Vplyv elektroakupunktúru stimulácia v Zusanli acupoint (ST36) na žalúdočné motilitu: je to možné prostredníctvom PKC a MAPK signálnych dráh

Účinok elektroakupunktúry stimulácia v Zusanli acupoint (ST36) na žalúdočné motilitu: je to možné prostredníctvom PKC a MAPK dráh prenosu signálu,
abstraktné
pozadia
Elektroakupunktúra (EA) stimulácia bolo preukázané, že majú veľký terapeutický potenciál pre liečenie žalúdočných a črevných poruchy motility. Avšak, žiadny dôkaz objasnila mechanizmy, ktoré prispievajú k účinkom EA stimulácie na acupoint Zusanli (ST.36). Táto štúdia bola navrhnutá tak, aby vyšetrila regulatívy účinok EA stimulácie na ST.36 na žalúdočné motilitu, a preskúmať možné mechanizmy
metódy
Tridsať Sprague-Dawley boli náhodne rozdelení do troch skupín :. Na ST.36 skupina, non-acupoint skupina a kontrolná skupina. stimulácia EA bola nastavená na 2 Hz, kontinuálnym spôsobom, a 1, V, počas 30 minút. Frekvencia a priemerná amplitúda píku motility žalúdka boli merané electrogastrography. Proteínkináza C (PKC) a mitogénom aktivovanej proteín kinázy (MAPK), signálne dráhy boli hodnotené pomocou real-time PCR. Caldesmon (CAD) a expresie calponin (CAP) proteín v žalúdočnej dutine boli detekované Western blot. Vypočítaný Video systém spracovania sa na ohodnotenie morfologické zmeny v bunkách hladkého svalstva (SMC) od žalúdočnej dutine.
Výsledky
stimulácie vo ST.36 EA má dvojaký účinok na frekvencii a priemernej amplitúdy píku. Okrem toho, stimulácia EA na ST.36 regulovať expresiu niektorých génov v PKC a MAPK signálnych dráh, a to regulované expresie CAD a CAP proteínov. EA v sére vyvolaná SMC kontraktilitu. Propagácia motility žalúdka môže korelovať s up-reguláciou MAPK6 (ERK3), MAPK13 a prostaglandínu-endoperoxidy syntázy 2 (PTGS2) génovej expresie, a down-reguláciu kolagénu, I, alfa-1 génu typu (COL1A1) a CAD a Cap expresiu proteínu. Inhibícia žalúdočnej motility môže korelovať s down-reguláciou typu receptora interleukínu-1, 2 (IL1R2) a metaloproteinázy 9 génov matrice (MMP9), a up-regulácia expresie proteínu CAD a Cap
. Závery
EA stimulácia v ST.36 regulovaná motility žalúdka, a účinky boli obaja podporovať a inhibícia u potkanov. Možné mechanizmy môžu korelovať s signálnych transdukčných dráh PKC a MAPK.
Kľúčové
Elektroakupunktúra Zusanli žalúdočnej motility PKC MAPK pozadí
motility žalúdka je jedným z najdôležitejších fyziologických funkcií v ľudskom čreve. Bez koordinované motility, trávenie a vstrebávanie živín diétnych nemôže prebehnúť. Regulácia gastrointestinálne motility je zložitá a zahŕňa kontrakciu buniek hladkého svalstva (SMC). Kontrakcie SMC je primárne upravené prechodné zmeny v intracelulárnej Ca 2+ koncentrácia [1]. Existujú dve hlavné cesty podieľajúce sa na tomto mechanizme, a síce RhoA-Rho kinázy cesty a proteín kinázy C (PKC) cesta [2]. Calponin (CAP), dobre zavedené in vitro
substrát pre signálnych proteínov PKC [3], priamo interaguje s PKC [4]. Caldesmon (CAD) je aktínu a myosin viažuci proteín, ktorý sa vyskytuje v dvoch isoformách, ktoré vznikajú alternatívnym zostrihom [5]. Hromadia sa dôkazy o sekundárne dráhy v regulácii kontrakcie hladkého svalstva, ktoré je závislé na PKC, a táto cesta môže byť sprostredkované prostaty a aktivácia CAD [6-9]. MAP kináza (MAPK), signálne dráhy sú zapojené aj do SMC kontrakcie [10]. Existujú tri hlavné skupiny odlišne regulovaných MAPK, ktoré vedú ku pozmenenej génovej expresie. Extracelulárna signál súvisiace kinázy 1 a 2 (ERK1 /2), C-Jun terminálny Kinase (JNK) a p38 MAPK je známe, že hrajú dôležitú úlohu v intracelulárnom signálnom odpoveď na extracelulárne podnety [11]. Okrem toho cap môže uľahčiť EKR závislú signalizáciu, čo hrá významnú úlohu v regulácii kontrakcie SMC [12].
