abstraktné
žalúdočné črevnej metaplázia (IM) je veľmi rozšírená preneoplastických lézie; Avšak molekulárne mechanizmy regulujúca jeho vývoj zostávajú nejasné. Už skôr sme ukázali, že populácia buniek exprimujúcich marker črevnej kmeňových buniek (ISC) LGR5 Citácia :. Jang BG, Lee BL, Kim WH (2015) črevná Stem Cell Markers v črevnej metaplázia žalúdka a Barrettova pažeráka. PLoS ONE 10 (5): e0127300. doi: 10,1371 /journal.pone.0127300 Akademický Editor: Anthony W.I. Lo, Queen Mary Hospital, HONGKONG prijatá: 08.01.2015; Prijaté: 13. apríla 2015; Uverejnené: 21. mája 2015 Copyright: © 2015 Jang et al. Toto je článok o otvorenej distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané Data Dostupnosť: Všetky relevantné údaje spadajú do papiera a jeho podporné informácie súbory Financovanie: Tento výskum bol podporený grantom z Kórejskej Health Technology R &D projektu cez Kórea Health Industry Development Institute (KHIDI), financovaného Ministerstvom. Health & Welfare, Kórejská republika (číslo grantu: HI14C1277). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú Úvod preneoplastických intestinálny metaplázia (IM) je spojená so zvýšeným rizikom karcinómu žalúdka a predstavuje v približne jednu štvrtinu ľudí na celom svete. [1] IM je často výsledkom chronickej atrofickej gastritídy po infekcii s Helicobacter pylori Vzhľadom k tomu, IM je rozhodujúci prekurzor v žalúdočnej karcinogenéze, že je možné zvrátiť týchto lézií je veľký záujem. [5] Predchádzajúce výskumy uvádzajú, že odstránenie H objav normálne žalúdočnej sliznice kmeňových buniek sa zhodoval s identifikáciou Wnt cieľového génu LGR5 Barrettov pažerák (BE) je metaplastická konverzia na črevnú cylindrického epitelu a je spojená so zvýšeným rizikom adenokarcinómu, podobne ako u žalúdočné IM. [12] Pozoruhodne, ľudský BE lézie vykazujú upregulaci LGR5 Niekoľko molekulárne markery ISC boli zistené vedľa LGR5 materiály a metódy Predmety formalín -fixed a parafínu zaliate (FFPE) žalúdočné vzorky s alebo bez črevnej metaplázia (IM) boli zhromaždené z piatich pacientov, ktorí podstúpili endoskopické submukóznu pitvu na Seoul National University Hospital (snehu) od roku 2008 do roku 2010. lézií IM boli rozdelené do žalúdka, a -intestinal zmiešané (GI), a to iba črevné (i) podtypy (tiež známy ako nekompletné a kompletné typy, v tomto poradí). [19] Vzorky Barrettova pažeráka boli izolované z dvoch pacientov s adenokarcinóm gastroezofageálneho spojenia, a normálne tenkého čreva vzorka bola získané od pacienta s rakovinou hrubého čreva. Čerstvé mrazené non-nádorového tkaniva žalúdočné boli k dispozícii od 28 pacientov s karcinómom žalúdka, ktorí podstúpili chirurgický gastrektómii od roku 2001 do roku 2005 na snehu. Všetky ľudské vzorky boli získané prostredníctvom kuratívny chirurgickej resekcii , Táto retrospektívna štúdia bola vykonaná za použitia uložených vzoriek po patologické diagnózy. Vzorky boli anonymizované pred štúdií, a tak sa nevyžaduje písomný súhlas. Usporiadanie štúdia bola schválená Institutional Review Board na Seoul National University Hospital za podmienky anonymizácie (vzťah: H-1209-037-424). in situ hybridizácia za LGR5 Celková RNA bola extrahovaná z parafínu zaliate rezy s RNeasy FFPE Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA), ako bolo popísané vyššie. [20] reverznej transkripcii cDNA sa pripraví z 1-2μg celkovej RNA s náhodnými primermi hexamérov a GoScript reverznej