PLoS ONE: Pratęstų Acetilsalicilo rūgštis papildai sukeltos gastritas įtaka simpatinės neuronų Tiekianti Prepyloric regionas kiaulių skrandžio Neurochemija

Abstract

Šis eksperimentas buvo sukurta siekiant nustatyti lokalizacijos ir Neurochemical fenotipo užjaučiančių neuronų tiekia prepyloric plotas kiaulių skrandžio į fiziologinės būklės ir acetilsalicilo rūgštis (ASR), sukeltos gastritas metu. Siekiant lokalizuoti simpatinė perikarya iš tiek kontrolės ir acetilsalicilo rūgšties apdoroti (ASR) gyvūnai skrandžiams buvo sušvirkšta neuronų atgal bandomųjų Fast mėlyna (FB). Septynias dienas rašyti FB injekcijos, gyvūnai buvo suskirstyti į kontrolės ir ASA papildų grupei. ASA grupė buvo suteiktas su sv 100 mg /kg ASA žodžiu 21 dienų. Apie 28 ^{-osios dieną visi kiaulės buvo numarinti palaipsniui perdozavimo anestetikų. Tada keturiolikos mikrometrą storio Kriostatas skyriai buvo tvarkomi už kasdieninį dukart ženklinimo imr.rnofluorescencija, naudojant pirminės antiserumus nukreiptą tirozinhidroksilazės (TH), dopamino β-hidroksilazę (DβH), neuropeptidas Y (NPY), galanino (GAL), neuronų azoto oksido sintezės (nNOS) lėja 5-enkefalinas (LENK), kokaino ir amfetaminą reguliuojama stenograma peptidas (KREPŠELIS), kalcitonino genų, susijusių su peptido (CGRP), substancijos P (SP) ir vazoaktyvus žarnyno peptidas (VIP). Gauti šio tyrimo duomenys rodo, kad Postganglionic simpatinė nervų skaidulos, tiekiantys prepyloric plotas kiaulių skrandžio kilę iš pilvo ertmės, kaukolės pasaito ganglinę kompleksas (CCMG). Be kontrolinių gyvūnų, FB-paženklinti neuronai išreiškė TH (94,85 ± 1,01%), DβH (97,10 ± 0,97%), NPY (46,88 ± 2,53%) ir GAL (8,40 ± 0,53%). ASA grupės TH- ir DβH- teigiami nervų ląstelės buvo sumažintas (85.78 ± 2.65% ir 88.82 ± 1.63% atitinkamai). Be to, ASA- sukeltas gastritas, kad padidėja išraiška NPY (76,59 ± 3,02%) ir GAL (26,45 ± 2,75%), taip pat Novo-sintezės nNOS (6,13 ± 1,11%) ir Lenk (4,77 ± 0,42%), kad atsekti CCMG neuronų. Be to, iš Galvij, CGRP-, SP-, VIP, LENK- tinklas, nNOS- imunoreaktyvi (IR) nervinių skaidulų apjuosta FB-teigiamų perikarya nepastebėta nepažeistas ir ASR gydytų gyvūnų. Šio tyrimo rezultatai rodo, dalyvavimą šių neuropeptidų Tobulinant ar matyt neutralizavimo skrandžio uždegimas}

nurodomoji dalis:. Palus K Całka J (2015) Pratęstų Acetilsalicilo rūgštis papildai sukeltos gastritas įtaka Neurochemija Simpatinė Neuronų Supplying Prepyloric regionas kiaulių skrandį. PLoS ONE 10 (11): e0143661. Doi: 10,1371 /journal.pone.0143661

redaktorius Mykolas Bader Max Delbrück centras molekulinės medicinos (JDP), Vokietija

Įstojo: rugpjūčio 16, 2015; Priėmė: Lapkričio 6, 2015 m Paskelbta: Lapkričio 25, 2015

Visos teisės saugomos: © 2015 palus, Całka. Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Duomenų Prieinamumas: Visi susiję duomenys yra per popieriaus

finansavimas:. Leidinys remia Lenkijos valstybės komiteto moksliniams tyrimams skaičius 1890 /B /P01 /2010/39, Varmijos ir Mozūrijos universitetas Olštyne (numatytų teisės aktais moksliniai tyrimai) suteikti Nėra 15.610. 003-300 ir žinoti (vedantis Nacionalinis mokslinių tyrimų centras) Mokslinė konsorciumas "Sveikas gyvūnų - saugaus maisto", ministerijos mokslo ir studijų Nr 05-1 /KNOW2 /2015

konkuruojančių interesų sprendimas: autoriams. pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja.

