Estratto
gastrica metaplasia intestinale (IM) è una lesione pre-neoplastica altamente prevalente; Tuttavia, i meccanismi molecolari che regolano il suo sviluppo rimangono poco chiari. Abbiamo dimostrato in precedenza che una popolazione di cellule che esprimono il marcatore di cellule staminali intestinali (ISC) LGR5 Visto:. Jang BG, Lee BL, Kim WH (2015) intestinale staminali marcatori di cellule nel intestinale metaplasia di stomaco ed esofago di Barrett. PLoS ONE 10 (5): e0127300. doi: 10.1371 /journal.pone.0127300 Editor Accademico: Anthony W.I. Lo, Queen Mary Hospital, Hong Kong Ricevuto: 8 Gennaio, 2015; Accettato: 13 aprile 2015; Pubblicato: 21 maggio 2015 Copyright: © 2015 Jang et al. Questo è un articolo ad accesso libero distribuito sotto i termini della Creative Commons Attribution License, che permette l'uso senza restrizioni, la distribuzione e la riproduzione con qualsiasi mezzo, a condizione che l'autore originale e la fonte sono accreditati disponibilità dei dati: Tutti i dati rilevanti sono all'interno del suoi file informazioni di supporto carta e Finanziamento: Questa ricerca è stata sostenuta da una sovvenzione della Corea Salute Technology R & S del progetto attraverso la Corea Health Industry Development Institute (Khidi), finanziato dal Ministero della. Salute & Welfare, Repubblica di Corea (codice di autorizzazione: HI14C1277). I finanziatori avevano alcun ruolo nel disegno dello studio, la raccolta e l'analisi dei dati, la decisione di pubblicare, o preparazione del manoscritto Competere interessi:.. Gli autori hanno dichiarato che non esistono interessi in competizione Introduzione preneoplastiche metaplasia intestinale (IM) è associato ad un aumentato rischio di carcinoma gastrico e presenta in circa un quarto degli individui in tutto il mondo. [1] IM spesso il risultato di gastrite cronica atrofica a seguito dell'infezione da Helicobacter pylori a causa IM è un precursore fondamentale nella carcinogenesi gastrica, il potenziale per invertire queste lesioni è di grande interesse. [5] indagini precedenti hanno riportato che l'eradicazione di H la scoperta delle normali cellule staminali della mucosa gastrica ha coinciso con l'identificazione del gene bersaglio Wnt LGR5 esofago di Barrett (BE) è una conversione metaplastica per intestinale epitelio colonnare ed è associata ad un aumentato rischio di adenocarcinoma, simile a quella osservata con IM gastrica. [12] in particolare le lesioni, umana BE esibire un sovraregolazione di LGR5 Diversi marcatori molecolari ISC sono stati identificati oltre a LGR5 Materiali e Metodi Soggetti formalina -fixed e inclusi in paraffina (FFPE) campioni gastrici con o senza metaplasia intestinale (IM) sono stati raccolti da cinque pazienti che hanno subito endoscopica della sottomucosa dissezione a Seoul University Hospital nazionale (SNUH) dal 2008 al 2010. Le lesioni IM sono stati classificati in gastrica-e -intestinal misto (GI) e solo intestinali (I) sottotipi (noto anche come tipi incompleti e completi, rispettivamente). [19] I campioni di esofago di Barrett sono stati isolati da due pazienti con adenocarcinoma della giunzione gastroesofagea, e un normale piccolo campione di intestino era ottenuto da un paziente affetto da cancro al colon. tessuti gastrici non tumorali fresco congelato erano disponibili da 28 pazienti affetti da cancro gastrico che avevano subito una gastrectomia chirurgica 2001-2005 a SNUH. Dichiarazione etica Tutti i campioni umani sono stati ottenuti attraverso la resezione chirurgica curativa . Questo studio retrospettivo è stato eseguito utilizzando campioni conservati dopo la diagnosi patologica. I campioni sono stati resi anonimi prima dello studio, quindi il consenso scritto non era necessario. Il disegno dello studio è stato approvato dal Consiglio Institutional Review presso la Seoul National University Hospital sotto la condizione di forma anonima (riferimento: H-1209-037-424). In situ ibridazione per LGR5 L'RNA totale è stato estratto