transkripcie systému (Promega, Madison , WI, USA). Kvantitatívny real-time PCR (QRT-PCR) reakcie boli vykonané za použitia Premix EX Taq (Takara Bio, Shiga, Japonsko) podľa odporúčania výrobcu, a dáta analyzovaná pomocou softvéru systém detekcie Sequence (verzia 1.4, Applied Biosystems). Boli použité nasledujúce TaqMan génovej expresie testy: Hs00173664_m1 ( LGR5 CDX2 cDNA (pCMV6-CDX2) bol zakúpený od Origen (Rockville, MD, USA). Žalúdočné rakovinové bunky boli nasadené v množstve 1 x 10 6 buniek /jamka v 6-jamkové doštičky a transfekovány 2,5 ug cDNA alebo prázdnym kontrolným vektorom za použitia transfekčního činidla Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) podľa výrobcom inštrukcie. Bunky boli podrobené QRT-PCR analýzy približne 24 hodín po transfekciu. Štatistické analýzy boli vykonané v Prism (GraphPad 5 Software, Inc., San Diego, CA, USA). Korelácia medzi prejavov markerov kmeňových buniek črevnej a CDX2 1. ISC markery korelujú s úrovňami CDX2 v žalúdočnej sliznici sme predtým podal správu o relatívnom rastom LGR5 Ak chcete potvrdiť pozitívne asociáciu OLFM4 stroje a EPHB2 3. LGR5 Ak chcete zistiť, či existuje priamy vzťah medzi LGR5 stroje a ISC markerov v IM sme skúmali, či ich koexprese RNA in situ hybridizácia. Expresia LGR5 4. ISC markery sú vyjadrené v pažeráku lézií Barrettova Ďalej sme sa snažili zistiť, či ISC markery boli vyjadrené v Barrettova pažeráka (BE). Pre tento účel dva exempláre adenokarcinómy vznikajúce v pozadí BE boli vyhodnotené na expresiu CDX2 Diskusia v regióne šije /krku žalúdočné jednotky sa predtým myslelo, že zahŕňa výklenok kmeňových buniek, v ktorých sa vyskytuje IM, a bolo navrhnuté, že metaplasic postup z jednej žalúdočné klonálnej jednotky dochádza cez klonálnej expanzii a krypty štiepenie. [8], pretože LGR5 Rôzne úsilia sa snažili zaradiť PI o typov žalúdočné lézie. Matuskura et al. navrhol klasifikačný systém založený na prítomnosti tenkého čreva tráviacich enzýmov; definovaná ako kompletné a nekompletné typu IM, [26], vzhľadom k tomu, Jass a Filipe zavedené tri stupne IM na základe morfológie a histochemické farbenie mucínu. [27] V poslednej dobe novej klasifikácie bolo navrhnuté Tatematu a kol., V ktorom IM môže byť rozdelená do žalúdka-a-črevné zmiešaná (GI), a to výhradne črevné (I) druhy. [19] GI typu IM , žalúdočné a črevné fenotypové markery objavujú na oboch žliaz a bunkovej úrovni, a preto bolo navrhnuté, že IM môže byť spôsobená postupným intestinalization kmeňových buniek z ohromných i-typu. [28] Tu sme pozorovali postupný rast markerov ISC OLFM4 stroje a EPHB2 H Barrettov pažerák (BE) je prekancerózne lézie, ktorá zdieľa niekoľko morfologické a molekulárne charakteristiky s žalúdočné IM, najmä pretože sa jedná o metaplastická konverzie na črevný epitel stĺpovitý v dôsledku chronického zápalu. Veríme, že táto štúdia charakterizuje ďalšie podobnosť medzi týmito dvoma lézií v prítomnosti LGR5 CDX2 je transkripčný faktor master pre expresiu črevných diferenciačných markerov, a predpokladá sa, že základom rozvoja BE. Kým normálne žalúdočnej sliznice nevyjadruje CDX2 V súhrne sme zistili, že LGR5
zvyšuje výrazne v IM. V tejto štúdii sme ďalej preskúmať molekulárnej charakteristiky týchto LGR5
+ buniek v IM skúmaním profil expresie niekoľkých ISC markerov. Pozoruhodne, sme zistili, že ISC markery, vrátane OLFM4 stroje a EPHB2
-Sú pozitívne spojená s CDX2
