DNA polymeraseη eiwitexpressie voorspelt respons op de behandeling en overleving van gemetastaseerd adenocarcinoom van de maag patiënten behandeld met oxaliplatin gebaseerde chemotherapy

DNA polymeraseη eiwitexpressie voorspelt respons op de behandeling en overleving van gemetastaseerd adenocarcinoom van de maag patiënten behandeld met oxaliplatin-gebaseerde chemotherapie
De abstracte Achtergrond
DNA polymerase η (pol η) kan omzeilen DNA adducten door cisplatine of oxaliplatine en wordt geassocieerd met cellulaire tolerantie voor platina. Eerdere studies toonden aan dat defect pol η resulteerde in verhoogde cisplatine of oxaliplatine gevoeligheid van bepaalde cellijnen. Het doel van deze studie was om de rol van pol η eiwitexpressie in metastatische adenocarcinoom van de maag te onderzoeken.
Methods
Vier adenocarcinoom cellijnen werden gekozen om de relatie tussen pol η eiwitexpressie en oxaliplatin gevoeligheid door Western blotting staand en MTT assay. Tachtig gemetastaseerd adenocarcinoom van de maag patiënten behandeld met FOLFOX of XELOX regime als eerstelijns chemotherapie werden geanalyseerd, wat overeenkomt voorbehandeling formaline gefixeerde in paraffine ingebedde tumor weefsels werden gebruikt om pol η eiwitexpressie te detecteren door immunohistochemie. Relatie tussen pol η eiwit expressie en klinische kenmerken en de resultaten van deze patiënten werd geanalyseerd.
Resultaten
Een positief lineair verband tussen pol η eiwitexpressie en 48 h IC50-waarden van oxaliplatine in vier maagkanker cellijnen werd waargenomen. Positiviteit van pol η eiwitexpressie werd sterk geassocieerd met een slechte respons op de behandeling, evenals kortere overleving bij zowel univariate (8 versus 14 maanden; P < 0,001) en multivariate (hazard ratio 4,555; 95% betrouwbaarheidsinterval, 2,461-8,429; P. < analyse 0,001) in tachtig gemetastaseerd adenocarcinoom van de maag patiënten
Conclusies
Onze studie geeft aan dat polη is een voorspellende factor van de behandeling respons en overleving van gemetastaseerd adenocarcinoom van de maag patiënten behandeld met FOLFOX of XELOX als eerstelijns chemotherapie. Daarom is de bevestiging van de waarde van polη in studies met potentiële ontwerp is verplicht. Achtergrond
Maagkanker is de vierde meest voorkomende vorm van kanker in de wereld, met 603.003 nieuwe gevallen bij mannen en 330.290 nieuwe gevallen bij vrouwen per jaar [1]. Het is de tweede meest voorkomende oorzaak van kanker gerelateerde sterfte (700.000 sterfgevallen per jaar), met bijna twee derde van de gevallen die zich in ontwikkelingslanden en 42% in China alleen al [2]. Chirurgie blijft belangrijke potentiële methode om de ziekte te genezen; zal echter ongeveer 84% van maagkanker patiënten ontwikkelen om een ​​geavanceerde ziekte, met 30% van lokaal gevorderde gevallen 30% metastatische ziekte bij diagnose en 24% recidief ziekten [3]. De literatuur toonde aan dat de mediane overleving was slechts 3-4 maanden bij gevorderde maagkanker patiënten zonder chemotherapie. De nieuwe generatie van chemotherapeutische middelen, zoals Oxaliplatine kan overleving verlengen gevorderde maagkanker zijn 10 tot 12 maanden; bovendien kan de chemotherapie ook het verbeteren van de kwaliteit van leven [4-12]. Therapeutisch effect hangt vooral af van de respons van geneesmiddelen aan de tumor tijdens de eerstelijns chemotherapie, omdat tot nu toe slechts één kleine fase III studie met 120 gevallen bleek een bescheiden overlevingsvoordeel van irinotecan monotherapie meer dan alleen ondersteunende zorg [13]. Helaas, als gevolg van resistentie tegen geneesmiddelen, slechts 30-50% respons kan worden bereikt, hoewel het beheer van een nieuwe generatie geneesmiddelen, zoals docetaxel, oxaliplatin, capecitabine, irinotecan, S1, etc om gevorderde maagkanker patiënten als eerstelijns behandeling [3]. Dat betekent dat ten minste 50% moeten patiënten ondoeltreffende behandeling, die niet alleen de patiënten de kwaliteit van leven te verminderen, maar ook de economische last ondergaan. Dus hoe respons van chemotherapie bij maagkanker is een zeer belangrijke wetenschappelijke kwestie voorspellen.
