Gastrisk tarm metaplasi (IM) er en meget udbredt præneoplastiske læsion; imidlertid de molekylære mekanismer, der regulerer dets udvikling er fortsat uklare. Vi har tidligere vist, at en population af celler, der udtrykker den intestinale stamcelle (ISC) markør LGR5 Henvisning:. Jang BG, Lee BL, Kim WH (2015) Intestinal Stem Cell Markers i Intestinal Metaplasi af mave og Barretts øsofagus. PLoS ONE 10 (5): e0127300. doi: 10,1371 /journal.pone.0127300 Academic Redaktør: Anthony W.I. Lo, Queen Mary Hospital, HONG KONG Modtaget: 8. januar 2015; Accepteret: 13. april, 2015; Udgivet: 21. maj 2015 Copyright: © 2015 Jang et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden for papir og dens støtte Information filer Finansiering: Denne forskning blev støttet af en bevilling på Korea Health Technology R & D Project via Korea Health Industry Development Institute (KHIDI), finansieret af Ministeriet for. Sundhed & Velfærd, Republikken Korea (tilskud nummer: HI14C1277). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser Introduktion præneoplastiske intestinal metaplasi (IM) er forbundet med en øget risiko for gastrisk carcinom og præsenterer i ca. en fjerdedel af individer verden over. [1] IM ofte forårsaget af den kroniske atrofisk gastritis efter infektion med Helicobacter pylori Fordi IM er en kritisk precursor i gastrisk carcinogenese, potentialet til at vende disse læsioner er af stor interesse. [5] Tidligere undersøgelser har rapporteret, at udryddelse af H opdagelsen af normale maveslimhinden stamceller faldt sammen med identifikation af Wnt målgenet LGR5 Barretts øsofagus (BE) er en metaplastisk konvertering til intestinal søjleepitel og er forbundet med en øget risiko for adenocarcinom, af samme størrelsesorden som med gastrisk IM. [12] Navnlig human BE læsioner udviser en opregulering af LGR5 Flere molekylære ISC markører er blevet identificeret i tillæg til LGR5 Materialer og metoder emner Formalin -Fast og paraffin-indstøbt (FFPE) gastrisk prøver med eller uden tarm metaplasi (IM) blev indsamlet fra fem patienter, som gennemgik endoskopisk submucosa dissektion i Seoul National University Hospital (SNUH) fra 2008 til 2010. IM læsioner blev kategoriseret i gastrisk og -intestinal blandet (GI) og alene tarm (i) undertyper (også kendt som komplette og inkomplette typer, henholdsvis). [19] prøver af Barretts øsofagus blev isoleret fra to patienter med adenocarcinom i gastrooesophageale forbindelse, og en normal tyndtarm prøve var opnået fra en patient med tyktarmskræft. Frisk-frosne ikke-tumorform gastriske væv var til rådighed fra 28 mavecancerpatienter som havde fået foretaget kirurgisk gastrektomi 2001-2005 på SNUH. Alle humane prøver blev opnået gennem helbredende kirurgisk resektion . Denne retrospektiv undersøgelse blev udført ved hjælp af lagrede prøver efter patologisk diagnose. Prøverne blev anonymiseret før undersøgelsen, således skriftligt samtykke var ikke påkrævet. Undersøgelsen design blev godkendt af Institutional Review Board i Seoul National University Hospital på betingelse af anonymisering (reference: H-1209-037-424). In situ hybridisering til LGR5 Total RNA blev ekstraheret fra paraffinindlejret vævssnit med en RNeasy FFPE Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA) som tidligere beskrevet [20]. reverse-transkriberede cDNA blev fremstillet ud fra 1-2μg totalt RNA med tilfældige hexamere primere og den GoScript revers transkription-system (Promega, Madison , WI, USA). Kvantitativ real-time PCR (QRT-PCR) blev udført under anvendelse af Premix EX Taq (Takara Bio, Shiga, Japan) i henhold til producentens anbefalinger, og dataene analyseres