Akupunktúra, ktorý bol použitý po tisíce rokov v Číne, sa stále viac používajú po celom svete pre správu rôzne ochorenia [13]. Predpokladá sa, že stimulácia z acupoint môže priamo ovplyvniť príslušné orgány a dosiahnutie účinku akupunktúrne terapie. EA je kombinovaný postup, ktorý stimuluje acupoint s elektrickou stimuláciou miesto s manuálnou manipuláciou ihiel. Početné štúdie hodnotila účinok a mechanizmy EA na žalúdočné motility [14-20]. Na základe dôkazov z týchto klinických štúdií, EA stimulácia bolo preukázané, že majú veľký terapeutický potenciál pre liečenie žalúdočných a črevných porúch motility. Zusanli (ST.36) je jedným z najčastejšie používaných Acupoints pre gastrointestinálnych ochorení. Podľa teórie tradičnej čínskej medicíny (TCM), existuje vzťah medzi ST.36 a funkciu tráviaceho traktu. K dnešnému dňu však žiadny dôkaz objasnila presné mechanizmy, ktoré prispievajú k účinkom EA stimulácie.
Teda tým, že skúma morfologické zmeny a myoelectrical aktivitu, predložený štúdiu zameranú na vyhodnotenie regulatívy účinok EA stimulácia v ST.36 acupoint na žalúdočné motilitu u potkanov a skúmať jeho možné mechanizmy.
Metódy
Zvieratá a činidlá
Tridsať dospelých samcov Sprague-Dawley (SD) krýs s hmotnosťou 180-220 g boli udržovaní na 12-h Lighting tma pri teplote 25 ± 2 ° C a 60% vlhkosti s voľným prístupom k potrave a vode. SD krysy boli zakúpené z pokusného zvieraťa Center štvrtého Vojenskej lekárskej univerzity. Všetky pokusy na zvieratách boli vykonané v súlade s inštitucionálnymi smernicami štvrtého Vojenské lekárskej univerzity pre starostlivosť a použitie laboratórnych zvierat. Schválenie protokolu štúdie bola získaná z etickou komisiou pre výskum zvierat, Fourth Military Medical University v Číne. Zvieratá boli náhodne rozdelení do troch skupín: Text. ST.36 skupina, non-acupoint a kontrolnej skupiny
kolagenáza II, inhibítor trypsínu, dithiothreitol alkohol cukru, hovädzie sérový albumín, vápnik bez fosfátom pufrovaný fyziologický roztok (PBS ), glutaraldehyd, a trypánovej modrej boli zakúpené od firmy Sigma Chemical Co. Total RNA Extraction Kit, Superscript III reverznej transkriptázy, a SuperArray PCR Master Mix sa kúpili od Invitrogen Co. anti-kozí anti-myší, a anti-králičie protilátky zakúpené od Šanghaja Kangcheng Bio-Engineering Co
EA postupe stimulácia
ST.36 bol umiestnený približne 5 mm laterálne od lýtkovej kosti strane panvových končatín, zatiaľ čo non-acupoint bol umiestnený na zadnej nohy vedľa ST.36 otvorené 5 mm [21]. Ihly boli vložené 5 mm hlboko do svalovej vrstvy vybraného acupoint a boli stimulované EA na 2 Hz až 2 V. použitie elektrostimulátor (G6805-2A; Shanghai Huayi lekárske nástroje Factory, Shanghai, Čína). Každý stimulácia trvala 20 minút v kontinuálnom režime, a stimulácia sa vykonáva 1 krát /deň po dobu 5 dní. Potkany v kontrolnej skupine boli predložené sám imobilizáciu bez stimulácie po dobu 30 minút v rovnaký čas každý deň.
