Korupciou polymeraseη expresie proteínov predpovedá liečebnú odpoveď a prežitie pacientov s metastatickým adenokarcinómom žalúdka liečení chemoterapiou na báze oxaliplatiny

Expresia DNA polymeraseη proteín predpovedá liečebnú odpoveď a prežitie pacientov s metastatickým adenokarcinómom žalúdka liečení chemoterapiou na báze oxaliplatiny
abstraktné
pozadia
DNA polymerázu N (pol N) je schopný obísť DNA adukty vytvorené cisplatina alebo oxaliplatinou a je spojená s bunkovou toleranciu voči platiny. Predchádzajúce štúdie ukázali, že defektné pol η za následok zvýšenú citlivosť cisplatina alebo oxaliplatinu v niektorých bunkových línií. Účelom tejto štúdie bolo skúmať úlohu expresie pol η proteínov v metastatického adenokarcinóme žalúdka.
Metódy
Štyri adenokarcinómom žalúdka bunkové línie boli vybraní, aby preskúmala vzťah medzi expresiou pol η proteínov a citlivosti oxaliplatiny westernovým prenosom a MTT test. boli analyzované Osemdesiat metastatické pacienti adenokarcinómom žalúdka liečení FOLFOX alebo XELOX režimom v prvej línii chemoterapie, čo zodpovedá predčistenie formaldehydom pevné nádorové tkanivá zaliatych parafínu boli použité na detekciu expresie pol N proteínu imunohistochemicky. bol analyzovaný vzťah medzi expresiou pol N proteínu a klinický obraz a výsledky týchto pacientov. Výsledky
pozitívny lineárny vzťah medzi expresiou pol N proteínu a 48 h hodnoty IC50 oxaliplatiny v štyroch žalúdočných nádorových bunkových línií bola pozorovaná. Pozitivita expresia pol N proteín bol silne spojený so zlou odpoveďou na liečbu, rovnako ako kratšie prežitia u oboch jednorozmerných (8 oproti 14 mesiacov; P < 0,001) a multivariačný (pomer rizika, 4,555, 95% interval spoľahlivosti, 2,461-8,429; P. < 0,001) analýza v osemdesiatich metastatických pacientov s adenokarcinómom žalúdka
Závery
Naša štúdia ukazuje, že polη je prediktívne faktor liečebné odpovede a prežitia pacientov s metastatickým adenokarcinómom žalúdka liečených FOLFOX alebo XELOX ako chemoterapia prvej línie. Preto sa potvrdzuje hodnotu polη v štúdiách s potenciálnymi dizajnu je povinná.
Pozadie
rakovina žalúdka je štvrtým najbežnejším typom rakoviny po celom svete, s 603,003 nových prípadov medzi mužmi a 330,290 nových prípadov u žien ročne [1]. Ide o druhú najčastejšou príčinou úmrtí súvisiacich s rakovinou (700.000 úmrtí ročne), pričom takmer dve tretiny prípadov dochádza v rozvojových krajinách a 42% v Číne sám [2]. Operácia zostáva hlavný potenciálny spôsob na liečbu ochorení; Avšak, približne 84% pacientov s karcinómom žalúdka bude vyvíjať byť pokročilým ochorením, s 30% lokálne pokročilých prípadov, 30% metastatické ochorenie, pri diagnóze, a 24% recidívy ochorenia [3]. Literatur ukázali, že stredná doba prežitia bola iba 3-4 mesiacov u pacientov s pokročilou rakovinou žalúdka bez chemoterapie. Nová generácia chemoterapeutických činidiel, ako je oxaliplatina môže predĺžiť prežitie u pokročilého karcinómu žalúdka v intervale 10 až 12 mesiacov; Navyše chemoterapia môže tiež zlepšiť kvalitu života [4-12]. Terapeutický efekt závisí predovšetkým na reakciu drog nádoru počas chemoterapie prvej línie, pretože zatiaľ len jedna malá štúdia fázy III s 120 prípadmi vykazovali mierne zlepšenie prežitia od irinotekanom v monoterapii nad podpornou starostlivosťou samotného [13]. Bohužiaľ, vzhľadom k rezistencii voči liekom miery odozvy len 30 až 50% môže byť dosiahnuté, hoci administráciu novej generácie liekov, ako je docetaxel, oxaliplatina, kapecitabín, irinotekan, S1, etc pacientov s pokročilou rakovinou žalúdka ako prvej línii liečby [3]. To znamená, že najmenej 50% pacienti musia podstúpiť neúčinná liečba, ktorá môže nielen znížiť kvalitu jednotlivých života pacientov, ale aj zvýšiť ekonomickú záťaž. Tak, ako predpovedať reakciu chemoterapeutík v karcinómu žalúdka je veľmi dôležitý vedecký problém.