ved anvendelse af Sequence Detection System software (Version 1.4, Applied Biosystems). Følgende TaqMan genekspression assays blev anvendt: Hs00173664_m1 ( LGR5 CDX2 cDNA (pCMV6-CDX2) blev købt fra OriGene (Rockville, MD, USA). Gastrisk cancer-celler blev podet ved 1 × 10 6 celler /brønd i 6-brønds plade og transficeret med 2,5 ug af cDNA eller tomme kontrolvektor under anvendelse af lipofectamin 2000 transfektionsreagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ifølge producentens instruktioner. Celler blev udsat for QRT-PCR-analyse omtrent 24 timer efter transfektion. Statistiske analyser blev udført i Prism 5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA). Korrelationer mellem udtryk for intestinale stamcelle markører og CDX2 1. ISC markører korrelerer med CDX2 niveauer i maveslimhinden Vi har tidligere rapporteret på den relative stigning i LGR5 For at bekræfte den positive sammenslutning af OLFM4 3. LGR5 For at afgøre, om en direkte sammenhæng eksisterede mellem LGR5 4. ISC markører udtrykkes i Barretts øsofagus læsioner Vi næste søgt at fastslå, om ISC markører også blev udtrykt i Barretts øsofagus (BE). Til dette blev to eksemplarer af adenocarcinomer opstår i baggrunden af vurderes for ekspression af CDX2 diskussion isthmus /hals-regionen af mavens enhed blev tidligere anset for at omfatte stamcelle niche, hvor IM forekommer, og det er blevet foreslået, at metaplasic progression fra en enkelt gastrisk klonal enhed opstår gennem klonal ekspansion og krypt fission. [8], fordi LGR5 har søgt forskellige bestræbelser på at klassificere IM af maven læsioner typer. Matuskura et al. foreslog et klassifikationssystem baseret på tilstedeværelsen af tyndtarmen fordøjelsesenzymer; defineret som fuldstændig og ufuldstændig type IM, [26] mens Jass og Filipe introduceret tre kvaliteter af IM på grundlag af morfologi og histokemisk mucin farvning. [27] For nylig en ny klassifikation er blevet foreslået af Tatematu et al., Hvori IM kan opdeles i gastrisk og-tarm blandet (GI) og alene tarm (I) typer. [19] I GI-type IM , gastriske og intestinale fænotypiske markører vises på begge glandulær og cellulære niveauer, hvorfor det er blevet foreslået, IM kan være forårsaget af den gradvise intestinalization af stamceller fra gi- til i-type. [28] Her observerede vi gradvis stigning af ISC markører OLFM4 H Barretts øsofagus (BE) er en præcancerøse læsion, der deler flere morfologiske og molekylære karakteristika med gastrisk IM, hovedsagelig fordi det er en metaplastisk konvertering til intestinal søjleepitel følge af kronisk inflammation. Vi mener, at den foreliggende undersøgelse karakteriserer en anden lighed mellem disse to læsioner i tilstedeværelse af LGR5 CDX2 er en master transkriptionsfaktor til ekspression af intestinale differentieringsmarkører, og menes at ligge til grund for udviklingen af BE. Selvom normal maveslimhinden ikke udtrykker CDX2 Sammenfattende vi fastslået, at LGR5
stigninger bemærkelsesværdigt i IM. I denne undersøgelse, vi yderligere undersøgt de molekylære karakteristika disse LGR5
+ celler IM ved at undersøge udtryk profil af flere ISC markører. Især fandt vi, at ISC markører-herunder OLFM4
og EPHB2
-Er positivt associeret med CDX2
udtryk i ikke-tumorform gastriske væv. Dette resultat blev bekræftet i maven læsioner med eller uden metaplasi, der påviste, at OLFM4 og EPHB2 udtryk gradvist steget med metaplastisk progression. Desuden RNA in situ hybridisering afslørede, at LGR5
