espressione del DNA della proteina polymeraseη predice la risposta al trattamento e la sopravvivenza dei pazienti con adenocarcinoma gastrico metastatico trattati con l'espressione chemotherapy

DNA della proteina polymeraseη a base di oxaliplatino predice la risposta al trattamento e la sopravvivenza dei pazienti con adenocarcinoma gastrico metastatico trattati con chemioterapia a base di oxaliplatino
Abstract
sfondo
DNA polimerasi η (pol η) è in grado di bypassare addotti di DNA prodotti da cisplatino o oxaliplatino ed è associata con la tolleranza cellulare per platino. Studi precedenti hanno mostrato che difettoso pol η portato a una maggiore sensibilità cisplatino o oxaliplatino in alcune linee di cellule. Lo scopo di questo studio è stato quello di indagare il ruolo di espressione della proteina pol η in adenocarcinoma gastrico metastatico.
Metodi
Quattro linee cellulari di adenocarcinoma gastrico sono stati scelti per esplorare il rapporto tra l'espressione della proteina pol η e sensibilità oxaliplatino mediante western blotting e saggio MTT. Ottanta pazienti con adenocarcinoma gastrico metastatico trattati con FOLFOX o XELOX regime come chemioterapia di prima linea sono stati analizzati, corrispondente tessuti tumorali inclusi in paraffina fissati in formalina pretrattamento sono stati utilizzati per rilevare l'espressione della proteina pol η mediante immunoistochimica. Relazione tra l'espressione della proteina pol η e caratteristiche cliniche e l'esito di questi pazienti è stato analizzato.
Risultati
Una relazione lineare positiva tra l'espressione della proteina pol η e 48 valori h IC50 di oxaliplatino in quattro linee di cellule di cancro gastrico è stato osservato. Positività di espressione della proteina pol η era fortemente associata con una scarsa risposta al trattamento, così come più breve sopravvivenza a due univariata (8 rispetto a 14 mesi; P < 0,001) e multivariata (hazard ratio, 4.555; 95% intervallo di confidenza, 2,461-8,429; P. < 0,001) analisi in ottanta pazienti con adenocarcinoma gastrico metastatico
Conclusioni
nostro studio indica che polη è un fattore predittivo di risposta al trattamento e la sopravvivenza dei pazienti con adenocarcinoma gastrico metastatico trattati con FOLFOX o XELOX come chemioterapia di prima linea. Pertanto, confermando il valore di polη negli studi con i potenziali disegno è obbligatoria.
Sfondo
Il cancro dello stomaco è il quarto cancro più comune in tutto il mondo, con 603,003 nuovi casi tra gli uomini e 330,290 nuovi casi tra le donne per anno [1]. E 'la seconda causa più comune di morte correlate cancro (700.000 decessi all'anno), con quasi due terzi dei casi si verificano in paesi in via di sviluppo e il 42% nella sola Cina [2]. La chirurgia rimane il principale metodo potenziale per curare la malattia; Tuttavia, circa il 84% dei pazienti affetti da cancro gastrico si svilupperà per essere una malattia avanzata, con il 30% dei casi avanzati a livello locale, il 30% delle malattie metastatiche al momento della diagnosi, e le malattie il 24% di recidiva [3]. Le letterature hanno mostrato che la sopravvivenza mediana è stata di soli 3-4 mesi tra i pazienti con carcinoma gastrico avanzato senza chemioterapia. La nuova generazione di agenti chemioterapici, come oxaliplatino, può prolungare la sopravvivenza nel carcinoma gastrico avanzato per essere 10 a 12 mesi; Inoltre, la chemioterapia può anche migliorare la qualità della vita [4-12]. Effetto terapeutico dipende principalmente dalla risposta di farmaci per la chemioterapia del tumore durante la prima linea, perché finora solo un piccolo studio di fase III con 120 casi ha mostrato un beneficio di sopravvivenza modesto dalla