Oxaliplatina je treťou generáciou platina, hrá dôležitú úlohu v chemoterapii pre gastrointestinálne rakovinu. Oxaliplatinou kombinovanom režime, ako je oxaliplatinou a 5-FU alebo 5-FU ako lieku bolo preukázané, že byť aktívny v cca 40-50% všetkých pacientov s pokročilou rakovinou žalúdka [14-16]. Oxaliplatina a cisplatina zdieľajú podobný mechanizmus, a spôsobiť mono-adukty a intra-reťazcoch alebo inter-mostíkov medzi vláknami v dvojitej špirály DNA, ktoré silne blokujú syntézu DNA [17-19]. Keď sa to stane, niektoré cesty DNA opravy poškodenia môže zapnúť, vrátane opráv nukleotidov excesie (NER), génovej reparácia (MR), homológnej rekombinácie (HR), syntézy translesion DNA (TLS) [20]. Tieto aduktu opravy vyskytujú predovšetkým prostredníctvom NER [21]. TLS je ďalší alternatívou spôsob, ako opraviť tieto lézie, ktoré sa vykonáva hlavne pomocou DNA polymerázy N [22]. Polymeraseη (Polη), jeden z lézií sa replikujúce enzýmy, obsahuje správny nukleotid cez lézie, ako je platinový od aduktu TLS a pokračuje predĺženie reťazca, zatiaľ čo klasické Pols nemôže [23]. Polη má najvyššiu účinnosť obchádzať Pt-GG vnútri vláknami diadducts spôsobené platiny medzi týmito lézií sa replikujúce enzýmy, s obmedzenou presnosťou [23, 24]. ukázali nedávne pokusy, že absencia polη vedie k štatisticky významnému zvýšeniu citlivosti v cisplatinou pri porovnaní polη-null Xeroderma pigmentosum variant ľudské fibroblasty s tými polη-exprimujúce [25]. Toto vylepšenie je tiež pozorovaný, keď boli bunky ošetrené karboplatiny a oxaliplatiny [25]. Nedávne údaje ukazujú, že polη hladina mRNA v negatívnej korelácii s cisplatinou citlivosti rakoviny nemalých pľúcnych buniek (NSCLC), bunkové línie [26].
V tejto štúdii sme správu prvýkrát vzťah medzi expresiou proteínu polη a citlivosti oxaliplatinou žalúdočných rakovinových bunkových línií a významu, že v predikcii odpovede na liečbu a prežitie pacientov s metastatickým karcinómom žalúdka liečení chemoterapiou na báze oxaliplatiny.
materiály a metódy bunkové línie
rakovinou žalúdka bunkových línií, vrátane SGC7901 , AGS, MKN45 a MGC803, bol darovaný profesorom Libing Song od štátu kľúčové laboratórium onkológie v južnej Číne (Cancer Center Slnko ešte-sen University). Všetky bunkové línie boli udržiavané v médiu RPMI 1640 (Gibco) doplnenom 10% fetálneho teľacieho séra (Gibco), ale s MKN 45 s 20% fetálnym bovinným sérom.
Pacienti a vzorky
pacientov v našej klinickej databáze s chemoterapiou naivný , histologicky dokázaný metastatický karcinóm žalúdka boli zaradení do štúdie. Všetci pacienti mali dostávať FOLFOX (fluóruracil, leukovorín a oxaliplatinu) alebo XELOX (kapecitabín a oxaliplatina) režim ako chemoterapia prvej línie pri Cancer Center Sun Yat-sen University a parafínových vzoriek pred liečbou formalínu je stanovená na základe gastroskop biopsiou alebo paliatívnu operácie boli získané. Histopatologické vlastnosti boli potvrdené zaslepeným preskúmanie pôvodných patologických snímok. Klasifikácia TNM bol použitý pre patologické staging a klasifikácie Svetovej zdravotníckej organizácie bol použitý pre patologické triedenie. Ďalšie kritériá pre zaradenie zahrnuté veku medzi 18-80, Eastern Cooperative Oncology Group stav (ECOG) Výkon 2 alebo menej, druhé línie chemoterapie alebo nie, nie ožarovanie. Všetci pacienti za predpokladu písomný informovaný súhlas; sme získali samostatný súhlas pre použitie vzoriek. Schválenie štúdie bola získaná z nezávislých etických komisií v Cancer Center Sun Yat-Sen University. Štúdia bola vykonaná v súlade s etickými štandardami Svetovej lekárskej asociácie Helsinskej deklarácie o.
Follow-up a hodnotenie
Pacienti boli sledovaní po telefóne alebo písmenom komunikáciu raz ročne po celkovú dobu 4 rokov. Celková doba prežitia bola definovaná ako čas od dátumu potvrdenou diagnózou na smrť a cenzurované k dátumu posledného kontaktu pre prežívajúceho pacienta. Reakcia choroba bola hodnotená podľa hodnotiacich kritérií Response in Solid nádorov (riečisku kritérií) [27].
