Skrandžio ir žarnyno metaplazija (MP) yra labai paplitusi priešvėžine pažeidimas; Tačiau molekulinius mechanizmus, reglamentuojantys jo plėtrą lieka neaiški. Mes jau anksčiau parodė, kad ląstelių išreiškiančius žarnyno kamieninių ląstelių (DPK) Žymeklio Gyventojų LGR5 nurodomoji dalis:. Jang BG Lee BL, Kim WH (2015) žarnyno Kamieninių ląstelių Žymekliai žarnyno Metaplasia skrandžio ir Bareto stemplė. PLoS ONE 10 (5): e0127300. Doi: 10,1371 /journal.pone.0127300 Akademinė redaktorius: Antanas W.I. Štai "Queen Mary ligoninė, HONKONGAS Įstojo: Sausis 8, 2015 m Priėmė: Balandžio 13, 2015 m Paskelbta: Gegužės 21, 2015 Visos teisės saugomos: © 2015 Jang et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos Duomenų Prieinamumas: Visi susiję duomenys yra per popieriaus ir jo Pagalbinė informacija failus finansavimas: Šis tyrimas parėmė iš Korėjos sveikatos technologijų R &suteikimo; d Project per Korėjos sveikatos pramonės plėtros instituto (KHIDI), finansuojamą iš ministerijos. sveikatos & Gerovė, Korėjos Respublika (dotacijos numeris: HI14C1277). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja Įvadas priešvėžine žarnyno metaplazija (MP) yra susijęs su padidėjusia rizika susirgti skrandžio vėžiu ir pristato maždaug vieną ketvirtadalį asmenų visame pasaulyje. [1] MP dažnai nulemia lėtinį atrofinį gastritas po užsikrėtimo Helicobacter pylori Kadangi MP yra kritinis pirmtakas skrandžio kancerogenezėje, galimas pakeisti šiuos pakitimus yra labai naudingas. [5] Ankstesni tyrimai, pranešė, kad H normalių skrandžio gleivinės kamieninių ląstelių atradimas sutapo su identifikuoti WNT taikinio geno LGR5 Bareto stemplė (BE) yra metaplastic konversijos žarnyno kolonų epitelis ir yra susijęs su padidėjusia rizika susirgti adenokarcinoma, panašus į tą, kuris su skrandžio raumenį. [12] Visų pirma, žmogui BE pažeidimų eksponuoti apie ląstelę, LGR5 Keletas molekulinės DPK žymekliai buvo nustatyta, be to LGR5 medžiagos ir metodai Dalykai formalinu nereguliuojamas ir parafino įterptųjų (FFPE) skrandžio mėginius su arba be žarnyno metaplazijos (MP) buvo renkami iš penkių pacientų, kuriems buvo atlikta endoskopinės gleivine išpjaustymo Seulo nacionalinio universiteto ligoninė (SNUH) nuo 2008 iki 2010 MP pažeidimų buvo suskirstyti į skrandžio-ir -intestinal mišri (GI) ir tik žarnyno (I) potipių (taip pat žinomas kaip nekomplektinės ir komplektinės tipų, atitinkamai). [19] Pavyzdžiai Bareto stemplė buvo izoliuotas nuo dviejų pacientų, sergančių adenokarcinoma gastroezofaginio sankryžos, ir normalus plonojoje žarnoje pavyzdys buvo gauti iš paciento, su gaubtinės žarnos vėžio. Švieži užšaldyti ne navikinio skrandžio audiniai buvo gauti iš 28 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, kuriems buvo atliktos chirurginės pašalintas skrandis nuo 2001 iki 2005 metų SNUH. Visi žmogaus egzemplioriai buvo gauti per gydomojo chirurginės rezekcijos , Ši retrospektyvinė Tyrimas buvo atliktas naudojant saugomus mėginius po patologinio diagnozę. Mėginiai buvo anonimiški iki tyrimo, todėl rašytinis sutikimas nebuvo reikalingas. Tyrimas dizainas