Įvadas

Per pastaruosius trisdešimt metų parodė, vis sparčia pažanga studijų inervacijos virškinimo trakte. Apskritai, skrandžio ir žarnų būtų įnervuotą tiek neuronų rastos vidine nervus ir taip priklauso žarnų nervų sistemos (ENS) [1, 2], taip pat pagal kilmės simpatinės, parasimpatinės ir jutimo nervus išorinių ląstelių telkinių [3- 5]. Naujausi tyrimai atskleidė, kad simpatinių mazgų yra ne tik centrai nervų integracijos, bet ir svarbių savybių turėjimas savo neuronų. Be kita ko jie apima konvergencijos centrinių impulsus, projekcija vidaus organų impulsų Peržiūrėkite prieš ir po synaptic lygius, gauti /leidžianti centrinių pluoštų visceralinių apsaugos ir stimuliatoriaus veiklos [6, 7]. Tačiau užjaučiantys Postganglionic neuronai, tiekiantys virškinimo trakto nėra tiesiogiai įtakoti savo funkcijų, bet daryti savo poveikį per ENS [8, 9], arba susiaurinti aprūpinančios arterijos virškinimo organą [10]. Be to, skrandis funkcija tarpininkaujant ir moduliuojama daug neuronų siųstuvų ir neuropeptidų, kurios vaidina vaidmenį judrumas, rūgšties sekrecijos, hormonų spaudai, vietos kraujotaką ir gleivinės gynybos mechanizmų reglamentą [3].

yra didelės apimties paskelbtų tyrimų, apibūdinami simpatinės inervacijos skrandžio, iš esmės grindžiama mažų laboratorinių gyvūnų, tokių kaip žiurkės [10-12], pelė [13, 14], jūrų kiaulytės [15, 16], triušių [17] arba naminiai gyvūnai, kaip antai šuo [7] ir katė [18, 19]. Autoriai apie tą prevertebral mazgų, pvz. celiakija mazgas sudaro pagrindinę šaltinį Postganglionic simpatinės inervacijos pilvo ertmėje. Kadangi tik pavieniai perikarya buvo rasta paravertebral mazgų, pvz. Simpatinė grandinės mazguose [16, 20]. Iki šiol palyginti mažai žinoma apie inervacijos skrandžio naminių kiaulių, kuris labai panašus, kad žmogaus atžvilgiu anatominės ir fiziologinės charakteristikos [21, 22]. Ankstesni tyrimai šioje srityje apibūdinti tik išoriškai inervacijos plonojo ir storojo žarnyno [4, 20] arba sutelkti dėmesį į žarnų nervų sistemos [23, 24].

autonominės nervų sistemos pasižymi dideliu plastiškumu, reaguojant įvairių patologinių dirgiklius ir gebėjimo prisitaikyti prie besikeičiančių aplinkos sąlygų [25, 26]. Šios adaptacijos apima keičiasi chemijos fenotipas neuronų s padidinta kai kurių neuromediatorių ir sumažinta kitų arba aktyvavimo išraiška anksčiau neaktyvių genų [26, 27]. Pastaraisiais metais buvo vis daugiau Reklaminė literatūra, apibūdinanti keisti cheminės kodavimo simpatinių neuronų tiekia virškinimo trakto ileito [20] metu, proliferacijos enteropatija [28], kolitas [4] ir axotomy [29-31]. Be to, kai kurie autoriai rodo, kad simpatinė neuronai ne tik pakeisti savo cheminę savybę, bet ir demonstruoja gebėjimą regeneruotis [32]. Įdomu tai, kad kai kurie autoriai mano, kad simpatinė nervų sistema vaidina svarbų vaidmenį kaip virškinimo trakto uždegimas moduliatoriaus, nes simpatinė neuronai tiekti limfinių audinių. Be to, dėl simpatinių neurotransmiterių imuninių ląstelių receptorių buvimas buvo patvirtintas [33].

Acetilsalicilo rūgštis, gerai žinomas kaip aspirinas (ASA), yra vienas iš dažniausiai naudojamų nesteroidinis priešuždegiminis vaistai (NVNU) visame pasaulyje ir yra ypač vertinami dėl savo gydomųjų savybių. Priemonės, kuriomis pločio terapinių, pavyzdžiui, prevencijos širdies ir kraujagyslių ligų nauda, ​​gydymas simptomų įvairovė uždegiminių būsenų, priešvėžiniai aktyvumą, arba skausmui malšinti buvo žinoma daugelį metų [34]. Aspirinas apsaugo nuo prostaglandinų sintezę slopina fermentą ciklooksigenazę (COX) per negrįžtamo acetilinimo hidroksilo grupės 1 serino liekana [35, 36]. COG pat vadinama prostaglandinų endoperoksidazės sintezės yra membrana jungiasi hemoprotein ir glikoproteino fermentas, kuris katalizuoja konversija ląstelės membranos fosfolipidų, dalyvauja prostanoidai sudaro sintezę: prostaglandino (PG), prostaciklinas (SGN) ir tromboksanai (txa) ir egzistuoja kaip 3 izoformų (COX-1, -2 ir -3) [34, 37]. Eikozanoidai, gautų iš reakcijos katalizuoja COX-1, dalyvauja trombocitų agregaciją, apsaugos skrandžio gleivinės, ir daugelis kitų fiziologinių procesų, o tų, suformuota su COX-2 dalyvavimo dalyvauja tik plėtros uždegimine reakcija. COX-3 yra po transkripcijos modifikacija COX-1, atsirandančius tame centrinės nervų sistemos [38].