monoterapia con irinotecan rispetto alla sola terapia di supporto [13]. Purtroppo, a causa della resistenza ai farmaci, solo il 30-50% i tassi di risposta possono essere raggiunti anche se amministrare farmaci di nuova generazione come il docetaxel, oxaliplatino, capecitabina, irinotecan, S1, ecc per i malati di cancro gastrico avanzato come trattamento di prima linea [3]. Ciò significa che almeno il 50% dei pazienti devono essere sottoposti a un trattamento inefficace, che potrebbe non solo diminuire la qualità della vita dei pazienti, ma anche aumentare l'onere economico. Così come a predire la risposta di agenti chemioterapici nel cancro gastrico è molto importante questione scientifica.
Oxaliplatino è la terza generazione di platino, giocando un ruolo fondamentale nella chemioterapia per il cancro gastrointestinale. regime di combinazione a base di oxaliplatino, come oxaliplatino più 5-FU o farmaci 5-FU-come ha dimostrato di essere attivo in circa il 40-50% dei pazienti affetti da cancro gastrico avanzato [14-16]. Oxaliplatino e cisplatino condividono il meccanismo simile, e causano mono-addotti e intra-strand o inter-filamento legami incrociati nella doppia elica del DNA che bloccano gravemente la sintesi del DNA [17-19]. Quando questo accade, alcuni percorsi di riparazione del DNA danni possono accendere, compresa la riparazione per escissione dei nucleotidi (NER), mismatch repair (MR), ricombinazione omologa (HR), la sintesi del DNA translesion (TLS) [20]. Queste riparazioni addotto avvengono principalmente attraverso NER [21]. TLS è un altro modo alternativo per riparare queste lesioni, che è fatto principalmente da DNA polimerasi η [22]. Polymeraseη (Polη), uno degli enzimi lesione-replicante, incorpora la corretta nucleotide sopra lesioni come un addotto di platino da TLS e continua allungamento della catena, che pols classici non può [23]. Polη ha la più alta efficacia di bypassare Pt-GG diadducts intra-strand causati da platino tra questi enzimi lesione-replicanti, con fedeltà limitata [23, 24]. Recenti esperimenti hanno dimostrato che l'assenza di risultati polη in un miglioramento statisticamente significativo nella sensibilità cisplatino quando si confrontano polη-null fibroblasti umani Xeroderma pigmentoso-variante con quelli polη esprimono [25]. Questo miglioramento si osserva anche quando le cellule sono state trattate con carboplatino e oxaliplatino [25]. Dati recenti mostrano che il livello di mRNA polη negativamente correlata con la sensibilità cisplatino di tumore polmonare non a piccole cellule (NSCLC) linee cellulari [26].
Nel presente studio, si segnala per la prima volta il rapporto tra l'espressione della proteina polη e sensibilità oxaliplatino di linee di cellule di cancro gastrico e il significato di quella nel predire la risposta al trattamento e la sopravvivenza dei pazienti con carcinoma gastrico metastatico trattati con chemioterapia a base di oxaliplatino.
Materiali e metodi
linee cellulari
le linee di cellule di cancro gastrico, tra cui SGC7901 , AGS, MKN45, e MGC803, sono stati donati dal Prof. Libing song da Stato chiave Laboratorio di Oncologia nel sud della Cina (Cancer center di Sun ancora-sen University). Tutte le linee cellulari sono state mantenute in RPMI 1640 (Gibco) supplementato con siero fetale bovino al 10% (Gibco), ad eccezione di MKN 45 con il 20% di siero fetale bovino.
Pazienti e campioni