da incluso in paraffina sezioni di tessuto con un kit RNeasy FFPE (Qiagen, Valencia, CA, USA), come descritto in precedenza. [20] retrotrascritto cDNA è stato preparato da 1-2μg di RNA totale con primer esameriche casuali e il GoScript sistema di trascrizione inversa (Promega, Madison , WI, USA). Real-time PCR (qRT-PCR) reazioni quantitativi sono stati eseguiti utilizzando Premix EX Taq (Takara Bio, Shiga, Giappone) secondo le raccomandazioni del fabbricante, ei dati analizzati utilizzando il software Sequence Detection System (versione 1.4, Applied Biosystems). I seguenti saggi di espressione genica TaqMan sono stati utilizzati: Hs00173664_m1 ( LGR5 CDX2 cDNA (pCMV6-CDX2) è stato acquistato da Origene (Rockville, MD, USA). cellule di cancro gastrico sono state seminate a 1 × 10 6 cellule /pozzetto in 6 pozzetti e trasfettate con 2,5 mg di cDNA o controllo vettoriale vuoto utilizzando Lipofectamine 2000 reagente di trasfezione (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) secondo il costruttore del istruzioni. Le cellule sono state sottoposte ad analisi qRT-PCR circa 24 ore dopo la trasfezione. Le analisi statistiche sono state eseguite in Prism 5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA). Le correlazioni tra le espressioni di marcatori di cellule staminali intestinali e CDX2 1. marcatori ISC correlazione con i livelli di CDX2 nella mucosa gastrica precedentemente riportato sul relativo aumento di LGR5 Per confermare l'associazione positiva di OLFM4 3. LGR5 Per determinare se un rapporto diretto esistente tra LGR5 4. marcatori ISC sono espressi nelle lesioni esofago di Barrett accanto cercato di determinare se marcatori ISC sono stati espressi anche in esofago di Barrett (BE). Per questo, due esemplari di adenocarcinomi derivanti sullo sfondo di BE sono stati valutati per l'espressione di CDX2 Discussione la regione istmo /collo dell'unità gastrico è stato precedentemente pensato per comprendere la nicchia di cellule staminali in cui avviene IM, ed è stato suggerito che la progressione metaplasic da una singola unità clonale gastrica verifica attraverso l'espansione clonale e la fissione cripta. [8] perché LGR5 I vari sforzi hanno cercato di classificare le IM di tipi di stomaco lesione. Matuskura et al. suggerito un sistema di classificazione basato sulla presenza di piccole enzimi digestivi dell'intestino; definita come tipo completa e incompleta IM, [26] mentre Jass e Filipe introdotti tre gradi di IM sulla base della morfologia e istochimico colorazione mucina. [27] Più recentemente, una nuova classificazione è stata proposta da Tatematu et al., In cui IM può essere diviso in gastrica-and-intestinale mista (GI) e tipi esclusivamente intestinali (I). [19] In GI-tipo IM , marcatori fenotipici gastriche e intestinali appaiono sia a livello ghiandolare e cellulare, quindi è stato suggerito che IM potrebbe essere causato dalla progressiva intestinalization di cellule staminali dal GI- a i-tipo. [28] Qui, abbiamo osservato aumento graduale dei marcatori ISC OLFM4 H esofago di Barrett (BE) è una lesione precancerosa che condivide diverse caratteristiche morfologiche e molecolari con gastrica IM, soprattutto perché è una conversione metaplastica per intestinale epitelio colonnare risultanti da infiammazione cronica. Noi crediamo che il presente studio caratterizza un'altra somiglianza tra queste due lesioni in presenza di LGR5 + cellule CDX2 è un fattore di trascrizione master per l'espressione dei marcatori di differenziazione intestinali, e si pensa alla base dello sviluppo di BE. Mentre normale mucosa gastrica non esprime CDX2 In sintesi, abbiamo stabilito che LGR5
aumenta notevolmente in IM. In questo studio, abbiamo ulteriormente studiato le caratteristiche molecolari di questi LGR5
+ cellule IM esaminando il profilo di espressione di diversi marcatori ISC. In particolare, abbiamo scoperto che ISC marcatori, tra cui OLFM4
e EphB2
-sono positivamente associato con il CDX2