aspirino yra neselektyvus NVNU ir slopina fermentinį aktyvumą, COX-1 kelių šimtų kartų daugiau veiksmingai, palyginti su COX-2 [38, 39]. Iš tiesų, jos veiklos rezultatus tiek naudingų (karščiavimą ir anti-uždegiminių) ir toksiška (virškinimo trakto sužalojimo) poveikį [40]. Net mažas aspirino dozę skatina paviršutinišką žalos skrandžio epitelį ir sukelia nenormalus jonų srauto su padidintu H ^{+ atgal difuzijos. Be to, COX-1 slopinimo, todėl trūkumas prostaglandinų (GG), skrandžio ir žarnyno gleivinę, priimtas kaip pagrindinis mechanizmas gleivinės pažeidimas, kad yra kraujavimas, erozijų, opų [41]. Šie Harms dažniausiai pasireiškia žmonėms antralinėje dalyje ir prepyloric aikštelėje, nors jie taip pat gali būti vertinamas proksimalinės dalies dvylikapirštėje žarnoje [34]. Be to, sumažėjo lygį prostaglandinų E2 (PGE2) atskleidžia gleivinė žalai, kurią druskos rūgšties ir tulžies ir sumažina regeneracijai gleivinės ląstelių gebėjimą mažinant spaudai gleivių, baseinas paviršiaus medžiagos ir fosfolipidų sintezę, mažinimo sekrecija HCO _{3 ir sutrikimai kraujo srauto mikrocirkuliacijos [40, 42]. Šiuo metu aspirino sukeltas gastritas prisitaikanti procesus ir Neurochemical savybių simpatinių neuronų tiekia skrandį įtaka yra gana fragmentiškas}}

Todėl šis eksperimentas buvo sukurta siekiant nustatyti: 1). Lokalizavimą ir platinimą simpatinių neuronų tiekia prepyloric plotas vidaus kiaulių skrandį; 2) Neurochemical fenotipas atsekti perykarya į fiziologinę būklę; 3) galimi pokyčiai neurocheminq kodavimo atsekti neuronų gastritas metu, sukelti ilgalaikio acetilsalicilo rūgšties papildų.

Medžiagos ir metodai

Etika pareiškimas

eksperimentinė metodika, įskaitant gyvūnų eutanazija buvo patvirtinta pagal vietos etikos komisijos Eksperimentai su gyvūnais ne iš Varmijos Mozūrų nad universiteto Olštyne (leidimas numeriai 05/2010). Visi chirurgija buvo atlikta pagal natrio tiopentalio anestezijos ir buvo dedamos visos įmanomos pastangos siekiant sumažinti gyvūnų kančias.

Gyvūnai ir chirurginės procedūros

Tyrimas buvo atliekamas dešimtyje nepilnamečių veislinėms kiaulėms didelio Baltosios lenkų veislė, maždaug 8 savaičių amžiaus ir sveria maždaug 20 kg. Gyvūnai buvo laikomi pagal reguliariai apšvietimo sąlygomis, naudojant kontroliuojamos temperatūros aplinkoje. Jie buvo šeriamos komercinės paskirties grūdų mišinio ir vandens iš čiaupo iki soties pervežimas. Visi gyvūnai buvo preanesthetized su Azaperonas (Stresnil, Jansen Pharmaceutica NV, Belgija, 4 mg /kg kūno svorio, im) 15 min iki pagrindinio anestetikų taikymo, natrio tiopentalio (Thiopental, "Sandoz", Kundlas-Rakúsko, Austrija; 10 mg /kg kūno masės, turint omenyje į veną). Siekiant lokalizuoti simpatinės mobiliuosius kūnus, kiaulės buvo atliktas vidutiniškai laparotomija ir gavo injekcijas fluorescencinio retrogradine neuronų trasuojančius Greitas Mėlyna (FB EMS-CHEMIE, GmbH, Vokietija) į rombo formos dalis (apie 4 cm x 4 cm) skrandžio priekinės prepyloric sienelę iš bendro tūrio, 50 pL 5% tirpalo (1 mikrol, per 1 injekcijos). Siekiant sumažinti nuotėkio mėginių, į aplinkinius audinius, iš Hamilton švirkšto adata liko vietoje 20s po kiekvienos injekcijos, o vėliau įpurškimo plotas vėliau praplautos izotoniniu fiziologiniu tirpalu ir švelniai nuvaloma marle. Po operacijos injekcijų antibiotiko (Betamox L. A., Scanvet, Lenkijos, 15 mg /kg, sv, I. M.) ir analgetikų (meloksikamas-Metacam, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Vokietija, 0,4 mg /kg sv, I. M.) buvo taikomos. Siekiant sumažinti po operacijos skausmo, meloksikamo (Metacam Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Vokietija, 0,4 mg /kg sv, I. M.) injekcijos buvo administruoja vieną kartą per dieną. Sveikatos būklė gyvūnų buvo stebimi veterinarijos gydytojo bent 4 kartus per dieną

