой комбинации антител была выше 200 нейронов на животное. Данные из обеих групп были объединены, статистически анализировали с использованием Statistica 10 программного обеспечения (StatSoft Inc., Tulsa, Оклахома, США), а также были представлены в качестве средства ± стандартная ошибка среднего (SEM). Значительные различия были оценены с использованием т критерия Стьюдента для независимых выборок (* P &ЛТ; 0,05 и ** P &л; 0,001). Кроме того, для полуколичественного оценки плотности нервных волокон, иммунореактивных к каждому веществу исследуемого, произвольная шкала была использована, где (-) - отсутствие волокон; (+) - Одиночные волокна; (++) - Редкие нервные волокна; (+++) - Изображает очень плотные нервные волокна

Результаты

Быстрый Синий трассировка и иммуногистохимии
<р> Быстрые тела нервных клеток, содержащих Сине были найдены исключительно в CCMG. комплекс, в то время как остальная часть пред- и паравертебральной симпатических ганглиев были лишены FB- меченых клеток. В среднем, комплекс CCMG содержал 1615 ± 20,73 FB + нейронов в контроле и 1644 ± 38,03 нейронов в группе АСК, соответственно. Большинство меченных нейронов располагались в районе целиакией полюсов комплекса CCMG, только одно-меченый somata в другой части CCMG были идентифицированы. Клеточные тела были овальные, круглые или многополярный с короткими дендритов и центрально расположенной ядра и измеряется 20-45 мкм в диаметре. В некоторых случаях наблюдались один длинный аксон-подобный процесс прослежен от ячейки.
<Р> У контрольных животных двойной маркировки иммуногистохимии показали, что подавляющее большинство FB + клетки иммунореактивная к TH (94,85 ± 1,01%) и DβH (97,10 ± 0,97%). Кроме того, все th- положительные клеточные тела были иммунореактивная к DβH, что подтвердили сильно Катехоламинергическая характер (рис 1A, 1B, 1C и 1D). Применение антител против нейропептида Y, изображенном, что NPY иммуномечение был найден в 46,88 ± 2,53% от FB- меченый perikarya (рис 1E, 1F, 1G и 1H). Кроме того, еще одна популяция FB- позитивных нейронов охватываемой GAL в 8,40 ± 0,53% (рис 1I, 1J, 1K и 1L). Кроме того, GAL-позитивных нервных волокон (+) кстати образуются пласты, окружающие органы gal- ИК-клеток. С другой стороны, ни один из FB + нейронов содержали нОАС, Ленк, CART, SP и VIP. Тем не менее, все эти нейротрансмиттеры присутствовали в нервных волокон, окружающих прослежены perikarya. Большое количество варикозных CART-позитивных нервных волокон (+++) тесно окружали FB-меченых нейронов и сформировали Баскет-подобные структуры вокруг них (рис 2А, 2В, 2С и 2D). Микроскопический анализ срезов, инкубированных с анти-CGRP антител выявили плотную сеть из CGRP-положительных волокон часто локализованных рядом с FB-положительных клеток (+++) (рис 2E, 2F, 2G и 2H). Только одного варикозная или простой нОАС-ИК (+) (рис 1М, 1N, 1O и 1P), ЛЕНК-ИК (++) (рис 1R, 1S, 1Т и высотой 1U), SP-IR (+) (рис 2I, 2J, 2K и 2L) и VIP-IR (+) (рис 2М, 2N, 2O и 2P) нервные волокна, иногда образуя небольшие пучки, были рассеяны по всему ганглии между отслеживаемых клеточных тел (таблица 2).