espressione nei tessuti gastrici non-tumorali. Questo risultato è stato confermato nelle lesioni allo stomaco con o senza metaplasia, che hanno dimostrato che OLFM4 e l'espressione EphB2 gradualmente aumentata con la progressione metaplastica. Inoltre, l'RNA ibridazione in situ ha rivelato che LGR5
+ cellule coesprimere diversi marcatori ISC e rimasero confinati alla base delle ghiandole metaplastiche, che ricordano a quella delle normali cripte intestinali, mentre quelli normali ghiandole antrali nessuno espresse di questi marcatori. Inoltre, un gran numero di cellule che esprimono marcatori-ISC stati diffusamente distribuiti in adenomi gastrici, suggerendo che questi marcatori possono facilitare tumorigenesi gastrica. Inoltre, esofago di Barrett (BE) -che è istologicamente simile intestinale metaplasia-esposto una distribuzione simile di marcatori ISC, indicando la presenza di una popolazione di cellule staminali con potenziale di differenziazione intestinale. In conclusione, abbiamo identificato che LGR5
+ cellule di IM gastrica ed essere marcatori ISC coesprimere, e presentare lo stesso profilo di espressione, come quelle che si trovano nelle normali cripte intestinali. Presi insieme, questi risultati implicano una popolazione di cellule staminali intestinali, come nella patogenesi di IM, e forniscono una base importante per comprendere lo sviluppo e il mantenimento di questa malattia
, che possono poi passare alla displasia epiteliale gastrica o carcinoma. [2] Una varietà di alterazioni genetiche ed epigenetiche sono stati implicati nella patogenesi di IM umana. [3] Inoltre, a lungo termine IM indotta da espressione CDX2 è stata dimostrato di portare a cancro gastrico in topi transgenici, che indica che IM stessa svolge un ruolo significativo nella genesi del carcinoma gastrico. [4]
. pylori
è sufficiente per invertire IM, altri ancora hanno trovato che una percentuale significativa di pazienti ancora presenti con IM, anche dopo l'eliminazione efficace. [5] IM si crede di essere il 'punto di non ritorno' nel istologico cascata da gastrite cronica a adenocarcinoma; [6] in tal modo, gli sforzi per la comprensione dei meccanismi molecolari che regolano la creazione e il mantenimento di IM sono cruciali per sviluppare strategie per interrompere la carcinogenesi gastrica. Per esempio, CDX2 autoregolazione viene suggerito di avere un grande impatto sulla stabilità delle lesioni IM. [7] Mentre cripte IM nello stomaco umano sono clonale e contengono cellule staminali multipotenti, [8] rimane poco compresa se le cellule staminali gastrici native sono la fonte iniziale di metaplasia o se servono solo a mantenere le lesioni stabiliti.
come marker delle cellule staminali in l'epitelio intestinale. [9] Uno studio lineage tracing in seguito rivelato che LGR5
+ cellule sono cellule staminali multipotenti responsabili per il rinnovo dell'epitelio gastrico nei topi. [10] il nostro gruppo ha dimostrato che in precedenza un piccolo numero di LGR5
+ cellule risiedere anche nella parte inferiore delle ghiandole antrali umani e aumentare drammaticamente nelle lesioni IM. [11] Questi risultati ci hanno portato a ipotizzare che LGR5
maggio essere un marker per le cellule staminali intestinali (ISC) coinvolti nel mantenimento della IM.
espressione quando rispetto ad un normale epitelio squamoso, ed è indicativo della presenza di un LGR5
+ le cellule staminali in BE. [13]
, tra cui PROM1
[14], BMI1
[15], LRIG1
[16], e ASCL2
, che è stato identificato come un fattore di trascrizione per il controllo intestinale destino delle cellule staminali. [17] Inoltre, OLFM4
[17] e EphB2
[18] sono anche altamente espresso in ISC. In questo studio, abbiamo cercato di scoprire ulteriori marcatori ISC coinvolti nella genesi e mantenimento di IM gastrica e BE, ed esaminare la loro colocalization con LGR5
+ cellule di RNA ibridazione in situ per rivelare ulteriormente la molecolare caratteristiche di LGR5
+ cellule in IM per quanto riguarda il fenotipo delle cellule staminali intestinali-like.