+ celler co-udtrykke adskillige ISC markører og forblev begrænset til bunden af metaplastiske kirtler, der minder som de normale intestinale krypter, mens tallene i normale antrale kirtler udtrykt none af disse markører. Desuden blev et stort antal ISC markør-udtrykkende celler diffust fordelt i gastriske adenomer, hvilket antyder, at disse markører kan lette gastrisk tumorigenese. Desuden Barretts øsofagus (BE) -som er histologisk ligner intestinal metaplasi-udviste en lignende fordeling af ISC markører, der angiver tilstedeværelsen af en stamcelle population med intestinal differentiering potentiale. Afslutningsvis vi identificeret, at LGR5
+ celler i mavens IM og BE co-udtrykker ISC markører og udstille det samme udtryk profil som dem, der findes i normale tarm krypter. Tilsammen disse resultater implicerer en tarm-lignende stamceller befolkning i patogenesen af IM, og et vigtigt grundlag for at forstå udviklingen og vedligeholdelsen af denne sygdom
, som derefter kan fortsætte til gastrisk epitel dysplasi eller carcinoma. [2] En række genetiske og epigenetiske ændringer har været impliceret i patogenesen af humane IM. [3] Endvidere langsigtet IM induceret af CDX2 ekspression er blevet vist sig at føre til gastrisk cancer hos transgene mus, hvilket indikerer, at IM selv spiller en væsentlig rolle i tilblivelsen af gastrisk karcinom. [4]
. pylori
er tilstrækkelig til at vende IM, endnu andre har fundet, at en betydelig del af patienterne stadig til stede med IM, selv efter en effektiv udryddelse. [5] IM menes at være den "point of no return" i histologiske kaskade af kronisk gastritis til adenocarcinom [6] således, bestræbelser på at forstå de molekylære mekanismer, der regulerer etablering og vedligeholdelse af IM er afgørende for at udvikle strategier til at afbryde gastrisk carcinogenese. For eksempel er CDX2 autoregulering foreslået at have en stor indvirkning på stabiliteten af IM læsioner. [7] Mens IM krypter i den menneskelige mave er klonal og indeholder multipotente stamceller, [8], er det stadig dårligt forstået, om indfødte gastriske stamceller er den indledende kilde til metaplasi eller hvis de kun tjener til at fastholde etablerede læsioner.
som en stamcelle markør i tarmepitelet. [9] En slægt-sporing undersøgelse senere afsløret, at LGR5
+ celler er multipotente stamceller ansvarlige for fornyelse af gastriske epithel i mus. [10] Vores gruppe tidligere påvist, at et lille antal LGR5
+ celler også bor i bunden af menneskelige antral kirtler og øge dramatisk i IM læsioner. [11] Disse resultater førte os til at spekulere, at LGR5
kan være en markør for intestinale stamceller (HTT) involveret i opretholdelsen af IM.
ekspression sammenlignet med normale pladeepitel, og antyder tilstedeværelsen af en LGR5
+ stamceller i BE. [13]
, herunder PROM1
[14], BMI1
[15], LRIG1
[16], og ASCL2
, der blev identificeret som en transskription faktor til at styre tarm stamceller skæbne. [17] Desuden OLFM4
[17] og EPHB2
[18] er også meget til udtryk i individuelle servicekontrakter. I denne undersøgelse, vi havde til formål at opdage yderligere ISC markører involveret i tilblivelsen og vedligeholdelsen af gastrisk IM og BE, og undersøge deres co-lokalisering med LGR5
+ celler ved RNA in situ hybridisering til yderligere at afsløre den molekylære karakteristika af LGR5
+ celler i IM med hensyn til den intestinale-lignende stamcelle fænotype.
Etisk erklæring
RNA in situ hybridisering
, ASCL2
, OLFM4
, og EPHB2
blev udført med RNAscope FFPE assay kit (Advanced Cell Diagnostics, Inc. , Hayward, CA, USA) som beskrevet tidligere. [11] Positiv farvning blev defineret som tilstedeværelse af brune punktformig prikker i kernen og /eller cytoplasma. Den ubiquitin C og bakteriel dapB
gener tjente som positive og negative kontroller, henholdsvis.