Cytotoxicity
rast buniek inhibícia bola stanovená 3- (4,5-dimetyl-thiazol-2-yl) -2 , 5-difenyltetrazoliumbromidu testu (MTT test). V stručnosti, bunky boli schovať v 96-jamkových doštičiek a ponechané prichytiť sa cez noc. Po 48 hodinách inkubácie liečivá v rôznych koncentráciách (37 ° C), MTT reakčného činidla (5 mg /ml, 20 ul /jamka) bol pridaný do každej jamky a inkubuje sa počas ďalších 4 hodín. Doštičky potom boli stočené (1500 g, 5 minút) a supernatant bol odstránený. Bunkové pelety boli rozpustené v 200 ul DMSO. Absorbancia bola stanovená za použitia metódy 550 Microplate Reader (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) pri vlnovej dĺžke 570 nm, s odpočítaní pozadia pri vlnovej dĺžke 630 nm. Všetky experimenty boli vykonané v troch opakovaniach. Koncentrácia potrebná na inhibíciu rastu buniek o 50% (IC50) bola vypočítaná z kriviek prežitia za použitia metódy Bliss [28].
Western blotting
Bunky boli premyté ľadovo chladným fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátom a zozbierané v odbere vzoriek pufri [ ,,,0],62,5 mmol /l Tris-HCl (pH 6,8), 2% SDS, 10% glycerolu a 5% 2-h-mercaptoetanolu]. Koncentrácia proteínu bola stanovená testom Bradford (Bio-Rad Laboratories). Rovnaká množstvo proteínov, boli nanesené na 7,5% polyakrylamidovom gélu SDS (SDS-PAGE), oddelených elektroforeticky a prenesené na PVDF membrány. Po blokované v 5% netučného mlieka v TBST pufri (10 mmol /l Tris-HCl, 150 mmol /l NaCl, a 0,1% Tween 20, pH 8,0) po dobu 1 hodiny pri teplote miestnosti, bola membrána inkubovaná s anti-polη králičie protilátkou (1: 400; abca). Polη expresia bola detekovaná s chrenovou peroxidázou konjugovanej kozej anti-králičie IgG a zvýšenej chemiluminiscencie. Anti-α-tubulín protilátka bola použitá ako kontrola nanášania.
ImageJ softvér od National Institutes of Health (NIH) bolo použité na kvantifikáciu proteínu.
Imunohistochémia
Imunohistochemické (IHC) analýza bola vykonaná pre detekciu expresie polηprotein v 80 ľudských nádorových tkanív žalúdka. Stručne, tkanivové rezy boli zbavené parafínu v xyléne pri 37 ° C počas 20 minút a rehydratovaný. Endogénne peroxidu bola blokovaná inkubáciou úseky s 3% peroxidu vodíka v metanole po dobu 20 minút pri teplote 37 ° C. Potom boli rezy ponorené do 10 mM citrátového pufru (pH 6,0) a v mikrovlnnej rúre na antigénne vyhľadávanie, nasledovala inkubácia s králičím anti-polη (1: 100; abca) cez noc pri 4 ° C. Po umytí sa tkanivové rezy boli spracované s chrenovou peroxidázou značené sekundárne protilátky po dobu 30 minút. Rezy boli vyvinuté s Diaminobenzidine Tetrahydrochloride (DAB) a kontrastne hematoxylínom.
Analýza imunohistochémia v sa naša štúdia vykonaná dvoma nezávislými pozorovateľmi na základe podielu pozitívne zafarbených nádorových buniek. V prípade, že je rozdiel medzi týmito dvoma pozorovateľmi, tieto rezy boli opätovne prešetriť ako vyšetrovatelia za použitia Mnohohlavá mikroskopu. Nádory s viac ako 5% POLη pozitívnych rakovinových buniek boli považované za pozitívny (nucleus farbenie), v opačnom prípade negatívnej.
Štatistická analýza
prijímač pracujúci charakteristikou (ROC) analýzou krivky a Fisherovho exaktného testu boli vykonané pre výber IHC Pol -pozitívne hodnota s najvyššou presnosťou. 2 x 2 stôl bol konštruovaný nesúce senzitivita, špecificita, pozitívne a negatívne prediktívne hodnoty, a presnosť bola vypočítaná ako podiel pravdivo pozitívnych a negatívnych pacientov pravých z celých pacientov. Všetky štatistické analýzy boli vykonané pomocou SPSS 15,0 štatistický softvér balíček (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Hodnota P < 0,05 bola považovaná za štatisticky významnú. Kaplan-Meierovej analýzy s log-rank testovania bola použitá pre jednorozmerných analýzach. Premenné ukazujúci trend pre asociáciu s prežitím (P 0,05) boli vybrané pre zahrnutie do konečnej mnohorozmerné Coxovho modelu proporčne rizík. Vzťah medzi polη prejavu a patologickým charakteristikám bola skúmaná testom chi-kvadrát a Fisherovho exaktného testu.