pazienti nel nostro database clinico con la chemioterapia naïve , carcinoma gastrico avanzato metastatico istologicamente provata sono stati arruolati per lo studio. Tutti i pazienti avevano a ricevere FOLFOX (fluorouracile, leucovorina e oxaliplatino) o XELOX (capecitabina e oxaliplatino) regime come chemioterapia di prima linea a Cancer Center di Sun Yat-sen University, e campioni di pretrattamento inclusi in paraffina fissati in formalina in biopsie gastroscopio o palliative operazione sono stati ottenuti. caratteristiche istopatologiche sono stati confermati dalla revisione in cieco delle diapositive patologia originali. La classificazione TNM è stata utilizzata per la stadiazione patologica, e la classificazione OMS è stato utilizzato per la classificazione patologica. Altri criteri di inclusione comprendevano: età tra 18-80, Eastern Cooperative Oncology Group stato (ECOG) la realizzazione di 2 o meno, secondo la chemioterapia la linea o no, nessun trattamento di radiazioni. Tutti i pazienti hanno fornito il consenso informato; abbiamo ottenuto il consenso a parte per l'uso di campioni. approvazione studio è stato ottenuto da comitati etici indipendenti al Cancer Center di Sun Yat-Sen University. Lo studio è stato condotto in conformità con gli standard etici del mondo Dichiarazione dei Medici di Helsinki.
Follow-up e valutazioni
pazienti sono stati seguiti da una comunicazione telefonica o per lettera una volta l'anno per un totale di 4 anni. La sopravvivenza globale è stata definita come il tempo dalla data della diagnosi confermata a morte e censurato alla data dell'ultimo contatto per un paziente sopravvissuto. risposta malattia è stata valutata secondo i criteri di valutazione della risposta nei tumori solidi (criteri RECIST) [27].
saggi di citotossicità
inibizione della crescita cellulare è stata determinata da 3- (4,5-dimethylthiazol-2-il) -2 , saggio bromuro di 5-diphenyltetrazolium (MTT). Brevemente, le cellule sono state seminate in piastre da 96 pozzetti e lasciate allegare notte. Dopo 48 ore di incubazione farmaco a varie concentrazioni (37 ° C), il reagente MTT (5 mg /mL, 20 mL /pozzetto) è stato aggiunto a ciascun pozzetto e incubate per altre 4 ore. Le piastre sono state quindi centrifugate (1,500 g, 5 minuti) e il supernatante è stato rimosso. I pellet cellulari sono stati sciolti in 200 uL DMSO. Assorbanza è stato determinato utilizzando il Modello 550 Microplate Reader (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) ad una lunghezza d'onda di 570 nm, con sfondo la sottrazione alla lunghezza d'onda di 630 nm. Tutti gli esperimenti sono stati eseguiti in triplicato. La concentrazione necessaria per inibire la crescita cellulare del 50% (IC50) è stata calcolata dalle curve di sopravvivenza con il metodo Bliss [28].
Western blotting
cellule sono state lavate con gelida tampone fosfato salino e raccolte in tampone di campionamento [ ,,,0],62,5 mmol /L Tris-HCl (pH 6,8), 2% SDS, 10% glicerolo e 5% 2-h-mercaptoetanolo]. La concentrazione proteica è stata determinata mediante saggio Bradford (Bio-Rad Laboratories). La stessa quantità di proteine ​​sono stati applicati al 7,5% gel di poliacrilammide SDS (SDS-PAGE), separati elettroforesi, e trasferiti su membrane polivinilidene fluoruro. Dopo bloccato in 5% latte scremato in tampone TBST (10 mmol /L Tris-HCL, 150 mmol /L di NaCl, e 0,1% Tween20, pH 8,0) per 1 ora a temperatura ambiente, la membrana è stata incubata con anticorpi anti-polη anticorpi di coniglio (1: 400; Abcam). espressione Polη è stato rilevato con perossidasi coniugato IgG di capra anti-coniglio e chemiluminescenza. anticorpo anti-α-tubulina è stato utilizzato come controllo di caricamento. software
ImageJ dal National Institutes of Health (NIH) è stato impiegato per la quantificazione delle proteine.
immunoistochimica
