Mahalaukun suoliston metaplasiaa (IM) on erittäin yleinen preneoplastista vauriota; kuitenkin, molekyylimekanismeja säätelevät sen kehittämistä edelleen epäselvät. Olemme aiemmin osoittaneet, että populaatio ilmentävien solujen suolen kantasolu (ISC) merkki LGR5 Citation: Jang BG, Lee BL, Kim WH (2015) suoliston Stem Cell tussit suoliston Metaplasia vatsakirurgian ja Barrettin ruokatorvi. PLoS ONE 10 (5): e0127300. doi: 10,1371 /journal.pone.0127300 Academic Editor: Anthony W. I. Katso, Queen Mary Hospital, HONGKONG vastaanotettu: 8. tammikuuta 2015 Hyväksytty: 13 huhtikuu 2015; Julkaistu: toukokuu 21, 2015 Copyright: © 2015 Jang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja. Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat myöntämisestä Korea Health Technology R &D Project läpi Korea Health Industry Development Institute (KHIDI), rahoittama ministeriön Health & Welfare, Korean tasavalta (lupanumeroon: HI14C1277). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen. Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole. esineoplastiset suoliston metaplasiaa (IM) liittyy lisääntynyt riski mahalaukun syöpä ja esittää noin neljännes yksilöiden maailmassa. [1] IM johtuu usein kroonisesta atrofisesta gastriitista infektion jälkeen Helicobacter pylori Koska IM on kriittinen prekursori mahasyövän, mahdollisuudet kääntää nämä muutokset on erittäin kiinnostava. [5] Aiemmat tutkimukset ovat raportoineet, että hävittäminen H löytö normaali mahan limakalvon kantasolut samaan aikaan tunnistamisen Wnt kohdegeenin LGR5 Barrettin ruokatorvi (BE) on metaplastiset muuntaminen suoliston lieriöepiteeliin ja liittyy lisääntynyt riski adenokarsinooma, samankaltainen kuin mahalaukun IM. [12] Erityisesti, ihmisen BE vauriot näytteille säätelyä LGR5 Useat molekyyli- ISC merkkiaineita on havaittu lisäksi LGR5 Materiaalit ja menetelmät Oppiaineet Formaliini -Kiinteä ja parafinoidut (FFPE) mahalaukun näytteiden kanssa tai ilman suolen metaplasiaa (IM) kerättiin viisi potilasta, joille tehtiin endoskooppinen limakalvon alaista leikkely Seoul National University Hospital (SNUH) vuodesta 2008 vuoteen 2010. IM iholeesiot luokiteltu mahan-ja -intestinal sekoitettu (GI) ja ainoastaan suolen (I) alatyyppejä (tunnetaan myös epätäydellisiä ja täydellinen tyypit, vastaavasti). [19] Näytteet Barrettin ruokatorvi eristettiin kahdelta potilaalta adenokarsinooma ruokatorven risteyksessä, ja normaali ohutsuolen näyte oli saatu potilaalta, jolla on paksusuolen syöpä. Pakastemarjat ei-tuumori- mahalaukun kudokset oli saatavilla 28 mahasyöpäpotilaista joille oli tehty kirurginen gastrectomy 2001-2005 klo SNUH. Kaikki ihmisen näytteet saatiin läpi parantava kirurginen resektio . Tämä retrospektiivinen tutkimus tehtiin käyttämällä tallennettuja näytteitä jälkeen patologisen diagnoosin. Näytteet nimettömiksi ennen tutkimusta, joten kirjallinen suostumus ei ollut tarpeen. Tutkimuksen suunnittelu hyväksyi Institutional Review Board Seoul National University Hospital