Oxaliplatin is de derde generatie platina, spelen een cruciale rol bij chemotherapie voor gastro-intestinale kanker. Oxaliplatin combinatietherapie zoals oxaliplatin plus 5-FU of 5-FU-achtige drug is bewezen actief in ongeveer 40-50% van gevorderde maagkanker patiënten [14-16]. Oxaliplatine en cisplatine delen vergelijkbaar mechanisme, en de oorzaak mono-adducten en intra-streng of inter-strengen dwarsverbindingen in de dubbele DNA-helix dat DNA-synthese [17-19] ernstig te blokkeren. Wanneer dit gebeurt, kunnen sommige routes van DNA schade herstel inschakelt, zoals NER (NER), mismatch repair (MR), homologe recombinatie (HR), translesie DNA-synthese (TLS) [20]. Deze adduct reparaties plaatsvinden in de eerste plaats door middel van NER [21]. TLS is een andere alternatieve manier om deze beschadigingen te herstellen, die voornamelijk wordt uitgeoefend door DNA polymerasen η [22]. Polymeraseη (Polη), één van laesie replicerende enzymen bevat de juiste nucleotide op beschadigingen zoals een platina adduct van TLS en blijft ketenverlenging, terwijl klassieke pols kan niet [23]. Polη de hoogste werkzaamheid omzeilen Pt-GG intra-streng diadducts door platina onder deze laesie replicerende enzymen, beperkte betrouwbaarheid [23, 24]. Recente experimenten hebben aangetoond dat de afwezigheid van polη resulteert in een statistisch significante verbetering in gevoeligheid cisplatine bij het vergelijken polη-null Xeroderma Pigmentosum variante humane fibroblasten met polη expressie die [25]. Deze verbetering wordt ook waargenomen wanneer de cellen werden behandeld met carboplatine en oxaliplatine [25]. Recente gegevens tonen aan dat polη mRNA-niveau negatief gecorreleerd met cisplatine gevoeligheid van niet-kleincellige longkanker (NSCLC) cellijnen [26].
In de huidige studie, rapporteren we voor de eerste keer dat de relatie tussen polη eiwitexpressie en oxaliplatin gevoeligheid maagkanker cellijnen en de betekenis van dat voorspellen behandelingsrespons en overleving van uitgezaaide maagkanker patiënten behandeld met oxaliplatin chemotherapie.
Materialen en werkwijzen cellijnen
Ondernemingen de maagkanker cellijnen, waaronder SGC7901 , AGS, MKN45 en MGC803, werden geschonken door professor Libing Song van State Key Laboratory of Oncology in Zuid-China (Cancer Center van de zon nog-sen University). Alle cellijnen werden gehandhaafd in RPMI 1640 (Gibco) aangevuld met 10% foetaal runderserum (Gibco), behalve MKN 45 met 20% foetaal runderserum.
Patiënten en monsters
Patiënten in onze klinische databank met chemotherapie-naïeve , histologisch bewezen uitgezaaide gevorderde maagkanker werden ingeschreven voor de studie. Alle patiënten moesten FOLFOX (fluorouracil, leucovorin en oxaliplatin) of XELOX (capecitabine en oxaliplatin) regime als eerstelijns chemotherapie op Cancer Center van Sun Yat-sen Universiteit, en in formaline gefixeerde in paraffine ingebedde voorbehandeling monsters ontvangen uit hoofde gastroscope biopsieën of palliatieve operatie verkregen. Histopathologische kenmerken werden bevestigd door verblind herziening van de oorspronkelijke pathologie dia's. De TNM classificatie werd gebruikt voor pathologische staging, en de World Health Organization classificatie werd gebruikt voor pathologische indeling. Andere inclusie criteria opgenomen leeftijd tussen 18-80, Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) performance status van 2 of minder, tweede lijn chemotherapie of niet, geen straling behandeling. Alle patiënten gaven schriftelijk toestemming; we verkregen afzonderlijk toestemming voor het gebruik van specimens. Studie goedkeuring werd verkregen van onafhankelijke ethische commissies op Cancer Center van Sun Yat-Sen University. De studie werd uitgevoerd in overeenstemming met de ethische normen van de World Medical Association Verklaring van Helsinki.
Follow-up en evaluaties