buvo patvirtintas Institucijų ekspertizės valdyba Seulo nacionalinio universiteto ligoninė pagal Anoniminio būklės (nuoroda: H-1209-037-424). situ hibridizacija už LGR5 Viso RNR buvo išskirta iš parafino įterptųjų audinio skyriai, kurių RNeasy FFPE Kit (Qiagen, Valencia, CA, JAV), kaip aprašyta anksčiau [20]. Reverse-transkripcija kDNR buvo ruošiamas iš 1-2μg visų RNR su atsitiktinių heksamerinių gruntų ir GoScript atvirkštinės transkripcijos sistema (Promega, Madison , WI, JAV). Kiekybiniai realaus laiko PGR (KRL-PGR) reakcijos buvo atliekama naudojant Pašaro EX Taq (TAKARA bio, Šiga, Japonija) pagal gamintojo rekomendacijas, ir duomenys analizuojami naudojant sekos atpažinimo sistemos programinė įranga (Versija 1.4, Taikomoji BIOSYSTEMS). buvo naudojami šie TaqMan genų ekspresijos tyrimai: Hs00173664_m1 ( LGR5 CDX2 kDNR (pCMV6-CDX2) buvo įsigytas iš OriGene (Rockville, MD, JAV). Skrandžio vėžio ląstelės buvo pasėtos ne 1 × 10 6 ląstelių /gerai 6 šulinėlių plokštelės ir perkeltų su 2,5 mikrogramų kDNR arba tuščio valdymo vektorių, naudojant Lipofectamine 2000 transfekcijq reagentą (Invitrogen, Karlovi Varai, CA, JAV) pagal gamintojo instrukcijos. Ląstelės buvo atliktas KRL-PGR analizės maždaug po 24 valandų transfekciją. Statistinė duomenų analizė buvo atliekama Prizmė 5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, JAV). Koreliacijas tarp žarnyno kamieninių ląstelių žymenų raiškos ir CDX2 1. DPK žymekliai koreliuoja su CDX2 lygių skrandžio gleivinės buvo pranešta anksčiau, nuo santykinio padidėjimo, LGR5 Norėdami patvirtinti teigiamą asociaciją, OLFM4 parsisiųsti ir EPHB2 3. LGR5 Norėdami nustatyti, ar tiesioginis ryšys egzistuoja tarp LGR5 parsisiųsti ir DPK žymenų IM, mes išnagrinėti, ar jų coexpression pagal RNR in situ hibridizacija. Žodžio LGR5 4. DPK žymekliai išreikštas Bareto stemplė pažeidimų Kitas siekiama nustatyti, ar DPK žymekliai taip pat buvo išreikštas Bareto stemplė (BE). Už tai du egzemplioriai adenokarcinomos kylančių BE fone buvo įvertinti už CDX2 Diskusijos sąsmauka /kaklo regionas skrandžio vieneto anksčiau buvo manoma, kad apima kamieninių ląstelių nišą, kurioje atsiranda MP, ir ji buvo pasiūlyta, kad metaplasic progresavimo iš vieno skrandžio klonų vieneto įvyksta per klonų plėtros ir kriptų dalijimosi. [8], nes, LGR5 Įvairūs pastangos siekė klasifikuoti trumpąją skrandžio tipų pažeidimų. Matuskura ir kt. pasiūlė klasifikavimo sistemą, grindžiamą plonosios žarnos virškinimo fermentų kiekį; apibrėžiamas kaip išsami ir neišsami tipas IM, [26] o Jass Filipe pristatė tris klases IM nuo morfologijos ir histocheminiu muciną dažymo pagrindu. [27] Daugiau neseniai, nauja klasifikacija buvo siūlomas Tatematu ir kt., Kuriame MP gali būti suskirstyti į skrandžio-ir-žarnyno mišrus (GI) ir tik žarnyno (I) tipai. [19] GI-tipas IM , skrandžio ir žarnyno fenotipo žymekliai rodomi tiek liaukų ir ląstelių lygį, todėl buvo pasiūlyta, kad MP gali būti sukeltas laipsniško intestinalization kamieninių ląstelių iš GI- I tipo. [28] Čia mes nustatėme palaipsniui didinti DPK žymekliai OLFM4 parsisiųsti ir EPHB2 