gástrica metaplasia intestinal (IM) é uma lesão pré-neoplásica altamente prevalente; No entanto, os mecanismos moleculares que regulam o seu desenvolvimento permanecem obscuros. Nós mostramos anteriormente que uma população de células que expressam o marcador de células estaminais intestinal (ISC) LGR5 Citation:. Jang BG, Lee BL, Kim WH (2015) intestinal Stem marcadores de células na metaplasia intestinal de estômago eo esôfago de Barrett. PLoS ONE 10 (5): e0127300. doi: 10.1371 /journal.pone.0127300 Editor do Academic: Anthony Federação das Índias Ocidentais Lo, Queen Mary Hospital, HONG KONG Recebido: 08 de janeiro de 2015; Aceito: 13 de abril de 2015; Publicado em: 21 de maio de 2015 Direitos de autor: © 2015 Jang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação Financiamento: Esta pesquisa foi apoiada por uma bolsa da Coréia Saúde Tecnologia R & D Projeto através do Korea Institute Indústria Saúde para o Desenvolvimento (KHIDI), financiado pelo Ministério da. Health & Bem-estar, República da Coreia (número de concessão: HI14C1277). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes Introdução pré-neoplásicas metaplasia intestinal (GI) está associado com um aumento do risco de carcinoma gástrico e apresenta em cerca de um-quarto de indivíduos em todo o mundo. [1] frequentemente IM resulta de gastrite atrófica crónica após a infecção com Helicobacter pylori Porque IM é um precursor essencial na carcinogénese gástrica, o potencial para reverter essas lesões é de grande interesse. [5] investigações anteriores relataram que a erradicação da H a descoberta de células estaminais da mucosa gástrica normais coincidiu com a identificação do gene alvo Wnt LGR5 esófago de Barrett (BE) é uma conversão metaplásico para intestinal epitélio colunar e está associada com um risco aumentado de adenocarcinoma, semelhante ao observado com IM gástrico. [12] Nomeadamente, humanos sejam lesões apresentam uma regulação positiva da LGR5 Vários marcadores moleculares ISC foram identificados, além de LGR5 Materiais e Métodos assuntos formalina -Fixed e embebidos em parafina (FFPE) amostras gástricas com ou sem metaplasia intestinal (MI) foram coletadas de cinco pacientes que foram submetidos à dissecção submucosa endoscópica no Hospital da Universidade Nacional de Seul (SNUH) de 2008 a 2010. lesões IM foram categorizados em gástrica e (I) subtipos intestinais misto (GI) e unicamente intestinais (também conhecido como tipos incompletos e completos, respectivamente). [19] As amostras de esófago de Barrett, foram isolados a partir de dois pacientes com adenocarcinoma da junção gastro-esofágico, e um normal pequeno espécime intestino foi obtido a partir de um paciente com cancro do cólon. tecidos gástricos não-tumorais fresco congelado estavam disponíveis a partir de 28 pacientes com câncer gástrico que tinham sido submetidos a gastrectomia cirúrgica 2001-2005 na SNUH. Declaração ética Todos os espécimes humanos foram obtidos através de ressecção cirúrgica curativa . Este estudo retrospectivo foi realizado utilizando amostras armazenadas após o diagnóstico patológico. As amostras foram anónimos antes do estudo, portanto, o consentimento escrito não era necessária. O desenho do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do Hospital da Universidade Nacional de Seul sob a condição de anonimização (referência: H-1209-037-424). In situ hibridação para LGR5 O RNA total foi extraído de parafina-embedded secções de tecido com um kit RNeasy FFPE (Qiagen, Valencia, CA, EUA) como previamente descrito [20]. transcritos de modo inverso ADNc foi preparado a partir de ARN total 1-2μg com os iniciadores hexaméricos aleatórios e o GoScript sistema de transcrição reversa (Promega, Madison , WI, EUA). PCR (qRT-PCR) As reacções em tempo