Electrogastrography
Electrogastrography bol aplikovaný za použitia viackanálového signálu fyziologické Získavanie a systém spracovania (režim RM-6280) od posledného stimulácia piateho dňa. Po 12-h rýchle (s voľným prístupom k vode) a 6 hodín bez pitia, sa potkany anestetizují intraperitoneálne (i.p.) 10% uretánu v dávke 1 g /kg telesnej a potom imobilizované. Prvá elektróda bola stanovená na chvoste, a riadené elektródy boli implantované na serózna povrch žalúdka 0,3 - 0,5 cm nad pyloru. Elektródy boli pokryté 37 ° C, normálny fyziologický roztok gázy, spojený s drôtom. Experimentálne parametre boli nasledovné :. Frekvencia 400 Hz, filter 10 Hz, rýchlosť skenovania 2 s /delenie, citlivosť 25 mV, časová konštanta jednosmerný prúd, a osciloskop čas záznamu 1 h [18]
v reálnom čase polymerázovej reťazovej reakčná analýza (PCR)
Po poslednej stimulácii EA, boli krysy usmrtené. U kontrolnej skupiny a non-acupoint skupiny, jedna krysa bol náhodne vybraných resp. Pre skupiny EA, najprv ho rozdeliť do EA podporovať skupinu a EA inhibícia skupinu podľa výsledkov electrogastrography. A potom, tam boli krysy náhodne vybraných z oboch skupín. Žalúdočné dutine tkaniva (od pylorické 0,8 - 1 cm) boli nakrájame na kúsky, ktoré boli približne 0,3 cm x 0,5 cm vo veľkosti a okamžite umiestnených v -70 ° C tekutým dusíkom. Celkové RNA vzorky boli extrahované za použitia TRIzolu z rôznych skupín v súlade s pokynmi výrobcu. Kvalita RNA bola stanovená spektrofotometricky na základe pomeru A260 /A280. RNA vzorky boli testované na celistvosť 18S a 28S RNA pomocou gélovej elektroforézy. Celková RNA (1,5 ug) bol použitý na vytvorenie prvého reťazca cDNA s horným indexom III reverznej transkriptázy (1 ul) z izolovaných RNA. V reálnom čase PCR reakcie boli pripravené za použitia SuperArray PCR Master Mix (kat č. PA-112), ktorý obsahuje signál dráh gény PKC a MAPK. Zriedený cDNA (102 ul) bol pridaný do každej jamky, ktorá zodpovedá PCR čipu. Potom žetóny PCR boli umiestnené do real-time PCR nástroje pre PCR reakcie. Tieto Podmienky cyklovania boli nasledujúce: 95 ° C počas 10 minút, 60 ° C počas 15 s a 60 ° C po dobu 1 min (40 cyklov). Rozdiely v expresiu génov, vyjadrené ako rozkladací zmeny, boli vypočítané za použitia 2 -ΔΔCt metódy.
Western blot ICHS a čiapku
Hladiny CAD a čiapku bielkoviny boli detekované westernovým prenosom. Po ošetrení sa EA, boli krysy usmrtené. Krysy potom boli fixované a následne incízie kože brucha a pobrušnice. Vnútornosti boli vystavené, a centrálne 1/3 žalúdočné tela bol rozrezaný na malé kúsky, ktoré boli približne 0,3 cm x 0,5 cm vo veľkosti. Tieto kusy boli okamžite skladované pri -70 ° C v tekutom dusíku. Stručne povedané, bunkové extrakty (30 ug) z hornej 1/3 stredu tela žalúdku sa oddelí dodecylsulfát sodný-polyakrylamidovom gélu (SDS-PAGE) a potom prenesené na nitrocelulózové membrány. Filtre boli blokované Tris-vyrovnanom fyziologickom roztoku (TBS) /5% mlieka, s následnou inkubáciou s Polyklonálne protilátky proti CAD (1: 3000 zriedenie), karcinómu prostaty (1: 3000 zriedenie), a p-aktínu (1: 10000). Potom, čo boli membrány premyté, boli inkubované s sekundárnymi protilátkami peroxidáze konjugovanú zriedeného 1: 5000 v TBS s 0,01% Tween 20. Systém detekčná protilátka bola použitá, a membrány boli vystavené röntgenovému filmu v súlade s pokynmi výrobcu.
príprava sérum
sérum sa pripraví ako je popísané vyššie s modifikáciou [22]. Po poslednej stimulácii EA, boli všetky krysy usmrtené. Ďalšie, 6 ml krvi odfotil z karotídy každej krysy. Krv sa udržiava ešte po dobu 1 hodiny, a potom sa odstredí pri 3000 otáčkach za minútu po dobu 15 minút. Sérum bolo odobraté, filtrovaný pre odstránenie baktérií a 1,5 ml sa naplní v rúre EP, ktorý bol uložený pri -70 ° C v tekutom dusíku.