O Bareto stemplė (BE) yra priešvėžinė pažeidimas, kad sutinka keletą morfologinius ir molekulinius charakteristikas su skrandžio MP, daugiausia, nes tai yra metaplastic konversijos žarnyno kolonų epitelis gautą iš lėtinis uždegimas. Mes tikime, kad ši studija apibūdina kitą tarp šių dviejų pažeidimų panašumą į LGR5 CDX2 yra meistras transkripcijos faktorius dėl žarnyno diferenciacijos žymenų ekspresijos ir, manoma, kuriuo užtikrinamos apie BE plėtrą. O normalus skrandžio gleivinė neišreiškia CDX2 Apibendrinant, nustatėme, kad LGR5
didėja nepaprastai MP. Šiame tyrime mes toliau tirti molekulinės savybės šių LGR5
+ ląstelių IM nagrinėjant sąvoką profilį kelių DPK žymekliais. Pažymėtina, mes nustatėme, kad DPK žymekliai-įskaitant OLFM4 parsisiųsti ir EPHB2
-Ar teigiamai susijęs su CDX2
išraiška ne tumoro skrandžio audinius. Ši išvada buvo patvirtinta skrandžio pakitimų su arba be metaplazijos, kurie parodė, kad OLFM4 ir EPHB2 išraiška palaipsniui didinti metaplastic progresavimą. Be to, RNR in situ hibridizacijos atskleidė, kad LGR5
+ ląstelių coexpress keletą ISC žymekliai ir liko tik su metaplastic liaukų, primenantis, kad kad normalios žarnyno kriptos bazę, o tie normalus antralinių liaukų išreikštų nė iš šių žymeklių. Be to, didelis skaičius ISC žymeklių išreiškiančias, iš ląstelių buvo difuziškai pasiskirsto skrandžio adenomos, tai rodo, kad šie žymekliai gali palengvinti skrandžio tumorigenezei. Be to, Bareto stemplė (BE) -which yra histologiškai panaši į žarnyno metaplazijos-eksponuojama panašią paskirstymą DPK žymekliai, nurodant kamieninių ląstelių populiacijos su žarnyno diferenciacijos potencialą buvimą. Taigi, mes nustatyta, kad LGR5
+ ląstelių skrandžio IM ir būti coexpress DPK žymekliai ir parodyti tokį patį išraiška profilį, rasti normalios žarnyno kriptos. Kartu paėmus, šie rezultatai įpainioti žarnyno panašūs kamieninių ląstelių populiacija IM patogenezės ir suteikti svarbų pagrindą suprasti kūrimą ir priežiūrą šios ligos
, kuri vėliau gali pereiti į skrandžio epitelio displazija ar karcinoma. [2] genetinių ir epigenetinių pokyčių įvairovė buvo susijęs žmogaus IM patogenezėje [3]. Be to, ilgalaikis MP sukeltas CDX2 išraiška buvo įrodyta, kad sukelti skrandžio vėžio transgeninių pelių, nurodant, kad pati MP vaidina svarbų vaidmenį skrandžio karcinoma genezės. [4]
likviduoti. pylori
pakanka pakeisti trumpąją, dar kiti nustatė, kad didelė dalis pacientų vis dar pas IM net po veiksmingai likviduoti. [5] MP yra manoma, kad būti taškas nėra kelio atgal "į histologinių kaskada nuo lėtiniu gastritu su adenokarcinoma [6]; taigi, pastangos suprasti molekulinius mechanizmus, reguliuojančius sukūrimą ir priežiūrą MP yra labai svarbu sukurti strategijas nutraukti skrandžio kancerogenezės. Pavyzdžiui, CDX2 autoreguliacija siūloma turėti didelę įtaką MP pažeidimų stabilumo. [7] Nors MP kriptos į žmogaus skrandį yra klonų ir yra multipotent kamienines ląsteles, [8], kad menkai suprantama, ar gimtoji skrandžio kamieninės ląstelės yra pradinis šaltinis metaplazijos arba jei jie tik padeda palaikyti nustatytus pakitimus.