<р> Гастрит, индуцированный продолжительном добавок ацетилсалициловая кислота изменила шаблоны кодирования из множества FB + клеток. Популяция TH-положительных и DβH-позитивных клеток была снижена (таблица 3). При микроскопическом исследовании участков показал, что 85,78 ± 2,65%, были ТН-положительным, в то время как 88,82 ± 1,63% от FB- отслеживаемых нейронов выражали DβH иммунореактивности (рис 3A, 3B, 3C и 3D). Кроме того, повышающая регуляция из NPY-нейронов ИК до 76.59 ± 3.02% было также статистически значимым (рис 3Е, 3F, 3G и 3H). Самое замечательное различие в химическом кодировании отслеживаемых симпатических нейронов между контролем и ASA-обработанных свиней включали очень повышенное количество GAL (до 26,45 ± 2,75%) (рис 3I, 3J, 3K и 3L). В FB- положительные клетки, содержащие GAL были также снабжены многочисленными, в основном варикозного нервных волокон GAL-IR. Кроме того, были обнаружены клетки, содержащие нОАС в 6,13 ± 1,11% (рис 3M, 3N, 3O и 3P) и LENK в 4,77 ± 0,42% (рис 3R, 3S, 3Т и 3U) только в ASA- животных, обработанных. Аналогично с контрольными животными, прорисованные perikarya не были иммунореактивная к телеге, CGRP, SP и VIP, но нервных волокон, содержащих эти нейротрансмиттеры наблюдались в непосредственной близости от FB- маркированы somata и напоминал наблюдаемым в контрольной группе.

гастроскопической и гистопатологические экспертиза
<р> гастроскопической экспертиза производится в первый день эксперимента исключены поражений в слизистой оболочке желудка у животных как от контроля и группы ASA. Тем не менее, тот же осмотр выполняется в последний день подтвердили гастрит, вызванный добавками ацетилсалициловой кислоты. наблюдались гиперемия, петехии, поверхностных эрозий и язв маленьких не только в желудка, но и двенадцатиперстной кишки слизистой оболочки: макроскопические изменения, такие как. Гистопатологические оценка фрагментов стенки желудка prepyloric области раскрыты микроскопические изменения, такие как:. Гиперемию слизистой оболочки, глубокие эрозий, foliculosis, пролиферацию нейтрофилах и эозинофильная инфильтрация, простирающихся в подслизистую (Фиг.4А, 4В, 4С и 4D)

Обсуждение
<р> Это первый доклад, демонстрирующий точной локализации, морфологии и химического кодирование симпатических нейронов, к prepyloric области свиного желудка. Основным источником постганглионарными нервных волокон, снабжающих эту область происходят из комплекса CCMG, в то время как до и паравертебральный симпатические ганглии были лишены из FB- меченых клеток. Эти результаты согласуются с данными, полученными от крыс [3, 12], морской свинки [15, 16] и собаки [7] и являются еще одним свидетельством о создании преобладающее значение CCMG нейронов в желудке иннервации. Тем не менее, незначительные вклад в симпатической иннервации желудка у крыс и морских свинок происходил из торакальной цепи ганглиев. Нейроны, поставляющие стенки желудка у крыс были расположены от Т <к югу от> 1 до L <суб> 3 в правой цепи, и от Т <югу> 2 L <суб> 3 в левом соответственно [10], в то время как клеточные тела иннервирующих слизистую оболочку желудка крыс были найдены из Т <к югу от> 6 до Т <югу> 9 симпатической цепочки ганглиев [3]. В свинью нейроны подопытными, расположенные во всех торакальной цепи ганглиев проектировали желудка [16]. В отличие от этого, это исследование показывает, что эти ганглии не участвуют в иннервации prepyloric области свиного желудка, скорее всего, они иннервируют другие части желудка, что требует дальнейшего изучения. Кроме того, это результаты хорошо коррелируют с этих исследованиях постулировать характерное топографическое расположение нейронов, по отношению к их ткани-мишени, в свиная CCMG комплекса [43].