výraz v non-nádorového tkaniva žalúdka. Toto zistenie bolo potvrdené v žalúdočných lézií s alebo bez metaplázia, ktoré preukázali, že OLFM4 a EPHB2 výraz postupne zvyšuje s progresiou metaplastického. Okrem toho, in situ hybridizácia RNA bolo zistené, že LGR5
+ bunky koexprimovat niekoľko ISC značiek a zostal len na základni metaplastického žliaz, pripomínajúce možnosti bežných črevných krýpt, zatiaľ čo v normálnych žliaz antrálnej vyjadrené žiadny z týchto markerov. Okrem toho veľký počet ISC buniek exprimujúcich markerov boli difúzne rozdelené v žalúdočných adenómov, čo naznačuje, že tieto markery môžu uľahčiť žalúdočné tumorigeneze. Okrem toho, Barrettov pažerák (BE) -ktorý je histologicky podobná črevnej metaplázia, vykazovali podobnú distribúciu ISC markerov, čo ukazuje na prítomnosť populácii kmeňových buniek črevnej diferenciačního potenciálu. Na záver sme zistili, že LGR5
+ buniek v žalúdku IM a musí byť koexprimovat ISC markery, a vykazujú rovnaké expresné profil ako tí nájdený v bežných črevných kryptách. Dohromady tieto výsledky zapliesť s kmeňových buniek populácie v črevách, ako v patogenéze IM a sú dôležitým základom pre pochopenie rozvoja a údržby tohto ochorenia
, ktorý potom môže postúpiť k žalúdočnej epiteliálne dysplázia alebo karcinómu. [2] Početné genetické a epigenetické zmeny boli zapojené do patogenézy ľudskej PI. [3] Okrem toho dlhodobá IM vyvolané CDX2 vyjadrovania bola preukázané, že vedie k žalúdočnej rakoviny u transgénnych myší, čo naznačuje, že IM sám o sebe hrá významnú úlohu v genéze karcinómu žalúdka. [4]
. pylori
je dostatočná pre zrušenie IM, napriek tomu iní zistili, že významná časť pacientov stále prítomná s IM aj po efektívnej eradikácie. [5] IM sa predpokladá, že je "bod nie je návratu" v histologických kaskáda chronickú gastritídu do adenokarcinóm; [6] tak, snaha porozumieť molekulárne mechanizmy, ktorými sa riadi zakladanie a údržby IM sú kľúčové pre rozvoj stratégie k prerušeniu žalúdočnej karcinogenéze. Napríklad, CDX2 autoregulácie je navrhnuté, že majú významný vplyv na stabilitu lézií IM. [7] Aj keď IM krypty v ľudskom žalúdku sú klonálnej a obsahujú multipotentní kmeňové bunky, [8], zostáva zle rozumie, či natívny žalúdočné kmeňové bunky počiatočné zdroj metaplázia, alebo v prípade, že slúži len na udržanie stanovenej lézie.
ako marker kmeňových buniek v črevný epitel. [9] štúdie riadkov trasovanie neskôr ukázal, že LGR5
+ bunky sú multipotentní kmeňové bunky zodpovedné za obnovenie žalúdočného epitelu u myší. [10] Naša skupina už skôr preukázané, že malý počet LGR5
+ bunky tiež sú umiestnené v spodnej časti ľudských antrálnej žliaz a zvýšiť dramaticky lézií chatu. [11] Tieto zistenia nás viedli k špekulovať, že LGR5
máj byť marker pre črevných kmeňových buniek (ISČS) podieľajúcich sa na udržanie IM.
vyjadrenia v porovnaní s normálnym dlaždicového epitelu, a je pripomínajúce prítomnosti LGR5
+ kmeňové bunky v BE. [13]
vrátane PROM1
[14], BMI1
[15], LRIG1
[16], a ASCL2
, ktorý bol identifikovaný ako transkripčný faktor pre kontrolu črevných kmeňových buniek osud. [17] Okrem toho, OLFM4
[17] a EPHB2
[18] sú tiež vysoko vyjadrené v ISČS. V tejto štúdii sme sa zamerali objaviť ďalšie ISC markery sa podieľajú na vzniku a udržiavaní žalúdočné IM a BE, a preskúmať ich colocalization s LGR5
+ buniek od RNA in situ hybridizácia, aby ďalej odhaliť molekulárnej charakteristiky LGR5
+ buniek v IM s ohľadom na kmeňových buniek fenotypu črevnej podobné.