RNA ekstraktion og kvantitativ real-time PCR
), Hs00362096_m1 ( EPHB2
), Hs00270888_s1 ( ASCL2
), Hs00197437_m1 ( OLFM4
), Hs01009250_m1 ( PROM1
), Hs00394267_m1 ( LRIG1
), Hs00995536_m1 ( BMI1
), Hs00178027_m1 ( DCLK1
), Hs010780810_m1 ( CDX2
), Hs00212584_m1 ( CLDN18
), og Hs0275899_g1 ( GAPDH
). GAPDH
tjente som den endogene kontrol.
Transfektion af CDX2
Statistisk analyse
blev vurderet ved lineær regressionsanalyse. Mean forskelle mellem de grupper af FFPE gastriske prøver blev vurderet ved envejs ANOVA. Mellem-gruppe sammenligninger efter transfektion af CDX2
i gastrisk cancer cellelinjer blev udført ved hjælp af Student t
-tests. Resultaterne blev betragtet som signifikante, når s
< 0.05.
Resultater
+ celler i IM læsioner af menneskelige mave. [11] Dette fik os til at hypotesen, at disse LGR5
+ celler kan virke som selvfornyende stamceller til at bistå i vedligeholdelse og formering af metaplastisk epitel i maveslimhinden. Således har vi til formål at identificere yderligere ISC markører, der korrelerede med CDX2
udtryk i IM. Til det målte vi ekspressionsniveauerne af CDX2
og otte ISC markers- LGR5
, ASCL2
, OLFM4
, EPHB2
, PROM1
, DCLK1
, LRIG1
, og BMI1
-i normal gastrisk væv. De undersøgte væv viste en bred vifte af CDX2
niveauer, der repræsenterer de forskellige grader af IM, da CDX2
udtryk er positivt korreleret med IM progression (Fig 1A). Tre ISC markører viste sig at korrelere med CDX2
udtryk: OLFM4
, EPHB2
, og BMI1
. Især OLFM4 Hotel ( s
< 0,0001, r 2 = 0,56) (fig 1B) og EPHB2
( s
< 0,0001, r 2 = 0,52) (fig 1C) viste en stærk positiv korrelation med CDX2
, mens BMI1
blev omvendt korreleret ( s
= 0,0002, r 2 = 0,42) (fig 1D). Ingen signifikant sammenhæng med CDX2
udtryk blev identificeret med de andre fem ISC markører (S1 Fig).
2. ISC markør udtryk korrelerer med IM progression
EPHB2
med IM, valgte vi fire histologisk-distinkt gastriske vævstyper; normal antral slimhinde uden IM (n = 4), kronisk aktiv gastritis uden IM (n = 3), mave- og tarm blandet type (GI type) IM (n = 6), og alene tarm type (jeg skriver) IM (n = 5) (fig 2A). Claudin-18 er den mest højt udtrykt tight junction-protein i maven. Som forventet viste vores analyser, at claudin-18-ekspression formindsket med de stigende grader af IM ( s
< 0,0001) (fig 2B), hvorimod CDX2
udtryk forhøjet ( s
< 0,0001) (fig 2C). Vi fandt også, at OLFM4
og EPHB2
niveauer steget konsekvent med hver efterfølgende læsion, der bekræfter, at disse markører er nært beslægtet med IM progression ( s
= 0,008 og 0,001, henholdsvis fig 2D og 2E). I modsætning hertil BMI1
LRIG1
udtryk viste en tendens til at falde med IM progression. ( s
= 0,002 og 0,0006, henholdsvis Fig 2F og 2G)
+ celler i tarm metaplasi colocalize med andre ISC markører
og ISC markører i IM, vi undersøgt, om deres coekspression af RNA in situ hybridisering. Udtrykket af LGR5
, ASCL2
, EPHB2
, og OLFM4
blev først undersøgt i et normalt menneske tyndtarm sektion til at validere denne teknik, og viste sig at lokalisere specifikt til celler i stamcelle niche af intestinale krypter som forventet (S2 fig). Da LGR5
+ celler i normale tarm krypter også udtrykke ISC markører, vi teoretiseret, at LGR5
+ celler i IM kan også udvise et lignende udtryk mønster. Således har vi gentaget proceduren på hinanden følgende sektioner af endoskopiske submukøse dissektion prøver (n = 5), som hver indeholdt multiple foci af gi- eller I-type IM blandt ikke-tumorvævet. Et lille antal LGR5
