Gastric intestinal metaplasi (IM) er en svært utbredt preneoplastiske lesjon; imidlertid, de molekylære mekanismene som regulerer utviklingen uklare. Vi har tidligere vist at en populasjon av celler som uttrykker tarmstamcelle (ISC) markør LGR5 Citation. Jang BG, Lee BL, Kim WH (2015) Tarm Stem Cell Markers i tarm Metaplasi av magen og Barretts øsofagus. PLoS ONE 10 (5): e0127300. doi: 10,1371 /journal.pone.0127300 Academic Redaktør: Anthony W.I. Lo, Queen Mary Hospital, HONG KONG mottatt: 08.01.2015; Godkjent: 13 april 2015; Publisert: 21. mai 2015 Copyright: © 2015 Jang et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer Finansiering: Denne forskningen ble støttet av en bevilgning av Korea Health Technology R & D Prosjekt gjennom Korea Health Industry Development Institute (KHIDI), finansiert av departementet for. Helse & Velferd, Republikken Korea (tilskudd nummer: HI14C1277). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer Innledning preneoplastiske intestinal metaplasi (IM) er assosiert med økt risiko for magekreft og presenterer i omtrent en fjerdedel av enkeltpersoner over hele verden. [1] IM ofte resulterer fra kronisk atrofisk gastritt etter infeksjon med Helicobacter pylori Fordi IM er et kritisk forløper i gastrisk karsinogenese, potensialet for å reversere disse lesjonene er av stor interesse. [5] Tidligere undersøkelser har rapportert at utryddelsen av H oppdagelsen av normal mage slimhinne stamceller falt sammen med identifikasjon av Wnt målet genet LGR5 Barretts øsofagus (BE) er en metaplastiske konvertering til intestinal søyle epitel og er forbundet med økt risiko for adenokarsinom, lik den som er observert med mage IM. [12] Spesielt menneskelig BE lesjoner viser en oppregulering av LGR5 Flere molekylære ISC markører har blitt identifisert i tillegg til LGR5 Materialer og metoder fag Formalin -Fast og parafin-embedded (FFPE) mage prøver med eller uten intestinal metaplasi (IM) ble samlet inn fra fem pasienter som gjennomgikk endoskopisk submucosal disseksjon ved Seoul National University Hospital (SNUH) fra 2008 til 2010. IM lesjoner ble kategorisert i mage-og -intestinal blandet (GI) og utelukkende tarm (i) undertyper (også kjent som ufullstendig og fullstendig typer, henholdsvis). [19] Prøver av Barretts øsofagus ble isolert fra to pasienter med adenokarsinom i gastroøsofageal krysset, og en normal tynntarmen prøven var oppnådd fra en pasient med kreft i tykktarmen. Fersk frosset ikke-tumor mage vev var tilgjengelig fra 28 mage kreftpasienter som hadde gjennomgått kirurgisk gastrektomi 2001-2005 på SNUH. Alle menneskelige prøvene ble innhentet gjennom kurativ kirurgisk reseksjon . Denne retrospektive studien ble utført ved hjelp av lagrede prøver etter patologisk diagnose. Prøvene ble anonymisert før studien, og dermed skriftlig samtykke ikke var nødvendig. Studien utforming ble godkjent av Institutional Review Board ved Seoul National University Hospital under forutsetning av anonymiserings (referanse: H-1209-037-424). I situ hybridisering for LGR5 Total RNA ble ekstrahert fra parafin-embedded vevssnitt med en RNeasy FFPE Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA) som tidligere beskrevet. [20] revers-transkribert cDNA ble fremstilt fra 1-2μg av total RNA med tilfeldige heksamerprimere og GoScript revers transkripsjonssystemet (Promega, Madison , WI, USA). Kvantitative real-time PCR (QRT-PCR) reaksjoner ble utført ved hjelp av Premiks EX Taq (Takara Bio, Shiga, Japan) i henhold til produsentens anbefalinger, og dataene analysert ved hjelp Sequence Detection System programvare (versjon 1.4, Applied Biosystems). Følgende TaqMan genekspresjon analysene ble brukt: Hs00173664_m1 ( LGR5 CDX2 cDNA (pCMV6-CDX2) ble kjøpt fra OriGene (Rockville, MD, USA). Gastrisk kreft celler ble sådd ut ved 1 x 10 6 celler /brønn på 6-brønners plate og transfektert med 2,5 ug cDNA eller tom kontrollvektor ved hjelp av Lipofectamine 2000 transfeksjon reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) i henhold til produsentens bruksanvisning. Celler ble utsatt for QRT-PCR-analyse ca 24 timer etter transfeksjon. Statistiske analyser ble utført i Prism 5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA). Sammenhenger mellom de uttrykk for tarmstamcellemarkører og CDX2 1. ISC markører korrelerer med CDX2 nivåer i mageslimhinnen Vi har tidligere rapportert om den relative økningen av LGR5 For å bekrefte den positive sammenslutning av OLFM4 Hotell og EPHB2 3. LGR5 For å avgjøre om en direkte sammenheng eksisterte mellom LGR5 Kjøpe og ISC markører i IM, undersøkte vi om deres koekspresjon av RNA in situ hybridisering. Uttrykket av LGR5 4. ISC markører er uttrykt i Barretts øsofagus lesjoner neste søkt å fastslå om ISC markører ble også uttrykt i Barretts øsofagus (BE). For dette ble to eksemplarer av adenokarsinomer som oppstår i bakgrunnen av det vurderes om uttrykk for CDX2 diskusjon eidet /nakkeregion av den gastriske enhet ble tidligere antatt å omfatte stamcelle nisje hvori IM forekommer, og det har vært antydet at metaplasic progresjon fra en enkelt gastrisk klonal enhet oppstår ved klonal ekspansjon og krypt fisjon. [8] fordi LGR5 Ulike forsøk har forsøkt å klassifisere IM magen lesjonstyper. Matuskura et al. foreslått et system for klassifisering basert på tilstedeværelsen av tynntarmen fordøyelsesenzymer; definert som fullstendig og ufullstendig konstruksjon IM, [26] mens Jass og Filipe introdusert tre graderinger av IM på grunnlag av morfologi og histokjemisk mucin farging. [27] I den senere tid, en ny klassifisering er blitt foreslått av Tatematu et al., I hvilken IM kan deles inn i mage-og tarmkanalen blandet (GI) og utelukkende tarm (I) typer. [19] I GI-type IM , gastriske og intestinale fenotypiske markører vises både på kjertel- og cellulære nivåer, slik at det har vært antydet at IM kan være forårsaket av den gradvise intestinalization av stamceller fra GI- til i-typen. [28] Her har vi observerte gradvise økning av ISC markører OLFM4 Hotell og EPHB2 H Barretts øsofagus (BE) er en forstadier lesjon som deler flere morfologiske og molekylære egenskaper med gastrisk IM, hovedsakelig fordi det er et metaplastiske omdannelse til intestinal sylindrisk epitel som følge av kronisk betennelse. Vi mener at denne studien karakteriserer en annen likhet mellom disse to lesjoner i nærvær av LGR5 CDX2 er en master-transkripsjonsfaktor for ekspresjon av intestinal differensieringsmarkører, og er antatt å ligge til grunn for utviklingen av BE. Mens normal mageslimhinnen ikke uttrykker CDX2 I sammendraget, fant vi ut at LGR5
øker bemerkelsesverdig i IM. I denne studien har vi undersøkt videre de molekylære egenskapene til disse LGR5
+ celler i IM ved å undersøke uttrykket profilen til flere ISC markører. Spesielt, fant vi at ISC markører-inkludert OLFM4 Hotell og EPHB2
-Er positivt assosiert med CDX2
