gástrico metaplasia intestinal (MI) es una lesión preneoplásicas altamente prevalente; sin embargo, los mecanismos moleculares que regulan su desarrollo siguen sin estar claros. Hemos demostrado anteriormente que una población de células que expresan las células madre intestinales (ISC) marcador LGR5 Visto:. Jang BG, Lee BL, Kim WH (2015) intestinal Tallo marcadores de células en la metaplasia intestinal del estómago y el esófago de Barrett. PLoS ONE 10 (5): e0127300. doi: 10.1371 /journal.pone.0127300 Editor Académico: Anthony W.I. Lo, Queen Mary Hospital, HONG KONG Recibido: 8 de Enero, 2015; Aceptado: April 13, 2015; Publicado: 21 de mayo de 2015 Derechos de Autor © 2015 Jang et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del sus archivos de soporte de información en papel y Financiación: Esta investigación fue apoyada por una beca de la Tecnología de Corea R &Salud; D Proyecto a través del Instituto Coreano de la Industria de la Salud para el Desarrollo (KHIDI), financiado por el Ministerio de. salud & El bienestar, la República de Corea (número de concesión: HI14C1277). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia Introducción preneoplásicas metaplasia intestinal (IM) se asocia con un mayor riesgo de carcinoma gástrico y presenta en aproximadamente un cuarto de individuos en todo el mundo. [1] IM a menudo resulta de gastritis atrófica crónica después de la infección con Helicobacter pylori Debido IM es un precursor crítico en la carcinogénesis gástrica, el potencial de revertir estas lesiones es de gran interés. [5] investigaciones anteriores han informado de que la erradicación de H el descubrimiento de las células madre normales de la mucosa gástrica coincidió con la identificación del objetivo de genes Wnt LGR5 esófago de Barrett (BE) es una conversión de metaplasia intestinal de epitelio columnar y se asocia con un mayor riesgo de adenocarcinoma, similar a la observada con IM gástrica. [12] en particular, Human Be lesiones exhibir una regulación al alza de los LGR5 Varios marcadores moleculares ISC se han identificado, además de LGR5 Materiales y Métodos los sujetos la formalina -fixed y embebido en parafina (FFPE) muestras gástricas con o sin metaplasia intestinal (MI) se obtuvieron de cinco pacientes que se sometieron a la disección endoscópica de la submucosa en el hospital de la Universidad Nacional de Seúl (SNUH) de 2008 a 2010. Las lesiones se clasificaron en IM-gástrica y (I) subtipos -intestinal mixto (GI) y únicamente intestinales (también conocido como tipos completos e incompletos, respectivamente). [19] Las muestras de esófago de Barrett se aislaron a partir de dos pacientes con adenocarcinoma de la unión gastroesofágica, y una normal espécimen pequeño intestino se obtenida de un paciente con cáncer de colon. tejidos no tumorales gástricas-frescas congeladas estaban disponibles de 28 pacientes con cáncer gástrico que habían sido sometidos a gastrectomía quirúrgica 2001-2005 en SNUH. declaración ética Todas las muestras humanas se obtuvieron a través de la resección quirúrgica curativa . Este estudio retrospectivo se realizó utilizando muestras almacenadas después del diagnóstico patológico. Las muestras fueron anónimos antes del estudio, por tanto, no se requiere el consentimiento por escrito. El diseño del estudio fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital de la Universidad Nacional de Seúl bajo la condición de forma anónima (referencia: H-1209-037-424). En situ hibridación para LGR5 ARN total fue extraído de parafina embebido secciones de tejido con un kit RNeasy FFPE (Qiagen, Valencia, CA, EE.UU.) como se describe anteriormente [20]. transcrito de forma inversa de ADNc se preparó a partir 1-2μg de ARN total con cebadores hexámeros aleatorios y la GoScript sistema de transcripción inversa (Promega, Madison , WI, EE.UU.). reacciones cuantitativas PCR en tiempo real (qRT-PCR) se