kaip kamieninių ląstelių žymeklio žarnyno epitelio. [9] lineage sekimo tyrimas vėliau paaiškėjo, kad LGR5
+ ląstelių yra multipotent kamieninės ląstelės atsakingos už atnaujinimo skrandžio epitelio pelių. [10] Mūsų grupė anksčiau parodė, kad nedidelis skaičius, LGR5
+ ląstelių taip pat gyvena ne žmogaus antralinių liaukų apačioje ir dramatiškai didėja MP pažeidimų [11]. Šie rezultatai paskatino mus spėlioti, kad LGR5
gali būti žymeklis žarnyno kamieninių ląstelių (ISC), dalyvaujančių IM priežiūra.
išraiška, lyginant su normaliu suragėjusių epitelio, ir galvoti apie a LGR5
buvimą + kamieninių ląstelių būti. [13]
, įskaitant PROM1
[14] BMI1
[15] LRIG1
[16], ir ASCL2
, kuri buvo identifikuota kaip transkripcijos veiksnio kontroliuoti žarnyno kamieninių ląstelių likimą. [17] Be to, OLFM4
[17] ir EPHB2
[18], taip pat labai išreikštas ISC. Šiame tyrime siekėme atrasti papildomų ISC žymekliai dalyvaujančių genezės ir priežiūra skrandžio IM ir BE ir išnagrinėti jų colocalization su LGR5
+ ląstelių pagal RNR in situ hibridizacijos ir toliau atskleidžia molekulinė charakteristikos LGR5
+ ląstelių IM ryšium su žarnyno panašūs kamieninių ląstelių fenotipo.
Etikos pareiškimas
RNR in situ hibridizacijos
ASCL2
OLFM4
ir EPHB2
buvo atliktas su RNAscope FFPE bandymo komplektas (Advanced Cell diagnostika, Inc , Hayward, CA, USA), kaip aprašyta anksčiau. [11] Teigiamas dėmė buvo apibrėžiamas kaip rudos taškinę taškais branduolio ir /arba citoplazmoje buvimą. Ubikvitino C bakterijų, DapB
genai tarnavo kaip teigiamus ir neigiamus kontrolinius mėginius, atitinkamai.
RNR gavybos ir kiekybinė realaus laiko PGR
), Hs00362096_m1 ( EPHB2
), Hs00270888_s1 ( ASCL2
), Hs00197437_m1 ( OLFM4
), Hs01009250_m1 ( PROM1
), Hs00394267_m1 ( LRIG1
), Hs00995536_m1 ( BMI1
), Hs00178027_m1 ( DCLK1
), Hs010780810_m1 ( CDX2
), Hs00212584_m1 ( CLDN18
) ir Hs0275899_g1 ( GAPDH
). GAPDH
tarnavo kaip endogeninio kontrolę.
transfekciją CDX2
Statistinė analizė
buvo įvertintas tiesinės regresijos analizė. Mean skirtumų tarp FFPE skrandžio egzempliorių grupių buvo vertinami vieną pusę ANOVA. Tarp grupių palyginimai po transfekciją CDX2
skrandžio vėžio ląstelių linijų atliekamas naudojant Studentas , T
-tests. Rezultatai buvo laikomi reikšmingais, kai P
< 0,05.