Patiënten werden opgevolgd door telefonisch of schriftelijk mededeling eenmaal per jaar voor een totaal van 4 jaar. Algehele overleving werd gedefinieerd als de tijd vanaf de datum van de bevestigde diagnose tot de dood en gecensureerd op de datum van laatste contact voor een overlevende patiënt. Ziekte respons werd geëvalueerd volgens de Response Evaluation Criteria in Solid Tumors (RECIST criteria) [27].
Cytotoxiciteit assays
Celgroei remming werd bepaald door 3- (4,5-dimethyl-2-yl) -2 , 5-difenyltetrazoliumbromide test (MTT assay). Kort samengevat werden cellen gezaaid in 96-well platen en overnacht hechten. Na 48 uur incuberen van het geneesmiddel in verschillende concentraties (37 ° C), MTT reagens (5 mg /ml, 20 pl /putje) werd aan elk putje toegevoegd en gedurende nog eens 4 uur. De platen werden vervolgens gecentrifugeerd (1500 g, 5 minuten) en het supernatant werd verwijderd. De cel pellets werden opgelost in 200 ul DMSO. De absorptie werd bepaald volgens de Model 550 Microplate Reader (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) bij een golflengte van 570 nm, met achtergrond aftrekking bij een golflengte van 630 nm. Alle experimenten werden in drievoud uitgevoerd. De concentratie die nodig is om de celgroei met 50% te remmen (IC50) werd berekend uit overlevingscurves met de Bliss methode [28].
Western blotting
cellen werden gewassen met ijskoude fosfaatbuffer zoutoplossing en bemonstering buffer [geoogst ,,,0],62,5 mmol /L Tris-HCl (pH 6,8), 2% SDS, 10% glycerol en 5% 2-h-mercaptoethanol]. De eiwitconcentratie werd bepaald door Bradford test (Bio-Rad Laboratories). Gelijke hoeveelheden eiwitten werden op 7,5% polyacrylamide-SDS-gels (SDS-PAGE), elektroforetisch gescheiden en overgebracht op polyvinylideenfluoride membranen. Na geblokkeerd in 5% vetvrije melk in TBST buffer (10 mmol /L Tris-HCL, 150 mmol /L NaCl, en 0,1% Tween 20, pH 8,0) gedurende 1 uur bij kamertemperatuur werd het membraan geïncubeerd met anti-polη konijn antilichaam (1: 400; Abcam). Polη expressie werd gedetecteerd met mierikswortelperoxidase-geconjugeerd geit anti-konijn IgG en versterkte chemiluminescentie. Anti-α-tubuline antilichaam werd gebruikt als ladingcontrole.
ImageJ software van National Institutes of Health (NIH) werd gebruikt om eiwit te kwantificeren.
Immunohistochemie
immunohistochemische (IHC) analyse werd uitgevoerd om expressie te detecteren polηprotein in 80 menselijke maagkanker weefsels. Kort samengevat, werden de weefselcoupes paraffine ontdaan in xyleen bij 37 ° C gedurende 20 minuten gerehydrateerd. Endogene peroxide werd geblokkeerd door incuberen van de secties met 3% waterstofperoxide in methanol gedurende 20 minuten bij 37 ° C. Vervolgens werden de plakjes ondergedompeld in 10 mM citraatbuffer (pH 6,0) en correct voor antigene ophalen, gevolgd door incubatie met konijn anti polη (1: 100; Abcam) overnacht bij 4 ° C. Na wassen, werden weefselcoupes behandeld met mierikswortel peroxidase-gelabeld secundair antilichaam gedurende 30 minuten. De secties werden ontwikkeld met diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) en tegengekleurd met hematoxyline.
Analyse van immunohistochemie in onze studie uitgevoerd door twee onafhankelijke waarnemers werd uitgevoerd op basis van het percentage positief lood tumorcellen. Indien er verschil tussen deze twee waarnemers werden deze objectglaasjes opnieuw onderzocht door zowel onderzoekers met een multiheaded microscoop. Tumoren met meer dan 5% van de POLη-positieve kankercellen werden beschouwd als positief (kern kleuring), anders negatief.
Statistische analyse
Receiver operating characteristic (ROC) curve analyse en Fisher's exact test werd uitgevoerd om IHC Pol selecteren -positieve waarde met de hoogste nauwkeurigheid. 2 × 2 tafel werd gebouwd opbrengst sensitiviteit, specificiteit, positief en negatief voorspellende waarde, en de nauwkeurigheid werd berekend als percentage van de ware positieve en echte negatieve patiënten uit de hele patiënten. Alle statistische analyses werden uitgevoerd met SPSS 15.0 statistische softwarepakket (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). P-waarde < 0,05 werd als statistisch significant beschouwd. Kaplan-Meier-analyse met log-rank test werd gebruikt voor univariate analyses. Variabelen met een trend voor associatie met overleving (P < 0,05) werden geselecteerd voor opname in de finale multivariate Cox proportionele hazards model. De relatie tussen polη expressie en clinicopathologic kenmerken werd onderzocht door een chi-kwadraat-test en de exacte toets van Fisher.