realizaron con Premix EX Taq (Takara Bio, Shiga, Japón) de acuerdo con las recomendaciones del fabricante, y los datos analizados utilizando el software Sequence Detection System (versión 1.4, Applied Biosystems). Se utilizaron los siguientes ensayos de expresión génica TaqMan: Hs00173664_m1 ( LGR5 CDX2 ADNc (pCMV6-CDX2) se adquirió de OriGene (Rockville, MD, EE.UU.). células de cáncer gástrico fueron sembradas a 1 × 10 6 células /pocillo en placas de 6 pocillos y se transfectaron con 2,5 g de ADNc o vector vacío de control usando el reactivo de transfección Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.), según el fabricante de instrucciones. Las células se sometieron a análisis de QRT-PCR de aproximadamente 24 h después de la transfección. Los análisis estadísticos se realizaron en 5 Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, EE.UU.). Las correlaciones entre la expresión de marcadores de células madre intestinales y CDX2 1. ISC marcadores se correlacionan con los niveles de CDX2 en la mucosa gástrica ya se ha informado sobre el aumento relativo de LGR5 Para confirmar la asociación positiva de OLFM4 3. LGR5 Para determinar si existía una relación directa entre el LGR5 4. ISC marcadores se expresan en lesiones de esófago de Barrett A continuación trató de determinar si los marcadores ISC también se expresaron en el esófago de Barrett (EB). Para ello, dos ejemplares de los adenocarcinomas que surgen en el contexto de BE se evaluaron para la expresión de CDX2 Discusión la región istmo /cuello de la unidad gástrico se pensó previamente para abarcar el nicho de células madre en el que se produce IM, y se ha sugerido que la progresión metaplásico desde una sola unidad clonal se produce gástrico a través de la expansión clonal y la fisión cripta. [8], porque LGR5 Varios esfuerzos han tratado de clasificar los tipos de lesiones IM de estómago. Matuskura et al. sugerido un sistema de clasificación basado en la presencia de pequeñas enzimas digestivas intestinales; definida como tipo completo e incompleto IM, [26] mientras que Jass y Filipe introdujeron tres grados de IM en la base de la morfología y tinción histoquímica mucina. [27] Más recientemente, una nueva clasificación ha sido propuesto por Tatematu et al., En la que IM se puede dividir en gástrico-y-intestinal mixta (GI) y los tipos únicamente intestinales (I). [19] En tipo GI IM , marcadores fenotípicos gástricos e intestinales aparecen en los planos glandulares y celulares, por lo tanto, se ha sugerido que la mensajería instantánea puede ser causado por el intestinalization gradual de las células madre a partir de la GI-a I-tipo. [28] a continuación, se observó aumento gradual de los marcadores ISC OLFM4 H El esófago de Barrett (EB) es una lesión precancerosa que comparte varias características morfológicas y moleculares con gástrico IM, en su mayoría, ya que es una conversión de metaplasia intestinal de epitelio columnar resultante de la inflamación crónica. Creemos que el presente estudio caracteriza a otra similitud entre estas dos lesiones en la presencia de LGR5 CDX2 es un factor de transcripción principal para la expresión de marcadores de diferenciación intestinales, y se cree que la base del desarrollo de BE. Mientras mucosa gástrica normal no expresa CDX2 En resumen, hemos determinado que LGR5
aumenta notablemente en IM. En este estudio, se investigó además las características moleculares de estos LGR5
+ células en IM mediante el examen del perfil de expresión de varios marcadores de ISC. En particular, se encontró que los marcadores de ISC-incluyendo OLFM4
y EPHB2
, se asocian positivamente con el CDX2
expresión en tejidos no tumorales gástricas. Este hallazgo fue confirmado en lesiones en el estómago con o sin metaplasia, lo que demuestra que OLFM4 y expresión EPHB2 aumentaron gradualmente con la progresión metaplásico. Por otra parte, el ARN de hibridación in situ reveló que LGR5