<Р> В настоящем исследовании показал, что подавляющее большинство FB- позитивных нейронов в контрольной группе были сильно катехоламинергическая характер, как показали одновременного th- и DβH- иммунореактивности. Эти результаты хорошо согласуются с исследованиями, описывающих адренергической природу большинства нейронов CCMG у крыс, морской свинки, собаки и домашней свиньи [10, 16, 44, 45]. Лишь небольшое число отслеживаемых нейронов CCMG была лишена этих ферментов, которые могут указывать, что они являются население неадренергическое, возможно, холинергических нейронов, что согласуется с предыдущими выводами о гистохимия CCMG в обоих Гвинеей и домашних свиней [45, 46]. Кроме того, эти данные указывают на то, что значительное количество FB- маркированы perikarya выразил NPY иммунореактивности. Данные литературы свидетельствуют о том, что NPY считается основным передатчиком пептидергических в обоих: симпатической и парасимпатической нервной системы [47]. А именно, NPY, как нейронные и гормонального регулятора играют важную роль в физиологии млекопитающих желудочно-кишечного тракта, в том числе торможение перистальтики кишечника, опорожнение желудка, секреции кислоты и секреции поджелудочной экзокринной. Более того, этот пептид влияет на кровеносные сосуды, а также участвует в регуляции кишечной кровотока [48, 49]. С другой стороны, NPY также наблюдалось в свиных нейронов CCMG выступающими в подвздошной кишке [50]. Кроме того, это исследование показало, что gal- ИК нейроны представляют собой часть ретроградно меченных клеток. Это хорошо согласуется с тем, что Галанин является биологически активным нейропептида, имеющий широкое распространение в центральной и периферической нервной систем, а также периферических тканях многих видов [51-53]. В желудочно-кишечном уровне, Галанин ингибирует секрецию желудочного сока, выпуск многочисленных панкреатических пептидов, регулирует всасывание слизистой оболочки эпителиальных клеток и модулирует моторику желудочно-кишечного тракта [54]. Галанин проявляет свою физиологическую роль, действуя на одном из трех различных подтипов G-белком рецепторов (GAL-R1, GAL-R2 и GAL-R3) широко распространены во многих тканях и органах [52].
<Р> Несмотря на то, ни один из FB- положительных нейронов содержали нОАС, ЛЕНК, CART, CGRP, SP и VIP, все эти нейромедиаторы не присутствовали в нервных волокон, окружающих прослежены perikarya. Многочисленные варикозное CART-позитивных нервных волокон тесно окружили FB-позитивных нейронов и сформировали баскет- как структуры вокруг них. Кокаиновой и амфетамином транскрипт (CART) пептид обнаружен в 1981 году в овечьего гипоталамуса была описана в различных сегментах желудочно-кишечного тракта многочисленных видов млекопитающих, включая человека [2, 55, 56]. Несмотря на то, что роль этого пептида в функции кишечника конца не установлена, некоторые авторы предполагают, что корзинка участвует в регуляции перистальтики кишечника, ингибирование кормления, снижение секреции желудочного сока, обострение моторику толстого кишечника [57]. До настоящего времени, изменения в количестве CART-позитивных нервных структур в ENS при различных патологических факторов были описаны, что может предложить вовлечение CART в выживании и нейропротекции [58, 59]. CGRP и SP рассматриваются как pronociceptive сенсорных нейропептидов [60]. Количество и распределение SP-IR и CGRP-IR волокон очень похожи на те, которые уже были описаны Лакомый и др. [45] для волокон, окружающих TH-позитивных нейронов в свиных CCMG. Они представляют собой один из источников в viscerofugal проекций из кишечной стенки или происходят из DRG афферентных нейронов, так как эти специфически кодированные нейроны были описаны в кишечно ганглиев [55, 61], а также широко распространены в сенсорных нейронов [5]. Кроме того, наблюдались единичные варикозные VIP-IR нервные волокна рассредоточены по всей ганглии между отслеживаемых клеточных тел. VIP, вероятно, участвует в кишечнике-кишечном ингибиторной рефлекторной дуги и происходит в кишечно афферентов иннервирующих CCMG [45]. Наконец, источник нОАС-IR и ЛЕНК ИК волокон визуализированных в данном исследовании, может быть преганглионарные нейроны, расположенные в intermediolateral ядре поясничного отдела спинного мозга или DRG от нейронов. Непосредственная близость волокон, раскрытых в данном исследовании, по отношению к ретроградно меченные нейроны CCMG могут указывать косвенные эффекты этого пептида в симпатической иннервации желудка. Тем не менее, вопрос о влиянии этих волокон на симпатических нейронов, снабжающих prepyloric область желудка еще предстоит выяснить.