uttrykk i ikke-tumor mage vev. Dette funnet ble bekreftet i magen lesjoner med eller uten metaplasi, som viste at OLFM4 og EPHB2 uttrykk økt gradvis med metaplastiske progresjon. Videre RNA in situ hybridisering viste at LGR5
+ celler coexpress flere ISC markører og forble begrenset til bunnen av metaplastiske kjertler, som minner på vanlige tarm krypter, mens de i normale antrum kjertler uttrykt ingen av disse markørene. Videre er et stort antall ISC markør-uttrykkende celler ble diffust fordelt i mage adenomer, noe som tyder på at disse markørene kan lette gastrisk tumorigenesis. I tillegg, Barretts øsofagus (BE) -som er histologisk ligner på intestinal metaplasi-oppviste en lignende fordeling av ISC markører, som indikerer tilstedeværelse av en stilk cellepopulasjon med tarm differensiering potensial. I konklusjonen, identifiserte vi at LGR5
+ celler i mage IM og BE coexpress ISC markører, og fremvise den samme uttrykk profil som de som finnes i normale tarm krypter. Samlet utgjør disse resultatene impliserer en tarmlignende stamcelle befolkningen i patogenesen av IM, og gi et viktig grunnlag for å forstå utvikling og vedlikehold av denne sykdommen
, som kan deretter gå videre til gastrisk epitelial dysplasi eller carcinoma. [2] En rekke genetiske og epigenetiske forandringer har vært innblandet i patogenesen av menneskelig IM. [3] Videre langsiktig IM indusert av CDX2 uttrykk har vært vist seg å føre til magekreft i transgene mus, noe som indikerer at IM selv spiller en betydelig rolle i dannelsen av magekreft. [4]
. pylori
er tilstrekkelig til å reversere IM, men andre har funnet ut at en betydelig andel av pasientene fortsatt til stede med IM selv etter effektiv utrydding. [5] IM antas å være "point of no return" i histologiske kaskade av kronisk gastritt til adenokarsinom, [6] og dermed arbeidet med å forstå de molekylære mekanismene som regulerer etablering og vedlikehold av IM er avgjørende for å utvikle strategier for å avbryte magekreftutvikling. For eksempel er CDX2 autoregulation foreslått å ha en stor innvirkning på stabiliteten i IM lesjoner. [7] Mens IM krypter i menneske magen er klonal og inneholder multipotente stamceller, [8] det er fortsatt dårlig forstått om innfødte mage stamceller er den opprinnelige kilden til metaplasi eller om de bare tjene til å opprettholde etablerte lesjoner.
som en stamcelle markør i tarmepitelet. [9] En avstamning-tracing studie senere avslørt at LGR5
+ celler er multipotente stamceller som er ansvarlige for fornyelse av gastrisk epitel i mus. [10] Vår gruppe tidligere vist at et lite antall LGR5
+ celler også ligge i bunnen av menneskelige antrum kjertler og øke dramatisk i IM lesjoner. [11] Disse funnene førte oss til å spekulere i at LGR5
kan være en markør for tarm stamceller (ISCS) som er involvert i vedlikehold av IM.
uttrykk i forhold til normal plateepitel, og tyder på tilstedeværelsen av en LGR5
+ stamceller i BE. [13]
, inkludert PROM1 product: [14], BMI1
[15], LRIG1 product: [16], og ASCL2
, som ble identifisert som en transkripsjonsfaktor for å kontrollere tarmstamcelle skjebne. [17] i tillegg OLFM4
[17] og EPHB2 product: [18] er også sterkt uttrykt i ISCS. I denne studien ønsket vi å oppdage flere ISC markører som er involvert i dannelsen og vedlikeholdet av mage IM og BE, og undersøke deres colocalization med LGR5
+ celler av RNA in situ hybridisering til ytterligere avdekke molekylære karakteristikker av LGR5
+ celler i IM med hensyn til tarmlignende stamcelle fenotype.