+ células coexpresan varios marcadores ISC y quedó confinado a la base de las glándulas de metaplasia, que recuerda a la de criptas intestinales normales, mientras que los de las glándulas antrales normales expresadas ninguno de estos marcadores. Además, un gran número de células que expresan marcadores ISC fueron distribuidos difusamente en adenomas gástricos, lo que sugiere que estos marcadores pueden facilitar la tumorigénesis gástrico. Además, el esófago de Barrett (BE) -que es histológicamente similar a intestinal metaplasia-exhibió una distribución similar de los marcadores de ISC, lo que indica la presencia de una población de células madre con potencial de diferenciación intestinal. En conclusión, hemos identificado que LGR5
+ en las células IM gástrica y ser marcadores ISC coexpress, y exhiben el mismo perfil de expresión como las que se encuentran en las criptas intestinales normales. Tomados en conjunto, estos resultados implican una población de células madre intestinales-como en la patogénesis de la mensajería instantánea, y proporcionan una base importante para la comprensión del desarrollo y mantenimiento de esta enfermedad
, que puede entonces avanzar a displasia epitelial gástrica o carcinoma. [2] Una variedad de alteraciones genéticas y epigenéticas han sido implicados en la patogénesis de la IM humana. [3] Además, a largo plazo inducida por IM expresión CDX2 ha sido demostrado que conducen a cáncer gástrico en ratones transgénicos, lo que indica que sí IM juega un papel importante en la génesis de carcinoma gástrico. [4]
. pylori
es suficiente para revertir IM, sin embargo, otros han encontrado que una proporción significativa de pacientes con IM sigue presente incluso después de la erradicación efectiva. [5] IM se cree que es el "punto de no retorno" en el histológico cascada de gastritis crónica al adenocarcinoma; [6] por lo tanto, los esfuerzos para comprender los mecanismos moleculares que regulan el establecimiento y mantenimiento de la mensajería instantánea son cruciales para el desarrollo de estrategias para interrumpir la carcinogénesis gástrica. Por ejemplo, la autorregulación CDX2 se sugiere tener un impacto importante en la estabilidad de las lesiones de mensajería instantánea. [7] Mientras criptas de mensajería instantánea en el estómago humano son clonales y contienen células madre multipotentes, [8] que sigue siendo poco conocida si las células madre gástricas nativas son la fuente inicial de la metaplasia, o si sólo sirven para mantener las lesiones establecidas.
como marcador de células madre en el epitelio intestinal. [9] Un estudio de trazado de linaje más tarde reveló que LGR5
+ células son células madre multipotentes responsables de la renovación del epitelio gástrico en los ratones. [10] Nuestro grupo demostró previamente que un pequeño número de LGR5
+ células también residen en la parte inferior de las glándulas antrales humanos y aumentar de forma espectacular en las lesiones de mensajería instantánea. [11] Estos resultados nos llevaron a especular que LGR5
mayo ser un marcador de células madre intestinales (ISC) que participan en el mantenimiento de IM
.
expresión en comparación con el epitelio escamoso normal, y sugiere la presencia de un LGR5
+ las células madre en BE. [13]
, incluyendo PROM1
[14], IMC1
[15], LRIG1
[16], y ascl2
, que fue identificado como un factor de transcripción para controlar el destino de células madre intestinales. [17] Además, OLFM4
[17] y EPHB2
[18] son también altamente expresado en los CSI. En este estudio, encaminado a descubrir marcadores ISC adicionales implicados en la génesis y mantenimiento de IM gástrica y BE, y examinar su colocalización con LGR5
+ células por ARN hibridación in situ para revelar aún más la molecular características de LGR5
+ en las células IM con respecto al fenotipo de células madre intestinales similares.