Resultaten
Polη expressie correleert met oxaliplatine gevoeligheid van maagkanker cellijnen
Oxaliplatine gevoeligheid van vier maag cellijnen ( SGC7901, AGS, MKN45 en MGC803) werden gedetecteerd door MTT-bepaling zoals hierboven beschreven. Endogene polη eiwitexpressie vier cellijnen werden met elkaar vergeleken door middel van Western blotting en helft maximale remmende concentratie (IC50) waarden voor oxaliplatine cellen worden getoond in Figuur 1. Significante en positieve correlatie waargenomen, zoals getoond in figuur 2 in vergelijking polη eiwit expressie met IC50-waarden van oxaliplatine. Figuur 1 Expressie analyse van POL η eiwit bij maagkanker cellijnen met western blotting en 48 h IC50 waarden oxaliplatine maagkanker cellen (umol /L).
Figuur 2 Correlatie tussen POL η expressie en IC50 van oxaliplatine voor gastrische cellen patiënt kenmerken
Tachtig patiënten vanaf januari 2005 en juli 2009.
werden retrospectief geanalyseerd. De patiënten hadden een mediane leeftijd van 54 jaar (range, 26,0-79,0), met 49 mannen en 31 vrouwen. Andere klinische kenmerken zijn samengevat in tabel 1. De respons (CR + PR) met de eerste lijn XELOX of FOLFOX chemotherapie was 47,5%, van klinisch voordeel (CR + PR + SD) was 77,5%. Een deel van deze patiënten (23/80) had tweedelijns chemotherapy.Table 1 Patiënt kenmerken (N = 80)
karakteristieke
No. van de patiënten
%
Leeftijd (jaar)
Median
54,0
Range
26,0-79,0
Sex
Man
49
61.3
Female
31
38,7
ECOG performance status
0
36
45,0 1
42
52,5 Pagina 2
2
2,5
Primaire plaatsen
Cardia
21
26,3
Body
18
22.5
Antrum /pylorus
41
51.2
metastasen
lever
26
32,5
Lung
21
26,3
Peritoneum
19
23,8 overige
14
17,4
Pathologische differentiatie N0
G1 2
2.5
G2
26
32,5
G3
52
65,0
Treatment Response (1e lijn)
CR 2
2.5
PR
36
45,0
SD
24
30,0
PD
18
22.5
2-lijn chemotherary regime
BSC
57
71,3
FOLFIRI
6
7.5
XELIRI
8
10,0
DX
6
7.5
TP
3
3,7
CR, volledige respons; PR, gedeeltelijke respons; SD, stabiele ziekte; PD, de progressie van de ziekte;
BSC, de beste ondersteunende zorg; FOLFIRI, 5-fluracil plus leucovorin plus irinotecan; XELIRI, capecitabine plus irinotecan; DX, docitaxel plus capecitabine; TP, paclitaxel plus cisplatine. Ondernemingen De criteria die tumorweefsel met meer dan 5% van de Polη-positieve kankercellen werd gedefinieerd als IHC-positieve heeft de hoogste nauwkeurigheid in het voorspellen van klinische voordeel van eerstelijns chemotherapie
Tumor weefsel van tachtig metastatische maagkanker patiënten behandeld met FOLFOX of XELOX regime gebruikt om polη eiwitexpressie te detecteren door immunohistochemie (Figuur 3). Omdat het percentage kern-kleuring tumorcellen in elk geval niet meer dan 10%, we probeerden IHC Polη-positieve waarde met hoge nauwkeurigheid selecteren klinisch voordeel van eerstelijns chemotherapie voorspellen. We gedefinieerd negen IHC-positieve waarde: ≥ 1%, ≥ 2%, ≥ 3%, ≥ 4%, ≥ 5%, ≥ 6%, ≥ 7%, ≥ 8%, ≥ 9%, en gebouwd negen 2 × 2 tafel. Tabel 2 wordt getoond als een voorbeeld. Sensitiviteit, specificiteit, positieve en negatieve voorspellende waarde en nauwkeurigheid berekend en gebruikt voor ROC curve te tekenen. Zoals uit Tabel 3 en Figuur 4 afkapwaarde ≥ 5%, heeft de hoogste nauwkeurigheid (88,8%). Dus tumoren met meer dan 5% van POLη-positieve kankercellen werden als positief (kern kleuring), anders negatief. Figuur 3 De expressie van POLη eiwit in gevorderde maagkanker zoals onderzocht door immunohistochemie. A. image negatieve expressie in tumorweefsel (× 400). B. POLη eiwit detecteerbaar was in de kern van maagkanker cel (× 400).
Tabel 2 DNA polymerase η eiwit expressie en de klinische respons op de behandeling