real quantitativos foram realizados utilizando Premix EX Taq (Takara Bio, Shiga, Japão) de acordo com as recomendações do fabricante, e os dados analisados usando software Sequence Detection System (Versão 1.4, Applied Biosystems). Foram utilizados os seguintes ensaios de expressão gênica TaqMan: Hs00173664_m1 ( LGR5 CDX2 cDNA (pCMV6-CDX2) foi comprado de OriGene (Rockville, MD, EUA). células de cancro gástrico foram semeadas a 1 x 10 6 células /poço em placa de 6 cavidades e foram transfectadas com 2,5 ug de cADN ou vector de controlo vazio utilizando Lipofectamina 2000 reagente de transfecção (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) de acordo com o fabricante do instruções. As células foram submetidas a análise de qRT-PCR, aproximadamente, 24 h após a transfecção. As análises estatísticas foram realizadas no Prism 5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, EUA). Correlações entre as expressões de marcadores de células tronco intestinais e CDX2 1. marcadores ISC se correlacionam com níveis Cdx2 na mucosa gástrica Nós previamente relatados sobre o aumento relativo de LGR5 Para confirmar a associação positiva da OLFM4 3. LGR5 Para determinar se uma relação direta existente entre LGR5 Comprar e ISC marcadores no IM, examinamos se a sua co-expressão de ARN por hibridação in situ. A expressão de LGR5 4. marcadores do ISC são expressos em lesões esôfago de Barrett A seguir, procuraram determinar se os marcadores do ISC foram também expressas no esôfago de Barrett (BE). Para isso, dois espécimes de adenocarcinomas surgem no fundo de BE foram avaliadas para a expressão de CDX2 a região do istmo /colo da unidade gástrica foi previamente pensado para abranger o nicho de células estaminais no qual ocorre IM, e tem sido sugerido que a progressão metaplásicas a partir de uma única unidade clonal gástrica ocorre através da expansão clonal e fissão cripta. [8], porque LGR5 Vários esforços têm procurado classificar IM de tipos de lesões no estômago. Matuskura et ai. sugerido um sistema de classificação com base na presença de pequenas enzimas digestivas do intestino; definida como tipo completo e incompleto IM, [26] enquanto Jass e Filipe introduziu três séries do IM com base na morfologia e coloração mucina histoquímica. [27] Mais recentemente, uma nova classificação foi proposta por Tatematu et al., Em que MI pode ser dividido em gástrica e intestinal misto (GI) e os tipos unicamente intestinais (I). [19] Em tipo GI IM , marcadores fenotípicos gástricos e intestinais aparecem em ambos os níveis celulares glandulares e, assim, tem sido sugerido que o IM pode ser causada pela intestinalization gradual de células-tronco do GI-a I-tipo. [28] Aqui, observou-se aumento gradual dos marcadores ISC OLFM4 H esôfago de Barrett (BE) é uma lesão pré-cancerosa que compartilha várias características morfológicas e moleculares com IM gástrica, principalmente, uma vez que é uma conversão metaplásico de epitélio colunar intestinal resultante da inflamação crónica. Acreditamos que o presente estudo caracteriza outra semelhança entre estas duas lesões na presença de LGR5 CDX2 é um factor de transcrição mestre para a expressão de marcadores de diferenciação intestinal, e pensa-se que estão na base do desenvolvimento de BE. Enquanto mucosa gástrica normal não expressam CDX2 Em resumo, nós determinamos que LGR5 células
aumenta notavelmente em IM. Neste estudo, foram investigados as características moleculares destes LGR5
+ células IM examinando o perfil de vários marcadores ISC expressão. Notavelmente, descobrimos que ISC marcadores, incluindo OLFM4
e EPHB2
-são positivamente associado com o CDX2