Po to kiaulės buvo atsitiktinai priskirti vienai iš dviejų eksperimentinės grupės. Kontrolės (C grupė, n = 5) ir ASR grupėje ( n = 5). Gyvūnai sudarantys ASR, nuo septintos dienos po FB injekcijos, buvo acetilsalicilo rūgšties žodžiu (aspirinas, "Bayer"; 100 mg /kg, sv) 1 val iki šėrimo. Gastroscopic tyrimas buvo atliktas siekiant pašalinti pažeidimus, skrandžio gleivinės gyvūnams, ASA grupės pirmos dienos ir patvirtinti gastritas sukelia ASA-gydymo paskutinę dieną aspirino papildų (naudojant vaizdo-endoskopą "Olympus GIF 145 su darbo ilgis 1030 mm, o skersmuo 9,8 mm).

Po 4 savaičių išlikimo laiką (21 ^{St dieną ASA gydymo), tiek kontrolės ir ASA kiaulės buvo giliai reanaesthetized ir paaukojo yra natrio tiopentalis perdozavimo. Tada jie buvo transcardially nušvies 4% buferiniame paraformaldehido (pH 7,4). Gastritas gyvūnams ASA grupės buvo patvirtinta histopatologiniams išnagrinėjus fragmentais prepyloric skrandžio sienos surinktos po perfuzijos (naudojant įprastus histopatologinių metodus). Po perfuzijos, šie audiniai buvo renkami: į celiakija-kaukolės pasaito ganglijų kompleksas (CCMG) (taip pat žinomas kaip celiakija-pasaito ganglinę komplekso (CSMG)); krūtinės ląstos, juosmens ir kryžkaulio simpatiškas grandinės mazgai (SChG), kaukolės ir vidutinio kaklo mazgai, Suprarenal mazgai, mažos mazgai iš intermesenteric ir inkstų rezginiai, uodegos pasaito mazgai (CaMG). Surinkti audiniai buvo po fiksuoto panardinant toje pačioje fiksuojamosios 20 minučių, perplaunamos fosfato buferiniu tirpalu (pH 7,4) per tris dienas ir pagaliau buvo laikomi 30% buferiniame sacharozės tirpalu, kol jie nugrimzdo į indo dugno tolesniam perdirbimui .}

imunohistocheminis ir statistika

Keturiolika mikrometrų storio kriostatas skyriai buvo analizuojami pagal fluorescencinio mikroskopo ( "Olympus BX 51," Olympus ", Lenkija) audinių pavyzdžius su filtru nustatyti tinkamas stebėjimas FB, lokalizuoti ir skaičiuoti užjaučiančius neuronų, kurių sudėtyje yra bandymo. Norėdami nustatyti santykinį skaičių FB-teigiamas perikarya, neuronai buvo skaičiuojami kas ketvirtą skyrių. buvo laikomi tik neuronai su aiškiai matomu branduolį. Tada pažymėtus skyriai su FB-paženklinti perikarya buvo tvarkomi už kasdieninį dukart ženklinimo imunofluorescenciniam technika, naudojant pirminės antiserumus iškeltas įvairių rūšių ir rūšims pritaikytus antriniai antikūnai (1 lentelė). Trumpai, po to, kai oro džiovinimo kambario temperatūroje 45 min. ir auga 0,1 M fosfato buferio druskų tirpalo (PBS, pH 7,4;. 3 x 10 min),, sekcijos buvo blokuotos mišinį, kuriame yra 10% arklio serumo ir 0,1% galvijų serumo albumino 0,1 M PBS, 1% Triton X- 100, 0,05% Thimerosal ir 0,01% natrio azido 1 valandą, o kambario temperatūroje, kad būtų sumažinti nespecifinį fono dažymo. Praplovus PBS (3 x 10 min.), Sekcijos buvo inkubuojami per naktį kambario temperatūroje su pirmine antiserumų, pareikšto tirozinhidroksilazės (TH), dopamino beta-hidroksilazės (DβH), neuropeptido Y (NPY), galanino (gal), neuronų azoto oksido sintezės (nNOS) lėja 5-enkefalinas (LENK), kokaino ir amfetaminą reguliuojama stenograma peptidas (KREPŠELIS), kalcitonino genų, susijusių su peptido (CGRP), substancijos P (SP) ir vazoaktyvus žarnyno peptidas (VIP) ( 1 lentelė). Kai atlikus perplaunami PBS (3 x 10 min.), Sekcijos buvo inkubuojamos su mišinio antrinių antikūnų (1 lentelė) 1 val kambario temperatūroje, kad būtų vizualizuoti pirminius antikūnus naudojami šiame tyrime. Po dažymo, skyriai buvo montuojamos karbonato buferiniame glicerolio (pH 8,6) ir dangtelio-paslydo.