etické oznámení
RNA in situ hybridizácia
ASCL2
OLFM4 stroje a EPHB2
bolo vykonané pomocou testovacej súpravy RNAscope FFPE (Advanced Cell Diagnostics, Inc. , Hayward, CA, USA), ako bolo popísané vyššie. [11] Pozitívne farbenie bolo definované ako prítomnosť hnedej bodkovité bodky v jadre a /alebo cytoplazme. Ubiquitinizované C a bakteriálne dapB
gény slúžil ako pozitívne a negatívne kontroly, resp.
extrakcie RNA a kvantitatívne real-time PCR
), Hs00362096_m1 ( EPHB2
), Hs00270888_s1 ( ASCL2
), Hs00197437_m1 ( OLFM4
), Hs01009250_m1 ( PROM1
), Hs00394267_m1 ( LRIG1
), Hs00995536_m1 ( BMI1
), Hs00178027_m1 ( DCLK1
), Hs010780810_m1 ( CDX2
), Hs00212584_m1 ( CLDN18
), a Hs0275899_g1 ( GAPDH
). GAPDH
slúžila ako vnútorná kontrola.
transfekcia CDX2
Štatistická analýza
bola stanovená lineárnej regresnej analýzy. Priemerné rozdiely medzi skupinami FFPE žalúdočných vzoriek boli hodnotené jednosmernou ANOVA. Medzi skupinami porovnanie po transfekciu CDX2
žalúdočné rakovinové bunkové línie boli vykonané za použitia Študent t
-tests. Výsledky boli považované za významné pri p Hotel < 0.05.
Výsledky
+ buniek v chate poškodenia ľudského žalúdka. [11] To nás prinútilo predpokladať, že tieto LGR5
+ bunky môžu fungovať ako self-obnovujú kmeňových buniek, ktoré pomáhajú pri údržbe a šírení metaplastického epitelu žalúdočnej sliznice. Preto sme sa zamerali na identifikáciu ďalších ISC markery, ktoré korelované s CDX2
expresie v IM. Za týmto účelom sme merali hladiny expresie CDX2 stroje a osem ISC markers- LGR5
ASCL2
OLFM4
DCLK1
LRIG1 stroje a BMI1
-v normálne žalúdočné tkaniva. Skúmané tkaniva ukázala širokú škálu CDX2
úrovniach, ktoré predstavujú rôzne stupne IM, pretože CDX2
výraz pozitívne koreluje s progresiou IM (obr 1A). Neboli nájdené tri ISC markery korelujú s CDX2
výraz: OLFM4
EPHB2 stroje a BMI1
. Najmä OLFM4
( p Hotel <0,0001, r 2 = 0,56) (obr 1B) a EPHB2
( p
< 0,0001, r 2 = 0,52) (obr 1C), vykazovali silnú pozitívnu koreláciu s CDX2
, zatiaľ čo BMI1
bola nepriamo úmerná ( p =
0,0002, r 2 = 0,42) (obr 1D). Žiadna významná súvislosť s CDX2
výraz bol identifikovaný s ďalšími piatimi ISC markerov (S1 Obr).
2. ISC značka vyjadrenie koreluje s IM progresie
s IM, sme vybrali štyri histologicky-odlišných typov žalúdočné tkanív; normálne antrálnej sliznice bez IM (n = 4), chronickej aktívnej gastritíde bez IM (n = 3), žalúdočné a črevné zmiešaného typu (typ GI) IM (n = 6), a to výhradne črevnej typ (typ I) IM (n = 5) (obr 2A). Claudin-18 je vysoko exprimovaný najviac pevne križovatka proteín v žalúdku. Ako sa dalo očakávať, naša analýza ukázala, že Claudin-18 expresie zmenšil s rastúcimi stupňom IM ( p Hotel &0,0001) (obr 2B), zatiaľ čo CDX2
expresie zvýšená ( p Hotel &0,0001) (obrázok 2C). Tiež sme zistili, že OLFM4 stroje a úrovňou EPHB2
neustále zvyšoval s každým nasledujúcim lézie, čo potvrdzuje, že tieto markery sú úzko spojené s IM progresie ( p
= 0,008 a 0,001, v tomto poradí, obr 2D a 2E). Na rozdiel od toho BMI1 stroje a LRIG1
expresie vykazovali tendenciu k poklesu s IM progresie. ( p
= 0,002 a 0,0006, v uvedenom poradí; obr 2F a 2G)
+ bunky črevnej metaplázia colocalize s ďalšími ISC markery
ASCL2
EPHB2 stroje a OLFM4
boli najprv skúmané v normálnom ľudskom časti tenkého čreva overiť túto techniku, a bolo zistené, že špecificky lokalizovať buniek v kmeňových buniek výklenku črevných krýpt, ako sa očakávalo (S2 obr). Vzhľadom k tomu, LGR5
+ buniek v normálnej črevnej krypty vyjadriť tiež ISC markery, sme sa domnieval, že LGR5