olosuhteessa nimettömäksi (viite: H-1209-037-424). In situ hybridisaatio LGR5 Yhteensä RNA eristettiin parafinoidut kudosleikkeiden RNeasy FFPE Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA), kuten aiemmin on kuvattu. [20] käänteistranskriboitua cDNA valmistettiin 1-2μg kokonais-RNA: satunnainen heksameerialukkeiden ja GoScript käänteistranskriptio-järjestelmän (Promega, Madison , WI, USA). Kvantitatiivisen tosiaikaisen PCR (qRT-PCR) suoritettiin käyttäen Esiseos EX Taq (Takara Bio, Shiga, Japani) mukaan valmistajan suositusten ja tiedot analysoidaan Sequence Detection System (versio 1.4, Applied Biosystems). Seuraavat TaqMan geeniekspression määrityksiä käytettiin: Hs00173664_m1 ( LGR5 CDX2 cDNA (pCMV6-CDX2) hankittiin Origene (Rockville, MD, USA). Mahasyöpä solut ympättiin 1 x 10 6 solua /kuoppa 6-kuoppaiselle levylle ja transfektoitiin 2,5 ug cDNA: n tai tyhjän kontrollivektorin käyttäen Lipofectamine 2000 transfektioreagenssia (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) valmistajan ohjeet. Solut altistettiin qRT-PCR-analyysi noin 24 tuntia transfektion jälkeen. Tilastolliset analyysit suoritettiin Prism 5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA). Väliset korrelaatiot ilmaisuja suoliston kantasolujen merkkiaineita ja CDX2 1. ISC markkereita korreloivat CDX2 tasojen mahalaukun limakalvon raportoitiin aiemmin suhteellinen kasvu on LGR5 Vahvista positiivista yhdistys OLFM4 3. LGR5 Voit selvittää, suora suhde välillä oli LGR5 4. ISC markkereita on ilmaistu Barrettin ruokatorven vauriot vieressä pyrittiin määrittämään, onko ISC markkereita myös ilmaistu Barrettin ruokatorvi (BE). Tätä varten kaksi yksilöitä adenokarsinoomia johtuvat taustalla BE arvioitiin ilmaus CDX2 keskustelu kannas /kaulan alueen mahalaukun yksikön aiemmin ajateltiin käsittämään kantasolujen markkinarako, jossa IM tapahtuu, ja on ehdotettu, että metaplasic etenemistä yhdestä mahalaukun klonaalinen yksikkö tapahtuu kautta kloonilaajenemisen ja kryptassa fissio. [8], koska LGR5 Various ponnistelut ovat pyrkineet luokittelemaan IM vatsaan vaurion tyyppejä. Matuskura et ai. ehdotti luokittelu, joka perustuu läsnä ohutsuolen ruoansulatusentsyymien; määritellään täydellinen ja epätäydellinen tyyppi IM, [26] kun taas Jass ja Filipe esitteli kolme luokilla IM pohjalta morfologian ja histokemi- musiinin värjäystä. [27] Viime aikoina uusi luokitus on ehdottanut Tatematu et al., Jossa IM voidaan jakaa mahalaukun ja suolen sekoitettu (GI) ja ainoastaan suolen (I) tyyppiä. [19] GI-tyyppinen IM , mahalaukun ja suoliston fenotyyppisiä markkereita näkyvät sekä rauhasten ja solujen tasolla, joten se on ehdotettu, että IM voi johtua asteittain intestinalization kantasolujen päässä GI- I-tyyppiä. [28] Tässä, havaitsimme asteittainen lisääminen ISC merkkiaineiden OLFM4 H Barrettin ruokatorvi (BE) on precancerous leesio, joka jakaa useita morfologiset ja molekyylien ominaisuuksien kanssa mahalaukun IM, enimmäkseen koska se on metaplastinen muuntaminen suoliston lieriöepiteeliin johtuva krooninen tulehdus. Uskomme, että tässä tutkimuksessa luonnehtii toinen samankaltaisuus näiden kahden vaurioita läsnäollessa LGR5 CDX2 on master transkriptiotekijä ilmentämiseen suoliston erilaistumisen markkereita, ja sen ajatellaan taustalla kehittämiseen BE. Vaikka normaali mahan limakalvoa ei ilmaista CDX2 Yhteenvetona totesimme, että LGR5