Standartiniai kontrolę, ty preabsorption už neuropeptido imuniniai serumai su atitinkamu antigeno (20 mikrogramų /ml antigeno praskiesta antiserumo, visų antigenų perkamos iš pusiasalio, Sigma ar Abd Serotec) ir neveikimas, taip pat iš visų pradinių imuninius serumus pakeitimas ne imuniniai serumai buvo atlikta išbandyti imunohistocheminės ženklinimo. Nebuvo fluorescencija pastebėtas visose šių kontrolės stainings, ką patvirtina metodiką ir antikūnų taikoma, ypatybes.

Profiliai tada buvo tiriamas Olympus BX51 mikroskopu, įrengtas su filtrais tinka AlexaFluor 488, AlexaFluor 546 ir Greitas Mėlyna ir nuotraukos buvo užfiksuotas skaitmeninio fotoaparato prijungtas prie kompiuterio, įrengta "Olympus Mobilusis F vaizdo analizės programinės įrangos (" Olympus ", Tokijas, Japonija). Nudažytą už tą patį derinys antigenų priskirtų kiekybinių tyrimų dalys buvo atskirtos ne mažesnio negu 100 m, kad būtų išvengta dvigubo-analizę neuronų somata. Iš FB-teigiamas perikarya skaičiuojami už kiekvieną antikūnų kartu skaičius buvo virš 200 neuronų už gyvūną. Duomenys iš abiejų grupių buvo kartu, statistiškai analizuojami naudojant Statistica 10 programinę įrangą (StatSoft Inc., Tulsa, OK, JAV), ir buvo pristatyti kaip priemonė ± standartinė paklaida vidurkio (SEM). Reikšmingi skirtumai buvo vertinami naudojant Stjudento t testą nepriklausomoms mėginių (* p < 0,05 ir ** P <0,001). Be to, pusiau-kiekybinis įvertinimas nervinių skaidulų tankio imunoreaktyvių į kiekvienai tirtai medžiagos, bet kokiam skalė buvo naudojama, kur (-) - nebuvimas pluoštų; (+) - Vieniši pluoštai; (++) - Retų nervų pluoštai; (+++) - Vaizduojamas labai tankus nervų skaidulų

Rezultatai

Greitas Mėlyna sekimas ir imunohistocheminis

Greitai Blue, kurių sudėtyje yra nervų ląstelių kūnai buvo rasti tik CCMG. sudėtinga, o prieš ir paravertebral simpatinių mazgų likusieji neturi FB- paženklinti ląsteles. Vidutiniškai CCMG kompleksas pateikta 1615 ± 20.73 FB + neuronų kontrolės ir 1644 ± 38,03 neuronų ASA grupės, atitinkamai. Iš paženklinti neuronų dauguma buvo įsikūrę celiakija sergantiems polių CCMG kompleksas regione, tik vienoje vietoje paženklinti somata kitoje CCMG dalis nenustatyta. Mobilaus ryšio įstaigoms buvo ovalios, apvalios arba daugiapolis su trumpais dendritų ir centralizuotai įsikūręs branduolys ir matuojamas 20-45 mikronų skersmens. Kai kuriais atvejais buvo pastebėta viena ilgoji AXON-kaip procesas atsekti nuo ląstelių.

kontrolinių gyvūnų dukart ženklinimas imunohistocheminis atskleidė, kad didžioji dauguma FB + ląstelių buvo imunoreaktyvi į TH (94,85 ± 1,01%) ir DβH (97,10 ± 0,97%). Be to, visi TH- teigiamų ląstelių kūnai imunoreaktyvi į DβH ką patvirtino savo stipriai catecholaminergic charakterį (pav 1A, 1B, 1C ir 1D). Antikūnų prieš neuropeptido Y pavaizduotas taikymas, kad NPY immunolabeling buvo rastas 46.88 ± 2.53% nuo FB- paženklinti perikarya (pav 1E, 1F, 1G ir 1h). Be to, dar vienas FB- teigiamų neuronų riboto GAL gyventojų 8.40 ± 0.53% (pav 1I, 1J, 1K ir 1L). Be to, GAL teigiamas nervų pluoštai (+) beje suformuota formacijos supančių GAL- infraraudonuosius mobiliuosius kūnus. Kita vertus, nė vienas iš FB + neuronų santūri nNOS, Lenk, krepšelį, SP ir VIP. Tačiau visų šių neurotransmiterių buvo pateikti nervinių skaidulų aplinkinių atsekti perikarya. Daug išsiplėtusių KREPŠELIS teigiamas nervinių skaidulų (+++) glaudžiai apsuptas FB-paženklinti neuronus ir suformavo a Basket-kaip struktūras aplink juos (pav 2a, 2b, 2c ir 2d). Mikroskopinis tyrimas inkubuojamų su anti-CGRP antikūnų skyriuose atskleidė tankus iš CGRP teigiamas pluoštų (+++) dažnai lokalizuota netoliese FB-teigiamų ląstelių (pav 2E, 2F, 2G ir 2H). Tik vieno išsiplėtusių arba paprastą nNOS-IR (+) (pav 1M, 1N, 1O ir 1P), LENK-IR (++) (pav 1R, 1S, 1T ir 1U), SP-IR (+) (pav 2I, 2J, 2K ir 2L) ir VIP iR (+) (pav 2M, 2N, 2O ir 2P) nervinių skaidulų, kartais formavimo mažus ryšulėlius, buvo pasklidę po visą ganglijo tarp atsekti mobiliuosius įstaigos (2 lentelė).