RNA ibridazione in situ
, ASCL2
, OLFM4
, e EphB2
è stata effettuata con il kit di analisi RNAscope FFPE (Diagnostica cellulari avanzati, Inc. , Hayward, CA, USA) come descritto in precedenza. [11] macchia positiva è stata definita come la presenza di punti puntiformi marroni nel nucleo e /o nel citoplasma. L'ubiquitina C e batteriche DapB
geni servito come controlli positivi e negativi, rispettivamente.
estrazione di RNA e real-time PCR quantitativa
), Hs00362096_m1 ( EphB2
), Hs00270888_s1 ( ASCL2
), Hs00197437_m1 ( OLFM4
), Hs01009250_m1 ( PROM1
), Hs00394267_m1 ( LRIG1
), Hs00995536_m1 ( BMI1
), Hs00178027_m1 ( DCLK1
), Hs010780810_m1 ( CDX2
), Hs00212584_m1 ( CLDN18
), e Hs0275899_g1 ( GAPDH
). GAPDH
servito come controllo endogeno.
Transfection di CDX2
Analisi statistica
è stata valutata mediante analisi di regressione lineare. differenze medie tra i gruppi di FFPE campioni gastrici sono stati valutati mediante ANOVA. il confronto tra i due gruppi dopo la trasfezione di CDX2
in linee cellulari di cancro gastrico sono stati eseguiti utilizzando Student t
-test. I risultati sono stati considerati significativi quando p
< 0.05.
Risultati
+ cellule in IM lesioni dello stomaco umano. [11] Questo ci ha spinto a ipotizzano che questi LGR5
+ cellule possono agire come cellule staminali di auto-rinnovamento per aiutare nella manutenzione e propagazione dell'epitelio metaplastico nella mucosa gastrica. Così, abbiamo voluto individuare ulteriori indicatori di ISC che correlate con CDX2
espressione in IM. Per questo, abbiamo misurato i livelli di espressione di CDX2
e otto ISC markers- LGR5
, ASCL2
, OLFM4
,
, DCLK1
, LRIG1
, e BMI1
-in tessuto gastrico normale. I tessuti esaminati hanno mostrato una vasta gamma di CDX2
livelli, che rappresentano i vari gradi di IM, dal momento che CDX2
espressione è correlata positivamente con IM progressione (Fig 1A). Tre indicatori ISC sono risultate correlate con CDX2
espressione: OLFM4
, EphB2
, e BMI1
. In particolare, OLFM4
( p
< 0,0001, r 2 = 0,56) (Fig 1B) e EphB2
( p
< 0,0001, r 2 = 0,52) (Fig 1C) visualizzata una forte correlazione positiva con CDX2
, mentre BMI1
era inversamente correlato ( p =
0.0002, r 2 = 0.42) (Fig 1D). Nessuna associazione significativa con CDX2
espressione è stato identificato con gli altri cinque marcatori ISC (S1) Fig.