Účinky EA séra na SMC kontraktilitu
piatich normálnych SD potkanov boli anestéziu ip s 10% uretánu v dávke 1 g /kg telesnej hmotnosti. Potom, čo bol anestézii, brušnej kože a pobrušnice boli zubatý, a vnútornosti boli vystavené. Celá Žalúdok bol vystrihnutý a žalúdočné dutine tkaniva boli izolované a okamžite umiestnené do kyslíkom nasýtené PBS penicilínom (100 U /ml) a streptomycínom (100 ug /ml) pri 4 ° C. Po prepláchnutí sa tkanivá boli prenesené do HEPES kyslíka nasýtené, ktoré sú rozložené a upevnené na silikagélovej doske s tenkou ihlou. Mukóznej vrstva sa opatrne odrezať, vystavovať kruhový sliznicu, ktorý bol zaklapnúť do 9 - 10 svalových pásoch (1 mm x 4 mm), ktoré v Tyrodově roztoku, a udržiava sa pri teplote 4 ° C v chladničke po dobu približne 15 minút. Svalové prúžky boli štiepené v 1% kolagenázy typu II, inhibítor trypsínu 0,05%, 0,05% dithiothreitol alkoholu cukru a 0,2% hovädzieho sérového albumínu enzýmu vo vodnom kúpeli po dobu 25 minút pri teplote 36 ° C. Po štiepení sa zmes prepláchne bez enzýmu HEPES, inkubované po dobu 30 minút a potom sa prefiltruje s veľkosťou oka 200 obrazovky zbierať Free jednotlivé žalúdočné SMC. Životaschopnosť buniek bola meraná s modrým testom trypánovej. Živé bunky boli viac ako 95% pri hustote 10 6 buniek /ml.
Izolované SMC boli náhodne rozdelené do normálneho séra skupiny, ST.36 séra skupinu, a non-acupoint séra skupiny. SMC suspenzie (50 ul) pri hustote 1,0 x 10 6 buniek /ml boli umiestnené v 96-jamkových doštičkách. Každá vzorka séra bol inaktivovaný po 30 minútach pri 56 ° C na vodnom kúpeli a, a potom sa zriedi v pomere 1: 2 s HEPES. Séra (50 ul) z rôznych skupín bola pridaná do SMC, zmieša s pipetou počas 30 s, a fixované 30 ul 2,5% glutaraldehydu. Dĺžka buniek bola hodnotená pomocou videosystému počítačová Processing (DP2-BSW), ktorá bola použitá na výpočet percento zmrštenia. Percento bunkovej zmrštenie = (dĺžka bunka pred začiatkom liečby - dĺžka buniek po liečbe). /Dĺžky bunkového pred začatím liečby x 100%
Štatistická analýza
Údaje boli vyjadrené ako priemer ± smerodajná odchýlka Jednocestné analýzy rozptylu s následným Bonferroniho viacnásobného porovnávacieho testu bola použitá softvér SPSS 10.0. Hodnoty ΔCt získané z PCR v reálnom čase, ktoré boli použité na výpočet rozdielov prekladač zmeny (tu vyjadrená ako percento kontroly), boli taktiež použité pre štatistické analýzy. P
-hodnota < 0,05 alebo fold-change > 2 bola definovaná ako štatisticky významný pre všetky analýzy. Výsledky
Účinky EA na žalúdočné motilitu
EA na ST.36 vyrába významné zmeny v absolútnej hodnote priemernej amplitúdy vrcholu a frekvencie v porovnaní s kontrolou, alebo non-acupoint skupiny (P Hotel < 0,01). Na rozdiel od EA na non-acupoint nevyvolal významné zmeny v žalúdku pohyblivosti v porovnaní s kontrolnou skupinou (ďalší súbor 1: Obrázok S1). boli pozorované dva typy žalúdočných vzoriek motorovej pre ST.36 skupiny v 10 potkanov skúšané v súlade s priemerným vrcholom: krysy s pozitívnym priemerným vrcholom boli posudzované na podporu vzorom, zatiaľ čo krysy so záporným priemerným vrcholom boli posudzované k podpore vzor. Výsledky ukázali, 5 (50,0%) potkanov ukázali ST.36 podporujúce vzor a 5 (50,0%), krysy ukázala ST.36 inhibujúce vzor. U potkanov s ST.36 propagáciu vzoru Priemerné vrcholové amplitúdy a frekvencie boli hodnoty 47.13 ± 0,44 a 0,19 ± 0,06, resp. U potkanov s ST.36 inhibičný vzoru, priemerné vrcholovej amplitúdy a frekvencie hodnoty boli -43.41 ± 0,62 a 0,17 ± 0,03, resp. (Ďalší súbor 2: Tabuľka S1)
Účinky EA na PKC a MAPK signalizačnej dráhy