Gastritas sukeltas ilgalaikio acetilsalicilo rūgšties papildų pakeitė kodavimo modelius daugelis FB + ląstelių. Iš TH-teigiamų ir DβH teigiamų ląstelių populiacija sumažėjo (3 lentelė). Mikroskopinį skyriuose parodė, kad 85,78 ± 2,65% buvo TH-teigiamas, tuo tarpu 88,82 ± 1,63% nuo FB- atsekti neuronų išreiškė DβH reaktyvumas (pav 3A, 3B, 3C ir 3D). Be to, iki-reguliavimui NPY-IR neuronų 76.59 ± 3.02% taip pat buvo statistiškai reikšmingas (pav 3E, 3F, 3G ir 3H). Ryškiausias skirtumas chemijos kodavimo atsekti simpatinių neuronų tarpusavio kontrolės ir ASR gydytų kiaulių įtraukti labai padaugėjo GAL (iki 26.45 ± 2.75%) (Pav 3I, 3j, 3K bei 3L). Į FB- teigiami elementai, kurių sudėtyje GAL taip pat buvo tiekiama daug, daugiausia išsiplėtusių GAL-IR nervinių skaidulų. Be to, elementai, kurių sudėtyje teisėti 6.13 ± 1.11% (pav 3M, 3N, 3O ir 3P) ir Lenk į 4,77 ± 0,42% (pav 3R, 3S, 3T ir 3U) buvo stebimas tik ASA- gydytų gyvūnų. Panašus į kontrolinės grupės gyvūnais, atsekti perikarya nebuvo imunoreaktyvi į krepšelį, CGRP, SP ir VIP, tačiau nervinių skaidulų, kurių sudėtyje yra šių neurotransmiterių nepastebėta arti į FB- paženklinti somata ir priminė tą, kuris pastebėtas kontrolinėje grupėje.

Gastroscopic ir histopatologiniams tyrimams

Gastroscopic tyrimas atliekamas pirmą dieną eksperimento be pakitimų skrandžio gleivinės gyvūnams iš tiek kontrolės ir ASA grupėje. Tačiau tas pats tyrimas atliktas paskutinę dieną patvirtino gastritas, kurią sukelia acetilsalicilo rūgšties papildų. Makroskopinių pokyčių, kaip antai: hiperemija, petechijos, paviršutiniškai erozijos ir mažų opos buvo pastebėtas ne tik skrandžio, bet ir dvylikapirštės žarnos gleivinė. Histopatologinė vertinimas fragmentai skrandžio prepyloric regiono sienos atskleisti mikroskopinius pokyčius, kaip antai:. Hiperemija gleivinės, giliai erozijos, foliculosis, proliferaciją neutrophiles ir eozinofilinė infiltracija, nusidriekę į bendrą submucosa (pav 4a, 4b, 4c ir 4d)

Diskusijos

Tai pirmoji ataskaita rodo tikslų Lokalizavimas, morfologijos ir cheminį kodavimą užjaučiančių neuronų išsikišančių į prepyloric plotas kiaulių skrandį. Pagrindinis šaltinis poganglinių nervinių skaidulų, tiekiančių šis regionas yra kilę iš CCMG komplekso, o prieš ir paravertebral simpatinių mazgų buvo neturi iš FB- paženklinti ląsteles. Šie rezultatai sutampa su duomenimis, gautais iš žiurkių [3, 12], jūrų kiaulyčių [15, 16], ir šunų [7] ir teikti kitų įrodymų, patvirtinančių didžiąją svarbą CCMG neuronų skrandžio inervacijos. Nepaisant to, nepilnametis indėlis simpatinės inervacijos skrandžio žiurkėms ir jūrų kiaulyčių atėjo iš krūtinės grandinės mazgų. Neuronų tiekiančios skrandžio sieną su žiurkėmis buvo įsikūręs nuo T _{1 L 3 teisinga grandinėje, ir nuo T 2 L 3 kairėje atitinkamai [10], kadangi ląstelių įstaigos innervating žiurkės skrandžio gleivinę buvo rasta nuo T 6 T 9 simpatiškas grandinės mazguose [3]. Be jūrų kiaulyčių neuronai, esantys visose krūtinės grandinės mazgų buvo projektuoti į skrandį [16]. Priešingai, šis tyrimas rodo, kad šie mazgai yra ne dalyvauja prepyloric regione kiaulių skrandžio inervacijos, greičiausiai jie Unerwiać kitos dalys skrandžio, kuris reikalauja tolesnio tyrimo. Be to, šis išvados koreliuoja su šių tyrimų postuluojant būdingą topografinės išdėstymas neuronų, atsižvelgiant į jų tikslinių audinių, o kiaulių CCMG komplekso [43].}