2. ISC espressione marcatore è correlata con IM progressione
e EphB2
con IM, abbiamo selezionato quattro tipi di tessuto gastrico istologicamente distinta; mucosa antrale normale senza IM (n = 4), gastrite cronica attiva senza IM (n = 3), gastrica e tipo intestinale misto (tipo GI) IM (n = 6), e il tipo esclusivamente intestinale (tipo I) IM (n = 5) (Fig 2A). Claudin-18 è la proteina giunzioni strette più altamente espresso nello stomaco. Come previsto, le nostre analisi hanno rivelato che claudina-18 espressione diminuita con le crescenti gradi di IM ( p
< 0,0001) (Fig 2B), mentre CDX2
espressione aumentato ( p
< 0,0001) (Fig 2C). Abbiamo anche trovato che OLFM4
e livelli EphB2
cresciute costantemente con ogni successivo lesioni, confermando che questi marcatori sono strettamente correlati alla progressione IM ( p
= 0.008 e 0.001, rispettivamente; fig 2D e 2E). Al contrario, BMI1
e LRIG1
espressione ha mostrato una tendenza a diminuire con l'IM progressione. ( p
= 0,002 e 0,0006, rispettivamente; fig 2F e 2G)
+ cellule in metaplasia intestinale colocalize con altri marcatori ISC
e ISC marcatori in IM, abbiamo esaminato se loro coexpression da RNA ibridazione in situ. L'espressione di LGR5
, ASCL2
, EphB2
, e OLFM4
sono già state sviluppate in una sezione piccolo intestino umano normale per convalidare questa tecnica, e sono stati trovati per localizzare specificamente alle cellule all'interno della nicchia di cellule staminali delle cripte intestinali come previsto (S2 Fig). Dal momento che LGR5
+ cellule normali in cripte intestinali esprimono anche i marcatori ISC, abbiamo teorizzato che LGR5
+ cellule in IM potrebbe anche presentare un pattern di espressione simile. Così, si è ripetuta la procedura su sezioni consecutive di campioni sottomucosa dissezione endoscopica (n = 5), ciascuna delle quali conteneva focolai multipli di GI- o I-tipo IM tra tessuto non tumorale. Un piccolo numero di LGR5
+ cellule alla base di normali ghiandole antrali erano privi di espressione marcatore ISC (Fig 3A), mentre quelli in I-tipo IM ha mostrato espresso tutti e tre i marcatori (fig 3B) . Inoltre, GI-tipo lesioni IM visualizzati lo stesso profilo di espressione complessiva tranne che l'espressione marcatore ISC era situato sopra rimanenti ghiandole gastriche, piuttosto che limitata alle zone basali (S3) Fig. Questo pattern di espressione è stata costantemente osservata in tutti i campioni. Questi risultati indicano che LGR5
+ cellule in IM differiscono da quelli in dell'antro normale l'espressione di marcatori ISC che di solito sono limitati alle cellule all'interno delle cripte intestinali. È interessante notare che, IM derivato dalle ghiandole fundica, dove LGR5
+ cellule sono normalmente non presente, hanno prodotto gli stessi risultati (S4 Fig). Così, sembra probabile che la popolazione di LGR5
+ cellule di IM non deriva dalla proliferazione di preesistente LGR5
+ cellule, ma è piuttosto un emergere di LGR5
+ cellule con potenziale di differenziazione acquisito, suggerendo che una popolazione di cellule staminali intestinali come è stabilito in IM. Inoltre, adenomi gastrici (n = 5) anche espresso alti livelli di marcatori ISC tutta lesioni, piuttosto che limitata alle cripte ghiandolari (Fig 3C). Come mostrato in Figura 3, questo accumulo di cellule marcatori che esprimono ISC sopra la metaplasia di sequenza di displasia è implicativo della partecipazione di cellule staminali di tipo intestinale nella tumorigenesi gastrica e ulteriori studi per indagare il legame tra i marcatori di cellule staminali intestinali e lo sviluppo del tumore gastrico sono sicuramente garantito.
, OLFM4
, EphB2
, e PROM1
da qRT-PCR (Figura 4A). Significativamente, sia BE e adenocarcinomi espresso livelli più elevati di tutti quattro marcatori ISC rispetto a quella del normale epitelio squamoso (Fig 4B, 4C, 4D e 4E). Mentre LGR5
e ASCL2
non ha mostrato cambiamenti rilevanti rispetto RT-PCR, probabilmente a causa di basso numero di copie di trascrizioni, RNA ibridazione in situ hanno mostrato una popolazione di cellule chiare con LGR5
, ASCL2
, e OLFM4
espressione a livello della giunzione delle ghiandole gastriche e metaplastiche, che ricorda GI-tipo IM (Fig 4F, 4G, 4H, 4I e 4J).