Výsledky
Polη vyjadrenie koreluje s citlivosťou oxaliplatinou bunkových línií rakoviny žalúdka
oxaliplatiny citlivosť štyroch žalúdočných bunkových línií ( SGC7901, AGS, MKN45 a MGC803) boli detekované testom MTT bolo popísané vyššie. Endogénne polη expresie proteínov zo štyroch bunkových línií boli porovnané s navzájom westernovým prenosom a polovičné maximálne inhibičné koncentrácie (IC 50) hodnoty oxaliplatiny pre bunky boli je znázornené na obrázku 1. Výrazné a bol pozorovaný pozitívny vzťah, ako je znázornené na obrázku 2 v porovnaní polη expresie proteínov s hodnotami IC 50 oxaliplatiny. Obrázok 1 Expresia analýza POL N proteínu v žalúdočnej nádorových bunkových línií Western Blot a 48 h hodnoty IC50 pre oxaliplatiny buniek karcinómu žalúdka (umol /l).
Obrázok 2 korelácia medzi POL N expresiu a IC50 oxaliplatiny pre žalúdočné bunky .
charakteristiky pacientov
osemdesiat pacientov od januára 2005 do júla 2009 boli retrospektívne analyzované. Pacienti mali medián veku 54 (v rozmedzí 26.0-79.0), sa 49 samcov a 31 samíc. Iné klinické charakteristiky boli zhrnuté v tabuľke 1. Percento odpovedí (CR + PR) v prvej línii XELOX alebo FOLFOX chemoterapie bol 47,5%, miera klinického prínosu (CR + PR + SD) bola 77,5%. Časť z týchto pacientov (23/80) malo v druhej línii chemotherapy.Table 1 charakteristiky pacientov (N = 80)
charakteristický
No. chorých
%
vek (rokov)
Median
54,0
Rozsah
26,0-79,0
sex
Muž
49
61,3
Žena
31
38,7
performance status ECOG
0
36
45,0
1
42
52,5
2
2
2,5
primárne servery
Cardia
21
26,3
tela
18
22,5
dutine /pylorus
41
51,2
Metastatická miesta
pečeň
26
32,5
Lung
21
26,3
Peritoneum
19
23,8
Ostatné
14
17,4
patologické diferenciácie N0
G1
2
2,5
G2
26
32,5
G3
52
65,0
Treatment Odpoveď (prvý riadok)
CR
2
2,5
PR
36
45,0
SD
24
30,0
PD
18
22,5
druhej línie chemotherary režim
BSC
57
71,3
FOLFIRI
6
7.5
XELIRI
8
10,0
DX
6
7,5
TP Sims 3
3,7
CR, kompletná odpoveď; PR, čiastočná odpoveď; SD, stabilizácia ochorenia; PD, progresie ochorenia;
BSC, najlepšie podpornú liečbu; FOLFIRI, 5-fluracil a leukovorín a irinotekanu; XELIRI, kapecitabín a irinotekanu; DX, docitaxel a kapecitabín; TP, paklitaxel v kombinácii s cisplatinou.
Kritéria, ktoré nádorové tkanivá s viac ako 5% Polη-pozitívnych nádorových buniek bola definovaná ako IHC-pozitívne, má najvyššiu presnosť pri predikciu klinický prínos chemoterapii prvej línie
nádoru tkaniva osemdesiat metastázujúci pacientov s rakovinou žalúdka liečených FOLFOX alebo XELOX režimu boli použité pre detekciu expresie proteínu polη imunohistochemické (obrázok 3). Vzhľadom k tomu, percento nádorových buniek nukleových-farbenie vo všetkých prípadoch bol viac ako 10%, sme sa snažili vybrať IHC Polη-pozitívne hodnoty s vysokou presnosťou predpovedať klinický prínos chemoterapii prvej línie. Definovali sme deväť IHC-pozitívne hodnoty: ≥ 1%, ≥ 2%, ≥ 3%, ≥ 4%, ≥ 5%, ≥ 6%, ≥ 7%, ≥ 8%, ≥ 9%, a konštruované deväť 2 × 2 stolík. Tabuľka 2 je zobrazený ako príklad. Senzitivita, špecificita, pozitívna a negatívna prediktívna hodnota, a presnosť bola vypočítaná a použitá k tomu ROC krivky. Ako je uvedené v tabuľke 3 a na obrázku 4 rez v hodnote ≥ 5%, má najvyššiu presnosť (88,8%). Takže nádory s viac ako 5% POLη-pozitívnych nádorových buniek, boli považované za pozitívny (jadrá farbenie), inak je záporná. Obrázok 3 Expresia proteínu v POLη pokročilou rakovinou žalúdka, ako skúmať imunohistochemicky. A. negatívny vyjadrenie obraz v nádorovom tkanive (× 400). B. POLη proteín bol zistiteľný v jadre bunky žalúdočnej rakoviny (× 400). Výraz
Tabuľka 2 DNA polymerázy η proteín a klinická odpoveď na liečbu