EA na adrese ST.36 výrazne reguluje expresiu niektorých génov v PKC a MAPK signalizačnej dráhy. V tabuľke 1 sú uvedené výsledky z microarray analýzy skupiny ST.36 propagáciu (v porovnaní s kontrolnou skupinou). Expresie mnohých génov bola zvýšená po stimulácii EA vrátane ERK3, MAPK13, IL1R1, PRKCA a PTGS2. Iné gény vykazovali zníženie expresie po stimulácii EA vrátane IL1R2. V tabuľke 2 sú uvedené výsledky z microarray analýzy skupiny ST.36 inhibícia (v porovnaní s kontrolnou skupinou). Génovej expresie IL1R2 a MMP9 boli znížené po EA stimulation.Table zmena 1 Gene nákupný EA podporovať skupinu s kontrolnou skupinou
Signálna dráhy
Gene
Sites
EA /control (rozkladací zmena)
EA /control (rozkladacie up- alebo down-regulácia)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
2.39
2.39
MAPK
MAPK13
D10
2.86
2.86
PKC
IL1R1
F08
2.18
2.18
PKC
PRKCA
G01
2.40
2.40
PKC
PTGS2
G02
2.72
2.72
PKC
IL1R2
F09
0.26
-3.85
Rozkladacie zmenu (2-ΔΔCt) je normalizovaná expresia génu (2-ΔCt) v testovacej vzorke delená normalizovanej génovej expresie (2-ΔCt) kontrolnej vzorky. Skladací nariadenie predstavuje výsledky rozkladací zmeny v biologicky zmysluplným spôsobom. Skladací zmena hodnoty väčšie ako jedna indikujú Plus- alebo up-regulácia, a prehyb regulácia sa rovná rozkladacie zmeny. Skladací zmena hodnoty menšie ako jedna indikujú negatívne alebo down-regulácia, a prehyb regulácia je negatívny prevrátená hodnota rozkladacieho zmeny.
Tabuľka 2 Zmena Gene porovnávajúce inhibičné skupiny EA s kontrolnou skupinou
Signálna dráhy
Génové
Sites
EA /kontrolu (rozkladací zmenu)
EA /ovládanie (rozkladacie po prúde aj proti down-regulation)

PKC
IL1R2
F09
0.24
-4.26
PKC
MMP9
F11
0.21
-4.68
Skladacie zmenu (2-ΔΔCt) je normalizovaná expresia génu (2-ΔCt) v testovacej vzorke deleno normalizovanej génovej expresie (2-ΔCt) kontrolnej vzorky. Rozkladacie nariadenie predstavuje výsledky rozkladací zmenu v biologicky zmysluplným spôsobom. Skladanie zmena hodnoty väčšie ako jedna indikujú Plus- alebo up-regulácia, a prehyb regulácia sa rovná rozkladací zmeny. Skladanie zmeniť hodnoty menšie ako jedna indikujú negatívne alebo down-regulácia, a záhyb -regulation je negatívny inverzný ohybové-zmenu.
tabuľka 3 uvádza výsledky z microarray analýzy na ST.36 propagáciu skupina (v porovnaní so skupinou bez acupoint). bola zvýšená expresia génu COL1A1 po EA stimulácii. expresie génov a IL1R2 SERPINE1 klesli po EA stimulácii. Tabuľka 4 uvádza výsledky z microarray analýzy na ST.36 inhibíciu skupina (v porovnaní so skupinou bez acupoint). Mnohé z génov ukázali znížil výraz po EA stimuláciu, vrátane ERK3, JNK3, p38bMAPK, MAPK13, p38MAPK, ERK1, FGF2, IL1R1, IL1R2, MYC, PRKCA a gény PTGS2. Expresia génu COL1A1 sa zvýšila potom, čo EA stimulation.Table zmene 3 Gene porovnávajúca EA podporujúci skupinu s non-acupoint skupiny
dráhy signálov
Gene
Sites
EA /Non-acupoint (rozkladací zmena)
EA /Non-acupoint (rozkladací po prúde aj proti down-regulation)

PKC
COL1A1
F05
3.60
3.60
PKC
IL1R2
F09
0.39
-2.54
PKC
SERPINE1
G04
0.48
-2.07
Skladacie zmenu (2-ΔΔCt) je normalizovaná expresia génu (2-ΔCt) v testovacej vzorke deleno normalizovanej génovej expresie (2-ΔCt) kontrolnej vzorky. Rozkladacie nariadenie predstavuje výsledky rozkladací zmenu v biologicky zmysluplným spôsobom. Skladanie zmena hodnoty väčšie ako jedna indikujú Plus- alebo up-regulácia, a prehyb regulácia sa rovná rozkladací zmeny. Skladanie zmeniť hodnoty menšie ako jedna indikujú negatívne alebo down-regulácia, a záhyb -regulation je negatívny prevrátená hodnota rozkladacieho zmeny.