<Р> Несмотря на то, что воспаление слизистой оболочки желудка, вызванное длительным добавок ацетилсалициловая кислота, не имеет влияние на число нейронов, иннервирующих анализируемой области желудка ретроградно меченные симпатические клетки проявляют большую пластичность в их нейропептидов фенотипа. ASA-индуцированной гастрит привело к значительным изменениям в химическом кодировании отслеживаемых нейронов, за счет снижения производства ферментов катехоламинов-синтеза тракта и повышающей регуляции синтеза нейропептидов, участвующих в нейронных механизмов защиты (NPY, GAL, ННО, Ленком). Эти данные согласуются с тем, что восстанавливающий симпатические нейроны временно вниз регулируют экспрессию некоторых нейромедиаторов, особенно TH [32] и начать производить нейротрансмиттеров, участвующих в защите и выживание [31].
<Р> NPY становится в качестве регулятора воспаления, участвующих в аутоиммунных заболеваний, астмы, рака и многих желудочно-кишечных расстройств, таких как melabsorption, короткого кишечника, воспалительные заболевания кишечника и панкреатит. NPY, в качестве противовоспалительного пептида, участвует в воспалительной реакции путем набора незрелых дендритных клеток и путем содействия поляризации Th2 [49]. NPY также могут быть вовлечены в воспалительную реакцию путем дифференциации клеток-хелперов Т, моноцитов медиатора, естественных киллеров [NK] активации клеток, и перераспределение иммунных клеток, что подтверждается более ранние сообщения о двунаправленной перекрестных помех между нервной и иммунной систем в желудочно-кишечном тракте [62, 63 ]. Эти результаты сходны с результатами предыдущих исследований, где были повышены число NPY-положительных симпатических нейронов во время различных патологических состояний, в том числе и пролиферативной энтеропатии свиней колит [4, 28]. Кроме того, эксперимент в человеке показано увеличение NPY- ИК нервных окончаний внутри слизистой оболочки при хроническом гастрите, вызванной хеликобактерной
[62]. Это наводит на мысль, что NPY является важным нейропротективная фактором, который играет роль в выживании и регенерации поврежденных нейронов в пределах воспаления. Интересно, что NPY может быть также секретируется некоторыми иммуноцитов, которые можно предположить, что NPY непосредственно участвует в нейрогенного воспаления [64]. Тем не менее, точная функция NPY в нейрональной реакции во время АСК-индуцированной гастрит у свиней остается невыясненной и требует дальнейшего исследования
. <Р> Самое замечательное различие в immuhistochemical фенотипа трассируемых нейронов очень увеличилось количество gal- иммунореактивных клеток тела в ASA- группы животных. Галанин, безусловно, участвует в регуляции воспалительных процессов. Действительно, Галанин рассматривается в качестве регулятора провоспалительных цитокинов, так как администрация Галанина увеличила производство TNF-alpha, IL-1 α и IL-8 в человеческих кератиноцитов в физиологическом состоянии [65]. На сегодняшний день увеличение экспрессии Галанин в нейронных структурах, как вегетативные и энтеральной нервной системы, были обнаружены во время химически индуцированного колита [4, 51] и пролиферативной энтеропатии [28] у свиней, хронический дивертикулит у человека [66] и кишечной инфекции Salmonella у мышей [67].

• PLoS ONE: Характеристики и клинико-патологическими выживания Результаты первичного перстневидно карциноме клет…
• PLoS ONE: конъюгированная линолевая кислота Supplementation под высоким содержанием жиров модулирует Желудок экспресси…