ARN hibridación in situ
, ascl2
, OLFM4
, y EPHB2
se realizó con el kit de ensayo de diagnóstico RNAscope FFPE (Advanced Cell, Inc. , Hayward, CA, EE.UU.) como se describe anteriormente. [11] mancha positiva se definió como la presencia de puntos puntiformes de color marrón en el núcleo y /o citoplasma. La ubiquitina C y bacteriana dapB
genes sirvió como controles positivos y negativos, respectivamente.
extracción de RNA y cuantitativa en tiempo real PCR
), Hs00362096_m1 ( EPHB2
), Hs00270888_s1 ( ascl2
), Hs00197437_m1 ( OLFM4
), Hs01009250_m1 ( PROM1
), Hs00394267_m1 ( LRIG1
), Hs00995536_m1 ( IMC1
), Hs00178027_m1 ( DCLK1
), Hs010780810_m1 ( CDX2
), Hs00212584_m1 ( CLDN18
), y Hs0275899_g1 ( GAPDH
). GAPDH
sirvió como control endógeno.
La transfección de CDX2
El análisis estadístico
se evaluó mediante análisis de regresión lineal. Las diferencias medias entre los grupos de muestras gástricas FFPE se evaluaron mediante ANOVA de una vía. Las comparaciones entre grupos después de la transfección de CDX2 Hoteles en líneas celulares de cáncer gástrico se realizaron utilizando Estudiante t-pruebas
. Los resultados se consideraron significativos cuando p Hotel < 0.05.
Resultados
+ células en las lesiones de mensajería instantánea de estómago humano. [11] Esto nos llevó a la hipótesis de que éstos LGR5
+ células pueden actuar como células madre auto-renovación para ayudar en el mantenimiento y la propagación del epitelio metaplásico en la mucosa gástrica. Por lo tanto, el objetivo fue identificar marcadores adicionales ISC que se correlacionaron con CDX2
expresión en IM. Para esto, hemos medido los niveles de expresión de CDX2 Opiniones y ocho ISC markers- LGR5
, ascl2
, OLFM4
,
, DCLK1
, LRIG1
, y IMC1
-en tejido gástrico normal. Los tejidos examinados mostraron una amplia gama de CDX2
niveles, que representan los diversos grados de mensajería instantánea, ya que CDX2
expresión se correlaciona positivamente con la progresión de IM (Figura 1A). Se encontraron tres marcadores ISC que se correlaciona con CDX2
expresión: OLFM4
, EPHB2
, y IMC1
. En particular, OLFM4 gratis ( p Hotel < 0,0001, r 2 = 0,56) (Figura 1B) y EPHB2 gratis ( p
< 0,0001, r 2 = 0,52) (figura 1C) mostraron una fuerte correlación positiva con CDX2
, mientras que IMC1
una correlación inversa ( p =
0,0002, r 2 = 0,42) (figura 1D). No se encontró asociación significativa con CDX2
expresión se identificó con los otros cinco marcadores ISC (S1) Fig.
2. la expresión de marcadores de ISC se correlaciona con la progresión IM
y EPHB2
con IM, se seleccionaron cuatro tipos de tejidos gástricos histológicamente distinta; mucosa antral normal sin IM (n = 4), la gastritis crónica activa sin IM (n = 3), gástrico y de tipo intestinal mixta (tipo GI) IM (n = 6), y el tipo exclusivamente intestinal (tipo I) IM (n = 5) (Fig 2A). Claudin-18 es la proteína de unión estrecha más altamente expresado en el estómago. Como era de esperar, los análisis revelaron que la claudina-18 expresión disminuida con las crecientes grados de IM ( p Hotel < 0,0001) (Figura 2B), mientras que aumentó CDX2
expresión ( p
< 0,0001) (Fig 2C). También se encontró que OLFM4
y niveles EPHB2
aumentado constantemente con cada lesión posterior, lo que confirma que estos marcadores están estrechamente relacionados con la progresión de mensajería instantánea ( p = 0,008
y 0,001, respectivamente; Fig 2D y 2E). Por el contrario, IMC1
y LRIG1
expresión mostraron una tendencia a disminuir con la progresión de la IM. ( p = 0,002