immunoistochimica (IHC) analisi è stata fatta per rilevare l'espressione polηprotein in 80 tessuti di cancro gastrico umano. Brevemente, sezioni di tessuto sono stati deparaffinate in xilene a 37 ° C per 20 minuti e reidratati. perossido endogena è stata bloccata incubando le sezioni con perossido di idrogeno al 3% in metanolo per 20 minuti a 37 ° C. Poi le sezioni sono state immerse in 10 mM tampone citrato (pH 6,0) e scaldati per il recupero antigenico, seguita da incubazione con coniglio polη anti- (1: 100; Abcam) notte a 4 ° C. Dopo il lavaggio, sezioni di tessuto sono stati trattati con l'anticorpo secondario rafano perossidasi per 30 minuti. Le sezioni sono state sviluppate con diaminobenzidina tetraidrocloruro (DAB) e di contrasto con ematossilina
. Analisi di immunoistochimica nel nostro studio è stato effettuato da due osservatori indipendenti sulla base della percentuale di cellule tumorali colorate positivamente. Se c'è differenza tra queste due osservatori, questi vetrini sono stati nuovamente controllata da entrambe investigatori utilizzando un microscopio più teste. I tumori con più del 5% delle cellule tumorali POLη-positivi sono stati considerati positivi (nucleo di pittura), altrimenti negativo.
Analisi statistica
receiver operating characteristic (ROC) analisi della curva e il test esatto di Fisher sono stati eseguiti per selezionare IHC Pol valore -positivo con la massima accuratezza. tabella 2 × 2 è stato costruito sensibilità cedevole, specificità, valore predittivo positivo e negativo, e la precisione è stata calcolata come percentuale di veri negativi pazienti positivi e veri su pazienti interi. Tutte le analisi statistiche sono state eseguite da SPSS 15.0 pacchetto di software statistico (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). valore <P; 0.05 è stato considerato statisticamente significativo. L'analisi di Kaplan-Meier con test log-rank è stato utilizzato per le analisi univariata. Le variabili che mostrano una tendenza per l'associazione con la sopravvivenza (P < 0,05) sono stati selezionati per l'inserimento nel multivariata finale rischi proporzionali di Cox modello. Il rapporto tra l'espressione polη e le caratteristiche clinico-patologiche è stato esaminato da un test chi-quadrato e test esatti di Fisher.
Risultati
espressione Polη correla con la sensibilità oxaliplatino di linee di cellule di cancro gastrico
sensibilità Oxaliplatino di quattro linee di cellule gastriche ( SGC7901, AGS, MKN45, e MGC803) sono stati rilevati mediante test MTT sopra descritto. espressione proteica polη endogena di quattro linee cellulari sono stati confrontati tra loro mediante western blotting e la metà massima concentrazione inibente (IC50) valori dell'oxaliplatino per le cellule sono stati mostrati in Figura 1. Significativo e fu osservata correlazione positiva, come illustrato nella figura 2 rispetto espressione della proteina polη con i valori di IC50 di oxaliplatino. Figura 1 analisi di espressione di proteine ​​POL η in linee cellulari di cancro gastrico di western blotting e 48 valori h IC50 di oxaliplatino per cellule di cancro gastrico (umol /L).
Figura 2 Correlazione tra espressione POL η e IC50 di oxaliplatino per cellule gastriche
. Le caratteristiche dei pazienti
ottanta pazienti dal gennaio 2005 e luglio 2009 sono stati analizzati retrospettivamente. I pazienti avevano un'età media di 54 (range 26,0-79,0), con 49 maschi e 31 femmine. Altre caratteristiche cliniche sono stati riassunti nella tabella 1. Il tasso di risposta (CR + PR) con prima linea XELOX o chemioterapia FOLFOX era 47,5%, tasso di beneficio clinico (CR + PR + SD) è stato 77,5%. Una parte di questi pazienti (23/80) ha avuto di seconda linea chemotherapy.Table 1 Le caratteristiche dei pazienti (n = 80)
caratteristica
No. dei pazienti
%
Età (anni)
mediana
54,0
Gamma
26,0-79,0
sesso maschile