kasvaa merkittävästi IM. Tässä tutkimuksessa olemme edelleen tutkitaan molekyylitason ominaisuudet näiden LGR5
+ solujen IM tutkimalla ilmentymisprofiilin useiden ISC markkereita. Erityisesti olemme havainneet, että ISC markkereita-lukien OLFM4
ja EPHB2
-Oletko positiivisessa yhteydessä CDX2
ilmentymistä ei-tumorous mahalaukun kudoksiin. Tämä havainto vahvistettiin vatsassa vaurioita tai ilman metaplasiaa, joka osoitti, että OLFM4 ja EPHB2 ilme vähitellen kasvanut metaplastiset etenemiseen. Lisäksi RNA in situ -hybridisaatio osoitti, että LGR5
+ solujen koekspressoimaan useita ISC markkereita ja pysyi rajoittuu pohjaan metaplastiset rauhaset, muistuttaa kuin normaalin suolen kryptat, kun taas normaaleissa antral rauhaset ilmaisi none näiden merkkiaineiden. Lisäksi suuri määrä ISC marker-ilmentäviä soluja hajottavasti jaettu mahalaukun adenoomien, viittaa siihen, että nämä merkit voivat helpottaa mahalaukun tuumorigeneesiä. Lisäksi, Barrettin ruokatorvi (BE) -joka on histologisesti samankaltainen suoliston metaplasia-näytteillä samanlainen jakautuminen ISC markkereita, mikä osoittaa, että läsnä on kantasolujen populaation suolen erilaistumisen potentiaalin. Lopuksi tunnistimme, että LGR5
+ solujen mahalaukun IM ja BE koekspressoimaan ISC markkereita, ja näytteille samaa ilmaisua profiilia kuin löytyy suoliston normaalin crypts. Yhdessä nämä tulokset osoittavat suoliston kaltainen kantasolujen populaation patogeneesissä IM, ja on tärkeä perusta ymmärtämiseksi kehittämiseen ja ylläpitoon tämän taudin.
Johdanto
, joka voi sitten edetä mahalaukun epiteeli- dysplasia tai syöpä. [2] erilaisia geneettisten ja epigeneettisten muutoksia on patogeneesiin ihmisen IM. [3] Lisäksi pitkän aikavälin IM aiheuttama CDX2 ilmaisu on osoitettu johtavan mahasyövän siirtogeenisiä hiiriä, mikä osoittaa, että IM itse on merkittävä rooli synnyssä mahalaukun syöpä. [4]
. pylori
riittää kääntämään IM, mutta toiset ovat havainneet, että merkittävä osa potilaista yhä läsnä IM jälkeenkin tehokas poistaminen. [5] IM uskotaan olevan "josta ei ole paluuta" in histologinen cascade kroonisesta gastriitti ja adenokarsinooma; [6] siten, pyrkimyksiä ymmärtää molekyylitason mekanismeja säätelevät perustamista ja ylläpitoa IM ovat tärkeää kehittää strategioita keskeyttää mahasyövän. Esimerkiksi CDX2 autoregulaatio ehdotetaan olevan suuri vaikutus vakauteen IM vaurioita. [7] Vaikka IM kryptissa ihmisen mahalaukussa ovat klonaalinen ja sisältävät multipotentteihin kantasoluja, [8] se jää huonosti onko natiivi mahalaukun kantasolut ovat alkuperäisen lähteen metaplasian tai jos ne vain säilyttää vakiintunut vaurioita.