klinisch falen
Klinisch voordeel
Total gevallen
Pol η (+)
16
7
23
Pol η ( -) 2
55
57
Totaal gevallen
18
62
80
≥ 5% Polη expressie in tumorcellen gedefinieerd als positieve
Table. 3 Nauwkeurigheid, gevoeligheid, specificiteit, positief voorspellende waarde en negatief voorspellende waarde volgens Polη IHC tellen procent in het voorspellen van chemotherapie reactie op FOLFOX of XELOX regime
tumorcellen positief procent, knippen off

Specificity

Sensitivity

PPV

NPV

Accuracy

1%
0.419
0.889
0.308
0.929
0.525
2%
0.500
0.889
0.340
0.940
0.588
3%
0.645
0.889
0.421
0.952
0.700
4%
0.823
0.889
0.593
0.962
0.838
5%
0.887
0.889
0.696
0.965
0.888
6%
0.887
0.778
0.667
0.932
0.863
7%
0.978
0.667
0.705
0.904
0.863
8%
0
0.389
1.000
0.849
0.863
9%
0
0.111
1.000
0.795
0.800
PPV, positief voorspellende waarde; NPV, negatieve voorspellende waarde.
Figuur 4 Receiver operating characteristic curve van Polη IHC tellen bij het voorspellen van chemotherapie reactie op FOLFOX of XELOX regime.
Verwantschap van polη expressie met de klinische kenmerken van uitgezaaide maagkanker
Zoals aangegeven in tabel 4 Slechts 23 van de 80 gevallen (28,75%) had polη proteïne positieve uitdrukking (≥ 5% polη-positieve kankercellen), 16 van de 23 positieve gevallen (69,56%) geen behandeling daarentegen slechts 2 van de 57 negatieve gevallen (3,51%) hadden gevorderde ziekte na FOLFOX of XELOX chemotherapie. Polη expressie sterk gecorreleerd met de respons op de behandeling te oxaliplatine gebaseerde chemotherapie van uitgezaaide maagkanker (P < 0,001), terwijl dit niet gepaard gaat met de leeftijd, geslacht, primaire sites, metastatische sites of pathologische differentiatie levels.Table 4 Correlatie tussen POL η expressie en clinicopathologic kenmerken van maagkanker patiënten
karakteristieke
POLη
χ2-test
P waarde

Fisher-test
P waarde

Positieve
(n = 23)
Negatief
(n = 57)



Age (y) Restaurant < 60
16
37
0.690
0,797
≥ 60
7
20
Geslacht
Man
14
35
0,695
1.000
Female
9
22
Primaire plaatsen
Cardia
10 | 11
0,084
0,102
Body verhuur 4
14
Antrum /pylorus
9
32
metastasen
lever
11
15
0,247
0,269
Lung
5
16
Peritoneum
3
16 overige
4
10 | Pathologische differentiatie
G1 2
0
0,068
0,107
G2
6
20
G3
15
37
Behandeling Response
CR + PR + SD
7
55
< 0.001
< 0.001
PD
16 2
CR, volledige respons; PR, gedeeltelijke respons; SD, stabiele ziekte; PD, ziekteprogressie.
Spearman correlatie analyse werd verder gedaan om de correlatie tussen polη expressie en clinicopathologic functies te bevestigen. Pearson onvoorziene coëfficiënt aangetoond dat polηexpression spiegels was significant geassocieerd met behandelingseffect (P < 0,001). Eveneens geen significante correlatie met andere factoren werd verkregen (gegevens niet getoond)
Verbindingen tussen polη expressie en overleving van uitgezaaide maagkanker
Kaplan-Meier survival univariate analyse bleek dat de positieve uitdrukking van polη in tumorcellen en slechte respons op de behandeling waren significant geassocieerd met een kortere overleving. De mediane overlevingstijd voor polη positieve en negatieve gevallen respectievelijk 8 en 14 maanden, zoals getoond in figuur 5 (log rank, P < 0,001). Multivariate survival analyse (Cox regressie model) is gebleken dat de expressie van polη was onafhankelijk prognostische factoren. De 95,0% betrouwbaarheidsinterval (BI) voor relatieve risico 2,461-8,429 (Tabel 5). Deze resultaten gaven aan dat de expressie van polη in tumorweefsel voorspelde kortere overleving. Er werd geen relatie gevonden tussen de overleving en de rest clinicopathologische parameters zoals leeftijd, geslacht, primaire tumor sites, pathologische differentiatie en metastatische sites.Table 5 Multivariate analyse van de totale overleving bij maagcarcinoom
Factoren
Kenmerken
Hazard ratio
95% CI
P-waarde