+ celler i bunden af normale antral kirtler var blottet for ISC markør udtryk (figur 3A), mens de i I-typen IM viste udtrykt alle tre markører (Fig 3B) . Desuden GI-type IM læsioner udviste samme ekspressionsprofil samlet med undtagelse af den ISC markør ekspression blev placeret over de resterende gastriske kirtler, snarere end begrænset til de basale områder (S3 Fig). Dette ekspressionsmønster blev konsekvent observeret i alle prøver. Disse resultater viser, at LGR5
+ celler i IM anderledes end i normal antrum i ekspressionen af ISC markører, der normalt begrænset til celler i tarmens krypter. Interessant, IM afledt af de fundiske kirtler, hvor LGR5
+ celler normalt ikke er til stede, produceret de samme resultater (S4 Fig). Det forekommer således sandsynligt, at befolkningen i LGR5
+ celler i IM skyldes ikke spredning af allerede eksisterende LGR5
+ celler, men er snarere en fremkomsten af LGR5
+ celler med erhvervet differentiering potentiale, hvilket antyder, at en intestinal-lignende stamcellepopulation er etableret i IM. Desuden gastriske adenomer (n = 5) udtrykte også høje niveauer af ISC markører hele læsionerne i stedet begrænset til glandulær krypter (fig 3C). Som vist i figur 3, denne ophobning af ISC markør-udtrykkende celler over metaplasi til dysplasi sekvens er implicative af deltagelse af intestinale typen stamceller i gastrisk tumorigenese og yderligere studier for at undersøge sammenhængen mellem tarm stamcelle markører og gastrisk tumor udvikling er sikkert berettiget.
, OLFM4
, EPHB2
, og PROM1
af QRT-PCR-analyse (fig 4A). Betydeligt, både BE og adenocarcinomer udtrykte højere niveauer af alle fire ISC markører sammenlignet med den for normale pladeepitel (Fig 4B, 4C, 4D og 4E). Mens LGR5
ASCL2
viste ingen signifikante ændringer fra RT-PCR-analyse, sandsynligvis på grund af lav kopi antal udskrifter, RNA in situ hybridisering viste et klart celle population med LGR5
, ASCL2
, og OLFM4
udtryk ved krydset af mavens og metaplastiske kirtler, der minder om GI-typen IM (fig 4F, 4G, 4H, 4I og 4J).
+ celler identificeres som multipotente intestinale-lignende stamceller i mus [10] og eksisterer i den humane gastriske antrum [11], er det plausibelt at tro, at IM kunne udvikle sig fra denne celle population. Imidlertid forbliver en mulighed, at en anden stamcellepopulation kunne ligge til grund denne proces, der. For eksempel, SOX2
+ celler er også blevet identificeret som særskilte gastriske stamceller, og label cellepopulation eksklusivt til dem med LGR5
udtryk. [21] transdifferentiering kan også give anledning til metaplastiske celler. Spasmolyitc polypeptid-udtrykkende metaplasi-hvor pylorus typen kirtler vises i oxyntic slimhinde-stamme fra modne chef celler, [22] i stedet for LGR5
udtrykkende celler. [23] Faktisk transgene CDX1
eller CDX2
udtryk resulterer i parietalcellerne afledt IM udvikling i transgene mus. [24] Derfor er det stadig vanskeligt, om IM er en konsekvens af intestinal stamcelle omprogrammering eller transdifferentiering af celler med erhvervet ISC-lignende egenskaber. [12, 25]
og EPHB2
med yderligere intestinalization af maveslimhinden. Sammen med den stigende CDX2 Salg niveauer, der inducerer intestinal differentiering og fænotype, disse ekspressionsmønstre foreslå en omdannelse af den samlede stamcellepopulations mod en mere intestinal-stamcelle-fænotype. Desuden uventede omvendt korrelation af BMI1
LRIG1
med IM behov yderligere undersøgelser for at bekræfte dette resultat, og at præcisere sine kliniske implikationer.