Etisk uttalelse
RNA in situ hybridisering
, ASCL2
, OLFM4
, og EPHB2
ble utført med den RNAscope FFPE analysen kit (Advanced Cell Diagnostics, Inc. , Hayward, CA, USA) som beskrevet tidligere. [11] Positive flekker ble definert som tilstedeværelse av brune punctate punkter i kjernen og /eller cytoplasma. Den ubiquitin C og bakteriell dapB
gener servert som positive og negative kontroller, henholdsvis.
RNA ekstraksjon og kvantitativ real-time PCR
), Hs00362096_m1 ( EPHB2
), Hs00270888_s1 ( ASCL2
), Hs00197437_m1 ( OLFM4
), Hs01009250_m1 ( PROM1
), Hs00394267_m1 ( LRIG1
), Hs00995536_m1 ( BMI1
), Hs00178027_m1 ( DCLK1
), Hs010780810_m1 ( CDX2
), Hs00212584_m1 ( CLDN18
), og Hs0275899_g1 ( GAPDH
). GAPDH
tjente som endogen kontroll.
Transfeksjon av CDX2
Statistisk analyse
ble vurdert ved lineær regresjonsanalyse. Midlere forskjeller mellom gruppene av FFPE gastriske prøver ble vurdert ved en-veis ANOVA. Mellom-gruppe sammenligninger etter transfeksjon av CDX2
i magekreft cellelinjer ble utført ved hjelp av Student t
-UNDERSØKELSER. Resultatene ble betraktet som signifikant når p
< 0,05.
Resultater
+ celler i IM lesjoner av menneskelige magen. [11] Dette fikk oss til hypoteser om at disse LGR5
+ celler kan fungere som selvfornyende stamceller til å bistå i vedlikehold og formering av metaplastiske epitel i mageslimhinnen. Derfor ønsket vi å identifisere ytterligere ISC markører som korrelerte med CDX2
uttrykk i IM. For dette, vi målte uttrykket nivåer av CDX2 Hotell og åtte ISC markers- LGR5
, ASCL2
, OLFM4
, EPHB2
, PROM1
, DCLK1
, LRIG1
, og BMI1
-in normal mage vev. De undersøkte vev viste et bredt spekter av CDX2
nivåer, som representerer de forskjellige grader av IM, ettersom CDX2
uttrykket er positivt korrelert med IM progresjon (figur 1A). Tre ISC markører ble funnet å korrelere med CDX2
uttrykk: OLFM4
, EPHB2
, og BMI1
. Spesielt OLFM4 product: ( p
< 0,0001, r 2 = 0,56) (figur 1B) og EPHB2 product: ( p
< 0,0001, r 2 = 0,52) (figur 1C) viste en sterk positiv korrelasjon med CDX2
, mens BMI1
ble omvendt korrelert ( p
= 0,0002, r 2 = 0,42) (fig 1 D). Ingen signifikant sammenheng med CDX2
uttrykk ble identifisert med de andre fem ISC markører (S1 Fig).