kantasoluja markkeri sisäepiteelissä. [9] Lineage-jäljitys tutkimus paljasti myöhemmin, että LGR5
+ solut ovat multipotentteihin kantasoluja vastuussa uusimisen mahalaukun epiteelin hiirissä. [10] Ryhmämme aiemmin osoitettu, että pieni määrä LGR5
+ solut myös asuvat alareunassa ihmisen antral rauhaset ja kasvaa dramaattisesti IM vaurioita. [11] Nämä havainnot saivat meidät spekuloida, että LGR5
voi olla markkeri suoliston kantasoluja (ISC) mukana ylläpitoon IM.
ilmaisu verrattuna normaaliin levyepiteelillä, ja tuo mieleen läsnäolon LGR5
+ kantasoluja BE. [13]
, kuten PROM1
[14], BMI1
[15], LRIG1
[16], ja ASCL2
, joka tunnistettiin transkriptiotekijän hallita suoliston kantasolun kohtalon. [17] lisäksi, OLFM4
[17] ja EPHB2
[18] ovat myös erittäin ilmaistu ISC. Tässä tutkimuksessa pyrittiin löytämään uusia ISC markkereita mukana synnyssä ja ylläpito mahalaukun IM ja BE, ja tutkia niiden rinnakkaispaikantumisen kanssa LGR5
+ solujen RNA in situ hybridisaatio edelleen paljastaa molekyylitasolla ominaisuudet LGR5
+ solujen IM suhteen suoliston kaltainen kantasolujen fenotyyppiä.
Eettinen
RNA in situ -hybridisaatio
, ASCL2
, OLFM4
, ja EPHB2
toteutettiin kanssa RNAscope FFPE iinianalyysikitissä (Advanced Cell Diagnostics, Inc. , Hayward, CA, USA), kuten aiemmin on kuvattu. [11] Positiivinen värjäys määriteltiin läsnä ruskean pistemäisiä pisteitä tumassa ja /tai sytoplasmaan. Ubikitiinipromoottori C ja bakteeri DapB
geenejä toimi positiiviset ja negatiiviset kontrollit, vastaavasti.
RNA ja kvantitatiivisen tosiaikaisen PCR
), Hs00362096_m1 ( EPHB2
), Hs00270888_s1 ( ASCL2
), Hs00197437_m1 ( OLFM4
), Hs01009250_m1 ( PROM1
), Hs00394267_m1 ( LRIG1
), Hs00995536_m1 ( BMI1
), Hs00178027_m1 ( DCLK1
), Hs010780810_m1 ( CDX2
), Hs00212584_m1 ( CLDN18
), ja Hs0275899_g1 ( GAPDH
). GAPDH
toimi endogeeninen kontrolli.
transfektio CDX2
Tilastollinen analyysi
määritettiin lineaarisella regressioanalyysillä. Mean eroja ryhmien FFPE mahalaukun näytteet arvioitiin yksisuuntaisella ANOVA. Välillä-ryhmä vertailuja transfektion jälkeen CDX2
mahasyövän solulinjoissa tehtiin käyttäen Student t
-testaukset. Tuloksia pidettiin merkittävinä, kun p
< 0.05.
Tulokset
+ solujen IM vaurioita ihmisen vatsa. [11] Tämä sai meidät hypothesize että nämä LGR5
+ solut voivat toimia itseuudistuvien kantasoluja avustamaan ylläpito ja lisäys metaplastiset epiteelin mahalaukun limakalvon. Näin pyrittiin tunnistamaan uusia ISC merkkiaineiden korreloivat CDX2
ilmaisun IM. Tämän mittasimme ekspressiotasot CDX2
ja kahdeksan ISC markers- LGR5
, ASCL2
, OLFM4
, EPHB2
, PROM1
, DCLK1
, LRIG1
, ja BMI1
in normaali mahalaukun kudosta. Tutkitut kudokset osoitti monenlaisia CDX2
tasoja, jotka edustavat eriasteista IM, koska CDX2
ilmentyminen korreloi positiivisesti IM etenemisen (kuvio 1A). Kolme ISC markkereita havaittiin korreloivan CDX2
ilmaus: OLFM4
, EPHB2
, ja BMI1
. Erityisesti OLFM4
( p
< 0,0001, r 2 = 0,56) (kuvio 1 B) ja EPHB2
( p
< 0,0001, r 2 = 0,52) (kuvio 1 C) näkyy voimakas positiivinen korrelaatio CDX2
, kun taas BMI1
oli korreloi käänteisesti ( p
= 0,0002, r 2 = 0,42) (kuvio 1 D). Ei merkittävää yhteyttä CDX2
ilmentyminen havaittiin viiden muun ISC merkkiaineita (S1 Kuva).