Rezultatai
+ ląstelių MP pakitimų žmogaus skrandį. [11] Tai paskatino mus hipotezę, kad tai LGR5
+ ląstelių gali veikti savarankiškai atnaujinimo kamieninių ląstelių padėti priežiūros ir dauginimo metaplastic epitelio skrandžio gleivinę. Taigi, mes siekiama nustatyti papildomus ISC žymekliai, kad koreliuoja su CDX2
išraiška MP. Norėdami tai padaryti, mes išmatavo raiškos lygį CDX2
ir aštuonių ISC markers- LGR5 pervežimas ASCL2
OLFM4
DCLK1
LRIG1
, ir BMI1
-in normalus skrandžio audinio. Nagrinėti audiniai parodė platų CDX2
lygius, atstovaujanti įvairių laipsnių IM, nes CDX2
išraiška teigiamai koreliuoja su MP progresavimo (pav 1A). buvo rasta trys DPK žymekliai koreliuoja su CDX2
išraišką: OLFM4
EPHB2
, ir BMI1 pervežimas. Visų pirma, OLFM4
( P
< 0,0001, R 2 = 0,56) (pav 1B) ir EPHB2
( P
< 0,0001, R 2 = 0,52) (pav 1C) rodomas stiprų teigiamą koreliaciją su CDX2
, o BMI1
buvo atvirkščiai koreliuoja ( p
= 0,0002, R 2 = 0,42) (pav 1D). Nėra reikšmingas ryšys su CDX2
išraiška buvo tapatinama su kitų penkių DPK žymekliai (S1 pav).
2. DPK žymeklis išraiška koreliuoja su MP progresavimo
su IM, mes išrinkome keturis histologiškai-skiriasi skrandžio audinių tipų; normalus antralinių gleivinė be IV, kurioje (n = 4), ir lėtinis aktyvus gastritas be IV, kurioje (n = 3), skrandžio ir žarnyno mišraus tipo (GI tipo) IV (n = 6), ir tik žarnyno tipo (I tipo) IM: (n = 5) (pav 2A). Claudin-18 yra labiausiai išreikštas įtemptas mazgas baltymas yra į skrandį. Kaip ir tikėtasi, mūsų tyrimai parodė, kad claudin-18 išraiška sumažėjo su didėjančių laipsnių IM ( P
< 0,0001) (pav 2B), o CDX2
išraiška padidėjo ( P
< 0,0001) (pav 2C). Mes taip pat nustatė, kad OLFM4 parsisiųsti ir EPHB2
lygiai nuosekliai didėjo kiekvieną paskesnį pažeidimo, patvirtinantį, kad šie žymenys yra glaudžiai susiję su MP progresavimo ( P
= 0,008 ir 0,001, atitinkamai; pav 2D ir 2E). Priešingai, BMI1 parsisiųsti ir LRIG1
išraiška parodė tendenciją mažėti MP progresavimą. ( P
= 0,002 ir 0,0006, atitinkamai; pav 2F ir 2G)
+ ląstelių žarnyne metaplazijos colocalize su kitais DPK žymekliai
ASCL2
EPHB2
, ir OLFM4
pirmą kartą buvo nagrinėjama normalus žmogaus plonosiose žarnose skyriuje patvirtinti šią techniką, ir buvo nustatyta, kad būtent lokalizuoti į ląsteles per kamieninių ląstelių nišą žarnyno kriptos, kaip tikėtasi (S2 pav). Nuo LGR5
+ ląstelių normalių žarnyno kriptos taip pat išreikšti ISC žymekliai, mes teorija, kad LGR5
+ ląstelių IM taip pat gali eksponuoti panašiais žodžiais modelis. Taigi, mes pakartojo procedūrą eilės skyriuose endoskopinių Po gleivine išpjaustymo egzempliorių (n = 5), kurių kiekvienas esančių kelių židinių GI- ar aš tipo IM tarp ne navikinio audinio. Nedidelis skaičius, LGR5
+ ląstelių po įprastinio antralinių liaukų bazę buvo neturi ISC žymeklio išraiškos (pav 3A), o tie, I tipo IM parodė išreiškė visų trijų žymenų (pav 3B) , Be to, G. tipo MP pažeidimai rodomas tą patį išraiška profilį bendras išskyrus, kad DPK žymeklis išraiška buvo virš likusių skrandžio liaukų, o ne tik bazinę srityse (S3 pav). Ši sąvoka modelis buvo nuolat stebimas visuose mėginiuose. Šie rezultatai rodo, kad LGR5