+ cellule vengono identificate come cellule staminali intestinali come multipotenti nei topi [10] ed esistono nel gastrico umano [11], è plausibile pensare che IM potrebbe sviluppare da questa popolazione di cellule. Tuttavia, rimane la possibilità che un'altra popolazione di cellule staminali potrebbe essere alla base di questo processo. Ad esempio, SOX2
+ cellule sono stati anche identificati come cellule staminali distinte gastrici, e la popolazione di cellule etichetta esclusivi a quelli con LGR5
espressione. [21] Transdifferenziazione può anche dare origine alle cellule metaplastiche. Spasmolyitc polipeptide che esprimono metaplasia-in che tipo ghiandole pilorica appaiono in ossintiche mucosa-derivano da cellule principali mature, [22], piuttosto che LGR5
esprimente cellule. [23] In effetti, transgenici CDX1
o CDX2
risultati di espressione in parietale derivato dalle cellule sviluppo IM in topi transgenici. [24] Pertanto, rimane elusiva se IM è una conseguenza della intestinale riprogrammazione di cellule staminali o la transdifferenziazione di cellule con acquisito ISC-like proprietà. [12, 25]
e EphB2
con l'ulteriore intestinalization della mucosa gastrica. Insieme con le crescenti livelli CDX2
che inducono la differenziazione intestinale e fenotipo, questi modelli di espressione suggeriscono una conversione della popolazione complessiva di cellule staminali verso un fenotipo delle cellule staminali più intestinali-like. Inoltre, la correlazione inversa inaspettata di BMI1
e LRIG1
con IM ha bisogno di ulteriori studi per confermare questo risultato e per chiarire le sue implicazioni cliniche.
. pylori
eradicazione ha il potenziale per prevenire i tumori gastrici, [29] e potrebbe attenuare la progressione delle lesioni gastriche pre-cancerose, come IM. [30, 31] Tuttavia, una volta stabilito, sembra che H
. pylori
eradicazione non può impedire completamente il cancro gastrico. [6] In effetti, circa il 80% dei soggetti con IM non ha mostrato alcun cambiamento o la progressione di IM dopo il trattamento con antibiotici. [31] Inoltre, una meta-analisi ha concluso che H
. pylori
eradicazione non ha alcun effetto sulla IM gastrica. [32] Questa irreversibilità IM può essere in parte spiegato dal mantenimento di CDX2
espressione attraverso un ciclo di autoregolazione che è indipendente dal grilletto iniziale, sostenendo il fenotipo intestinale. [33] Si ha inoltre rivelato che LGR5
+ cellule alla base delle ghiandole metaplastiche costantemente esprimere altri marcatori ISC, indicativi di un fenotipo delle cellule staminali intestinali-like. Noi crediamo che questa popolazione di cellule staminali stabile può fornire una spiegazione aggiuntiva per la natura di lunga durata di IM. Inoltre, le strategie terapeutiche sufficiente per indirizzare specificamente il LGR5 popolazione
+ cellule in combinazione con H
. pylori
eradicazione potrebbe potenzialmente minare la stabilità di IM, in tal modo accelerare il ripristino della normale mucosa gastrica.
con l'espressione marcatore ISC. Questo risultato è coerente con un precedente Da segnalare che LGR5
espressione era significativamente elevati nei BE, e che la popolazione è l'origine delle cellule-di-probabile per questo metaplasia. [13] Più recentemente, LGR5
+ cellule sono state identificate nel mezzo delle ghiandole di Barrett l'ibridazione in situ e si suggerisce di agire come le cellule staminali, in quanto presentano sia la differenziazione gastrica e intestinale. [34] Abbiamo anche trovato LGR5
+ cellule presso le aree tra ghiandole gastriche e metaplastiche in BE, che corrispondono alla metà delle ghiandole di Barrett. Inoltre, la presenza di marcatori ISC nel LGR5
+ popolazione cellulare supporta ulteriormente il loro potenziale di differenziazione intestinale. Così, sulla base di questi risultati, sembra ragionevole suggerire che LGR5
+ cellule in probabilmente funzione di cellule staminali che sostengono il fenotipo intestinale di BE, simile a quello visto in IM.
, forte espressione viene rilevata in IM. [35, 36] Inoltre, i topi transgenici hanno dimostrato che CDX2
espressione da solo è sufficiente per indurre IM [37 , 38], suggerendo che CDX2
può anche favorire lo sviluppo della popolazione di cellule staminali con un fenotipo intestinale. Così, abbiamo esaminato se CDX2
è direttamente coinvolto nella espressione dei marcatori ISC: LGR5
, ASCL2
, OLFM4
, e EphB2
(S5 Fig). Tuttavia, gli esperimenti di trasfezione rivelato che solo il EphB2
è stato marginalmente influenzata da CDX2
espressione. Certo, questi dati devono essere interpretati con cautela in quanto sono stati ottenuti in linee cellulari GC con differenti proprietà biologiche da quella delle cellule staminali epiteliali gastriche o intestinali non tumorali. Tuttavia, sembra probabile che ulteriori fattori di segnalazione con CDX2 Quali sono essenziali per indurre l'espressione marcatore ISC.