Ongunstig
Gunstige



Age
≥ 60 Restaurant < 60
0,956
0,570-1,602
0,863
histologische graad
Slecht
Well /matig
1.428
0,861-2,369
0,168
POL η
positieve
negatieve
4,555
2,461-8,429 Restaurant < 0.001
CI, betrouwbaarheidsinterval.
Figuur 5 Kaplan-Meier curves met univariate analyse (log-rank test) voor patiënten met een negatieve POLη meningsuiting versus positieve POLη expressie tumoren.
Discussie
De huidige studie gedeeltelijk onthulde de rol van DNA polymeraseη als DNA-reparatie eiwit bij maagkanker door het detecteren van de expressie ervan in vier maagkanker cellijnen en 80 patiënten met metastatische adenocarcinoom van de maag die FOLFOX of XELOX de eerste chemotherapie hadden ontvangen. De resultaten toonden dat het expressieniveau van polη in tumorcellijnen werd gecorreleerd met de gevoeligheid van oxaliplatin (figuur 2). Voor het tumorweefsel, de positieve expressie alleen opgetreden in 28,75% van de gevallen (23 van de 80), en de uitdrukking was bescheiden. Er werd echter een sterke correlatie gevonden tussen polη meningsuiting en de respons op de behandeling en overleving. Alle resultaten toonden aan dat polη positiviteit was een indicator voor slechte behandeling respons en kortere overleving bij patiënten bovenstaande instellingen.
Polymeraseη DNA wordt gecodeerd door Polh gen dat een van de 150 menselijke DNA repair genen, waarvan de resultaten in Xeroderma overlopen Pigmentosum variant (XP-V) syndroom, het vertonen zeer gevoelig voor UV-straling en een trend naar huidkanker [29-31] ontwikkelen. Polη is een belangrijke laesie repliceren enzym dat repliceert over pyrimidine dimeren geïntroduceerd door UV-straling, het vermijden van hoge genmutatie [32]. Naast pyrimidine dimeren is polη aangetoond repliceren in cisplatine verknoopte intrastreng GG plaatsen [33]. Sommige onderzoeken bleek dat polη expressie is gecorreleerd met gevoeligheid voor cisplatine of oxaliplatine in XP-V humane fibroblasten cellen en longcellijnen en polη leek een behandelingsvrije respons predictive marker NSCLC patiënten met cisplatine gebaseerde chemotherapie [26, 27] .
is minder bekend over de rol van polη bij maagkanker. Het is de eerste studie die de gevoeligheid van oxaliplatine in deze vier maagcarcinoom cellijnen (SGC7901, AGS, MKN45 en MGC803) van MTT-bepaling en eiwitexpressie door Western blotting gedetecteerd. We vonden een significante lineaire relatie tussen hen. Onze studie was tot op zekere hoogte in overeenstemming met de waarneming bij longkanker cellijnen door Paolo Ceppi et al, maar wat ze ontdekt waren polη mRNA-niveau en cisplatine gevoeligheid [27].
Toen we restrospectively analyseerden de expressie van polη eiwit in tachtig uitgezaaide gevorderde maagkanker patiënten die FOLFOX of XELOX ontvangen als chemotherapie. We eerst opgemerkt dat het percentage polη-kleuring tumorcellen in alle 80 gevallen niet meer dan 10%, dus gedefinieerd ≥5% IHC positief volgens de nauwkeurigheid bij het voorspellen van klinisch voordeel met XELOX of FOLFOX chemotherapie. Met deze standaard, maar 23 patiënten hadden positieve uitdrukking, met 7 van de 62 klinisch voordeel gevallen (CR + PR + SD) van chemotherapie en 16 van de 18 PD gevallen. De uitdrukking snelheid tussen klinisch voordeel groep (7/62, 11,3%) en de PD-groep (16/18, 88,9%) was significant verschillend (P < 0,001). Dit wijst erop dat Polη positiviteit ineffectief chemotherapie met XELOX of FOLFOX regiem zou kunnen voorspellen. Het resultaat was in overeenstemming met onze studie in cellen die Polη expressie negatief correleert met oxaliplatine gevoeligheid van maagkanker cellijnen.