Klinická porucha
klinický prínos
Celkový počet prípadov
Pol η (+)
16
7
23
Pol η ( -)
2
55
57
celkového počtu prípadov
18
62
80
≥ 5% Polη expresiu v nádorových bunkách sú definované ako pozitívne
tabuľku. 3 Presnosť, senzitivita, špecificita, pozitívna prediktívna hodnota a negatívna prediktívna hodnota podľa Polη IHC počítania percenta v predikciu odpovedi na chemoterapiu FOLFOX alebo XELOX režime
nádorové bunka pozitívne percent, znížiť off

Specificity

Sensitivity

PPV

NPV

Accuracy

1%
0.419
0.889
0.308
0.929
0.525
2%
0.500
0.889
0.340
0.940
0.588
3%
0.645
0.889
0.421
0.952
0.700
4%
0.823
0.889
0.593
0.962
0.838
5%
0.887
0.889
0.696
0.965
0.888
6%
0.887
0.778
0.667
0.932
0.863
7%
0.978
0.667
0.705
0.904
0.863
8%
0
0.389
1.000
0.849
0.863
9%
0
0.111
1.000
0.795
0.800
PPV pozitívna prediktívna hodnota; NPV, negatívne prediktívne hodnota.
Obrázok 4 receiver operating charakteristické krivky Polη IHC počítanie v predikciu odpovedi na chemoterapiu FOLFOX alebo XELOX režime.
Vzťah polη expresie s klinickými príznakmi metastatického karcinómu žalúdka
Ako je znázornené na Tabuľka 4 iba 23 z 80 prípadov (28,75%) malo polη proteínu pozitívny výraz (≥ 5% polη pozitívne nádorové bunky), 16 z 23 pozitívnych prípadov (69,56%) sa nepodarilo liečbu, naproti tomu iba 2 z 57 negatívnych prípadoch (3,51%) došlo k progresii ochorenia po FOLFOX alebo XELOX chemoterapii. Polη výraz silne koreluje s odpoveďou na liečbu na báze oxaliplatiny chemoterapiu metastatického karcinómu žalúdka (P < 0,001), zatiaľ čo to nie je spojené s vekom, pohlavím, primárne servery, metastatických miest alebo patologické diferenciácie levels.Table 4 Korelácia medzi POL N výrazu a patologickým charakteristiky pacientov s karcinómom žalúdka
charakteristický
POLη
χ2 testu
hodnota P <
br> Test
P hodnota Fisherov