2. ISC merkki ilme korreloi IM etenemisen
ja EPHB2
IM, valitsimme neljä histologisesti-erillistä mahalaukun kudoksen tyyppiä; normaali antral limakalvo ilman IM (n = 4), krooninen aktiivinen gastriitti ilman IM (n = 3), mahalaukun ja suoliston sekamuotoinen (GI tyyppi) IM (n = 6), ja ainoastaan suoliston tyypin (I tyyppi) IM (n = 5) (kuvio 2A). Klaudiini-18 on pisimmälle ilmaistuna tiiviin liitoksen proteiini vatsassa. Kuten odotettua, meidän analyysit paljastivat, että klaudiini-18 ilmentyminen väheni kasvavaan asteen IM ( p
< 0,0001) (kuvio 2B), kun taas CDX2
ilmaisua kohoaminen ( p
< 0,0001) (kuvio 2C). Huomasimme myös, että OLFM4
ja EPHB2
pinta nousi yhdenmukaisesti kunkin tulevan vaurion, vahvistetaan, että näitä markkereita liittyvät läheisesti IM etenemiseen ( p
= 0,008 ja 0,001, taavasti; 2D ja 2E). Sen sijaan BMI1
ja LRIG1
ilme osoitti taipumusta vähentää IM etenemiseen ( p
= 0,002 ja 0,0006, vastaavasti, kuvio 2F ja 2G).
+ solujen suolen metaplasiaa colocalize muiden ISC merkkiaineiden
ja ISC merkkiaineiden IM, me tutki niiden -parin RNA in situ -hybridisaatiolla. Ilmaisu on LGR5
, ASCL2
, EPHB2
, ja OLFM4
tarkasteltiin ensin normaalin ihmisen ohutsuolessa jaksossa vahvistaa tätä tekniikkaa, ja havaittiin paikallistaa erityisesti solujen kantasolujen kapealla suoliston kryptojen odotetusti (S2 kuvassa). Koska LGR5
+ solujen normaalin suolen kryptissa myös ilmaista ISC markkereita, me teorian, että LGR5
+ solujen IM voi esiintyä vastaava ilmaisu kuvio. Niinpä toistuva menettelyn peräkkäistä leikettä endoskooppisia submukosaalisen leikkely yksilöiden (n = 5), joista kukin sisälsi useita pesäkkeitä GI- tai I-tyypin IM keskuudessa ei-kasvainkudoksessa. Pieni määrä LGR5
+ soluja juuressa normaalin antral rauhaset puuttui ISC merkki ilmaisun (kuvio 3A), kun taas I-tyypin IM osoitti ilmaisi kaikki kolme merkkiä (kuvio 3B) . Lisäksi GI-tyyppinen IM vaurioita näkyy sama ilmaisun profiilin yleinen paitsi että ISC markkeri ilmentyminen yläpuolella jäljellä maharauhanen sijaan rajoittunut pohjapinta alueilla (S3 kuvassa). Tämä ilmaus kuvio havaittiin yhdenmukaisesti kaikissa näytteissä. Nämä havainnot osoittavat, että LGR5
+ solujen IM poikkeavat normaalista antrumiin ilmaisemisessa ISC markkereita, jotka ovat yleensä rajoittuu solujen suoliston crypts. Mielenkiintoista, IM johdettu fundic rauhaset, jossa LGR5
+ solut eivät normaalisti, tuotti samat tulokset (S4 kuvio). Siten on todennäköistä, että väestö LGR5
+ solujen IM ei johdu leviämisen ennestään LGR5
+ soluja, vaan on pikemminkin syntyminen LGR5
+ solujen hankittu erilaistumisen potentiaalin, mikä viittaa siihen, että suoliston kaltainen kantasolujen populaatio on perustettu IM. Lisäksi, mahalaukun adenoomien (n = 5) ilmaisi myös korkea ISC markkereita koko vaurioita, eikä rajoitu rauhasten kryptojen (kuvio 3C). Kuten kuvassa 3, tämä kertyminen ISC merkki ilmentävien solujen yli metaplasiaa on dysplasia sekvenssi on implicative osallistumisen suoliston tyyppiä kantasolujen mahalaukun kasvainten synnyssä ja lisätutkimuksia tutkimaan välisen yhteyden suoliston kantasolujen merkkiaineita ja mahakasvaimen kehitys ovat varmasti perusteltua.