expressão em tecidos gástricos não-tumorais. Esta constatação foi confirmada em lesões do estômago com ou sem metaplasia, que demonstrou que OLFM4 e expressão EPHB2 aumentou gradualmente com a progressão metaplásico. Além disso, o ARN de hibridação in situ revelou que LGR5
+ células co-expressar vários marcadores ISC e permaneceu confinado à base de glândulas metaplásicas, que lembra ao de criptas intestinais normais, ao passo que aqueles em glândulas antrais normais expressos nenhum destes marcadores. Além disso, um grande número de células que expressam o marcador ISC foram distribuídos de forma difusa em adenomas gástricos, sugerindo que estes marcadores podem facilitar a tumorigénese gástrico. Além disso, o esófago de Barrett (BE) -que é histologicamente semelhante a metaplasia intestinal-exibiram uma distribuição semelhante de marcadores ISC, indicando a presença de uma população de células estaminais com potencial de diferenciação intestinal. Em conclusão, nós identificamos que LGR5
+ células IM gástrica e ser marcadores ISC co-expressar e apresentar o mesmo perfil de expressão como os encontrados em criptas intestinais normais. Tomados em conjunto, estes resultados implicam uma população de células-tronco intestinal-como na patogênese da IM, e fornecer uma base importante para a compreensão do desenvolvimento e manutenção desta doença
, que pode então avançar para displasia epitelial gástrica ou carcinoma. [2] Uma variedade de alterações genéticas e ambientais têm sido implicados na patogénese de IM humano. [3] Além disso, a longo prazo induzida por expressão IM tem sido CDX2 mostrado para levar a câncer gástrico em ratos transgénicos, indicando que se IM desempenha um papel importante na gênese do carcinoma gástrico. [4]
. pylori
é suficiente para reverter IM, mas outros descobriram que uma proporção significativa de pacientes ainda presente com IM, mesmo após a erradicação eficaz. [5] IM é acreditado para ser o "ponto de não retorno" no histológica cascata de gastrite crônica ao adenocarcinoma; [6], assim, os esforços para compreender os mecanismos moleculares que regulam o estabelecimento e manutenção de IM são cruciais para o desenvolvimento de estratégias para interromper carcinogênese gástrica. Por exemplo, CDX2 autoregulação é sugerido ter um impacto importante na estabilidade de lesões IM. [7] Enquanto criptas IM no estômago humano são clonais e conter as células estaminais multipotentes, [8] que permanece pouco esclarecido se as células estaminais gástricas nativas são a fonte inicial de metaplasia ou se eles só servem para manter lesões estabelecidas.
como um marcador de células-tronco em o epitélio intestinal. [9] Um estudo de rastreamento de linhagem revelou mais tarde que LGR5
+ células são as células estaminais multipotentes responsáveis pela renovação do epitélio gástrico em ratos. [10] o nosso grupo demonstrou anteriormente que um pequeno número de LGR5
+ células também residem na parte inferior das glândulas antrais humanos e aumentar dramaticamente nas lesões MI. [11] Estes resultados nos levou a especular que LGR5 o mundo Mai ser um marcador para as células-tronco intestinais (ISC) envolvidas na manutenção do IM.
expressão quando comparado com o epitélio escamoso normal, e é sugestivo da presença de um LGR5
+ células-tronco em BE. [13]
, incluindo PROM1
[14], BMI1
[15], LRIG1
[16], e ASCL2
, o qual foi identificado como um factor de transcrição para controlar o destino de células estaminais intestinal [17]. Além disso, OLFM4
[17] e EPHB2
[18] são também altamente expresso no ISC. Neste estudo, o objetivo foi descobrir marcadores ISC adicionais envolvidos na gênese e manutenção do IM gástrica e BE, e examinar sua co-localização com a LGR5
+ células de RNA de hibridação in situ para revelar ainda mais a molecular características de LGR5
+ células no IM com relação ao fenótipo de células-tronco intestinal-like.