+ ląstelių MP skiriasi nuo įprastai antralinėje dalyje į DPK žymenų, kurie paprastai taikomi apribojimai į ląsteles per žarnyno kriptos išraiška. Įdomu tai, kad MP kilęs iš fundic liaukų, kur LGR5
+ ląstelių paprastai nėra, pagaminti tokius pačius rezultatus (S4 pav). Taigi, panašu, kad gyventojai, LGR5
+ ląstelių IM neturi atsirasti dėl nesieja platinimu, LGR5
+ ląstelių, bet veikiau atsiradimą LGR5
+ ląstelių įgytų diferenciacijos potencialą, rodančių, kad žarnyno panašūs kamieninių ląstelių populiacija yra nustatyta IM. Be to, skrandžio adenoma (n = 5) taip pat išreikštas aukšto lygio ISC žymenų visoje pažeidimų, o ne tik su liaukų kriptos (pav 3c). Kaip parodyta Fig 3, šis ISC žymeklių išreiškiančias, iš ląstelių kaupimasis per metaplazijos su displazija seka yra implicative iš žarnyno tipo kamieninių ląstelių skrandžio tumorigenezei ir papildomus tyrimus dalyvavimo ištirti tarp žarnyno kamieninių ląstelių žymenų ir skrandžio auglių vystymuisi yra nuorodą tikrai pagrįstas.
OLFM4
EPHB2
, ir PROM1
pagal KRL-PGR analizei (pav 4A). Žymiai, tiek BE ir adenokarcinomos išreikštas didesnį visų keturių ISC žymenų, lyginant su normalaus suragėjusių epitelio (pav 4B, 4C, 4d ir 4e). Nors LGR5 parsisiųsti ir ASCL2
neparodė jokių reikšmingų pokyčių nuo AT-PGR analizei, greičiausiai dėl mažos kopijų skaičiaus nuorašai, RNR in situ hibridizacijos parodė aiškų ląstelių populiaciją, su
, ir OLFM4
išraiška ties skrandžio ir metaplastic liaukų sankryžos, primenantis Gi-tipas IM (pav 4F, 4G, 4H, 4I ir 4J).
+ ląstelių yra identifikuojami kaip multipotent žarnyno panašūs kamieninių ląstelių pelėms [10] ir egzistuoja žmogaus skrandžio antralinėje dalyje [11], tai tikėtina manyti, kad MP gali išsivystyti iš šios ląstelių populiacijos. Tačiau, vis dar išlieka galimybė, kad kita kamieninių ląstelių populiacija būtų grindžiamas šį procesą. Pavyzdžiui, SOX2
+ ląstelių, taip pat buvo nustatyta, kad skirtingų skrandžio kamieninių ląstelių, ir etiketė ląstelių populiacijos išskirtinių tiems su LGR5
išraiška. [21] Transdifferentiation taip pat gali sukelti į metaplastic ląsteles. Spasmolyitc polipeptidas ekspresija metaplazija-kurioje prievarčio tipo liaukos atsiras oxyntic gleivinės-kyla iš subrendusių vyriausiųjų ląstelių [22], o ne LGR5
-expressing ląsteles. [23] Iš tiesų, transgeninių CDX1
arba CDX2
išraiška rezultatai Parietal ląstelių gautas IM plėtros transgeninių pelių. [24] Todėl išlieka silpnas, ar MP yra žarnyno kamieninių ląstelių perprogramavimo pasekmė arba ląstelių transdifferentiation su įsigijo DPK-kaip savybės. [12, 25]
su tolesniu intestinalization skrandžio gleivinę. Kartu su didėjančių CDX2
lygių, kurie sužadina žarnyno diferenciaciją ir fenotipą, šios išraiškos būdus pasiūlyti bendro kamieninių ląstelių populiacijos konversiją link labiau žarnyno-kaip kamieninių ląstelių fenotipo. Be to, netikėtai atvirkštinė koreliacija BMI1
ir LRIG1
su IM reikia atlikti tolesnius tyrimus siekiant patvirtinti šį rezultatą bei paaiškinti jos klinikinė reikšmė.