2. ISC markør uttrykk korrelerer med IM progresjon
med IM, valgte vi fire histologisk-tydelig mage vevstyper; normal antral slimhinne uten IM (n = 4), kronisk aktiv gastritt uten IM (n = 3), gastrisk og intestinal blandet type (GI type) IM (n = 6), og utelukkende tarmtypen (I skriv) IM (n = 5) (figur 2A). Claudin-18 er den mest sterkt uttrykt tett knutepunkt protein i magen. Som forventet, våre analyser avslørte at claudin-18 uttrykk redusert med økende grad av IM ( p
< 0,0001) (fig 2B), mens CDX2
uttrykk økt ( p
< 0,0001) (figur 2C). Vi fant også at OLFM4 Hotell og EPHB2
nivåer økt jevnt med hver påfølgende lesjon, bekrefter at disse markørene er nært knyttet til IM progresjon ( p
= 0,008 og 0,001, henholdsvis figur 2D og 2E). I kontrast, BMI1 Hotell og LRIG1
uttrykk viste en tendens til å avta med IM progresjon. ( p
= 0,002 og 0,0006, henholdsvis figur 2F og 2G)
+ celler i tarm metaplasi colocalize med andre ISC markører
, ASCL2
, EPHB2
, og OLFM4
ble først undersøkt i et normalt menneske tynntarmen delen for å validere denne teknikken, og ble funnet å lokalisere spesifikt til celler i stamcelle nisje av tarm krypter som forventet (S2 fig). Siden LGR5
+ celler i normale tarm krypter også uttrykke ISC markører, antar vi at LGR5
+ celler i IM kan også vise en lignende uttrykk mønster. Således vi gjentok fremgangsmåten på hverandre følgende deler av endoskopiske submucosal disseksjon prøver (n = 5), som hver inneholdt multiple foki av GI- eller I-konstruksjon IM blant ikke-tumorvevet. Et lite antall LGR5
+ celler ved foten av normale antrum kjertler var blottet for ISC markør uttrykk (Fig 3A), mens de i I-typen IM viste uttrykte alle tre markører (Fig 3B) . Videre GI-type IM lesjoner vises den samme ekspresjonsprofilen samlet med unntak av at ISC markør ekspresjon ble plassert over de gjenværende gastriske kjertler, i stedet begrenset til basal områder (S3) Fig. Dette uttrykket mønsteret ble gjennomgående observert i alle prøver. Disse funnene tyder på at LGR5
+ celler i IM forskjellige fra de i normal antrum i uttrykket av ISC markører som vanligvis begrenset til celler i tarm krypter. Interessant, IM avledet fra fundus kjertler, der LGR5
+ celler er vanligvis ikke til stede, produserte de samme resultatene (S4 fig). Dermed virker det sannsynlig at bestanden av LGR5
+ celler i IM ikke resulterer fra spredning av allerede eksisterende LGR5
+ celler, men er snarere en fremvekst av LGR5
+ celler med ervervet differensiering potensial, noe som tyder på at en tarmlignende stamcelle befolkning er etablert i IM. I tillegg gastriske adenomer (n = 5) også uttrykte høye nivåer av ISC markører gjennom lesjoner, heller enn begrenset til kjertel krypter (figur 3C). Som vist i figur 3, vil denne akkumulering av ISC markør-uttrykkende celler over metaplasi til dysplasi sekvens er implicative av deltakelse av tarmtypen stamceller i gastrisk tumordannelse og ytterligere studier for å undersøke sammenhengen mellom tarm stilk cellemarkører og gastrisk tumorutvikling er absolutt berettiget.
, OLFM4
, EPHB2
, og PROM1
ved QRT-PCR-analyse (figur 4A). Betydelig, både BE og adenokarsinomer uttrykte høye nivåer av alle fire ISC markører når sammenlignet med normal skjellepitel (figur 4B, 4C, 4D og 4E). Mens LGR5 Hotell og ASCL2
viste ingen signifikante endringer fra RT-PCR-analyse, sannsynligvis på grunn av lav kopi antall utskrifter, RNA in situ hybridisering viste en klar cellepopulasjon med LGR5
, ASCL2
, og OLFM4
uttrykk i krysset av mage og metaplastiske kjertler, som minner om GI-type IM (fig 4F, 4G, 4H, 4I og 4J).