49
61,3
femminile
31
38,7
prestazioni ECOG stato
0
36
45,0
1 42
52,5
2
2
2,5
siti primari
Cardia
21
26,3
corpo
18
22,5
antro /piloro
41
51,2 siti metastatici

Fegato
26
32,5
Lung
21
26,3
peritoneo
19
23,8
Altri
14
17,4
differenziazione patologica N0
G1 2
2,5
G2
26
32,5
G3
52
65,0
risposta al trattamento (linea 1)
CR 2
2,5
PR
36
45,0
SD
24
30,0
PD
18
22,5
2 ° linea chemotherary regime
BSC
57
71,3
FOLFIRI
6
7.5
XELIRI Pagina 8
10,0
DX Pagina 6
7.5
TP 3
3.7
CR, risposta completa; PR, risposta parziale; SD, stabilizzazione della malattia; PD, progressione della malattia;
BSC, migliore terapia di supporto; FOLFIRI, 5-fluracil più leucovorin più irinotecan; XELIRI, capecitabina e irinotecan; DX, docitaxel più capecitabina; TP, paclitaxel più cisplatino.
I criteri che il tessuto tumorale con più del 5% delle cellule tumorali Polη-positivi è stata definita come IHC-positiva è massima accuratezza nel predire beneficio clinico di prima linea di chemioterapia
Tumor tessuti di ottanta metastatico pazienti affetti da cancro gastrico trattati con FOLFOX o regime XELOX sono stati usati per rilevare l'espressione della proteina polη mediante immunoistochimica (Figura 3). Dato che la percentuale di cellule tumorali nucleo-colorazione in tutti i casi era non superiore al 10%, si è cercato di selezionare IHC valore Polη-positivo con la massima precisione per predire beneficio clinico di chemioterapia di prima linea. Abbiamo definito valore di nove IHC-positivo: ≥ 1%, ≥ 2%, ≥ 3%, ≥ 4%, ≥ 5%, ≥ 6%, ≥ 7%, ≥ 8%, ≥ 9%, e costruito nove 2 × 2 tavolo. Tabella 2 è mostrato come un esempio. La sensibilità, specificità, valore predittivo positivo e negativo, e la precisione è stata calcolata e utilizzati per disegnare la curva ROC. Come mostrato nella Tabella 3 e Figura 4 tagliò valore ≥ 5%, ha la massima precisione (88,8%). Così tumori con più del 5% delle cellule tumorali POLη-positivi sono stati considerati positivi (colorazione nucleo), altrimenti negativo. Figura 3 L'espressione della proteina POLη nel cancro gastrico avanzato, come esaminato da immunoistochimica. A. immagine espressione negativa nel tessuto tumorale (× 400). proteina B. POLη era rintracciabile nel nucleo della cellula tumorale gastrica (× 400). espressione
Tabella 2 DNA polimerasi proteine ​​η e risposta clinica trattamento