RNA hibridização in situ
, ASCL2
, OLFM4
, e EPHB2
foi realizado com o kit de ensaio RNAscope FFPE (Diagnostics Advanced Cell, Inc. , Hayward, CA, EUA) como descrito anteriormente [11]. mancha positiva foi definida como a presença de pontos castanhos puntiformes no núcleo e /ou citoplasma. A ubiquitina C e bacteriana dapB
genes serviu como controlos positivos e negativos, respectivamente.
extração de RNA e quantitativa PCR em tempo real
), Hs00362096_m1 ( EPHB2
), Hs00270888_s1 ( ASCL2
), Hs00197437_m1 ( OLFM4
), Hs01009250_m1 ( PROM1
), Hs00394267_m1 ( LRIG1
), Hs00995536_m1 ( BMI1
), Hs00178027_m1 ( DCLK1
), Hs010780810_m1 ( CDX2
), Hs00212584_m1 ( CLDN18
) e Hs0275899_g1 ( GAPDH
). GAPDH
serviu como controle endógeno.
A transfecção de CDX2
A análise estatística
foi avaliada por análise de regressão linear. diferenças médias entre os grupos de amostras gástricas FFPE foram avaliadas por ANOVA one-way. comparações entre os grupos após a transfecção de CDX2
em linhas celulares de cancro gástrico foram realizadas utilizando Student t
-Testes. Os resultados foram considerados significativos quando p Art < 0,05.
Resultados
+ células em lesões de IM do estômago humano. [11] Isto nos levou a a hipótese de que estes LGR5
+ células podem atuar como células-tronco auto-renovação para auxiliar na manutenção e propagação de epitélio metaplásico na mucosa gástrica. Assim, buscou-se identificar marcadores adicionais ISC que se correlacionaram com CDX2
expressão em IM. Para isso, foram medidos os níveis de expressão de CDX2 Comprar e oito ISC markers- LGR5
, ASCL2
, OLFM4
,
, DCLK1
, LRIG1
, e BMI1
-em tecido gástrico normal. Os tecidos examinados apresentaram uma ampla gama de níveis Cdx2
, representando os vários graus de IM, uma vez que CDX2
expressão é positivamente correlacionada com a progressão IM (Fig 1A). Três marcadores do ISC foram correlacionadas com CDX2
expressão: OLFM4
, EPHB2
, e BMI1
. Em particular, OLFM4
( p Art < 0,0001, r 2 = 0,56) (Fig 1B) e EPHB2
( p
< 0,0001, r 2 = 0,52) (Fig 1C) mostrou uma forte correlação positiva com CDX2
, enquanto que BMI1
foi inversamente correlacionada ( p
= 0,0002, r 2 = 0,42) (Fig 1D). Nenhuma associação significativa com o CDX2
expressão foi identificada com os outros cinco marcadores ISC (S1 FIG).