Pozitívne
(n = 23)
Negatívne
(n = 57)



veku (y) Hotel < 60
16
37
0,690 0,797
≥ 60
7
20
Pohlavie
Muž
14
35
0,695
1,000
Žena
9
22
primárne servery
Cardia
10
11
0,084 0,102
telo
4
14
dutine /pylorus
9
32
Metastatická miesta
pečeň
11
15
0,247 0,269
Lung
5
16
Peritoneum Sims 3
16
Ostatné
4
10
patologických diferenciáciu
G1
2
0
0,068
0,107
G2
6
20
G3
15
37
Liečba Response
CR + PR + SD
7
55
< 0,001 Hotel < 0,001
PD
16
2.
ČR, úplnú odpoveď; PR, čiastočná odpoveď; SD, stabilizácia ochorenia; PD, progresie ochorenia.
Korelačný analýza Oštepár bola ďalej vykonaná s cieľom potvrdiť koreláciu medzi polη prejavu a patologickým funkcií. Pearson pohotovostný koeficient je ukázané, že hladiny polηexpression významne súvisí s odpoveďou (P 0,001)., Podobne, boli získané žiadne významné korelácie s inými faktormi (dáta nie sú uvedené)
Vzťah medzi polη expresiou a prežitie metastatického karcinómu žalúdka
Kaplan-Meierovej analýzy prežitia jednorozmerné bolo zistené, že pozitívny expresie polη v nádorových bunkách a reakcie zlé zaobchádzanie boli významne spojené s kratšou prežitie. Stredná doba prežitia u polη pozitívnych a negatívnych prípadov bolo 8 a 14 mesiacov v tomto poradí, ako je znázornené na obrázku 5 (log rank, P 0,001). Multivariačný analýzy prežitia (Cox regresný model) ukázala, že expresia polη bolo nezávislé prognostické faktory. 95,0% interval spoľahlivosti (CI) pre relatívneho rizika bol 2,461-8,429 (tabuľka 5). Tieto výsledky ukazujú, že expresia v nádorovom tkanive polη predpokladá kratšie prežitie. Žiadny vzťah bol zaznamenaný medzi prežitím a zvyškom klinicko-parametrov, ako je vek, pohlavie, primárneho nádoru miest, patologické diferenciácie a metastatický sites.Table 5 viacrozmerné analýzy celkového prežitia u karcinómu žalúdka
Faktory
Charakteristika
pomer rizika
95% CI
P hodnotu