Tabuľka 4 zmena Gene nákupný inhibičné skupiny EA s non-acupoint skupiny
Signálna dráhy
Gene
Sites

EA /non-acupoint (rozkladací zmenu)
EA /non-acupoint (rozkladacie up- alebo down-regulácia)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
0,18
-5,67
MAPK
MAPK10 (JNK3)
D07
0,42
-2,40
MAPK
MAPK11 (p38bMAPK)
D08
0,39 -2,58
MAPK
MAPK13
D10
0,28
-3,58
MAPK
MAPK3 (ERK1)
G11
0,26
-3,83
MAPK
MAPK14 (p38MAPK)
D11
0.47
-2.13
PKC
FGF2
F07
0.37
-2.67
PKC
IL1R1
F08
0.30
-3.31
PKC
IL1R2
F09
0.36
-2.81
PKC
MMP9
F11
0.22
-4.48
PKC
MYC
F12
0.39
-2.59
PKC
PRKCA
G01
0.23
-4.27
PKC
PTGS2
G02
0.19
-5.36
PKC
COL1A1
F05
4.81
4.81
Skladacie zmenu (2-ΔΔCt) je normalizovaná expresia génu (2-ΔCt) v testovacej vzorke deleno normalizovanej génovej expresie (2-ΔCt) kontrolnej vzorky. Rozkladacie nariadenie predstavuje výsledky rozkladací zmenu v biologicky zmysluplným spôsobom. Skladanie zmena hodnoty väčšie ako jedna indikujú Plus- alebo up-regulácia, a prehyb regulácia sa rovná rozkladací zmeny. Skladanie zmeniť hodnoty menšie ako jedna indikujú negatívne alebo down-regulácia, a záhyb -regulation je negatívny prevrátená hodnota rozkladacieho zmeny.
Účinky EA na CAD a prejavu CAP proteínu
stimulácie s EA výrazne zvýšenou CAD a expresiu proteínu v cap uzatváracej skupiny ST.36 v porovnaní s non-acupoint skupina, zatiaľ čo stimulácia EA výrazne znížila CAD a čiapku expresiu proteínu v ST.36 podpore skupiny v porovnaní s non-acupoint skupiny (1A, B, C, D). Obrázok 1 účinky EA stimulácie caldesmon (CAD) a Calponin (SPP) hladiny proteínu. A. Expresia caldesmon hladiny proteínu westernovým prenosom. Hladiny proteínov B. Densitometrická analýza caldesmon normalizujú beta-aktínu; C. Expresia Calponin hladiny proteínu Western blot; D denzitometrické analýza Calponin množstvo bielkoviny normalizujú beta-aktínu. CAD: caldesmon; Viečko: calponin; 1: non-acupoint skupina; 2-4: EA inhibícia skupina; 5-7: EA podporovať skupinu. * P < 0,05 compard non-acupoint skupiny
účinky EA séra na SMC kontraktility
Ako ukazuje ďalší súbor. 3: Obrázok S2 a ďalší súbor 4: Tabuľka S2, morfológiu buniek bola pozorovaná pod svetelným mikroskopom po liečbe s rôznymi druhy séra. Bolo na dĺžku buniek žiadne rozdiely pred pridaním séra (p 0,05). ST.36 zvýšená hladina SMC kontraktilitu (60,22 ± 3,84 um), v porovnaní s kontrolným sérom (96,02 ± 6,24 um) alebo non-acupoint séra (97,33 ± 6,97 um). Percento kontrakcie bola 41% po stimulácii ST.36 sérom, zatiaľ čo zmenšenie percenta 7% a 10% po stimulácii buď s non-acupoint séra alebo kontrolné sérum, v danom poradí.
Diskusiu
tejto štúdii preukázaná že EA stimulácia v ST.36 mal regulatívy účinok na žalúdočnú motilitu u potkanov, ktoré boli buď stimulačný alebo inhibičný. Stimulačný účinok EA môže konať prostredníctvom PKC a MAPK signálnych dráh.