fallimento clinico
beneficio clinico
Totale di casi
Pol η (+)
16 7
23
Pol η ( -) 2
55
57
Totale di casi
18
62
80
≥ 5% espressione Polη nelle cellule tumorali definite come positivo
Table. 3 Precisione, sensibilità, specificità, valore predittivo positivo e valore predittivo negativo in base alla Polη IHC contare per cento nel predire la risposta alla chemioterapia FOLFOX o XELOX regime
per cento positivo delle cellule tumorali, tagliare off

Specificity

Sensitivity

PPV

NPV

Accuracy

1%
0.419
0.889
0.308
0.929
0.525
2%
0.500
0.889
0.340
0.940
0.588
3%
0.645
0.889
0.421
0.952
0.700
4%
0.823
0.889
0.593
0.962
0.838
5%
0.887
0.889
0.696
0.965
0.888
6%
0.887
0.778
0.667
0.932
0.863
7%
0.978
0.667
0.705
0.904
0.863
8%
0
0.389
1.000
0.849
0.863
9%
0
0.111
1.000
0.795
0.800
PPV, valore predittivo positivo; NPV, il valore predittivo negativo.
Figura 4 receiver operating characteristic curva Polη IHC contare nel predire la risposta alla chemioterapia FOLFOX o XELOX regime.
Relazione di espressione polη con le caratteristiche cliniche di metastatico cancro gastrico
Come mostrato nella Tabella 4 solo 23 dei 80 casi (28,75%) hanno avuto la proteina polη espressione positiva (≥ 5% le cellule tumorali Polη-positivi), 16 dei 23 casi positivi (69.56%) non è riuscito al trattamento, al contrario, solo 2 dei 57 casi negativi (3,51%) hanno avuto la malattia progressione dopo FOLFOX o XELOX chemioterapia. espressione Polη fortemente correlato con la risposta al trattamento alla chemioterapia a base di oxaliplatino di carcinoma gastrico metastatico (P < 0,001), mentre non è associato con l'età, il sesso, i siti primari, siti metastatici o patologica levels.Table differenziazione 4 Correlazione tra espressione η POL e le caratteristiche clinico-patologiche dei pazienti affetti da cancro gastrico
caratteristica
POLη
χ2 prova
valore P <
br> di Fisher prova
valore di P

positiva (n = 23)
negativo (n = 57)



Age (y)
< 60
16
37
0,690 0,797

≥ 60 7
20
genere
Maschio
14
35
0,695
1.000
femminili
9
22
siti primari
Cardia 10
11
0,084 0,102

corpo
4
14
Antrum /
piloro 9
32
siti metastatici del fegato

11
15
0,247
0.269
Lung
5
16
peritoneo 3
16
Altri
4 10
patologica differenziazione
G1 2
0
0.068
0,107
G2
6
20
G3
15
37
risposta al trattamento
CR + PR + SD 7
55
< 0.001
< 0.001
PD
16 2
CR, risposta completa; PR, risposta parziale; SD, stabilizzazione della malattia; PD, progressione della malattia
. Analisi di correlazione di Spearman è stato ulteriormente fatto per confermare la correlazione tra l'espressione polη e le caratteristiche clinico-patologiche. Pearson coefficiente di contingenza dimostrato che i livelli polηexpression era significativamente correlata con la risposta al trattamento (P < 0,001)., Allo stesso modo, correlazioni significative con altri fattori sono stati ottenuti (dati non riportati)
Relazione tra espressione polη e la sopravvivenza del tumore gastrico metastatico
Kaplan-Meier analisi di sopravvivenza univariata ha rivelato che l'espressione positiva di polη nelle cellule tumorali e scarsa risposta trattamento erano significativamente associati con la sopravvivenza più breve. Il tempo mediano di sopravvivenza per i casi positivi e negativi polη erano rispettivamente 8 e 14 mesi, come mostrato nella Figura 5 (log rank, P < 0,001). l'analisi di sopravvivenza multivariata (modello di regressione di Cox) ha rivelato che l'espressione di polη era fattori prognostici indipendenti. L'intervallo di confidenza 95,0% (IC) per il rischio relativo era 2,461-8,429 (Tabella 5). Questi risultati indicano che l'espressione di polη nel tessuto tumorale predetto breve sopravvivenza. è stata osservata alcuna relazione tra la sopravvivenza ed i parametri clinico-patologici di riposo, come l'età, il sesso, i siti tumorali primarie, differenziazione patologica e metastatico sites.Table 5 L'analisi multivariata della sopravvivenza globale nel carcinoma gastrico
Fattori