2. ISC expressão do marcador se correlaciona com IM progressão
e EPHB2
com IM, foram selecionados quatro tipos de tecidos gástricos histologicamente-distinta; mucosa antral normal sem IM (n = 4), gastrite crónica activa, sem IM (n = 3), gástrico e tipo intestinal mista (tipo GI) IM (n = 6), e do tipo exclusivamente intestinal (digito) IM (n = 5) (Fig 2A). Claudina-18 é a proteína de junção apertado mais altamente expresso no estômago. Como esperado, as nossas análises revelaram que claudin-18 expressão diminuiu com o aumento dos graus de IM ( p Art < 0,0001) (Figura 2B), enquanto CDX2
expressão aumentada ( p
< 0,0001) (Figura 2C). Descobrimos também que OLFM4
e níveis EPHB2
aumentou consistentemente com cada lesão posterior, confirmando que estes marcadores estão intimamente relacionados com a progressão IM ( p
= 0,008 e 0,001, respectivamente; Figura 2D e 2E). Em contraste, BMI1
e LRIG1
expressão mostrou uma tendência para diminuir com a progressão IM. ( p
= 0,002 e 0,0006, respectivamente; Fig 2F e 2G)
+ células em metaplasia intestinal colocalize com outros marcadores do ISC
, ASCL2
, EPHB2
, e OLFM4
foram examinados pela primeira vez em uma seção do intestino delgado humano normal para validar esta técnica, e foram encontrados para localizar especificamente a células dentro do nicho de células estaminais de criptas intestinais como esperado (Fig S2). Desde LGR5
+ células em criptas intestinais normais também expressam marcadores do ISC, que teorizou que LGR5
+ células IM pode também apresentam um padrão de expressão semelhante. Assim, repetiu-se o procedimento em secções consecutivas de espécimes submucosa dissecção endoscópica (n = 5), cada uma das quais continha vários focos de GI-I ou do tipo primário entre o tecido não-tumoral. Um pequeno número de LGR5
+ células na base das glândulas antrais normais foram desprovido de expressão do marcador ISC (Fig 3A), enquanto aqueles na I-tipo IM mostrou expressa todos os três marcadores (Fig 3B) . Além disso, as lesões GI-IM tipo exibido o mesmo perfil de expressão global excepto que a expressão ISC marcador estava localizado acima das glândulas gástricas restantes, em vez de restrito às áreas basais (S3 FIG). Este padrão de expressão foi observado de forma consistente em todas as amostras. Estes resultados indicam que LGR5
+ células IM em diferentes daqueles em antro normal na expressão de marcadores ISC que são geralmente restrita às células dentro das criptas intestinais. Curiosamente, IM derivada das glândulas fúndica, onde LGR5
+ células não estão normalmente presentes, produziu os mesmos resultados (S4 FIG). Assim, parece provável que a população de LGR5
+ células IM não resulta da proliferação de pré-existente LGR5
+ células, mas é sim uma emergência de LGR5
+ células com potencial de diferenciação adquirida, sugerindo que uma população de células-tronco intestinal-como está estabelecido no IM. Além disso, os adenomas gástricas (n = 5) também expressa níveis elevados de marcadores de ISC ao longo das lesões, ao invés de limitar-se às criptas glandulares (Fig 3C). Como mostrado na figura 3, esta acumulação de células que expressam o marcador ISC através da metaplasia a sequência displasia é implicativa da participação das células tipo-tronco intestinais em tumorigénese gástrica e estudos adicionais para investigar a ligação entre os marcadores de células estaminais intestinais e o desenvolvimento do tumor gástrico são certamente garantido.
, OLFM4
, EPHB2
, e PROM1
por análise de qRT-PCR (Fig 4A). Significativamente, ambos ser adenocarcinomas e expressaram níveis mais elevados de todos os quatro marcadores ISC quando comparada com a do epitélio escamoso normal (Figura 4B, 4C, 4D e 4E). Enquanto LGR5
e ASCL2
não mostraram alterações significativas a partir da análise de RT-PCR, provavelmente devido ao baixo número de cópias de transcrições, RNA de hibridação in situ mostrou uma população de células claras com LGR5
, ASCL2
, e expressão OLFM4
na junção das glândulas gástricas e metaplásicas, uma reminiscência do tipo GI IM (Fig 4F, 4G, 4H, 4I e 4J).