Šis tyrimas atskleidė, kad didžioji dauguma FB- teigiamų neuronų kontrolinės grupės buvo stipriai catecholaminergic charakterį, kaip atskleidė vienu metu TH- ir DβH- reaktyvumas. Šie rezultatai gerai koreliuoja su studijomis, apibūdinančių adrenerginį pobūdį daugumoje CCMG neuronų žiurkėms, jūrų kiaulytės, šuo ir naminių kiaulių [10, 16, 44, 45]. Tik nedaugeliui atsekti CCMG neuronų nesukelia šių fermentų, kurie gali rodyti, kad jie yra gyventojų ne adrenoreceptorius, galbūt Cholinerginį neuronų, kurie sutinka su ankstesnių tyrimų išvadas apie histocheminio iš CCMG abiejose Gvinėja ir naminių kiaulių [45, 46]. Be to, šie duomenys rodo, kad didelis kiekis FB- paženklinti perikarya išreiškė NPY reaktyvumas. Literatūra duomenys rodo, kad NPY laikomas pagrindinis peptidergic siųstuvas tiek: Simpatinė ir parasimpatinė nervų sistemos [47]. Būtent, NPY kaip neuronų ir hormonų reguliatorius žaisti svarbų vaidmenį žinduolių fiziologijos virškinimo trakto, įskaitant slopinamas žarnų peristaltiką, skrandžio išsituštinimą, rūgšties sekrecijos ir kasos egzokrininės sekrecijos. Be to, šis peptidas veikia kraujagysles ir dalyvauja reguliuojant žarnyno kraujotaka [48, 49]. Kita vertus, NPY taip pat buvo pastebėta kiaulių CCMG neuronų išsikišančių į klubinės žarnos [50]. Be to, šis tyrimas parodė, kad GAL- IR neuronai sudaro dalį iš retrogradely paženklinti ląsteles. Ji gerai koreliuoja su tuo, kad galanino yra biologiškai aktyvus neuropeptido, turintys plačiai pasiskirstymą centrinės ir periferinės nervų sistemų, taip pat periferiniuose audiniuose daugelio rūšių [51-53]. Tuo virškinimo lygiu, galanino slopina skrandžio rūgšties sekrecijos, daugelio kasos peptidų atpalaidavimo, reguliuoja gleivinės epitelio ląstelių absorbciją ir moduliuoja judrumo virškinimo trakto [54]. Galanino daro savo fiziologinį vaidmenį, veikdamas vieną iš trijų skirtingų potipių su G baltymu sujungto receptorių (Gal-R1, Gal-R2 ir GAL-R3) plačiai daugelyje audinių ir organų [52].

Nors nė vienas iš FB- teigiamų neuronų santūri nNOS, LENK, krepšelį, CGRP, SP ir VIP, visų šių neurotransmiterių buvo pateikti nervinių skaidulų aplinkinių atsekti perikarya. Daug venų KREPŠELIS teigiamas nervinių skaidulų glaudžiai apsuptas FB-teigiamų neuronų ir sudarė panašaus konstrukcijų aplink juos basket-. Kokaino ir amfetamino reglamentuoja stenograma (KREPŠELIS) ​​peptidas rastas 1981 metais avių pagumburio buvo aprašyta įvairių segmentų virškinimo trakto daugelio žinduolių rūšių, įskaitant žmones [2, 55, 56]. Nepaisant to, kad šio peptido žarnų funkcijos vaidmuo yra ne iki galo įtvirtinta, kai kurie autoriai rodo, kad krepšelis dalyvauja žarnyno peristaltiką, slopinimo šėrimo, mažinimo skrandžio rūgšties sekrecijos, paūmėjimo storosios žarnos judrumui [57] reguliavimo. Iki šiol, pokyčiai KREPŠELIS teigiamas nervų struktūrų skaičiaus Ens pagal įvairių patologinių veiksnių buvo aprašyta, ką gali pasiūlyti dalyvauti krepšelį išlikimo ir neuroapsauga [58, 59]. CGRP ir SP yra laikomi pronociceptive jutimo neuropeptidų [60]. Skaičius ir pasiskirstymas SP-IR ir CGRP-IR pluoštų yra gana panašūs į tuos, kurie jau buvo aprašyta Lakomy et al. [45] Dėl pluošto aplinkinių TH-teigiamas neuronų kiaulių CCMG. Jie atstovauja vieną iš iš viscerofugal prognozės iš žarnų sienelėje šaltinių arba yra kilę iš DRG jutimo neuronų, nes šie konkrečiai koduotos neuronai buvo aprašyta žarnyne tirpstančio ganglijų [55, 61], taip pat yra plačiai pasiskirsto sensorinių neuronų [5]. Be to, buvo pastebėta vienviečiai venų VIP IR nervinių skaidulų disperguoti visoje tarp atsekti mobiliuosius organų ganglijo. VIP greičiausiai patekote į žarnyno trakto slopinančio reflekso lanko ir pasitaiko žarnyno aferentai innervating į CCMG [45]. Galiausiai šaltinis iš nNOS-IR ir LENK-IR pluoštų vizualizuoti šiame tyrime galėtų būti preganglionic neuronai esančių intermediolateral branduolys juosmens stuburo smegenų ar DRG neuronų. Arti pluoštų atskleista šiame tyrime, palyginti su retrogradely paženklinti CCMG neuronai gali nurodyti netiesioginį poveikį šio peptido simpatinės inervacijos skrandį. Tačiau dar reikia išsiaiškinti iš šių pluoštų Simpatiniuose neuronų tiekia prepyloric plotas skrandžio poveikio klausimas.