+ celler er identifisert som multipotente tarmlignende stamceller hos mus [10] og finnes i den humane gastriske antrum [11], er det plausibelt å tro at IM kan utvikle seg fra denne cellepopulasjonen. Imidlertid er det fremdeles en mulighet for at en annen stilk cellepopulasjon kan ligge til grunn for denne prosessen. For eksempel SOX2
+ celler har også blitt identifisert som distinkte mage stamceller, og etiketten cellepopulasjon eksklusive til de med LGR5
uttrykk. [21] transdifferensiering kan også gi opphav til metaplastiske celler. Spasmolyitc polypeptid-uttrykke metaplasi-in som pylorusstenose typen kjertler vises i oxyntic slimhinne-oppstå fra modne sjef celler, [22] i stedet for LGR5
-expressing celler. [23] Ja, transgene CDX1
eller CDX2
uttrykk gir parietal celleavledet IM utvikling i transgene mus. [24] Derfor gjenstår det unnvikende om IM er en konsekvens av intestinal stamcelle omprogrammering eller transdifferensiering av celler med ervervet ISC lignende egenskaper. [12, 25]
med ytterligere intestinalization av mageslimhinnen. Sammen med den økende CDX2
nivåer som induserer differensiering og intestinal fenotype, er disse uttrykk mønstre foreslå en omdannelse av den totale cellepopulasjon stilk mot en mer tarmlignende stamcelle-fenotype. Videre uventet invers korrelasjon av BMI1 Hotell og LRIG1
med IM trenger videre studier for å bekrefte dette resultatet og for å avklare sine kliniske implikasjoner.
. pylori
utryddelse har potensiale til å forhindre gastrisk kreft, [29] og kan dempe utviklingen av forstadier gastriske lesjoner, slik som IM. [30, 31] Imidlertid, når lagt, ser det ut til at H
. pylori
utrydding kan ikke helt forebygge magekreft. [6] Faktisk viste ca 80% av pasienter med IM ingen endring eller progresjon av IM etter behandling med antibiotika. [31] I tillegg inngått en meta-analyse at H
. pylori
utrydding har ingen effekt på mage IM. [32] Dette irreversibilitet av IM kan delvis forklares med vedlikehold av CDX2
uttrykk gjennom en autoregulation sløyfe som er uavhengig av første trigger, opprettholde tarm fenotype. [33] Vi videre avdekket at LGR5
+ celler i bunnen av metaplastiske kjertler konsekvent uttrykke andre ISC markører, som indikerer en tarmlignende stamcelle fenotype. Vi tror at denne stabil stamcelle befolkningen kan gi en ekstra forklaring for den langvarige natur IM. I tillegg terapeutiske strategier tilstrekkelig spesifikt mot LGR5
+ cellepopulasjonen kombinert med H
. pylori
utrydding kan potensielt undergrave stabiliteten i IM, og dermed akselerere reetablering av normal mageslimhinnen.
+ celler med ISC markør uttrykk. Dette funnet er i samsvar med en tidligere rapport som viser at LGR5
uttrykk ble signifikant forhøyet i BE, og at befolkningen er den sannsynlige celle-of-opprinnelse for metaplasi. [13] I den senere LGR5
+ celler ble identifisert i midten av Barrett kjertler ved in situ hybridisering og er foreslått å virke som stamceller, som de oppviser både mage og tarm differensiering. [34] Vi har også funnet LGR5
+ -celler ved områdene mellom mage og metaplastiske kjertler i BE, som tilsvarer midten av Barretts kjertler. I tillegg tilstedeværelsen av ISC markører i LGR5
+ cellepopulasjonen ytterligere støtter deres potensial for intestinal differensiering. Dermed er basert på disse resultatene, synes det rimelig å antyde at LGR5
+ celler i BE sannsynlig funksjon som stamceller som oppretttarm fenotype av BE, lik den som er sett i IM.
, sterkt uttrykk er oppdaget i IM. [35, 36] Videre transgene mus har vist at CDX2
uttrykk alene er nok til å indusere IM [37 , 38], noe som tyder på at CDX2
kan også legge til rette for utviklingen av stamcelle befolkning med en tarm fenotype. Derfor undersøkte vi om CDX2
er direkte involvert i uttrykket av ISC markører: LGR5
, ASCL2
, OLFM4
, og EPHB2 product: (S5 fig). Men transfeksjon eksperimenter viste at bare EPHB2
ble marginalt påvirket av CDX2
uttrykk. Riktignok bør disse dataene tolkes med forsiktighet siden ble oppnådd i GC cellelinjer med ulike biologiske egenskaper fra den ikke-tumor mage epitelceller eller tarm stamceller. Likevel virker det sannsynlig at flere signal faktorer sammen med CDX2
er avgjørende for å indusere ISC markør uttrykk.