+ bunky v IM by tiež vykazujú podobný výraz vzor. Tak, sme opakovali postup z po sebe idúcich úsekoch endoskopických vzoriek submukóznu disekcia (n = 5), z ktorých každý obsahoval viac ložiská ohromných alebo I-typu IM medzi non-nádorového tkaniva. Malé množstvo LGR5
+ buniek na báze bežných antrálnej žliaz postrádajú ISC markerov expresie (obr 3A), zatiaľ čo tie, ktoré v I-typu IM preukázali vyjadrený všetky tri značky (obr 3B) , Okrem toho, lézie IM GI typu zobrazený rovnaký profil expresie celkovo s výnimkou, že ISC markerovou expresnou bol umiestnený nad zostávajúce žalúdočných žliaz, a nie obmedzené na bazálnej oblastí (S3) Obr. Tento expresný vzor bol konzistentne pozorovaný vo všetkých vzorkách. Tieto zistenia naznačujú, že LGR5
+ bunky v IM sa líšia od tých, ktoré v normálnom antra v expresii ISC markerov, ktoré sú zvyčajne obmedzené na bunky v črevných kryptách. Zaujímavé je, že IM odvodený od fundu žliaz, kde LGR5
+ bunky nie sú normálne prítomné, produkoval rovnaký výsledok (S4 Obr). Preto sa zdá pravdepodobné, že populácia LGR5
+ buniek v IM nevyplýva z šírenia skôr existujúce LGR5
+ bunky, ale je skôr vznik LGR5
+ bunky sa získanú diferenciačný potenciál, čo naznačuje, že populácia kmeňových buniek črevnej-like je usadený v IM. Okrem toho, žalúdočné adenómov (n = 5), vyjadrená aj vysokej úrovne ISC markerov v priebehu lézií, a nie iba na žľazových krýpt (obr 3C). Ako je znázornené na obrázku 3, táto akumulácia ISC buniek markerov expresiou cez metaplázia na dysplázia sekvencie je implicative účasti črevných typu kmeňových buniek v žalúdku vzniku nádorov a ďalších štúdií s cieľom skúmať spojenie medzi črevných kmeňových buniek markerov a žalúdočné vzniku nádorov sú iste oprávnené.
OLFM4
EPHB2 stroje a PROM1
o QRT-PCR analýzou (obr 4A). Je príznačné, že obaja a adenokarcinómy vyjadrené vyššej úrovne všetkých štyroch ISC markerov, kedy v porovnaní s normálnou dlaždicového epitelu (obr 4B, 4C, 4D a 4E). Kým LGR5 stroje a ASCL2
nevykazovali žiadne významné zmeny od RT-PCR analýzou, pravdepodobne v dôsledku nízkeho počtu kópií transkriptov RNA in situ hybridizácia ukázala jasnú populáciu buniek s
výrazom na križovatke žalúdočných a metaplastická žliaz, pripomínajúce GI typu IM (obr 4F, 4G, 4H, 4I a 4J).
+ bunky sú identifikované ako multipotentních kmeňových buniek črevnej podobné u myší [10], a existujú v ľudskom žalúdku, antra [11], je možné si myslieť, že IM mohol vyvinúť z tejto bunkovej populácie. Avšak, stále zostáva možnosť, že ďalšie bunková populácia kmeňových by základom tohto procesu. Napríklad SOX2
+ bunky tiež boli identifikované ako samostatné žalúdočných kmeňových buniek a štítok bunkovej populácie exkluzívne k tým s LGR5
prejavu. [21] transdiferenciace môže tiež viesť na metaplastického bunky. Spasmolyitc polypeptid expresiou metaplázia-in, ktorý pyloric žľazy typu sa objaví v oxyntických sliznice, vznikajú z hlavných zrelých buniek [22], skôr než LGR5
Epidermal Growth Factor bunky. [23] V skutočnosti transgénne CDX1
alebo CDX2
výsledky expresie v mozgovom vývoji buniek odvodených od IM v transgénnych myší. [24] z tohto dôvodu stále uniká, či IM je dôsledkom črevnej kmeňových buniek preprogramovanie alebo transdiferenciace buniek sa získala ISC-like vlastnosti. [12, 25]
s ďalším intestinalization žalúdočnej sliznice. Spolu s rastúcimi úrovňou CDX2
, ktoré vyvolávajú črevné diferenciáciu a fenotyp, tieto expresné vzory naznačujú premenu celkovej populácie kmeňových buniek smerom k viac črevnej podobného fenotypu kmeňových buniek. Okrem toho je neočakávané inverzný korelácia BMI1 stroje a LRIG1
s IM treba ďalších štúdií na potvrdenie tohto výsledku a aby objasnila svoje klinické dôsledky.