We vonden een significant overlevingsvoordeel in polη negatieve patiënten. Dit voordeel waarschijnlijk afkomstig uit effectieve therapie van oxaliplatine, gezien het feit dat polη was sterk gecorreleerd met de respons op de behandeling. Het is bekend dat effectieve chemotherapie levenskwaliteit van patiënten met maagkanker zou verhogen en overleving; ons onderzoek kan helpen om de behandelingsrespons van oxaliplatin chemotherapie en overleving voorspellen, waardoor onnodige behandeling begin voorkomen.
Er zijn verschillende beperkingen aan deze studie. Ten eerste is een retrospectieve studie met een klein aantal patiënten. In de vooraf ingestelde studie geen significante associatie tussen polη expressie en leeftijd, geslacht, primaire tumor site, metastasen of pathologische differentiatie werd verkregen op basis van dergelijke gevallen nummer. Het is mogelijk om significante resultaten in sommige clinicopathologic kenmerken zoals primaire sites of pathologische differentiatie (P waarde dichtbij 0,05) krijgen, als voldoende patiënten. Daarom enlargeing het zaaknummer en het uitvoeren van prospectieve studies is verplicht. Ten tweede, omdat de test nauwkeurigheid werd berekend aan de hand van de criteria die zijn vastgesteld door ROC curve analyse, onze resultaten nodig validering in een onafhankelijke cohort. Ten derde, de expressie van polη relatief laag bij maagkanker, door subjectiviteit, zou de onjuiste IHC telling groter, die de gevoeligheid en specificiteit kunnen beïnvloeden bij het voorspellen van de behandeling, zodat meer nauwkeurige methode nodig. Forth, is het bekend dat platina weerstand is zeer gecompliceerd, zodat polη als één parameter, is moeilijk therapie respons op een exacte wijze te voorspellen.
Ondanks beperkingen onze studie is een van de weinige pogingen definiëren criteria voor de in vivo chemische gevoeligheid van oxaliplatin bevattende regime met behulp van de klinische respons als referentie standaard. Het kan een effectieve en kostenbesparende methode om de respons op de behandeling te voorspellen zijn.
Conclusie
Kortom, de huidige studie toonde aan dat polη is een belangrijke voorspeller van respons op de behandeling bij patiënten met gemetastaseerde maagkanker die chemotherapie krijgen van FOLFOX of XELOX . Een dergelijke marker kan artsen helpen om de optimale klinische strategie voor patiënten met gevorderde maagkanker kiezen. Bovendien, de multivariate survival analyse bleek dat de expressie van polη was onafhankelijke prognostische factoren. De bevindingen moeten worden bevestigd in een grotere prospectieve studie vóór de toepassing in de klinische praktijk.
Notes
Kai-yuan Teng, Miao-Zhen Qiu eveneens bijgedragen aan dit werk.
Afkortingen
GG :
guanine-guanine
CR:
volledige respons
DNA:
desoxyribonucleïnezuur