y 0,0006, respectivamente; la figura 2F y 2G)
+ células de metaplasia intestinal colocalize con otros marcadores ISC
y ISC marcadores de mensajería instantánea, hemos examinado si su coexpresión por ARN hibridación in situ. La expresión de LGR5
, ascl2
, EPHB2
, y OLFM4
fueron examinados por primera vez en una sección del intestino delgado humano normal para validar esta técnica, y se encontró que localizar específicamente a las células dentro del nicho de células madre de las criptas intestinales como se esperaba (S2 Fig). Desde LGR5
+ células de las criptas intestinales normales también expresan marcadores de ISC, que la teoría de que LGR5
+ células en IM podría también exhiben un patrón de expresión similar. Por lo tanto, se repitió el procedimiento en secciones consecutivas de especímenes submucoso de disección endoscópica (n = 5), cada uno de los cuales contenía múltiples focos de GI o de tipo I IM entre el tejido no tumoral. Un pequeño número de LGR5
+ células en la base de las glándulas antrales normales carecían de expresión de los marcadores de ISC (figura 3A), mientras que los de tipo I-IM mostraron expresado los tres marcadores (Figura 3B) . Por otra parte, las lesiones de tipo IM-GI muestran el mismo perfil de expresión en general a excepción de que la expresión de marcadores de CAI se encuentra por encima de las glándulas gástricas restantes, en lugar de limitarse a las zonas basales (Fig S3). Este patrón de expresión se observó consistentemente en todas las muestras. Estos hallazgos indican que LGR5
+ células en IM difieren de las de antro normal, en la expresión de marcadores de ISC que normalmente están restringidos a las células dentro de las criptas intestinales. Curiosamente, IM deriva de las glándulas fúndica, donde LGR5
+ células son normalmente no está presente, producen los mismos resultados (Fig S4). Por lo tanto, parece probable que la población de LGR5
+ en las células IM no son el resultado de la proliferación de las preexistentes LGR5
+ células, sino que es más bien una aparición de LGR5
+ células con potencial de diferenciación adquirida, lo que sugiere que una población de células madre intestinales-como se establece en la mensajería instantánea. Además, adenomas gástricos (n = 5) también expresaron altos niveles de marcadores de ISC a lo largo de las lesiones, en lugar de limitarse a las criptas glandulares (figura 3C). Como se muestra en la figura 3, esta acumulación de células marcadoras que expresan ISC sobre la metaplasia de secuencia displasia es implicativo de la participación de las células de tipo madre intestinales en la tumorigénesis gástrico y estudios adicionales para investigar la relación entre los marcadores de células madre intestinales y el desarrollo de tumores gástricos se sin duda justificada.
, OLFM4
, EPHB2
, y PROM1
mediante análisis de QRT-PCR (figura 4A). De manera significativa, tanto BE y adenocarcinomas expresaron niveles más altos de los cuatro marcadores de ISC, en comparación con la de epitelio escamoso normal (Fig 4B, 4C, 4D y 4E). Mientras que LGR5
y ascl2
no mostró cambios significativos a partir del análisis de RT-PCR, probablemente debido al bajo número de copias de las transcripciones, ARN hibridación in situ mostró una población de células claras con LGR5
, ascl2
, y OLFM4
expresión en el cruce de las glándulas gástricas y metaplasia, que recuerda a la de tipo gastrointestinal IM (figura 4F, 4G, 4H, 4I y 4J).