. pylori
udryddelse har potentiale til at forhindre gastriske cancere, [29] og kan dæmpe progressionen af præcancerøse gastriske læsioner, såsom IM. [30, 31] Imidlertid først er etableret, ser det ud til, at H
. pylori
udryddelse kan ikke helt forhindre mavekræft. [6] I virkeligheden, omkring 80% af patienter med IM viste ingen ændring eller progression af IM efter behandling med antibiotika. [31] Desuden indgik en meta-analyse at H
. pylori
udryddelse har ingen effekt på mavens IM. [32] Denne uigenkaldelige IM kunne til dels forklares ved opretholdelse af CDX2
udtryk gennem en autoregulering løkke, der er uafhængig af indledende trigger, opretholde den intestinale fænotype. [33] Vi viste også, at LGR5
+ -celler i bunden af metaplastiske kirtler konsekvent udtrykke andre ISC markører, der indikerer en intestinal-stamcelle-fænotype. Vi mener, at denne stabile stamceller befolkning kan give en ekstra forklaring på den langvarige karakter af IM. Desuden terapeutiske strategier tilstrækkelig til specifikt at målrette LGR5
+ cellepopulation kombineret med H
. pylori
udryddelse potentielt kunne underminere stabiliteten i IM, og dermed fremskynde genetablering af normal maveslimhinden.
+ celler med ISC markør udtryk. Dette fund er i overensstemmelse med en tidligere rapport viser, at LGR5
udtryk var signifikant forhøjet i BE, og at befolkningen er den sandsynlige celle-of-oprindelse for denne metaplasi. [13] For nylig LGR5
+ -celler blev identificeret i midten af Barretts kirtler ved in situ hybridisering og er foreslået at fungere som stamceller, de udviser både gastrisk og intestinal differentiering. [34] Vi har også fundet LGR5
+ celler på områderne mellem mavesår og metaplastiske kirtler i BE, som svarer til midten af Barretts kirtler. Derudover tilstedeværelsen af ISC markører i LGR5
+ cellepopulation yderligere understøtter deres potentiale for tarm differentiering. Således er baseret på disse resultater, synes det rimeligt at antage, at LGR5
+ celler i BE sandsynlige funktion som stamceller, der opretholder den intestinale fænotype af BE, svarende til den, der ses i IM.
, stærke udtryk detekteres i IM. [35, 36] Desuden transgene mus har vist, at CDX2
udtryk alene er tilstrækkeligt til at fremkalde IM [37 , 38], hvilket tyder på, at CDX2
kan også fremme udviklingen af stamceller befolkning med en tarm fænotype. Således undersøgte vi, om CDX2
er direkte involveret i ekspressionen af ISC markører: LGR5
, ASCL2
, OLFM4
, og EPHB2
(S5 fig). afslørede imidlertid transfektionsforsøg, at kun EPHB2
blev marginalt påvirket af CDX2
udtryk. Bestemt bør disse data fortolkes med forsigtighed, da blev opnået i GC cellelinjer med forskellige biologiske egenskaber fra den ikke-tumor-gastriske epitel eller tarm stamceller. Ikke desto mindre, er det sandsynligt, at yderligere signalering faktorer sammen med CDX2
er afgørende for at inducere ISC markør udtryk.