Caratteristiche
Hazard ratio
95% CI
valore
P

sfavorevole
favorevole



Età
≥ 60
< 60
0,956
0,570-1,602
0,863
grado istologico
scarsamente
Bene /moderatamente
1.428
0,861-2,369
0.168
POL η
positivo
negativo
4.555
2,461-8,429
< 0.001
CI, intervallo di confidenza.
Figura 5 curve di Kaplan-Meier con analisi univariata (log-rank test) per i pazienti con espressione POLη negativo contro i tumori espressione POLη positivo.
Discussione
Il presente studio parzialmente ha rivelato il ruolo di polymeraseη DNA come una proteina di riparazione del DNA nel carcinoma gastrico, rilevando la sua espressione in quattro linee di cellule di cancro gastrico e 80 pazienti con adenocarcinoma gastrico metastatico che avevano ricevuto FOLFOX o XELOX come la prima linea di chemioterapia. I risultati hanno dimostrato che il livello di espressione di polη in linee cellulari tumorali è stata correlata con la sensibilità di oxaliplatino (figura 2). Per il tessuto tumorale, l'espressione positiva verificato solo nel 28.75% dei casi (23 su 80), e l'espressione era modesto. Tuttavia, la forte correlazione è stata trovata tra l'espressione polη e la risposta al trattamento, nonché la sopravvivenza. Tutti i risultati hanno dimostrato che la positività polη era un indicatore per la scarsa risposta al trattamento e più breve sopravvivenza nei pazienti di impostazioni di cui sopra.
Polymeraseη DNA è codificata da POLH gene, che è uno dei 150 geni di riparazione del DNA umano, i cui risultati defezione in Xeroderma pigmentoso variante (XP-V) sindrome, manifestando grande sensibilità alle radiazioni UV e una tendenza a sviluppare il cancro della pelle [29-31]. Polη è un importante enzima lesione-replicante che replica attraverso i dimeri di pirimidina introdotte dalla radiazione UV, evitando alta mutazione genetica [32]. Oltre ai dimeri di pirimidina, polη ha dimostrato di replicare tutti cisplatino siti GG intrastrand reticolati [33]. Alcune ricerche hanno dimostrato che l'espressione polη era correlata con la sensibilità al cisplatino o oxaliplatino in linee cellulari fibroblasti umani e di cellule del polmone XP-V, e polη sembrava essere un trattamento-risposta marcatore predittivo in pazienti con NSCLC con la chemioterapia a base di cisplatino [26, 27]
. Meno si sa circa il ruolo di polη nel cancro gastrico. E 'il primo studio per rilevare la sensibilità di oxaliplatino in queste quattro linee di cellule di carcinoma gastrico (SGC7901, AGS, MKN45, e MGC803) di MTT test e proteine ​​espressione di western blotting. Abbiamo trovato una significativa relazione lineare tra di loro. Il nostro studio è stato in qualche modo coerente con l'osservazione in linee cellulari di cancro ai polmoni di Paolo Ceppi et al, anche se ciò che essi rilevati erano livello di mRNA polη e sensibilità cisplatino [27].
Poi abbiamo restrospectively analizzato l'espressione della proteina polη in ottanta avanzate pazienti affetti da cancro gastrico metastatico che hanno ricevuto FOLFOX o XELOX come la chemioterapia. Abbiamo innanzitutto osservato che la percentuale di cellule tumorali polη-colorazione in tutti i 80 casi era non superiore al 10%, quindi abbiamo definito ≥5% come IHC positiva secondo la precisione nel predire beneficio clinico con XELOX o chemioterapia FOLFOX. Con questo standard, solo 23 pazienti avevano un'espressione positiva, con 7 su 62 casi clinici benefici (CR + PR + SD) da chemioterapia e 16 su 18 casi PD. Il tasso di espressione tra il gruppo clinica vantaggio (7/62, 11.3%) e del gruppo PD (16/18, 88,9%) era significativamente differente (P < 0,001). Ciò indica che Polη positività potrebbe prevedere la chemioterapia inefficace con XELOX o un regime FOLFOX. Il risultato è stato in linea con il nostro studio in cellule che Polη espressione correla negativamente con sensibilità oxaliplatino di linee di cellule di cancro gastrico.
Abbiamo trovato un significativo beneficio di sopravvivenza nei pazienti negativi polη. Questo beneficio probabilmente proveniva da una terapia efficace di oxaliplatino, dato che polη è stato fortemente correlato con la risposta al trattamento. E 'ben noto che la chemioterapia efficace sarebbe migliorare la qualità di vita dei pazienti affetti da cancro gastrico e migliorare la sopravvivenza; la nostra indagine può aiutare a predire la risposta al trattamento della chemioterapia a base di oxaliplatino e la sopravvivenza, quindi evitare trattamenti non necessari all'inizio.
Esistono diverse limitazioni per il nostro studio. Innanzitutto, questo è uno studio retrospettivo con un piccolo numero di pazienti. Nello studio di preselezione, alcuna associazione significativa tra l'espressione polη e l'età, il sesso, i siti del tumore primario, siti metastatici o differenziazione patologica è stata ottenuta sulla base di tale numero casi. E 'possibile ottenere risultati significativi in ​​alcune caratteristiche clinico-patologiche, quali i siti primari o differenziazione patologica (valore di P vicino a 0.05), se i pazienti con un numero sufficiente. Pertanto enlargeing il numero del caso e l'esecuzione di studi prospettici è obbligatoria. In secondo luogo, perché la precisione test è stato calcolato utilizzando i criteri definiti dalla analisi della curva ROC, i nostri risultati necessari convalida in una coorte indipendente. In terzo luogo, l'espressione di polη è relativamente basso nel carcinoma gastrico, a causa di soggettività, l'errore di conteggio IHC potrebbe essere più grande, che può influenzare la sensibilità e la specificità quando predire la risposta al trattamento, è necessario un metodo in modo più accurato. Forth, E 'ben noto che la resistenza di platino è molto complicato, quindi polη, come un singolo parametro, è difficile prevedere risposta alla terapia in maniera esatta.
Nonostante i limiti, il nostro studio è uno dei pochi tentativi di definire criteri per la chemiosensibilità in vivo di regime contenente oxaliplatino con risposta clinica come standard di riferimento. Può essere un metodo efficace ed economico per predire la risposta al trattamento.
Conclusione
In conclusione, questo studio ha dimostrato che polη è un predittore significativo di risposta al trattamento in pazienti con carcinoma gastrico metastatico sottoposti a chemioterapia di FOLFOX o XELOX . Tale indicatore potrebbe aiutare i medici a scegliere la strategia clinica ottimale per i pazienti con carcinoma gastrico avanzato. Inoltre, l'analisi di sopravvivenza multivariata ha rivelato che l'espressione di polη era fattori prognostici indipendenti. I risultati devono essere confermati in un più ampio studio prospettico prima applicazione nella pratica clinica.
Note
Kai-yuan Teng, Miao-zhen Qiu contribuito in maniera uguale a questo lavoro.
Abbreviazioni
GG :
guanina-guanina
CR:
risposta completa
DNA:
acido desossiribonucleico