. pylori
likvidavimo turi potencialą, siekiant išvengti skrandžio vėžio, [29] ir gali sušvelninti priešvėžinių skrandžio pažeidimų, pavyzdžiui, IM progresavimą. [30, 31] Tačiau, kai nustatoma, atrodo, kad O
. pylori
likvidavimo negali visiškai apsaugoti nuo skrandžio vėžio. [6] Tiesą sakant, maždaug 80% tiriamųjų, kurių IM parodė, jokių pokyčių ar progresavimą IM po gydymo antibiotikais. [31] Be to, metaanalizė išvadą kad O
. pylori
likvidavimo neturi įtakos skrandžio IM poveikį [32]. Šis IM Nebegalima galima iš dalies paaiškinti techninę priežiūrą, CDX2
išraiška per autoreguliavimo kilpą, kuri yra nepriklausoma nuo pradinio sukelti, palaikyti [33] žarnyno fenotipas. Mes taip pat atskleidė, kad LGR5
+ ląstelių ne iš metaplastic liaukų bazę nuosekliai išreikšti kitų ISC žymeklius, rodantys žarnyno panašūs kamieninių ląstelių fenotipo. Mes tikime, kad tai stabilus kamieninių ląstelių populiacija gali pateikti papildomą paaiškinimą dėl ilgalaikis pobūdžio MP. Be to, gydymo strategijas, pakanka specialiai nukreipti LGR5
+ ląstelių populiaciją, kartu su H
. pylori
likvidavimo potencialiai gali pakenkti IM stabilumą, tokiu būdu paspartinti naujo kurti normalią skrandžio gleivinę.
+ ląstelių su ISC žymeklio išraiškos buvimą. Ši išvada atitinka ankstesnę ataskaitą, kurioje, kad LGR5
išraiška buvo gerokai padidėjusi būti, ir kad gyventojų yra linkę ląstelių porą "kilmės šiam metaplazijos. [13] Visai neseniai LGR5
+ ląstelės buvo identifikuotas Bareto liaukų viduryje in situ hibridizacijos ir siūloma veikti kaip kamieninėmis ląstelėmis, nes jie pasižymi tiek skrandžio ir žarnyno diferenciaciją. [34] taip pat nustatyta, LGR5
+ ląstelių at tarp skrandžio ir metaplastic liaukų srityse BE, kurie atitinka prie Bareto liaukų viduryje. Be to, ISC žymenų buvimas LGR5
+ ląstelių populiacija toliau palaiko savo potencialą žarnyno diferenciacijos. Taigi, remiantis šiais rezultatais, atrodo pagrįsta manyti, kad LGR5
+ ląstelių yra greičiausiai veikia kaip kamieninių ląstelių, kurie palaiko žarnyno fenotipas BE, panašų į tą, matyti MP.
, stipri išraiška aptinkamas MP. [35, 36] Be to, transgeninių pelių parodė, kad vien CDX2
išraiška yra pakankamas, kad būtų sukelti trumpąją [37 38], o tai rodo, kad CDX2
taip pat gali palengvinti kamieninių ląstelių populiacijos vystymąsi, žarnyno fenotipą. Taigi, mes išnagrinėjo jei CDX2
tiesiogiai dalyvauja DPK žymenų ekspresijos: LGR5
ASCL2
OLFM4
, ir EPHB2
(S5 pav). Tačiau transfekciją eksperimentai parodė, kad tik EPHB2
buvo nežymiai paveikti CDX2
išraiška. Žinoma, šie duomenys turėtų būti interpretuojami atsargiai, nes buvo gauti GC ląstelių linijų su skirtingais biologinių savybių iš tos ne tumoro skrandžio epitelio arba žarnyno kamieninėmis ląstelėmis. Nepaisant to, atrodo, kad papildomos signalizacijos veiksniai kartu su CDX2
yra svarbu sukelti ISC žymeklis išraiška.