. pylori
odstránenie má potenciál, aby sa zabránilo karcinómov žalúdka, [29] a môže zmierniť progresiu prekanceróznych žalúdočných lézií, ako je PI. [30, 31] Avšak, ako sa stanovia, sa zdá, že H
. pylori
eradikácie nedá úplne zabrániť žalúdočné rakoviny. [6] V skutočnosti, približne 80% pacientov s IM nepreukázali zmenu alebo progresiu IM po liečbe antibiotikami. [31] Okrem toho, meta-analýza viedla k záveru že H
. pylori
vykorenenie nemá žiadny vplyv na žalúdočnú IM. [32] Tento nezvratnosť IM možno čiastočne vysvetliť tým, udržiavanie CDX2
vyjadrenie prostredníctvom autoregulačného slučke, ktorá je nezávislá na počiatočné spúšť, udržiavanie črevnej fenotyp. [33] sme ďalej vyplynulo, že LGR5
+ buniek pri základe metaplastická žliaz dôsledne vyjadrovať iné ISC markerov, svedčiace o kmeňových buniek fenotypu črevnej podobné. Veríme, že táto stabilná kmeňových buniek populácie môžu poskytnúť ďalšie vysvetlenie pre dlhotrvajúci charakter IM. Okrem toho terapeutické stratégie dostatočná, aby presne zacieliť na
+ bunkovej populácie LGR5 v kombinácii s H
. pylori
vykorenenie by mohli ohroziť stabilitu IM, tak urýchliť opätovné zavedenie normálne žalúdočnej sliznice.
+ buniek pomocou ISC markerov výrazu. Toto zistenie je v súlade s predchádzajúcou správu, podľa ktorej LGR5
expresie bola významne zvýšená u BE, a že obyvateľstvo je pravdepodobné, že bunka-of-pôvod tohto metapláziou. [13] Viac nedávno, LGR5
+ bunky boli identifikované v polovici Barrettova žľazy in situ hybridizácia a odporúča sa, aby pôsobiť ako kmeňové bunky, ako sa prejavujú ako žalúdočné a črevné diferenciáciu. [34] tiež sme zistili, LGR5
+ buniek v oblasti medzi žalúdočné a metaplastická žliaz v BE, ktoré zodpovedajú stredu Barrettova žliaz. Navyše prítomnosť ISC markerov vo LGR5
+ bunkovej populácie ďalej podporuje ich potenciál pre črevnú diferenciácie. Preto na základe týchto výsledkov sa zdá rozumné tvrdiť, že LGR5
+ buniek v pravdepodobne fungovať ako kmeňové bunky, ktoré udržujú črevnú fenotyp byť podobný ako u IM.
, silná expresia je detekovaná v IM. [35, 36] Okrem toho, transgénne myši bolo preukázané, že CDX2
výraz samo o sebe postačuje k vyvolaniu IM [37 38], čo naznačuje, že CDX2
môže tiež uľahčiť vývoj kmeňových buniek populácia sa črevnej fenotypu. Preto sme skúmali, či CDX2
sa priamo podieľajú na expresiu markerov ISC: LGR5
ASCL2
OLFM4 stroje a EPHB2
(S5 obr). Avšak, transfekční experimenty odhalili, že iba EPHB2
bol okrajovo ovplyvnené CDX2
výrazu. Iste, tieto údaje by mali byť interpretované s opatrnosťou, pretože boli získané GC bunkových línií s rôznymi biologickými vlastnosťami od toho non-nádorových žalúdočných epiteliálnych alebo črevných kmeňových buniek. Napriek tomu sa zdá pravdepodobné, že ďalšie signalizačné faktory spolu s CDX2
sú nevyhnutné na vyvolanie ISC markeru výraz.