Účinky EA na žalúdočné motilitu boli rozsiahle študovaná u zvierat aj ľudí kvôli dostupnosti electrogastrography. Je dobre známe, že žalúdočné myoelectrical činnosť spočíva pomalých vĺn a hrotmi. Hroty sú priamo spojené s výskytom kontrakcií. Pomalých vĺn nevyvolávajú gastrointestinálne kontraktilitu, ale oni určujú maximálnu frekvenciu žalúdočných kontrakcií.
Najčastejšie používaný acupoint pri liečbe žalúdočných a črevných porúch je ST.36. To je obyčajne veril, že akupunktúra môže pôsobiť podpore a inhibuje účinky na gastrointestinálnu motilitu v závislosti na stimulovanej acupoint. U ľudí bolo preukázané, že stimulácia v EA ST.36 mal dvojaký účinok na žalúdočné peristaltiky, ktoré sú buď facilitative alebo inhibičnú [15, 23]. Hoci pacienti trpiaci ochorenia zažívacieho ústrojenstva majú prospech z použitia akupunktúry pri ST.36, ale presné molekulárne mechanizmy sú stále nejasné. U psov, EA na adrese ST.36 zvýšila pravidelnosti žalúdočných pomalých vĺn [24, 25]. Pri vedomí potkanov, EA stimulácia v ST.36 indukovanej dvojaký účinok, ktorý bol buď facilitative alebo inhibičnú, na žalúdočné motilitu [26, 27]. Ďalšie štúdie ukázali, že stimulačný účinok je sprostredkovaný cholinergných ciest, zatiaľ čo inhibičný účinok je nezávislý na sympatického dráhy [28]. Všeobecná teória akupunktúry medicína je založená na koncepcii Jin a Jang, a akupunktúra je veril upraviť nerovnováhu medzi Jin a Jang. Účinky akupunktúry na vyrovnávanie Jin a Jang možné postúpiť interakcií medzi neurotransmisie GABA a glutamátu v mozgovom kmeni.
V súčasnej papiera, EA stimulácia v ST.36 bol účinný pri regulácii motility žalúdka, ako je preukázané výrazným zvýšením vrcholovej amplitúdy a frekvencie. Okrem toho absencia tejto reakcie, keď sa rovnaká stimulácia vykonáva na non-acupoint bol svedčiace o špecifickosť tohto účinku. V závislosti na špičkovej amplitúdy a frekvencie sa ST.36 skupina sa ďalej delí na propagáciu a inhibičných vzory, pretože EA vykazovali dvojaký účinok. Ďalej preskúmať mechanizmy, ktorými EA upravuje žalúdočné motility, my izolované SMC zo žalúdka a pozoroval účinok ST.36 séra na SMC kontraktility pomocou sérologické farmakologických skúšobných metód. Výsledky ukázali, že v sére ST.36 významne zvýšil SMC sťahy; . Vzhľadom na to, že účinky vyvolané normálny alebo non-acupoint sére nie je boli zrejmé
Nedávne výskumy naznačujú, že účinky EA stimulácie sú sprostredkované prostredníctvom systému opioidov [29] alebo cez jeho stimulačný účinok na predominanciou aktivitu [30]; Avšak, presné mechanizmy, ktorými EA ovplyvňuje motility žalúdka boli doteraz úplne objasnený. Predchádzajúce výsledky tiež ukázali, že hladiny PKC boli zvýšené po stimulácii s EA [31]. Preto sme vybrali PKC a MAPK ako ciele pre sprostredkovanie stimulačné účinky EA na žalúdočné mobility. Okrem toho, viečko a CAD môže hrať úlohu v regulácii gastrointestinálnej motility v priebehu fyziologických a patologických adaptácie. Up-regulácia prostaty a CAD prejavu inhibuje gastrointestinálnu motilitu a down-reguláciu prostaty a CAD prejavu podporoval gastrointestinálne pohyblivosť [32, 33]. ERK1 /2, člen rodiny MAPK, bolo preukázané, že hrajú významnú úlohu v regulácii kontrakcie hladkého svalstva [34]. Podľa našich výsledkov microarray, propagácia motility žalúdka môže korelovať s up-reguláciou MAPK6 (ERK3), MAPK13 a génovej expresie PTGS2, a down-regulácia COL1A1 génovej expresie. Inhibícia žalúdočnej motility môže korelovať s down-reguláciou IL1R2 a MMP9 génovej expresie. Western bloty ukázali, up-regulácia expresie CAD a čiapku bielkovín inhibuje žalúdočné motility, zatiaľ čo down-regulácia expresie CAD a čiapku bielkovín podporoval motility žalúdka. Tieto výsledky ukazujú, že CAD a prostaty môže hrať úlohu v regulácii gastrointestinálne motility pri fyziologických a patologických adaptácie.