Nepriaznivé
Priaznivé



Vek
≥ 60 Hotel < 60
0,956
0,570-1,602
0,863
histologického stupňa
Zle
Well /mierne
1,428
0,861-2,369
0,168
POL η
pozitívne
negatívne
4.555
2.461-8.429 Hotel < 0,001
CI, interval spoľahlivosti.
Obrázok 5 Kaplan-Meierove krivky s jednorozmerné analýzy (log-rank test) u pacientov s negatívnym POLη výrazom v porovnaní s pozitívnou POLη expresie nádorov.
Diskusia
tejto štúdii čiastočne odhalilo úlohu DNA polymeraseη ako opravy DNA proteínu v rakoviny žalúdka detekciou svoje vyjadrenie v štyroch žalúdočných rakovinových bunkových línií a 80 pacientov s metastatickým adenokarcinómom žalúdka, ktorí dostali FOLFOX alebo XELOX ako chemoterapii prvej línie. Výsledky ukázali, že hladina expresie polη v nádorových bunkových línií bola v korelácii s citlivosťou oxaliplatiny (obrázok 2). Pre nádorové tkanivá, pozitívne expresie dochádza iba na 28,75% prípadov (23 z 80), a výraz bol skromný. Avšak, silná korelácia bola zistená medzi polη prejavu a reakcie na liečbu, rovnako ako prežitie. Všetky výsledky preukázali, že polη pozitivita bola indikátorom zlé odpovede na liečbu a kratšie prežitia u pacientov s vyššie uvedenými nastaveniami.
DNA polymeraseη je kódovaný Polhem génom, ktorý je jedným z génov, 150 ľudských opravy DNA, ktorej výsledky prebehnutia v xeroderma pigmentosum variant (XP-V) syndróm, prejavujúci sa veľmi citlivosti na UV žiarenie a tendenciu k rozvoju rakoviny kože [29-31]. Polη je dôležitým lézie replikujúce enzým, ktorý sa replikuje v celej pyrimidínových dimérov zavedených UV žiarenia, aby sa zabránilo vysokej génovú mutáciu [32]. Okrem pyrimidínových dimérov, polη bolo preukázané, že po replikáciu cisplatinu zesítěných GG miest IAC [33]. Niektoré výskumy ukázali, že polη expresia bola korelované s precitlivenosťou na cisplatinu alebo oxaliplatiny v ľudské fibroblasty buniek a pľúc bunkových línií XP-V, a polη zdalo sa, že liečba odozvy prediktívneho markeru u pacientov s NSCLC s cisplatinou chemoterapiou na báze [26, 27] .
Menej je známe o úlohe polη u rakoviny žalúdka. Je to prvá štúdia na zistenie citlivosti oxaliplatiny v týchto štyroch žalúdočného karcinómu bunkových líniách (SGC7901, AGS, MKN45 a MGC803) testom MTT a expresie proteínu westernovým prenosom. Zistili sme významne lineárny vzťah medzi nimi. Naša štúdia bola do určitej miery v súlade s pozorovaním v rakovina pľúc bunkových línií Paolo Ceppo et al, keď to, čo oni boli detekovaný polη úrovni mRNA a cisplatinou citlivosť [27].
Potom sme restrospectively analyzovali expresiu proteínu polη v osemdesiatich pokročilým ochorením metastázujúce rakovinou žalúdka, ktorí dostávali FOLFOX alebo XELOX ako chemoterapia. Po prvé sme pozorovali, že percento nádorových buniek polη-farbenie vo všetkých 80 prípadov bolo viac ako 10%, a tak sme dosiahli ≥ 5% definované ako IHC pozitívne v závislosti na presnosti predikcie klinický prospech XELOX alebo FOLFOX chemoterapii. Vďaka tejto norme, iba 23 pacientov malo pozitívny výraz, pričom 7 z 62 prípadov klinického prínosu (CR + PR + SD) z chemoterapie a 16 z 18 PD prípadov. Miera expresie medzi klinickou skupiny dávok (7/62, 11,3%) a PD skupiny (16/18, 88,9%) bola významne odlišné (P 0,001). To ukazuje, že Polη pozitivita môže predurčiť, neefektívne chemoterapia XELOX alebo FOLFOX režimu. Výsledok bol v súlade s našou štúdiu na bunkách, ktoré Polη expresie negatívne koreluje s citlivosťou oxaliplatinou žalúdočných nádorových bunkových línií.
Našli sme významný prínos pre prežitie v polη negatívnych pacientov. Táto výhoda pravdepodobne pochádza z efektívnej terapie oxaliplatiny, vzhľadom k tomu, že polη bol silne koreluje s odpoveďou na liečbu. Je dobre známe, že účinné chemoterapia by zvýšilo kvalitu života pacientov s rakovinou žalúdka a zlepšenie prežitia; Náš výskum môže pomôcť predpovedať liečebnú odpoveď na báze oxaliplatiny chemoterapie a prežitie, a preto nedochádzalo k zbytočnému ošetrenie na začiatku.
Existuje niekoľko obmedzení našej štúdie. Prvá, to je retrospektívnej štúdii s malým počtom pacientov. V nastavenom štúdii, bola získaná žiadna významná súvislosť medzi polη prejavu a vekom, pohlavím a primárneho nádoru miest, metastatických miest alebo patologických diferenciácie na základe takýchto prípadoch číslom. Je možné získať významné výsledky v niektorých patologickým vlastnosťami, ako sú primárne servery alebo patologického diferenciácie (P hodnota blízka 0,05), ak je dostatok pacientov. Preto enlargeing číslo prípadu a vykonávanie prospektívnych štúdiách je povinná. Po druhé, pretože skúška presnosti bola vypočítaná podľa zadaných kritérií analýzou ROC krivky, naše výsledky potreboval validáciu v nezávislej kohorte. Po tretie, je expresia polη je relatívne nízka v karcinómu žalúdka, v dôsledku subjektívne chyba počítanie IHC môže byť väčší, čo pri predikciu odpovede na liečbu, môže mať vplyv na citlivosť a špecifickosť, je nutné k tomu presnejšie metódy. Forth, Je dobre známe, že odolnosť proti platina je veľmi komplikované, takže polη, ako jediný parameter, je ťažké predvídať reakciu terapia v presnom spôsobe.
Napriek obmedzenia, naše štúdie je jedným z niekoľkých pokusoch definovať kritériá pre in vivo chemosenzitivity z režimu oxaliplatiny obsahujúca využívajúce klinickú odpoveď ako referenčná štandard. To môže byť efektívny a úsporný spôsob, ako predpovedať liečebnú odpoveď.
Záver
Na záver, táto štúdia preukázala, že polη je významným prediktorom odpovede na liečbu u pacientov s metastatické rakovina žalúdka, ktorí podstupujú chemoterapiu FOLFOX alebo XELOX , Takáto značka by mohol pomôcť lekárom zvoliť optimálnu klinickú stratégiu pre pacientov s pokročilou rakovinou žalúdka. Okrem toho, multivariačný analýzy prežitie bolo zistené, že expresia polη bolo nezávislé prognostické faktory. Zistenie musia byť potvrdené vo väčšom prospektívnej štúdii pred aplikáciou v klinickej praxi.
Poznámky
Kai-Yuan Teng, Miao-zhen Qiu prispeli rovnakou mierou k tejto práci.
Skratky
GG :
guanín-guanín
CR:
úplnú odpoveď
DNA: deoxyribonukleová kyselina