Nepaisant to, kad uždegimas skrandžio gleivinės, kurį sukelia ilgalaikis acetilsalicilo rūgšties papildų, neturi įtaka neuronų skaičius innervating studijuojamos plotas skrandyje, retrogradely užrašu užjaučiantys ląstelės pasižymi daug plastiškumo savo neuropeptidai fenotipą. ASR sukeltas gastritas lėmė didelius pokyčius chemijos kodavimo atsekti neuronų, mažinant produkcijos katecholaminų sintezė takų fermentų ir iki reguliavimą sintezės neuropeptidų dalyvaujančių nervinių gynybos mechanizmų (NPY, Gal, teisėti, Lenk). Šie duomenys yra susitarusi su tuo, kad atsinaujinanti užjaučiančius neuronų laikinai neveikia reguliuoti kai kurių neuromediatorių išraiška ypač TH [32] ir pradėti gaminti neurotransmiterių dalyvauja gynybos ir išlikimą [31].

NPY ryškėja reguliatoriaus uždegimas, dalyvauja autoimuninės reakcijos, astma, vėžio ir daugelio skrandžio ir žarnyno sutrikimų, tokių kaip melabsorption, trumpą žarnų, uždegiminės žarnų ligos ir pankreatito. NPY, kaip priešuždegiminis peptido, dalyvauja uždegiminio atsako pagal nesubrendusių dendritų ląstelių įdarbinimo ir skatinimo TH2 poliarizaciją [49]. NPY taip pat gali būti įtraukti į uždegiminę reakciją diferencijuojant T pagalbininkas ląstelių, monocitų tarpininko spaudai, natūralus žudikas [NK] ląstelių aktyvacija, ir imuninės ląstelės perskirstymo, ką patvirtino ankstesnes ataskaitas dvikrypčio kryžminių tarp nervų ir imuninės sistemų, virškinimo trakto [62, 63 ]. Šie duomenys yra panašūs į ankstesniuose tyrimuose, kuriuose buvo padidėjusi metu įvairių patologinių būklių, įskaitant proliferacijos enteropatijos ir kiaulių kolitas [4, 28] NPY teigiamas simpatinių neuronų skaičius. Be to, eksperimentas žmogaus vaizduojamas in NPY- IR nervinių galūnėlių padidėjimą per gleivinę metu lėtiniu gastritu, kurį sukelia Helicobacter pylori
[62]. Tai rodo, kad NPY svarbu neuroprotekcinis veiksnys, kuris vaidina išgyvenimo ir regeneracijai pažeistų neuronų per uždegimas vaidmenį. Įdomu tai, kad NPY taip pat gali būti išskiriamas kai kurių imunocituose, kurie gali manyti, kad NPY tiesiogiai dalyvauja neurogeninių uždegimas [64]. Tačiau tiksli funkcija NPY neuronų atsaką metu ASA "sukeltos gastritas kiaulių lieka nepaaiškinamas ir reikalauja tolesnio tyrimo.

Ryškiausias skirtumas immuhistochemical fenotipas atsekti neuronų buvo labai padaugėjo GAL- imunoreaktyviųjų ląstelių įstaigos ASA- grupės gyvūnams. Galanino yra neabejotinai užsiima uždegiminių procesų reguliavimas. Iš tiesų, galanino yra laikomas pro-uždegiminių citokinų reguliatoriaus, dėl to, kad galanino administravimo išaugo gamybą TNF-alfa, IL-1α ir IL-8 žmogaus keratinocitų fiziologinės būklės [65]. Iki šiol į galanino raiškos padidėjimas neuroninių struktūrų, abu vegetacinės ir žarnyno nervų sistemos, buvo pastebėta per chemiškai sukeltas kolitas [4, 51] ir proliferacijos enteropatijos [28] kiaulėms, lėtinis divertikulitas žmogiškųjų [66] ir žarnų Salmonella infekcijos pelėms [67]. Įdomu tai, kad Talero ir kt.

• PLoS ONE: klinikos ypatumai ir jo Išgyvenimo Rezultatai Pradinuko Sygnet ląstelių karcinoma, skrandžio: retrospektyvi analizė vieno centro Database
• PLoS ONE: konjuguota linolo rūgštis papildai pagal riebiu Dieta moduliuoja Skrandžio baltymo ekspresija ir žarnyno mikrofloros į suaugusių pelių