+ buniek žalúdočné IM a BE koexprimovat ISC markery, ktoré svedčia o kmeňových buniek populácie črevnej-like, ktorý nahrádza predtým existujúcu žalúdočné kmeňové bunky. Toto zistenie Zdá sa, že poskytujú dôležitú vodítko pre pochopenie mechanizmu fundamentálne pretrvávanie IM po H
. pylori
odstránenie. Navyše, naše výsledky naznačujú LGR5
+ bunky sú sľubným cieľ zvrátiť IM a potenciálne zabrániť ich postupu do žalúdka rakoviny.
Podporné informácie
S1 Obr. Korelácia črevnej kmeňových buniek (ISC) markerov s úrovňou CDX2
v non-nádorového tkaniva žalúdka.
Žiadna korelácia sa nachádza medzi CDX2
expresných a niektoré ISC markery ako napríklad LGR5
(r 2 = 0,01, p
= 0,59), ASCL2
(r 2 = 0,01, p
= 0,59) PROM1
(r 2 = 0.11, p
= 0,08), LRIG1
(r 2 = 0,06, p
= 0,21) a DCLK1
(r 2 = 0.09, p
= 0,11)
doi :. 10,1371 /journal.pone.0127300.s001
( PPTX)
S2 obr. Vizualizácia črevnej markerov kmeňových buniek RNA in situ hybridizácia (ISH).
RNA ISH vykonaná na formalínom fixovaných a parafínových vzorky z tenkého čreva. (A, B) Skupina LGR5
+ kmeňové bunky sú identifikované v dolnej časti všetkých krýpt, miesil s Panethovy bunky. Ostatné črevnej kmeňových buniek markery ako napríklad ASCL2
(C, D), EPHB2
(E, F), a OLFM4
(G, H) sú tiež zistilo, byť obmedzené do krypty základní. Zväčšenie: A, C, E, G x 100; B, D, F, H × 400
doi :. 10,1371 /journal.pone.0127300.s002
(PPTX)
S3 Obr. Výrazy črevných kmeňových buniek markerov typu GI IM.
Zostávajúce žalúdočné žľazy sú často nachádzané v bazálnych oblastí typu GI IM (A a B). RNA ISH ukazuje, že LGR5
(C) a EPHB2
(D) výrazy sú lokalizované nad žalúdočných žliaz. Je zaujímavé, že OLFM4
(E) expresie je pozorovaná v žalúdočných žľazách, ako aj keď jeho intenzita je oveľa slabší ako v metaplastického žliaz. Keď sa tieto žalúdočných žliaz zmiznú ako IM vyvinie (A a F), distribúcia všetko LGR5
(G), EPHB2
(H) a OLFM4
(I) je prísne obmedzená na bazálnych oblastí. Šípky ukazujú zostávajúce žalúdočné žľazy. Zväčšenie: od A x 40; B, C, D, E, F, G, H, I × 200
doi :. 10,1371 /journal.pone.0127300.s003
(PPTX)
S4 Obr. Črevné kmeňových buniek markermi u črevnej metaplázia (IM) žalúdočné korpusu.
(A a B) Malý ohnisko IM v stredu fundu žliaz, je vyznačené šípkami, ukazuje rovnaký výraz vzory
(D), a OLFM4
(E) ako IM z dutine. Zväčšenie: od A × 100; B, C, D, E × 200
doi :. 10,1371 /journal.pone.0127300.s004
(PPTX)
S5 Obr. Účinok CDX2
na expresiu črevných kmeňových buniek (ISC) markery u karcinómu žalúdka (GC) bunkových línií.
Transfekcia CDX2
do štyroch bunkových línií GC, MKN74 (A ), MKN28 (B), SNU484 (C) a SNU668 (D) významne zvyšuje množstvo mRNA CDX2
(** p Hotel &0,01; ***, p Hotel < 0,005). EPHB2
expresie je len nepatrne zvýšená expresiou CDX2
v troch zo štyroch GC bunkových líniách (*** p Hotel < 0,005). Žiadny rozdiel sa vyskytuje v úrovniach LGR5
ASCL2 stroje a OLFM4