Boli určité obmedzenia v tejto štúdii, ktorá by mala byť spomenuté. Po prvé, sme nemali skúmať, či sú inhibítory PKC a MAPK môžu ovplyvňovať alebo zablokovať regulačný účinok EA stimulácie na ST.36 na žalúdočné mobility. Ďalšie štúdie budú musieť skúmať vplyvy inhibítorov PKC a MAPK. Po druhé, budú budúce vyšetrovanie zameria na plné pochopenie role každej zmene génovej expresie pri regulácii žalúdočnej mobility.
Závery
Stručne povedané, naše zistenia ukazujú, že EA stimulácia v ST.36 regulovaná motility žalúdka. EA stimulácia v ST.36 pôsobí dvojaký účinok na žalúdočné motility, ktoré boli buď stimulačný alebo inhibičný. Navyše, regulácia motility žalúdka môže korelovať s signálnych dráhach PKC a MAPK.
Notes
Qi Yang, Yan-Dong Xie prispeli rovnakou mierou k tejto práci.
Deklarácia
Poďakovanie
štúdia bola podporená dotácií z Národného Natural Science Foundation Číny (No. 30801487)
elektronický doplnkový materiál
12906_2013_1722_MOESM1_ESM.doc Ďalší súbor 1 :. Obrázok S1: Vplyv stimulácia EA na žalúdočné motilitu. Motility žalúdka bola meraná electrogastrography. A. Control, B. ST.36, C. Non-acupoint. Stimulácia s EA na ST.36 zvýšila priemernú amplitúdou a frekvenciou. Žalúdočné vlny ukázal dvojaký zmeny v skupine ST.36 v porovnaní s kontrolou alebo non-acupoint skupiny. Hodnoty sú vyjadrené ako priemer ± S.D. (N = 10
). * P Hotel < 0,05, ** p Hotel < 0,01 vs
. kontrolná skupina. #p Hotel < 0,05, ## p Hotel < 0,01 vs.
non-acupoint skupinu. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM2_ESM.doc Ďalší súbor 2: Tabuľka S1: Vplyv EA na žalúdočné myoelectrical činnosti. Skupina ST.36 bol ďalej rozdelený do EA a propagáciu EA inhibíciu skupiny v súlade s žalúdočnej vlny. Hodnoty sú vyjadrené ako priemer ± S.D (n
= 5). (DOC 26 KB) 12906_2013_1722_MOESM3_ESM.doc Ďalší súbor 3: Obrázok S2: Vplyv EA stimulácia na žalúdočné SMC kontrakcie. Morfológia buniek bola pozorovaná pri použití svetelného mikroskopu (zväčšenie x 200). Dĺžka bunky a percento kontrakcie bola meraná s počítačom Image Analysis System. O. SMC; A. SMC + kontrolné sérum; B. SMC + ST.36 v sére; C. SMC + non-acupoint sérum. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM4_ESM.doc Ďalší súbor 4: Tabuľka S2: Vplyv séra na SMC kontraktilitu. Hodnotená Video Processing System počítanej, Zusanli sérum k významnému kontraktility v SMC. Výsledky sú vyjadrené ako priemer ± S.D (n = 10)
. * P Hotel < 0,05 ** p Hotel < 0,01 vs.
kontrolné sérum skupinu. #p Hotel < 0,05, ## p Hotel < 0,01 vs.
non-acupoint sérum. (DOC 28 KB) autorov pôvodné predloženej súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy na autorov pôvodnej predložených súborov pre obrázky. 12906_2013_1722_MOESM5_ESM.tiff autorov pôvodný súbor na obrázku 1 protichodnými záujmami
Autori vyhlasujú, že nemajú žiadne protichodné záujmy.
Autorov príspevkov
QY vykonáva molekulárne genetické štúdie, podieľal sa na sekvenčného a formulovanie tejto rukopis. YDX, MXZ, BH vykonala imunoanalýzy. CZ, Hylite, RZ podieľal na zarovnanie sekvencie. MQ, YXH podieľal na návrhu štúdie a vykonaná štatistická analýza. JJW predstavil štúdiu, a podieľal sa na jeho konštrukciu a koordináciu a pomohol navrhnúť rukopis. Všetci autori čítať a schválená konečná rukopis.

• Jednostupňové chirurgická oprava dýchacích ciest žalúdočné fistula po esophagectomy
• Štúdia antimikrobiálnej aktivity, akútnej toxicity a cytoprotektivního účinku polyherbal extraktu v žalúdočnom vredom potkania etanol-HCl model