FOLFOX:
fluóruracil, leukovorín a oxaliplatina
HR:
homológnej rekombinácie
mRNA:
messenger ribonukleovej kyseliny
IC 50:
koncentrácia pol inhibičný
IHC:
imunohistochémia


MMR:
nesúlad opravy
WB:
westernovým prenosom
MTT test:
3- (4,5-dimetyl-thiazol-2-yl) -2,5-difenyltetrazoliumbromidu test
NER:
nukleotidov vyrezanie Oprava

OS:
celkového prežitia
PD:
progresie ochorenia
Pol η:
polymerázu eta
PR: čiastočná odpoveď
SD:
stabilizácia ochorenia
Pt:
platinum
ROC:
receiver operating characteristic
TLS:
translesion syntézu


XELOX:
kapecitabín a oxaliplatiny
XPV :.
xeroderma pigmentosum variant
deklarácia
Poďakovanie
ďakujeme zamestnancov v oddelení klinickej onkológie v Sun Yat-sen University Cancer Center pre ich návrh a pomoc
Grantová podpora :. Národná prírodná Science Foundation grantu Číne 30672408, Guangzhou Bureau of Science and Technology dotácie 2006Z3-E0041 a Sun Yat-sen University 985 Program Začatie fond (Čína).
Autori ďalej len "pôvodné predložený súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy na autorov pôvodnej predložených súborov pre obrázky. Žiadne výhody, v akejkoľvek forme boli prijaté alebo budú prijaté z obchodného stranou spojenú priamo alebo nepriamo k predmetu nášho článku.

• Vyhodnotenie počítačovú podporu pre posudzovanie žalúdočné príznaky (ECASS):.? Protokol štúdie pre randomizovanej kontrolovanej trial
• Detekcia carcinoembryonic antigén messenger RNA v krvi za použitia kvantitatívnu real-time reverznej transkriptázy-PCR predvídať recidíve žalúdočné detekcie adenocarcinoma