+ celler i gastrisk IM og BE co-udtrykke ISC markører, hvilket er indikativt for en intestinal-lignende stamcellepopulation, der erstatter det forud eksisterende gastriske stamceller. Dette fund synes at give et vigtigt spor for at forstå mekanismen bag det vedvarende IM efter H
. pylori
udryddelse. Desuden er vores resultater tyder LGR5
+ celler er en lovende mål at vende IM, og potentielt forhindre deres progression i gastrisk kræft.
Støtte Information
S1 Fig. Korrelation af tarm stamcelle (ISC) markører med CDX2
niveauer i ikke-tumorform gastriske væv.
Ingen korrelation fundet mellem CDX2
udtryk og nogle ISC markører såsom LGR5 Hotel (r 2 = 0,01, s
= 0,59), ASCL2
(r 2 = 0,01, s
= 0,59) , PROM1 Hotel (r 2 = 0,11, s
= 0,08), LRIG1 Hotel (r 2 = 0,06, p
= 0,21) og DCLK1 Hotel (r 2 = 0,09, s
= 0,11)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0127300.s001
( PPTX)
S2 fig. Visualisering af tarm stamcellemarkører ved RNA in situ hybridisering (ISH).
RNA ISH udføres på en formalinfikserede og paraffinindstøbte eksemplar af tyndtarmen. (A, B) En gruppe af LGR5
+ stamceller identificeres i bunden af alle krypter, blandet med Paneth celler. Andre tarm stamcellemarkører såsom ASCL2
(C, D), EPHB2
(E, F), og OLFM4
(G, H) findes også til begrænses til de krypt baser. Forstørrelse: A, C, E, G × 100; B, D, F, H × 400
doi:. 10,1371 /journal.pone.0127300.s002
(PPTX)
S3 Fig. Udtryk for tarm stamcelle markører i GI typen IM.
Resterende gastriske kirtler ofte findes på de basale områder af GI typen IM (A og B). RNA ISH viser, at LGR5
(C) og EPHB2
(D) udtryk er lokaliseret over mavens kirtler. Interessant, OLFM4
(E) udtryk er observeret i mavens kirtler samt selv om dens intensitet er meget svagere end i de metaplastiske kirtler. Når disse gastrisk kirtler forsvinde som IM udvikler (A og F), fordelingen af alle LGR5
(G), EPHB2
(H) og OLFM4
(I) er strengt begrænset til de basale områder. Pile angiver de resterende gastriske kirtler. Forstørrelse: A × 40; B, C, D, E, F, G, H, I x 200
doi:. 10,1371 /journal.pone.0127300.s003
(PPTX)
S4 Fig. Intestinale stamcellemarkører i intestinal metaplasi (IM) af mavens corpus.
(A og B) En lille fokus for IM i midten af fundiske kirtler, angivet med pile, viser de samme ekspressionsmønstre for LGR5
(C), ASCL2
(D), og OLFM4
(E) som IM af antrum. Forstørrelser: A × 100; B, C, D, E × 200
doi:. 10,1371 /journal.pone.0127300.s004
(PPTX)
S5 Fig. Effekt af CDX2
på ekspressionen af intestinal stamcelle (ISC) markører i gastrisk cancer (GC) cellelinjer.
Transfektion af CDX2
i fire GC cellelinjer, MKN74 (A ), MKN28 (B), SNU484 (C) og SNU668 (D) øger mængden af mRNA af CDX2 Hotel (**, s
< 0,01, ***, s
< 0,005). EPHB2
udtryk kun marginalt forbedret ved ekspression af CDX2
i tre af fire GC cellelinier (***, s
< 0,005). Ingen forskel findes i niveauerne af LGR5
, ASCL2
, og OLFM4
på CDX2
overekspression (ns, ikke signifikant).
doi: 10,1371 /journal.pone.0127300.s005
(PPTX)