Discussão
+ células são identificadas como células-tronco intestinais-like multipotentes em ratos [10] e existem no antro gástrico humano [11], é plausível pensar que IM pode desenvolver a partir desta população de células. No entanto, continua a haver a possibilidade de que uma outra população de células estaminais podem estar subjacentes este processo. Por exemplo, SOX2
+ células também foram identificadas como células distintas gástricas-tronco, e população de células rótulo exclusivo para aqueles com expressão LGR5
. [21] Transdiferenciação pode também dar origem para células metaplásicas. Spasmolyitc polipeptídeo expressando metaplasia-nos quais as glândulas tipo pilóricas aparecer em oxíntica mucosa-surgem de células principais maduros, [22] em vez de LGR5
-expressing células. [23] De fato, transgênico CDX1
ou Cdx2
resultados de expressão no desenvolvimento IM derivadas de células parietais em camundongos transgênicos [24]. por isso, permanece indefinida se IM é uma consequência da reprogramação de células-tronco intestinal ou a transdiferenciação de células com adquiriu ISC-like propriedades. [12, 25]
e EPHB2
com mais intestinalization da mucosa gástrica. Junto com as crescentes níveis CDX2
que induzem a diferenciação intestinal e fenótipo, esses padrões de expressão sugere uma conversão da população total de células-tronco em direção a um fenótipo de células-tronco mais intestinal-like. Além disso, a correlação inversa inesperada de BMI1
e LRIG1
com IM necessita de mais estudos para confirmar este resultado e clarificar as suas implicações clínicas.
. erradicação pylori
tem o potencial para prevenir cancros gástricos, [29] e pode atenuar a progressão de lesões gástricas pré-cancerosas, tais como IM. [30, 31] No entanto, uma vez estabelecida, verifica-se que H
. pylori
erradicação não podem impedir completamente o cancro gástrico. [6] De facto, aproximadamente 80% dos pacientes com MI não mostrou nenhuma mudança ou progressão de IM após o tratamento com antibióticos. [31] Além disso, uma meta-análise concluiu que H
. erradicação pylori
não tem efeito sobre IM gástrico. [32] Esta irreversibilidade do IM pode ser parcialmente explicado pela manutenção do expressão CDX2
através de um circuito de auto-regulação que seja independente do gatilho inicial, sustentando o fenótipo intestinal [33]. Nós revelou ainda que LGR5
+ células na base das glândulas metaplásicas consistentemente expressar outros marcadores do ISC, indicativos de um fenótipo de células-tronco intestinal-like. Acreditamos que esta população de células estaminais estável pode fornecer uma explicação adicional para a natureza duradoura do IM. Além disso, estratégias terapêuticas suficientes para visar especificamente a população
+ célula LGR5 combinada com H
. erradicação pylori
poderia minar a estabilidade do IM, assim, acelerar o restabelecimento da mucosa gástrica normal.
+ células com expressão do marcador ISC. Este resultado é consistente com uma exibição relatório anterior que LGR5
expressão foi significativamente elevado em BE, e que a população é a origem das células-de-provável para esta metaplasia. [13] Mais recentemente, LGR5
+ células foram identificadas no meio de glândulas de Barrett, por hibridação in situ e são sugeridos para actuar como células estaminais, que exibam ambas diferenciação gástrico e intestinal. [34] também descobrimos LGR5
+ células com as áreas entre as glândulas gástricas e metaplásicas em EB, que correspondem ao ponto médio das glândulas de Barrett. Além disso, a presença de marcadores ISC no LGR5
+ população celular ainda suporta o seu potencial de diferenciação intestinal. Assim, com base nestes resultados, parece razoável sugerir que LGR5
+ células em BE função provável que as células-tronco que sustentam o fenótipo intestinal de BE, semelhante ao observado em IM.
, forte expressão é detectado no IM. [35, 36] Além disso, os ratos transgénicos demonstraram que CDX2
expressão por si só é suficiente para induzir IM [37 , 38], sugerindo que CDX2
também pode facilitar o desenvolvimento da população de células-tronco com um fenótipo intestinal. Assim, examinamos se CDX2
está diretamente envolvida na expressão dos marcadores do ISC: LGR5
, ASCL2
, OLFM4
, e EPHB2
(S5 Fig). No entanto, as experiências de transfecção revelou que apenas EPHB2
foi marginalmente afetada pela expressão CDX2
. Certamente, estes dados devem ser interpretados com cautela, pois foram obtidos em linhas de células de GC com diferentes propriedades biológicas do que de células-tronco epiteliais ou intestinais gástrico não-tumorais. No entanto, parece provável que os fatores adicionais de sinalização juntamente com CDX2
são essenciais para induzir a expressão do marcador ISC.