FOLFOX:
fluorouracile, leucovorina e oxaliplatino
HR:
ricombinazione omologa
mRNA:
acido ribonucleico messaggero
IC50:
la concentrazione inibente la metà
IHC:
immunoistochimica


MMR:
mismatch repair
WB:
western blotting
MTT test:
3- (4,5-dimethylthiazol-2-il) -2,5-diphenyltetrazolium test bromuro
NER:
nucleotide Excision Repair

OS:
sopravvivenza globale
PD:
progressione della malattia
Pol η:
polimerasi eta
PR: risposta parziale

SD:
malattia stabile
Pt:
platino
ROC:
ricevitore caratteristica di funzionamento
TLS:
translesion sintesi


XELOX:
capecitabina e oxaliplatino

XPV:.
variante xeroderma pigmentoso

Dichiarazioni
Ringraziamenti
ringraziamo i membri del personale del Dipartimento di Oncologia medica presso Sun Yat-sen University Cancer center per il loro suggerimento e di assistenza
assegnare un sostegno:. Fondazione nazionale di Scienze naturali della Cina borsa di 30.672.408, Guangzhou Ufficio della Scienza e della Tecnologia concessione 2006Z3-E0041 e Sun Yat-sen University 985 Fondo Initiation Programma (Cina).
Autori 'originali presentate file per le immagini
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