, OLFM4
, EPHB2
, ja PROM1
by qRT-PCR-analyysillä (kuvio 4A). Merkittävästi sekä BE ja adenokarsinoomista ilmaistuna korkeamman tason kaikkien neljän ISC markkereita verrattuna, että normaalin levyepiteelin (kuvio 4B, 4C, 4D ja 4E). Vaikka LGR5
ja ASCL2
ei osoittanut merkittäviä muutoksia RT-PCR-analyysi, todennäköisesti alhaisen kopioluvun selostukset, RNA in situ -hybridisaatio osoitti selvästi solupopulaation kanssa LGR5
, ASCL2
, ja OLFM4
ilmaisu risteyksessä mahalaukun ja metaplastiset rauhaset, muistuttaa GI-tyyppinen IM (kuvio 4F, 4G, 4H, 4I ja 4J).
+ solut tunnistetaan multipotentteina suoliston kaltaisia kantasoluja hiirissä [10] ja olemassa ihmisen mahan antrum [11], se on uskottavaa ajatella, että IM voisivat kehittyä tästä solupopulaation. On kuitenkin olemassa mahdollisuus, että toinen kantasolujen määrä voi pohjautua prosessia. Esimerkiksi Sox2
+ soluja on myös todettu erotuksena mahan kantasoluja, ja etiketti solupopulaatio yksinomaan niille, joilla on LGR5
ilme. [21] Transdifferentiation voi myös aiheuttaa ja metaplastiset soluihin. Spasmolyitc polypeptidiä ilmentävien metaplasiaa-jossa mahaportin tyyppinen rauhaset näkyvät oxyntic limakalvoa syntyvät kypsiä pääsoluissa, [22] eikä LGR5
ilmentävillä soluilla. [23] Todellakin, siirtogeenisiä CDX1
tai CDX2
ilmaisun tuloksia parietaalisolujen johdettu IM kehittäminen siirtogeenisissä hiirissä [24]. sen vuoksi on edelleen heikko, onko IM on seurausta suoliston kantasolujen uudelleenohjelmointi tai transdifferentiation solujen hankittu ISC-like ominaisuudet. [12, 25]
ja EPHB2
täydentäviä intestinalization mahalaukun limakalvon. Lisääntymisen myötä CDX2
tasoilla, jotka aiheuttavat suoliston erilaistumista ja fenotyypin, nämä ekspressiokuviot viittaavat muuntaminen yleisen kantasolujen populaation kohti enemmän suolen kuten kantasolujen fenotyyppiä. Lisäksi odottamaton käänteinen korrelaatio BMI1
ja LRIG1
IM tarvitsee lisätutkimuksia, joissa vahvistetaan tämän tuloksen ja selventämään kliinistä merkitystä.