FOLFOX:
fluorouracil, leucovorin en oxaliplatin
HR:
homologe recombinatie
mRNA:
messenger ribonucleïnezuur
IC50: of the half remmende concentratie
IHC:
immunohistochemie


MMR:
mismatch repair
WB:
western blotting
MTT-test:
3- (4,5-dimethyl-2-yl) -2,5-difenyltetrazoliumbromide assay
NER:
nucleotide Excision Repair

OS:
totale overleving
PD:
ziekteprogressie
Pol η:
polymerase eta
PR:
gedeeltelijke respons
SD:
stabiele ziekte
pt:
platinum
ROC:
receiver operating characteristic
TLS:
translesiesynthese


XELOX:
capecitabine en oxaliplatin
XPV:.
xeroderma pigmentosum variant
verklaringen
Dankwoord
Wij danken de medewerkers van de afdeling Medische Oncologie aan Sun Yat-sen Universiteit Cancer Center voor hun suggestie en hulp
Grant ondersteuning:. National Natural Science Foundation of China subsidie ​​30672408, Guangzhou Bureau van Wetenschap en Technologie subsidie 2006Z3-E0041 en Sun Yat-sen Universiteit 985 Program Initiation Fund (China).
Authors 'originele ingediende dossiers voor afbeeldingen
Hieronder staan ​​de links naar de auteurs oorspronkelijke ingediende dossiers voor afbeeldingen.

• Het evalueren van een computer steun voor het beoordelen van de maag symptomen (ECASS): onderzoeksprotocol voor een gerandomiseerde gecontroleerde trial
• Detectie van carcino-antigeen boodschapper-RNA in het bloed met behulp van kwantitatieve real-time reverse transcriptase-polymerase-kettingreactie om herhaling van maagdarmkanker voorspellen