+ em IM gástrica e ser marcadores co-expressar ISC, o que é indicativo de uma população de células estaminais intestinal semelhante que substitui as células estaminais gástricas pré-existentes. Esta constatação parece fornecer uma pista importante para a compreensão do mecanismo subjacente a persistência de IM depois de H
. pylori
erradicação. Além disso, os nossos resultados sugerem LGR5
+ células são um alvo promissor para IM reverso, e, potencialmente, evitar a sua progressão para câncer gástrico.
Informações de Apoio
S1 Fig. Correlação de células-tronco intestinal (ISC) marcadores com níveis CDX2
em tecidos gástricos não-tumorais.
Nenhuma correlação é encontrada entre marcadores CDX2
expressão e alguns ISC, como LGR5
(r 2 = 0,01, p
= 0,59), ASCL2
(r 2 = 0,01, p
= 0,59) , PROM1
(r 2 = 0,11, p
= 0,08), LRIG1
(r 2 = 0,06, p
= 0,21) e DCLK1
(r 2 = 0,09, p
= 0,11)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s001
( PPTX)
S2 Fig. Visualização de marcadores de células tronco intestinais por RNA de hibridação in situ (ISH).
RNA ISH realizada em um fixados em formalina e embebidos em parafina espécime de intestino delgado. (A, B) Um grupo de LGR5
+ células-tronco são identificadas na parte inferior de todas as criptas, misturadas com células de Paneth. Outros marcadores de células tronco intestinais, como ASCL2
(C, D), EPHB2
(E, F), e OLFM4
(G, H) também são encontrados para limitar-se às bases da cripta. Ampliação: A, C, E, G × 100; B, D, F, H × 400
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s002
(PPTX)
S3 Fig. glândulas gástricas restantes expressões de marcadores de células tronco intestinais em tipo GI IM. Quais são frequentemente encontrados nas áreas basais do tipo GI IM (A e B). RNA ISH mostra que LGR5
(C) e EPHB2
(D) expressões são localizadas acima das glândulas gástricas. Curiosamente, OLFM4
(E) a expressão é observada nas glândulas gástricas, assim, embora a sua intensidade é muito mais fraca do que nas glândulas metaplásicas. Quando essas glândulas gástricas desaparecer à medida que se desenvolve IM (A e F), a distribuição de todos os LGR5
(G), EPHB2
(H) e OLFM4
(I) é estritamente confinada às áreas basais. As setas indicam as glândulas gástricas restantes. Ampliação: A × 40; B, C, D, E, F, G, H, I × 200
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s003
(PPTX)
S4 Fig. marcadores de células tronco intestinais em metaplasia intestinal (MI) do corpo gástrico.
(A e B) Um pequeno foco de IM no meio de glândulas fúndica, indicadas pelas setas, mostra os mesmos padrões de expressão de
(D), e OLFM4
(e) como o IM de antro. Ampliações: A × 100; B, C, D, E × 200
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s004
(PPTX)
S5 Fig. Efeito da CDX2
na expressão de células-tronco intestinal (ISC) marcadores em câncer gástrico (GC) linhas celulares.
Transfecção de CDX2
em quatro linhas de células de GC, MKN74 (A ), MKN28 (B), SNU484 (C) e SNU668 (D) aumenta significativamente a quantidade de ARNm de CDX2
(**, P
< 0,01; ***, p Art < 0,005). O EPHB2
expressão é apenas marginalmente reforçada pela expressão de CDX2
em três dos quatro linhas de células GC (***, p Art < 0,005). Nenhuma diferença é encontrada nos níveis de LGR5
, ASCL2
, e OLFM4
sobre CDX2