. pylori
poistamiseen on mahdollista estää mahalaukun syöpiin, [29] ja saattaa vaimentaa etenemistä precancerous mahavaurioita, kuten IM. [30, 31] Kuitenkin, kun perustettu, näyttää siltä, että H
. pylori
hävittämistä ei voi täysin estää mahalaukun syöpä. [6] Itse asiassa noin 80% potilailla, joilla oli IM ei osoittanut muutosta tai etenemisen IM jälkeen antibioottihoidon. [31] Lisäksi meta-analyysi päätökseen että H
. pylori
poistamiseen ei ole vaikutusta mahalaukun IM. [32] Tämä korjautumattomuus IM voidaan osittain selittää ylläpito CDX2
ilmaisun kautta autoregulaatio silmukka, joka on riippumaton Sysäyksen, ylläpitäviä suoliston fenotyyppi. [33] Me kertoo vielä, että LGR5
+ soluja juuressa metaplastiset rauhaset johdonmukaisesti ilmaista muita ISC markkereita, osoittaa suoliston kaltaisen kantasolujen fenotyyppi. Uskomme, että tämä vakaa kantasolujen populaatio voidaan antaa lisäselvitystä varten pitkäaikaisen luonteen IM. Lisäksi terapeuttisia strategioita riittää kohdistaa LGR5
+ solupopulaation yhdistettynä H
. pylori
hävittämiseksi saattaisi heikentää vakautta IM, mikä nopeuttaa uudelleen käyttöön normaalin mahan limakalvon.
+ solujen ISC merkki ilme. Tämä havainto on yhdenmukainen aiemman raportin osoittaa, että LGR5
ilmentyminen oli merkittävästi koholla BE, ja että väestö on todennäköinen solu-of-alkuperäinen tässä metaplasiaa. [13] Viime aikoina LGR5
+ -soluissa, keskellä Barrettin rauhasten in situ hybridisaatio- ja ehdotetaan toimia kantasoluja, koska niillä on sekä mahalaukun ja suoliston erilaistumista. [34] Huomasimme myös LGR5
+ solujen väliset alueet mahan ja metaplastiset rauhaset BE, jotka vastaavat keskellä Barrettin rauhaset. Lisäksi läsnäolo ISC merkkiaineiden LGR5
+ solupopulaation edelleen tukee niiden mahdollisuuksia suoliston erilaistumista. Niinpä näiden tulosten perusteella, on järkevää olettaa, että LGR5
+ solujen todennäköisesti toimivat kantasoluja, jotka ylläpitävät suoliston fenotyyppi BE, samanlainen kuin IM.
, vahva ilmentyminen havaitaan IM. [35, 36] Lisäksi siirtogeenisiä hiiriä ovat osoittaneet, että CDX2
ilmaisu yksinään riittää aiheuttamaan IM [37 , 38], mikä viittaa siihen, että CDX2
voi myös helpottaa kehitystä kantasolun väestöstä suoliston fenotyyppi. Niinpä tutkimme jos CDX2
osallistuu suoraan ilmaus ISC merkkiaineiden: LGR5
, ASCL2
, OLFM4
, ja EPHB2
(S5 kuvio). Kuitenkin transfektiokokeis- paljasti, että vain EPHB2
niukasti vaikutti CDX2
ilme. Varmasti, nämä tiedot pitäisi tulkita varoen, koska saatiin GC solulinjoissa erilaisilla biologiset ominaisuudet kuin ei-tuumori- mahalaukun epiteeli- tai suoliston kantasoluja. On kuitenkin todennäköistä, että ylimääräinen signalointi tekijät yhdessä CDX2
ovat oleellista aikaansaada ISC merkki ilme.