+ células son identificadas como células madre intestinales similares a multipotentes en ratones [10] y existen en el antro gástrico humano [11], que es plausible pensar que la mensajería instantánea podría desarrollarse a partir de esta población celular. Sin embargo, sigue habiendo una posibilidad de que otra población de células madre podría ser la base de este proceso. Por ejemplo, Sox2
+ células también han sido identificados como distintas células gástricas del tallo, y la población de células etiqueta exclusivos para aquellos con LGR5
expresión. [21] La transdiferenciación puede también dar lugar para células de metaplasia. Spasmolyitc que expresa el polipéptido metaplasia-en la que las glándulas de tipo pilórico aparecen en la mucosa oxínticas surgen de las células principales maduros, [22] en lugar de LGR5
expresando células. [23] En efecto, transgénico CDX1
o CDX2
expresión tiene por resultado el desarrollo de IM derivado de las células parietales en ratones transgénicos. [24] por lo tanto, sigue siendo difícil de alcanzar si IM es una consecuencia de la reprogramación de células madre intestinales o la transdiferenciación de células con adquirida ISC-como propiedades. [12, 25]
y EPHB2
con más intestinalization de la mucosa gástrica. Junto con el aumento de los niveles de CDX2
que inducen la diferenciación intestinal y fenotipo, estos patrones de expresión sugieren una conversión total de la población de células madre hacia un fenotipo de células madre intestinales más parecido. Por otra parte, la correlación inversa inesperada de IMC1
y LRIG1
con IM necesita más estudios para confirmar este resultado y para aclarar sus implicaciones clínicas.
. erradicación de H. pylori
tiene el potencial de prevenir el cáncer gástrico, [29] y podría atenuar la progresión de las lesiones gástricas precancerosas, tales como mensajería instantánea. [30, 31] Sin embargo, una vez establecido, parece que H
. pylori
erradicación no puede evitar completamente el cáncer gástrico. [6] De hecho, aproximadamente el 80% de los sujetos con IM no mostró ningún cambio o la progresión de IM después del tratamiento con antibióticos. [31] Además, un meta-análisis concluyó que H
. erradicación de H. pylori
tiene ningún efecto sobre IM gástrica. [32] Esta irreversibilidad de IM podría explicarse en parte por el mantenimiento de CDX2
expresión a través de un bucle de autorregulación que es independiente de desencadenante inicial, el mantenimiento . el fenotipo intestinal [33] Se reveló además que LGR5
+ células en la base de las glándulas de metaplasia expresar consistentemente otros marcadores ISC, indicativos de un fenotipo de células madre intestinales similares. Creemos que esta población estable de células madre puede proporcionar una explicación adicional de la naturaleza de larga duración de la mensajería instantánea. Además, las estrategias terapéuticas suficientes para dirigirse específicamente a la LGR5 población
+ celular combinado con H
. erradicación de H. pylori
potencialmente podría socavar la estabilidad de mensajería instantánea, por lo tanto acelerar el restablecimiento de la mucosa gástrica normal.
+ células con expresión de los marcadores de ISC. Este hallazgo es coherente con un informe anterior muestra que LGR5
expresión fue significativamente elevado en BE, y que es el origen de la población de células de metaplasia probable de este. [13] Más recientemente, LGR5
+ se identificaron las células en el medio de las glándulas de Barrett por hibridación in situ y se sugieren para actuar como células madre, ya que presentan tanto la diferenciación gástrica e intestinal. [34] también encontramos LGR5
+ células en las áreas entre las glándulas gástricas y metaplasia en BE, que corresponden a la media de las glándulas de Barrett. Además, la presencia de marcadores de CAI en el LGR5
+ población celular más compatible con su potencial de diferenciación intestinal. Por lo tanto, sobre la base de estos resultados, parece razonable sugerir que LGR5
+ células en función probable que las células madre que mantienen el fenotipo intestinal de BE, similar a la observada en IM.
, fuerte expresión se detecta en IM. [35, 36] Además, los ratones transgénicos han demostrado que CDX2
expresión por sí sola es suficiente para inducir IM [37 , 38], lo que sugiere que CDX2
puede también facilitar el desarrollo de la población de células madre con un fenotipo intestinal. Por lo tanto, hemos examinado si CDX2
está directamente implicada en la expresión de los marcadores de ISC: LGR5
, ascl2
, OLFM4
, y EPHB2 gratis (S5 figura). Sin embargo, los experimentos de transfección reveló que sólo el EPHB2
fue marginalmente afectada por CDX2
expresión. Ciertamente, estos datos deben interpretarse con precaución, ya que se obtuvieron en líneas celulares de GC con diferentes propiedades biológicas de la de las células madre epiteliales gástricas o intestinales no tumorales. Sin embargo, parece probable que los factores de señalización adicionales junto con el CDX2 ¿Cuáles son esenciales para inducir la expresión de marcadores de ISC.