+ celler i mage IM og BE coexpress ISC markører, som er et tegn på en tarmlignende stamcelle befolkningen som erstatter hatt kontakt mage stamceller. Dette funnet ser ut til å gi et viktig holdepunkt for å forstå mekanismen bak utholdenhet av IM etter H
. pylori
utrydding. Videre våre funn tyder på LGR5
+ celler er et lovende mål å reversere IM, og potensielt hindre deres progresjon i mage kreft.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 Fig. Korrelasjon av tarm stamcelle (ISC) markører med CDX2
nivåer i ikke-tumor mage vev.
Ingen korrelasjon er funnet mellom CDX2
uttrykk og noen ISC markører som LGR5 plakater (r 2 = 0,01, p
= 0,59), ASCL2 plakater (r 2 = 0,01, p
= 0,59) PROM1 plakater (r 2 = 0,11, p
= 0,08), LRIG1 plakater (r 2 = 0,06, p
= 0,21) og DCLK1 plakater (r 2 = 0,09, p
= 0,11)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0127300.s001 product: ( PPTX)
S2 fig. Visualisering av tarmstamcellemarkører av RNA in situ hybridisering (ISH).
RNA ISH utført på en formalinfiksert og parafininnstøpte eksemplar av tynntarmen. (A, B) en gruppe med LGR5
+ stamceller er identifisert ved bunnen av alle krypter, slå rot i Paneth celler. Andre tarmstamcellemarkører som ASCL2 plakater (C, D), EPHB2 product: (E, F), og OLFM4 plakater (G, H) er også funnet å være begrenset til krypten baser. Forstørrelse: A, C, E, G x 100; B, D, F, H × 400
doi:. 10,1371 /journal.pone.0127300.s002 plakater (PPTX)
S3 Fig. Expressions av tarmstamcellemarkører i GI konstruksjon IM.
Øvrige mage kjertler er ofte funnet på basal områder av GI konstruksjon IM (A og B). RNA ISH viser at LGR5 product: (C) og EPHB2 product: (D) uttrykk er lokalisert over mage kjertler. Interessant, OLFM4 product: (E) uttrykk er observert i mage kjertler også selv om intensiteten er mye svakere enn i de metaplastiske kjertler. Når disse mage kjertler forsvinne som IM utvikler (A og F), fordelingen av alle LGR5 plakater (G), EPHB2 product: (H) og OLFM4 product: (I) er strengt begrenset til basalområdene. Pilene viser de resterende mage kjertler. Forstørrelse: En × 40; B, C, D, E, F, G, H, I × 200
doi:. 10,1371 /journal.pone.0127300.s003 plakater (PPTX)
S4 Fig. Intestinal stamcellemarkører i intestinal metaplasi (IM) i den gastriske korpuset.
(A og B) En liten fokus av IM i midten av fundus-kjertler, angitt ved piler, viser de samme uttrykk mønstre av
doi:. 10,1371 /journal.pone.0127300.s004 plakater (PPTX)
S5 Fig. Effekt av CDX2
på uttrykk for tarm stamcelle (ISC) markører i magekreft (GC) cellelinjer.
Transfeksjon av CDX2
i fire GC cellelinjer, MKN74 (A ), MKN28 (B), SNU484 (C) og SNU668 (D) signifikant øker mengden av mRNA av CDX2 plakater (**, p
< 0,01; *** p
< 0,005). EPHB2
uttrykk er bare marginalt forbedret med uttrykk for CDX2
i tre av fire GC cellelinjer (***, p
< 0,005). Ingen forskjell er funnet i nivåene av LGR5
, ASCL2
, og OLFM4
på CDX2
overekspresjon (ns, ikke signifikant).
doi: 10,1371 /journal.pone.0127300.s005 plakater (PPTX)