+ solujen mahalaukun IM ja BE koekspressoimaan ISC markkereita, mikä on osoitus suoliston kaltaisen kantasolupopulaatiosta joka korvaa ennestään mahan kantasoluja. Tämä havainto näyttää tarjoavan tärkeän vihjeen ymmärtämiseksi mekanismin taustalla pysyvyys IM jälkeen H
. pylori
hävittämiseksi. Lisäksi meidän havainnot viittaavat LGR5
+ solut ovat lupaava kohde kääntää IM, ja mahdollisesti estää niiden eteneminen mahasyövistä.
tukeminen Information
S1 Kuva. Korrelaatio suoliston kantasolujen (ISC) markkereita CDX2
tasoilla kuin tumorous mahalaukun kudoksissa.
Ei korrelaatio vallitsee CDX2
ilmaisun ja jotkut ISC markkereita, kuten LGR5
(r 2 = 0,01, p
= 0,59), ASCL2
(r 2 = 0,01, p
= 0,59) PROM1
(r 2 = 0,11, p
= 0,08), LRIG1
(r 2 = 0,06, p
= 0,21) ja DCLK1
(r 2 = 0,09, p
= 0,11).
doi: 10,1371 /journal.pone.0127300.s001
( PPTX)
S2 Kuva. Visualisointi suoliston kantasolujen merkkiaineita RNA in situ -hybridisaatio (ISH).
RNA ISH suoritettiin formaliinilla kiinnitetyt ja parafinoidut näyte ohutsuolessa. (A, B) ryhmä LGR5
+ kantasolut tunnistetaan alareunassa kaikkien kryptat, sekoittunut Paneth soluihin. Muut suoliston kantasolujen markkereita, kuten ASCL2
(C, D), EPHB2
(E, F), ja OLFM4
(G, H) on myös todettu rajoittuu kryptassa emäksiä. Suurennus: A, C, E, G x 100; B, D, F, H × 400.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0127300.s002
(PPTX)
S3 Fig. Expressions suoliston kantasolujen merkkiaineiden GI tyyppi IM.
Jäljellä maharauhanen usein osoitteessa pohjapinta alueet GI tyypin IM (A ja B). RNA ISH osoittaa, että LGR5
(C) ja EPHB2
(D) ilmaisuja lokalisoitu yläpuolelle maharauhanen. Mielenkiintoista, OLFM4
(E) ilmentyminen havaitaan maharauhanen samoin vaikka sen voimakkuus on paljon heikompi kuin että metaplastiset rauhaset. Kun nämä maharauhanen kadota IM kehittää (A ja F), jakelu kaikkien LGR5
(G), EPHB2
(H) ja OLFM4
(I) on puhtaasti pohjapinta alueille. Nuolet osoittavat jäljellä maharauhanen. Suurennus A × 40; B, C, D, E, F, G, H, I × 200.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0127300.s003
(PPTX)
S4 Fig. Suoliston kantasolujen merkkiaineita suolen metaplasiaa (IM), mahalaukun corpus.
(A ja B) Pieni painopiste IM keskellä fundic rauhaset, nuolilla, osoittaa samaa ilmaisua malleja LGR5
(C), ASCL2
(D), ja OLFM4
(E) kuin IM antrumiin. Suurennukset A × 100; B, C, D, E × 200.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0127300.s004
(PPTX)
S5 Fig. Vaikutus CDX2
ekspressioon suolen kantasolujen (ISC) merkkiaineiden mahasyövän (GC) solulinjat.
Transfektio CDX2
neljään GC-solulinjat, MKN74 (A ), MKN28 (B), SNU484 (C) ja SNU668 (D) lisää merkittävästi mRNA: n määrä on CDX2
(** p
< 0,01; ***, p
< 0,005). EPHB2
ilmentymistä vain vähän parantaa ilmentymistä CDX2
kolmessa neljästä GC solulinjojen (***, p
< 0,005). Mitään eroa ei havaittu tasot LGR5
, ASCL2
, ja OLFM4
kun CDX2
yliekspressio (ns, ei merkitsevä).
doi: 10,1371 /journal.pone.0127300.s005
(PPTX) B