+ cellule in gastrica IM e BE marcatori coesprimere ISC, che è indicativa di una popolazione di cellule staminali intestinali-like che sostituisce i preesistenti cellule staminali gastriche. Questa scoperta sembra fornire un indizio importante per capire il meccanismo alla base della persistenza di IM dopo H
. pylori
eradicazione. Inoltre, i nostri risultati suggeriscono LGR5
+ cellule sono un bersaglio promettente per invertire IM, e potenzialmente prevenire la loro progressione in tumori gastrici.
Informazioni di supporto
S1 Fig. Correlazione di cellule staminali intestinali (ISC) marcatori con livelli CDX2
nei tessuti gastrici non tumorali.
Nessuna correlazione è trovato tra CDX2
espressione e alcuni ISC marcatori come LGR5
(r 2 = 0,01, p
= 0.59), ASCL2
(r 2 = 0,01, p
= 0.59) , PROM1
(r 2 = 0,11, p
= 0,08), LRIG1
(r 2 = 0,06, p
= 0,21) e DCLK1
(r 2 = 0,09, p
= 0,11)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s001
( PPTX)
S2 Fig. Visualizzazione di marcatori di cellule staminali intestinali di RNA ibridazione in situ (ISH).
RNA ISH effettuata su un fissati in formalina e inclusi in paraffina esemplare di piccolo intestino. (A, B) Un gruppo di LGR5
+ le cellule staminali sono identificati in fondo a tutte le cripte, mescolati con le cellule Paneth. Altri marcatori di cellule staminali intestinali come ASCL2
(C, D), EphB2
(E, F), e OLFM4
(G, H) si trovano anche a essere limitato alle basi cripta. Ingrandimento: A, C, E, G × 100; B, D, F, H × 400
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s002
(PPTX)
S3 Fig. Espressioni di marcatori di cellule staminali intestinali nel tipo di GI IM.
Rimanenti ghiandole gastriche si trovano frequentemente nelle zone basali di tipo GI IM (A e B). RNA ISH mostra che LGR5
(C) e EphB2
(D) le espressioni sono localizzate al di sopra delle ghiandole gastriche. È interessante notare che, OLFM4
(E) espressione si osserva nelle ghiandole gastriche e anche se la sua intensità è molto più debole rispetto a quella nelle ghiandole metaplastiche. Quando queste ghiandole gastriche scompaiono come si sviluppa IM (A e F), la distribuzione di tutti i LGR5
(G), EphB2
(H) e OLFM4
(I) è strettamente limitata alle aree basali. Le frecce indicano le rimanenti ghiandole gastriche. Ingrandimento: A × 40; B, C, D, E, F, G, H, I × 200
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s003
(PPTX)
S4 Fig. marcatori di cellule staminali intestinali in metaplasia intestinale (IM) del corpus gastrica.
(A e B) Un piccolo focolaio di IM nel mezzo delle ghiandole fundica, indicati dalle frecce, mostra lo stesso pattern di espressione di
(D), e OLFM4
(e), come l'IM di antro. Ingrandimenti: A × 100; B, C, D, E × 200
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s004
(PPTX)
S5 Fig. Effetto di CDX2
sull'espressione delle cellule staminali intestinali (ISC) marcatori in cancro gastrico (GC) linee cellulari
. Trasfezione di CDX2
in quattro linee di cellule GC, MKN74 (A ), MKN28 (B), SNU484 (C) e SNU668 (D) aumenta in modo significativo la quantità di mRNA di CDX2
(**, p
< 0,01; ***, p
< 0.005). Il EphB2
espressione è solo leggermente migliorata mediante l'espressione di CDX2
in tre delle quattro linee di cellule GC (***, p
< 0.005). Nessuna differenza si trova nei livelli di LGR5
, ASCL2
, e OLFM4
su CDX2