+ células en IM gástrico y ser marcadores coexpresan ISC, lo que es indicativo de una población de células madre intestinal similar que sustituye a las células madre gástricas preexistentes. Este hallazgo parece proporcionar una clave importante para comprender el mecanismo subyacente a la persistencia de mensajería instantánea después de H
. pylori
erradicación. Por otra parte, nuestros resultados sugieren LGR5
+ células son un objetivo prometedor para revertir la mensajería instantánea, y potencialmente prevenir su progresión en cáncer gástrico.
Apoyo a la Información
S1 Fig. La correlación de marcadores de células madre intestinales (CAI) con niveles CDX2
en tejidos no tumorales gástricas.
Correlación se encuentra entre los CDX2
de expresión y algunos ISC marcadores como LGR5 gratis (r 2 = 0,01, p = 0,59
), ascl2 gratis (r 2 = 0,01, p = 0,59
) , PROM1 gratis (r 2 = 0,11, p
= 0,08), LRIG1 gratis (r 2 = 0,06, p
= 0,21) y DCLK1 gratis (r 2 = 0,09, p = 0,11
)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s001 gratis ( PPTX)
S2 Fig. Visualización de marcadores de células madre intestinales por ARN hibridación in situ (ISH).
ARN ISH se realiza en una fijados en formalina y embebidos en parafina de muestras de intestino delgado. (A, B) Un grupo de LGR5
+ células madre se identifican en la parte inferior de todas las criptas, entremezcladas con las células de Paneth. Otros marcadores de células madre intestinales, como ascl2 gratis (C, D), EPHB2 gratis (E, F), y OLFM4 gratis (G, H) también se encuentran a limitarse a las bases de las criptas. Ampliación: A, C, E, G × 100; B, D, F, H × 400
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s002 gratis (PPTX)
S3 Fig. Expresiones de marcadores de células madre intestinales en el tipo GI IM.
Restantes glándulas gástricas se encuentran con frecuencia en las zonas basales de tipo gastrointestinal IM (A y B). ARN ISH muestra que LGR5 gratis (C) y EPHB2 gratis (D) expresiones se localizan por encima de las glándulas gástricas. Curiosamente, OLFM4
(E) la expresión se observa en las glándulas gástricas, así aunque su intensidad es mucho más débil que en las glándulas de metaplasia. Cuando estas glándulas gástricas desaparecen a medida que se desarrolla IM (A y F), la distribución de todos los LGR5 gratis (G), EPHB2 gratis (H) y OLFM4 gratis (I) está estrictamente limitado a las áreas basales. Las flechas indican las glándulas gástricas restantes. Ampliación: A × 40; B, C, D, E, F, G, H, I × 200
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s003 gratis (PPTX)
S4 Fig. marcadores de células madre intestinales en metaplasia intestinal (IM) del corpus gástrico.
(A y B) un pequeño foco de IM en el medio de glándulas fúndicas, indicadas por las flechas, muestra los mismos patrones de expresión de
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s004 gratis (PPTX)
S5 Fig. Efecto de CDX2
en la expresión de células madre intestinal (ISC) marcadores en el cáncer gástrico (GC) líneas celulares.
Transfección de CDX2
en cuatro líneas celulares de GC, MKN74 (A ), MKN28 (B), SNU484 (C) y SNU668 (D) aumenta significativamente la cantidad de mRNA de CDX2
(**, p
< 0,01; ***, p Hotel < 0,005). El EPHB2
expresión es sólo marginalmente mejorada por la expresión de CDX2
en tres de cuatro líneas de células GC (***, p Hotel < 0,005). No se diferencia se encuentra en los niveles de LGR5
, ascl2
, y OLFM4
a CDX2