+ ląstelių skrandžio IM ir BE coexpress DPK žymekliai, tai rodo, žarnyno panašūs kamieninių ląstelių populiacijos, kuri pakeistų jau turi skrandžio kamienines ląsteles. Ši išvada atrodo yra svarbus raktas suprasti mechanizmo, lemiančio IM atkaklumo po H
. pylori
likvidavimo. Be to, mūsų rezultatai rodo, LGR5
+ ląstelių yra perspektyvus tikslas pakeisti trumpąją ir galbūt užkirsti kelią jų progresavimą į skrandžio vėžio.
Pagalbinė informacija
S1 pav. Koreliacija žarnyno kamieninių ląstelių (ISC) žymekliai su CDX2
lygiai ne tumoro skrandžio audinių.
Nėra koreliacijos yra nustatyta tarp CDX2
išraišką ir kai DPK žymekliai, pavyzdžiui, LGR5
(R 2 = 0,01 p
= 0,59), ASCL2
(R 2 = 0,01 p
= 0,59) PROM1
(R 2 = 0,11 p
= 0,08), LRIG1
(R 2 = 0,06 p
= 0,21) ir DCLK1
(R 2 = 0,09 p
= 0,11)
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0127300.s001
( PPTX)
S2 pav. Vizualizacija žarnyno kamieninių ląstelių žymenų pagal RNR in situ hibridizacijos (ISH).
RNR ISH atlikti su formalinu fiksuotų ir parafino įterptųjų pavyzdį iš plonosios žarnos. (A, B) A LGR5 GROUP UAB + Kamieninės ląstelės yra identifikuojami visų kriptos, susimaišė su Paneth ląstelių apačioje. Kitos žarnyno kamieninių ląstelių žymenys, pavyzdžiui, ASCL2
(C, D) EPHB2
(E, F) ir OLFM4
(G, H), taip pat nustatyta, kad apsiriboti kriptos bazių. Didinimas: A, C, E, G × 100; B, D, F, H × 400
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0127300.s002
(PPTX)
S3 pav. Pareikšti žarnyno kamieninių ląstelių žymenų GN tipas IM.
Likęs skrandžio liaukos dažnai rasti bazinę sričių GN tipas IM (A ir B). RNR ISH rodo, kad LGR5
(C) ir EPHB2
(D) išraiškos lokalizuota virš skrandžio liaukų. Įdomu tai, kad OLFM4
(R) išraiška pastebima skrandžio liaukų, kaip gerai, nors jo intensyvumas yra daug silpnesnis nei per metaplastic liaukų. Kai šios skrandžio liaukos išnyks MP vystosi (A ir F), viso platinimas LGR5
(G), EPHB2
(H) ir OLFM4
(I) griežtai tik bazinę srityse. Rodyklės rodo likusius skrandžio liaukos. Didinimas: a × 40; B, C, D, E, F, G, H, I × 200
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0127300.s003
(PPTX)
S4 pav. Žarnyno kamieninių ląstelių žymenys žarnyno metaplazijos (IM), skrandžio corpus.
(A ir B) Mažas dėmesys IM į fundic liaukų, rodyklėmis nurodytų viduryje, rodo tuos pačius raiškos modelius
(d) ir OLFM4
(E) kaip antralinėje dalyje MP. Didinimas: a × 100; B, C, D, E × 200
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0127300.s004
(PPTX)
S5 pav. Poveikis, CDX2
nuo žarnyno kamieninių ląstelių ekspresijos (ISC) žymenų skrandžio vėžiu (GC) ląstelių linijas.
Transfekciją CDX2
į keturias GC ląstelių linijų, MKN74 (A ), MKN28 (B) SNU484 (C) ir SNU668 (d), žymiai padidina mRNR iš sumą, CDX2
(** p
< 0,01; ***, p
< 0,005). EPHB2
išraiška tik nežymiai sustiprino saviraiškos CDX2
trijų iš keturių GC ląstelių linijas (*** P
< 0,005). Nėra skirtumas randamas LGR5
ASCL2
, ir OLFM4